CN108324687B - 一种特立氟胺微乳、制备方法及应用 - Google Patents

一种特立氟胺微乳、制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种特立氟胺微乳、制备方法及应用，将乳化剂、助乳化剂混合均匀后加入油相；将特立氟胺溶于去离子水中得到特立氟胺溶液水相；搅拌过程中，逐滴将特立氟胺溶液加入到混合油相中，形成透明的含药微乳；其中，油相、水相、乳化剂、助乳化剂的比例根据伪三元相图进行优选。通过皮肤给药，微乳能增大难溶性药物的溶解性，形成较高的浓度梯度，促进药物的吸收，微乳疏水部分与角质层相互作用，干扰脂质双分子层结构，亲水部分可水化角质层，两者的共同作用可增强药物在角质层的透过性，有利于药物的渗透及吸收。本发明为特立氟胺的临床应用提供了一种新的剂型。

Description

一种特立氟胺微乳、制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一种特立氟胺的新剂型，尤其涉及的是一种特立氟胺微乳、制备方法及应用。
背景技术
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA)是一种自身免疫系统疾病，以关节和关节周围组织炎症为特征，呈反复发作性，引起骨侵蚀与关节功能障碍，是全球难治性疾病之一,RA的致病机制尚未完全明确。但患者的滑液组织中存在大量的肿瘤坏死因子(TNF-a)和T细胞，是引起关节发炎损伤的重要因素。RA的治疗目标是防止关节破坏和保持关节功能，早期规范化治疗可使绝大多数RA患者病情得到控制，甚至治愈。改善病情抗风湿药(disease-modifying anti-rheu-matic drugs DMARDs)通过抑制炎症因子(TNF-a,IL-1b等)来减缓、阻止关节肿胀和损伤。而来氟米特是一种新型的免疫调节剂，由美国HMR公司研制开发，并于1998年10月在美国首先上市。该药为二氢乳清酸脱氢酶可逆性抑制剂，具有抑制淋巴细胞增殖和抗炎作用,常用于治疗关节炎。但来氟米特水溶性差，一般只能以口服剂的形式给药。而特立氟胺(A771726)具有弱酸性，可以钠盐的形式存在，水溶性较好，有利于制成注射剂、软膏剂等其他制剂，且A771726为来氟米特的活性代谢产物，能阻止T细胞增殖、活化和关节细胞中细胞因子(如TNF-a,IL-1b的产生。美国FDA(Food and DrugAdministration，FDA)于2012年9月12日批准Sanofi-Aventis开发A771726(特立氟胺)口服片剂Aubagio，但因其半衰期长，常引起胃肠道刺激(如恶心、呕吐、腹泻)、肝脏丙氨酸转氨酶水平增加等，有研究结果显示，一年内超过60％的患者因无法耐受而中止服用。该药物己被FDA添加一项有关肝脏毒性风险的黑框警告。
经皮传递系统是一种能够延长释药并能够避免首过消除的传递方式。经皮传递系统可分为两种，一种是透皮给药系统(transdermal drug delivery systems，TDDS)或称透皮治疗系统(trandermal therapeutic systems，TTS)是药物通过皮肤吸收的一种方法，药物经由皮肤吸收进入人体血液循环并达到有效血药浓度，实现疾病治疗或预防的一类制剂；另一种是皮肤靶向传递系统，这类传递系统能够在作用部位定位传递药品、化妆品等，达到局部传递的目的。
微乳(microemulsion，ME)是水、油、表面活性剂和助表面活性剂按适当的比例混合，自发形成的各向同性、透明、热力学稳定的分散体系，粒径在10～100nm之间。微乳在结构上可以分为两类：水包油(O/W)型微乳和油包水(W/O)型微乳。微乳的特点包括它能够自发形成、贮存期长、黏度低、粒径小、具有较强的增溶作用、能够增加药物的生物利用度、生产成本低等。
许多研究表明微乳对于药物的透皮传递具有十分重要的意义，与其他可用于透皮给药的剂型如：脂质体、醇质体和囊泡等相比，微乳更稳定且对一些药物的经皮渗透具有更好的促进作用；此外，微乳用于透皮给药可降低口服给药引起的胃肠道不良反应，减少全身性不良反应发生率，可使一些具有上述不良反应但疗效好的药物在临床上得以广泛应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于：为了增加特立氟胺的溶解性和透皮传递性，提供了一种特立氟胺微乳、制备方法及应用。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的，本发明的一种特立氟胺微乳的制备方法，包括以下步骤：
(1)将乳化剂、助乳化剂混合均匀后加入油相；
(2)将特立氟胺溶于去离子水中得到特立氟胺溶液水相；
(3)搅拌过程中，逐滴将特立氟胺溶液加入到步骤(1)的混合油相中，形成透明的含药微乳。
作为本发明的优选方式之一，所述油相选自油酸、肉豆蔻酸异丙酯IPM、辛癸酸甘油酯DOD、油酸乙酯中的任一种。
作为本发明的优选方式之一，所述助乳化剂选自异丙醇、丙三醇、聚乙二醇400、无水乙醇中的任一种。
作为本发明的优选方式之一，所述乳化剂选自大豆磷脂、司盘80、吐温80、司盘80中的任一种或两种以上的混合物。
作为本发明的优选方式之一，所述油相、水相、乳化剂、助乳化剂的质量分数g/g分别为：肉豆蔻酸异丙酯IPM42.12％、去离子水15.76％、大豆磷脂21.06％、无水乙醇21.06％。
一种如所述的制备方法制得的特立氟胺微乳，所述特立氟胺微乳的粒径为10～100nm。
所述特立氟胺微乳的制备和存储温度为室温。符合国家药典规定的温度范围。
一种特立氟胺微乳在制备经皮给药制剂中的应用。为特立氟胺微乳的临床应用提供了新剂型。
本发明相比现有技术具有以下优点：本发明进行了离体鼠皮的透皮吸收实验，利用Franz扩散池，通过比较0.1％、0.25％特立氟胺微乳与0.1％特立氟胺普通乳剂、水溶液的单位面积累积渗透量(Qn)，观察不同浓度下、不同制剂下特立氟胺的皮肤渗透性。实验结果表明微乳制剂对促进药物的透皮吸收具有积极作用。透皮给药可加快药物的溶出速度，减小药物的体内波动；
本发明将特立氟胺制成微乳，通过皮肤给药制剂中的肉豆蔻酸异丙酯，大豆磷脂等辅料度人体无毒害作用，可在体内降解和吸收，并可提高药物在血液系统中的循环时间，缩短药物在血液中达到有效浓度的时间。通过皮肤给药，微乳能增大难溶性药物的溶解性，形成较高的浓度梯度，促进药物的吸收，微乳疏水部分与角质层相互作用，干扰脂质双分子层结构，亲水部分可水化角质层，两者的共同作用可增强药物在角质层的透过性，有利于药物的渗透及吸收。本发明为特立氟胺的临床应用提供了一种新的剂型。
附图说明
图1为手工滴加法制备的含药微乳粒径图；
图2为透射电镜下含药微乳的微观表征；
图3为内标法下特立氟胺标准品和特立氟胺微乳的HPLC图；
图4为促渗透吸收试验中各浓度和剂型下药物渗透累积量图。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
本发明所用主要仪器与材料：
仪器：
LC-20A型高效液相色谱仪(日本岛津)；Franz扩散池(自制)；NanoZS90型激光纳米粒度仪(英国马尔文公司)；电子天平(德国赛多利斯公司)；79HW-1型恒温磁力搅拌器(江苏金坛金城国胜实验仪器厂)；DDS-11AW型电导率仪(上海般特仪器有限公司)；PHS-3C型pH计(上海雷磁仪器厂)；超纯水机(美国Millipore公司)。
药品和试剂：
特立氟胺对照品(自制，质量分数为99％)；辛癸酸甘油酯(ODO，山东西亚试剂，批号：T0809)；大豆磷脂(Lecithin，上海艾韦特有限公司，批号：170103)；吐温80(天津光复精细化工研究所，批号：20170301)；大豆油、油酸、油酸乙酯、无水乙醇、甲醇由阿拉丁试剂上海有限公司提供；肉豆蔻酸异丙酯(IPM)、司盘80、异丙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400(PEG400)由国药集团化学试剂有限公司提供；甲醇为色谱纯；水为双蒸水；其余试剂为分析纯。
动物：
雄性SD大鼠，普通级，体重200～250g，取腹部皮肤，由安徽医科大学实验动物中心提供。
实施例1
本实施例包括以下组分：
特立氟胺：5mg，肉豆蔻酸异丙酯：2.106g，大豆磷脂：1.053g，无水乙醇：1.053g，去离子水：0.783g。
制备过程如下：
精密称取IPM、大豆磷脂、无水乙醇。先将大豆磷脂与无水乙醇混合溶解，再加入IPM充分混合。将特立氟胺对照品加入去离子水中，超声溶解，在磁力搅拌器搅拌下将特立氟胺水溶液缓慢滴入上述液体中，搅拌30min，即得透明的质量比0.1％特立氟胺微乳样品。对特立氟胺微乳粒径分布采用动态光散射法进行检测，如图1所示，微乳粒径范围在10～100nm，粒径大小均匀，外观澄澈，如图2(a)所示。
实施例2
本实施例包括以下组分：
特立氟胺：12.5mg，肉豆蔻酸异丙酯：2.106g，大豆磷脂：1.053g，无水乙醇：1.053g，去离子水：0.783g。
制备过程如下：
精密称取IPM、大豆磷脂、无水乙醇。先将大豆磷脂与无水乙醇混合溶解，再加入IPM充分混合。将特立氟胺对照品加入去离子水中，超声溶解，在磁力搅拌器搅拌下将特立氟胺水溶液缓慢滴入上述液体中，搅拌30min，即得透明的0.25％特立氟胺微乳样品。对特立氟胺微乳粒径分布采用动态光散射法进行检测，微乳粒径范围在10～100nm，粒径大小均匀，外观澄澈，结果如图2(b)所示。
特立氟胺微乳的电镜形态观察：
常温下取适量稀释5倍的特立氟胺ME滴在铜网上(覆有支持膜)，静置15min，待自然晾干后用1％磷钨酸溶液负染10min，自然挥干，透射电镜下观察。拍摄照片如图2，在电镜下ME乳滴为表面完整的圆球形，大小分布均匀，且符合微乳的粒径要求。
本发明的特立氟胺含量测定方法：
色谱条件
色谱柱:ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PH＝7.4)∶甲醇＝43.8∶56.2；流速1.00mL·min-1；柱温40℃；检测波长294.0nm；进样量：20μL；内标：尼泊金甲酯(10.0μg·mL-1)，结果如图3所示。
标准曲线的制备和方法学研究：
标准溶液的制备：精密称取特立氟胺对照品25mg，用适量甲醇溶解，置25mL容量瓶中，加甲醇定容摇匀，精密量取5ml置25mL容量瓶中，加甲醇定容，即得100μg·mL-1的特立氟胺对照品储备液，置4℃冰箱保存。精密量取特立氟胺对照品储备液，依次用甲醇稀释，得100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.125μg·mL-1的系列标准液，依次进样20μL，以药物峰面积(A)对药物浓度(C，μg·mL-1)进行线性回归，得回归方程：A＝8.2639C+4.2487(R2＝0.9996)，结果显示特立氟胺在3.125～100μg·mL-1范围内线性良好。精密度、重复性、稳定性试验RSD均小于3％，符合方法学要求。
体外经皮渗透研究：
(1)离体鼠皮的制备:
取大鼠，断颈后刮净背部毛发，剥离背部皮肤(避免损伤)，小心去除黏连物和皮下脂肪，用0.9％氯化钠溶液冲洗干净，置0.9％氯化钠溶液中4℃保存，7天内用完。
(2)体外透皮实验：
采用自制Franz扩散池，将离体皮肤固定在供给池和接收池间，表皮层面向供给池，真皮层紧贴接收液，接收液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.4)17.8ml，扩散池的有效接收面积为2.58cm2。供给池中分别加入0.1％、0.25％特立氟胺微乳和0.1％特立氟胺普通乳剂、水溶液1ml，装置置于恒温水浴中(30±1℃)，300r/min搅拌，于0.5，1，2，4，6，8，12，24h分别取样2ml，同时加入等温等体积上述磷酸盐缓冲液。样品经微孔滤膜(0.45μm)过滤，20μL进样，使用HPLC测定并计算特立氟胺单位面积的累积渗透量(Qn，μg/cm2)。
Figure BDA0001613092560000051
公式中cn为第n个取样点的渗透浓度，V0为接收池的容积，ci为第i个取样点的药物浓度，V为每次取样量，S为有效接收容积。结果如图4所示。
综上所述，本发明通过改变特立氟胺给药途径，制备了特立氟胺微乳，此微乳作为一种新的剂型，具备一定的载药量，可显著增加皮肤渗透率，避开肝脏及胃肠道吸收，减少达到有效血药浓度时间，从而降低肝毒性，减少胃肠道不良反应，还可提供局部治疗，对需要长期给药人群带来很大的方便，是一种新型的局部外用新剂型。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种特立氟胺微乳的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将乳化剂、助乳化剂混合均匀后加入油相；
(2)将特立氟胺溶于去离子水中得到特立氟胺溶液水相；
(3)搅拌过程中，逐滴将特立氟胺溶液加入到步骤(1)的混合油相中，形成透明的含药微乳；
所述油相、水相、乳化剂、助乳化剂的质量分数g/g分别为：肉豆蔻酸异丙酯IPM42.12％、去离子水15.76％、大豆磷脂21.06％、无水乙醇21.06％；
制得的特立氟胺微乳的粒径为10～100nm。
2.根据权利要求1所述的一种特立氟胺微乳的制备方法，其特征在于，所述油相选自油酸、肉豆蔻酸异丙酯IPM、辛癸酸甘油酯DOD、油酸乙酯中的任一种。
3.根据权利要求1所述的一种特立氟胺微乳的制备方法，其特征在于，所述助乳化剂选自异丙醇、丙三醇、聚乙二醇400、无水乙醇中的任一种。
4.根据权利要求1所述的一种特立氟胺微乳的制备方法，其特征在于，所述乳化剂选自大豆磷脂、司盘80、吐温80中的任一种或两种以上的混合物。
5.根据权利要求1所述的一种特立氟胺微乳的制备方法，其特征在于，所述特立氟胺微乳的制备和存储温度为室温。
6.如权利要求1所述的方法制得的特立氟胺微乳在制备经皮给药制剂中的应用。
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