CN108309993A - 仙茅苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及仙茅苷在促进缺血随意皮瓣存活的作用。在促进缺血随意皮瓣存活的过程中采用口服给药的方式，使用方法为每日口服剂量10mg/kg，5～7天为一疗程。通过大量的动物实验得出结论，使用仙茅苷可以使得皮瓣的存活面积比明显提高，能很好地促进缺血随意皮瓣存活。

Description

仙茅苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用

技术领域

本发明涉及仙茅苷的新用途，具体是仙茅苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。

背景技术

近年来，在临床上车祸伤、高坠伤、重物砸伤等高能损伤的患者不断增多，高能量损伤造成皮肤软组织的严重损伤，在清创后，往往会出现皮肤软组织缺损，无法进行直接缝合。需要皮瓣覆盖，而随意皮瓣因其应用灵活，学习周期短，外观恢复良好等优点，被广泛的应用于创面修复。但是在随意皮瓣的长宽比超过1.5：1的时候，皮瓣远端常常会出现不同程度的坏死。这无疑对随意皮瓣在临床上的应用带来很大的限制，因此如何增加随意皮瓣存活，减少皮瓣坏死，成了一个重要的课题。经过研究后发现很多的药物能够增加皮瓣的存活面积，通过促进随意皮瓣微血管的形成，增加皮瓣的血液灌注，减轻缺血再灌注损伤等途径。

仙茅，是我国的传统重要之一，在我国分布十分广泛，作为一种补益药，仙茅温肾阳壮、祛除寒湿，其主要成分仙茅苷（Curculigoside A）被发现具有抗骨质疏松，抗氧化，提高老年动物认知能力，保护神经等作用；而目前没有仙茅苷对皮瓣存活的影响的相关报道。

发明内容

本发明涉及仙茅苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。仙茅苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的过程中采用灌胃的方式，按每1毫克仙茅苷粉末溶于1毫升的生理盐水，配成1mg/ml溶液，使用方法为每千克大鼠每日灌胃剂量10mg仙茅苷，5～7天为一疗程。

通过大量的动物实验得出结论，使用仙茅苷可以使得皮瓣的存活面积比明显提高，能很好地促进缺血超长随意皮瓣存活。

附图说明

图1 缺血随意皮瓣模型建立；

图2 仙茅苷治疗组和对照组术后7天大鼠背部皮瓣及皮瓣下方情况对比图；

图3仙茅苷实验组与生理盐水对照组术后7天皮瓣存活面积柱状对比图；

图4 仙茅苷实验组与生理盐水对照组术后七天两组皮瓣血流灌注量对比观察；

图5 仙茅苷实验组与生理盐水对照组皮瓣氧化铅造影对比观察；

图6 显微镜下（100倍及200倍）仙茅苷组与生理盐水组中间区域皮瓣HE染色观察情况；

图7 仙茅苷组与生理盐水组皮瓣中区微血管密度对比；图8仙茅苷组与生理盐水组皮瓣血管内皮生长因子表达；

图9 仙茅苷组与生理盐水组皮瓣SOD值和MDA含量对比。

具体实施方式

仙茅苷可以促进缺血超长随意皮瓣存活性明显提高。在促进缺血超长随意皮瓣存活的过程中采用灌胃的方式。按每1毫克仙茅苷粉末溶于1毫升的生理盐水，配成1mg/ml溶液，使用方法为每千克大鼠每日灌胃剂量10mg仙茅苷，5～7天为一疗程。 以下为仙茅苷在促进缺血随意皮瓣存活的作用评价：

1、缺血随意皮瓣模型建立

选用健康的雄性SD大鼠60只，由温州医科大学实验动物中心提供，清洁级，SYXK [Zhe]2015–0009，体重250-300g龄。将大鼠按照随机数字表法分为仙茅苷实验组和生理盐水对照组，每组30只。采用改良的McFarlane皮瓣制作方法，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，将动物俯卧位固定，脱毛，碘伏消毒，铺巾，以大鼠尾部两髂嵴连线为蒂，在背部正中设计一宽3cm、长9cm矩形随意型皮瓣，设计线切开皮肤，皮下组织，达深筋膜浅层，保留真皮下毛细血管网，于深筋膜浅层表面分离皮下组织，遇到知名血管即以4-0号丝线结扎。皮瓣完全掀起后，彻底止血，立即用4-0医用慕丝缝线间断缝合。切口周围碘伏消毒后涂抹金霉素软膏，腹腔注射生理盐水(50ml/kg)抗休克。

仙茅苷实验组：10 mg/kg仙茅苷口服给药，生理盐水对照组：相同剂量口服，均每日1次，连续注射7天。因大鼠有自残现象，为避免其术后回头撕咬伤口影响皮瓣存活，均为其带上防止其自残的“颈套”（见图1），并单笼喂养。为减少手术操作带来的误差，所有手术由1人完成。

2、观察指标：

2.1 皮瓣存活面积比的检测

皮瓣存活面积比的检测：术后第7天，各组大鼠在麻醉状态下用透明纸准确测量皮瓣存活及坏死面积，并剪成存活或死亡两部分，分别以电子秤称重。按以下公式计算皮瓣存活面积比：皮瓣存活面积比=皮瓣存活面积玻璃纸重量/皮瓣总表面积玻璃纸重量×100%。皮瓣坏死标准：皮瓣颜色发黑，组织回缩、弹性差，质地坚硬，切割组织不出血。病理表现为组织崩解、细胞核消失、炎症细胞广泛浸润、有局灶出血。

术后7天，仙茅苷组中间区域皮瓣颜色淡红，表面无痂壳形成，弹性较好，远端区域颜色发黑，表明有痂壳，弹性差，原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃，出血量多，肉膜下无积血，积液，血管丰富。生理盐水组皮瓣中间区域及远端区域颜色均发黑，表面有痂壳形成，弹性极差，原位掀起皮瓣见皮瓣出血较少，内膜下炎性分泌物较多，血管相对较疏（见图2）。

7天后实验组皮瓣的存活面积比为（73.97±1.36%），对照组皮瓣存活面积比为（51.36±1.57%），比较两组皮瓣的存活面积比，差异有统计学意义（P<0.01）。（见图3）。

2.2激光多普勒血流仪测定新生血管

激光多普勒血流仪是利用激光多普勒原理，监测动物或人体组织微循环血流灌注量的一种设备。本学科实验室拥有该仪器并配套操作软件采集和分析血流信号。术后7天，分别测定大鼠皮瓣处血流，报告通用报告、百分比报告、PORH报告及频率报告等形式，观察新生血管处有效血流信号。

7天后激光多普勒血流仪显示仙茅苷组皮瓣的血流量明显多于对照组，仙茅苷组皮瓣的血流灌注量为(120.5 ± 9.1)，对照组皮瓣血流灌注量为(36.2 ± 8.6), 比较两组皮瓣的血流灌注量，差异有统计学意义（P<0.01）（见图4）。

2.3明胶-氧化铅血管造影

术后第7天，麻醉后先通过向大鼠一侧颈动脉注入0.9%生理盐水，同侧颈静脉放血排净大鼠体内血液，然后将预置的明胶+氧化铅灌注液（100ml/kg）缓慢注射入颈动脉，当观察到大鼠巩膜及四肢末端色泽变成造影剂颜色后停止注射。灌注成功后将大鼠冷藏12-24小时，使明胶凝集，最后将大鼠背部皮瓣及周围皮肤解剖，平铺行X线摄影。

仙茅苷组皮瓣远端造影剂充盈，而对照组的造影剂局限在皮瓣近端和中间区域（见图5）。

2.4组织学检测

皮瓣术后7天取皮瓣标本，在皮瓣中点处取样，将皮瓣组织浸泡于4％多聚甲醛液中固定，石蜡包埋，制成4微米厚的切片，HE染色。光镜（100倍及200倍）下观察肉芽组织层厚度、组织水肿、坏死、炎症细胞浸润等情况。

仙茅苷组见成纤维细胞增生，肉芽组织较薄，组织水肿较少，炎症细胞浸润少。生理盐水组成纤维细胞增生较少，组织水肿明显，炎症细胞浸润严重（见图6）。

在10×10 倍光镜下随意选取5个视野计数微血管数量取平均值。微血管计数，仙茅苷组在皮瓣中区(24.46 ± 2.04)个/mm²。对照组在皮瓣中区 (13.42 ± 0.99)个/mm²，两组中区血管密度比较，差异有统计学意义（P＜0.01）（见图7）。

2.5 免疫组化观察

检测血管内皮生长因子（VEGF）在实验组和对照组的表达及分布情况。选择染色均匀的区域，在 40×10倍光镜下进行观察，每张片子取五个视野拍摄保存，在拍摄过程中，设置白平衡、快门时间等参数一致。将保存的图片导入Image-Pro Plus v6.0软件，选择需要分析的指标“累积吸光度IA值”，读取IA数值进行测量，作为评价VEGF表达的指标。

免疫组化染色发现仙茅苷组大鼠皮瓣VEGF表达明显高于对照组。仙茅苷组的VEGF表达为量4028±125.4，对照组的VEGF表达为2154±94.59，两组VEGF表达比较，差异有统计学意义（P＜0.01)。（见图8）

2.6 超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）表达的检测

术后7 天，于皮瓣中区正中部位切取0.5 cm×0.5 cm全层组织，去除肉膜层，称质量，稀释，冰水浴中制成体积分数10％组织匀浆液．按照SOD、MDA检测试剂盒说明书，检测二者含量。

仙茅苷组的SOD值为(52.88±2.165 U/mg•protein)，对照组的SOD值为 (20.47±1.38 U/mg•protein)，仙茅苷组的MDA含量为(23.55±1.42 nmol/mg•protein)，对照组的MDA含量为 (63.24±2.23 nmol/mg•protein)，两组SOD值和MDA含量比较，差异有统计学意义（P＜0.05)（见图9）。

结论：1、仙茅苷可以促进缺血随意皮瓣的存活。

2、仙茅苷促进皮瓣存活的机理可能是促进血管内皮生长因子（VEGF）的表达，从而促进新生血管的增生有关。

3、仙茅苷促进皮瓣存活的机理可能与减少缺血皮瓣组织的缺血再灌注有关。

Claims (2)

1.仙茅苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。

2.根据权利要求1所述的仙茅苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用，其特征在于：按每1毫克仙茅苷粉末溶于1毫升的生理盐水，配成1mg/ml溶液，使用方法为每千克体重大鼠每日灌胃剂量10mg仙茅苷，5～7天为一疗程。