CN108267537A - 一种鉴别上清丸中黄柏的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中黄柏的方法,其中薄层色谱法为:吸取供试品溶液3~5μl,对照药材溶液3~5μl,对照品溶液3~5μl,分别点于高效硅胶GF254薄层板上,以体积比为12:6:3:3:1的甲苯‑乙酸乙酯‑异丙醇‑甲醇‑浓氨溶液为展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中加入适量浓氨水,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。本方法操作简便,分离效果快速、准确,重现性良好,专属性强,为上清丸的进一步质量控制提供依据。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂检测技术领域,具体涉及一种鉴别上清丸中黄柏的方法。
背景技术
上清丸收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》中,原质量标准较低,仅有性状和显微鉴别,目前尚无该制剂中黄柏鉴别的研究。
《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求中明确指出:实验中应注重绿色环保要求,尽量采用毒害小,污染少的试剂、试药,避免使用苯等毒害性大的溶剂;使用对照药材应保证药材的主斑点在样品中均有对应的斑点,供试品色谱中不能只有对照药材色谱中的1-2个次要斑点相对应。[肖燕.上清丸质量标准的研究[J].中国民族民间医药,2008,08:35-37.]和2000年版《中国药典》一部中黄柏药材的鉴别,均使用盐酸小檗碱做为对照品,但展开剂体系中均含有苯;而在2015年版《中国药典》一部中,黄柏药材的鉴别项下,使用盐酸黄柏碱做为对照品,盐酸黄柏碱价格相对昂贵;因此现有技术中缺乏一种相对安全、低成本、且鉴别效果好的方法。
发明内容
本发明提供了一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中黄柏的方法。上清丸制剂中,黄柏药材生粉入药但在处方中用量较少且粉蜜比达到1:1.7~1.8,其在上清丸制剂中含量不足4%。虽然其量小,但增加黄柏鉴别可为上清丸制剂的进一步质量控制提供依据。然而采用现有技术中的黄柏药材或其它含黄柏的中成药中的黄柏鉴别方法都无法得到较好的鉴别效果。
本发明技术方案如下:
一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中黄柏的方法,包括如下步骤:
(1)供试品溶液的制备:
取本品2~4g,剪碎,加甲醇10-20ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2~3ml使溶解,作为供试品溶液;
(2)对照药材溶液的制备:
取黄柏对照药材0.1~0.2g,同步骤(1)方法制成对照药材溶液;
(3)对照品溶液的制备:
取盐酸小檗碱1~2mg,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含0.5~1mg盐酸小檗碱的对照品溶液;(4)阴性样品溶液的制备:
取缺黄柏的阴性样品2~4g,同步骤(1)方法制成阴性样品溶液;
(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取3~5μl,分别点于同一薄层板上,以体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液为展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入大于或等于展开剂体积的浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;另一槽中加入的浓氨水量不溢出至加入展开剂的那一槽中。
本发明所述鉴别上清丸中黄柏的方法优选为:
(1)供试品溶液的制备:
取本品2~4g,剪碎,加甲醇10-20ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2~3ml使溶解,作为供试品溶液;
(2)对照药材溶液的制备:
取黄柏对照药材0.1~0.2g,同步骤(1)方法制成对照药材溶液;
(3)对照品溶液的制备:
取盐酸小檗碱1~2mg,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含0.5~1mg盐酸小檗碱的对照品溶液;(4)阴性样品溶液的制备:
取缺黄柏的阴性样品2~4g,同步骤(1)方法制成阴性样品溶液;
(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取3~5μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取6~8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8~30ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。
进一步的,所述薄层板为高效硅胶GF254薄层板。
进一步的,所述方法的展开剂加入方式为取6~8ml展开剂加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8~30ml浓氨水预饱和。
进一步的,所述方法的步骤(4)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取4μl,分别点于薄层板上。
本发明所述鉴别上清丸制剂中黄柏的方法中所述上清丸制剂为大蜜丸。
本发明的有益效果:
(1)黄柏在处方中含量较低且以酒黄柏入药,薄层鉴别成份复杂,[肖燕.上清丸质量标准的研究[J].中国民族民间医药,2008,08:35-37.]中上清丸的黄柏鉴别方法展开剂为12:6:3:3:3的苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液,本方法用甲苯代替苯并调整了展开剂比例得到较好的分离效果。
(2)氨蒸气在层析过程中起关键作用。氨蒸气预饱和展开缸一般实验步骤是将浓氨水加入小烧杯再放置在展开缸中预饱和,得到的供试品色谱,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,只有一个相同颜色的荧光斑点对应,且薄层成点性不好,Rf值不适宜(如对比列2)。本方法将浓氨水直接加入双槽展开缸的另一槽,解决了上述问题,使黄柏药材特征斑点得到有效分离。同时在供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有两个相同颜色的荧光斑点对应,在与对照药材色谱相应的位置上,有三个相同颜色的荧光斑点对应;
(3)本方法操作简便,分离效果快速、准确,检验成本低,重现性良好,专属性强,为上清丸制剂的进一步质量控制提供依据。
(4)在2015年版《中国药典》一部中,黄柏药材的鉴别项下,使用盐酸黄柏碱做为对照品。盐酸黄柏碱价格昂贵,本方法使用盐酸小檗碱做为对照品,节约检验成本,同时主斑点更清晰,Rf值更适宜,重现性良好,专属性强。
附图说明
图1是实施例1的黄柏薄层鉴别图,其中1-阴性样品;2-盐酸小檗碱对照品溶液;3-黄柏对照药材溶液;4~6--供试品溶液样品。
图2是实施例2的黄柏薄层鉴别图,其中1-盐酸小檗碱对照品溶液;2-黄柏对照药材溶液;3~5--供试品溶液样品。
图3是实施例3的黄柏薄层鉴别图,其中1~2-供试品溶液样品;3-阴性样品;4-盐酸小檗碱对照品溶液;5-黄柏对照药材溶液;6--供试品溶液样品。
图4是对比例1的黄柏薄层鉴别图,其中1-盐酸小檗碱对照品溶液;2-黄柏对照药材溶液;3-阴性样品;4~6--供试品溶液样品。
图5是对比例2的黄柏薄层鉴别图,其中1-黄柏对照药材溶液;2~4-供试品溶液样品;5-阴性样品;6-盐酸小檗碱对照品溶液。
图6是对比例3的黄柏薄层鉴别图,其中1-阴性样品;2-黄柏对照药材溶液;3-盐酸小檗碱对照品;4~6--供试品溶液样品。
图7是对比例4的黄柏薄层鉴别图,其中1-阴性样品;2-黄柏对照药材溶液;3-盐酸小檗碱对照品;4~6--供试品溶液样品。
图8是对比例5的黄柏薄层鉴别图,其中1-阴性样品;2-盐酸小檗碱对照品溶液;3-黄柏对照药材溶液;4~6--供试品溶液样品。
图9是对比例6的黄柏薄层鉴别图,其中1-阴性样品;2-盐酸小檗碱对照品溶液;3-黄柏对照药材溶液;4~6--供试品溶液样品。
图10是对比例7的黄柏薄层鉴别图,其中1-盐酸小檗碱对照品溶液;2-黄柏对照药材溶液;3~8--供试品溶液样品。
具体实施方式
以下实施例和对比例中上清丸制剂以上清丸(大蜜丸)为例,所用上清丸为《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》收载的上清丸。其中实施例或对比例设置一个阴性对照样品(按上清丸项下【处方】称取缺黄柏的其他药材,制成缺黄柏的阴性对照样品,按每个实施例或对比例中供试品溶液制备方法同法制成缺黄柏的阴性样品溶液,与供试品溶液等体积量点于薄层板上进行薄层鉴别)。通过阴性对照样的薄层鉴别结果,可表明本发明方法阴性无干扰,专属性强。
实施例1
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:
取本品2g,剪碎,加甲醇10ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;
(2)对照药材溶液的制备:
取黄柏对照药材0.1g,同步骤(1)方法制成对照药材溶液;
(3)对照品溶液的制备:
取盐酸小檗碱1mg,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg盐酸小檗碱的对照品溶液;
(4)阴性样品溶液的制备:
取缺黄柏的阴性样品2g,同步骤(1)方法制成阴性样品溶液;
(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取4μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取6ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰。
实施例2
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(3)同实施例1,
(4)薄层色谱法鉴别:吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液等体积量,各吸取5μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取6ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入12ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例3
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:
取本品2g,剪碎,加甲醇10ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;
(2)对照药材溶液的制备:
取黄柏对照药材0.2g,同步骤(1)方法制成对照药材溶液;
(3)对照品溶液的制备:
取盐酸小檗碱2mg,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含1mg盐酸小檗碱的对照品溶液;
(4)阴性样品溶液的制备:
取缺黄柏的阴性样品2g,同步骤(1)方法制成阴性样品溶液;
(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取3μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入30ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰。
对比例1
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(4)同实施例1,(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,放置于体积比为12:6:3:3:3的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液展开剂,氨蒸气预饱和展开缸,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,勉强可以判断只有一个荧光斑点对应,需调整展开剂比例。
对比例2
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(4)同实施例1,(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取5μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,在小烧杯中加入6ml氨水放置在展开缸另一槽,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,只有一个荧光斑点对应,且薄层成点性不好,Rf值不适宜。
对比例3
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(4)同实施例1,(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取5μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取6ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,在小烧杯中加入10ml氨水放置在展开缸另一槽,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,只有一个荧光斑点对应,Rf值不适宜。
对比例4
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(4)同实施例1,(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取5μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入6ml浓氨水预饱和,,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,只有一个荧光斑点对应,且薄层成点性不好。
对比例5
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(4)同实施例1,(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取5μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,取8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,只有一个次要斑点对应,不符合《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求中的:供试品色谱中不能只有对照药材色谱中的1-2个次要斑点相对应。
对比例6
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(4)同实施例3,(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,取8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,只有一个荧光斑点对应,且薄层成点性不好。
对比例7
一种鉴别上清丸制剂中黄柏的方法,包括以下步骤:
步骤(1)-(3)同实施例1,(4)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液等体积量,各吸取6μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,但点样量过大。
Claims (6)
1.一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中黄柏的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:
取本品2~4g,剪碎,加甲醇10-20ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2~3ml使溶解,作为供试品溶液;
(2)对照药材溶液的制备:
取黄柏对照药材0.1~0.2g,同步骤(1)方法制成对照药材溶液;
(3)对照品溶液的制备:
取盐酸小檗碱1~2mg,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含0.5~1mg盐酸小檗碱的对照品溶液;
(4)阴性样品溶液的制备:
取缺黄柏的阴性样品2~4g,同步骤(1)方法制成阴性样品溶液;
(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取3~5μl,分别点于同一薄层板上,以体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液为展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入大于或等于展开剂体积的浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:
取本品2g,剪碎,加甲醇10ml,超声30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;
(2)对照药材溶液的制备:
取黄柏对照药材0.1g,同步骤(1)方法制成对照药材溶液;
(3)对照品溶液的制备:
取盐酸小檗碱1mg,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg盐酸小檗碱的对照品溶液;
(4)阴性样品溶液的制备:
取缺黄柏的阴性样品2g,同步骤(1)方法制成阴性样品溶液;
(5)薄层色谱法鉴别:
吸取步骤(1)-(4)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性样品溶液等体积量,各吸取4μl,分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上,取6~8ml体积比为12:6:3:3:1的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨溶液的展开剂,加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8~30ml浓氨水预饱和,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述薄层板为高效硅胶GF254薄层板。
4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,取6~8ml展开剂加入双槽展开缸中一槽,另一槽中直接加入8~30ml浓氨水预饱和。
5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述步骤(4)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取4μl,分别点于薄层板上。
6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述上清丸制剂为大蜜丸。
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- 2016-12-31 CN CN201611266977.3A patent/CN108267537B/zh active Active
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