CN108251328A - 一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂及其应用。将越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418发酵液配合载体制备而成，所述的越南伯克霍尔德氏菌Burkholderia vietnamiensis P418在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期是2004年8月30日，保藏编号：CGMCC No.1212。本发明的微生物菌剂防治蔬菜根结线虫病的防治效果达到75％以上。

Description

一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂及其应用
技术领域
本发明涉及微生物菌剂及其应用技术领域，特别是涉及一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂及其应用。
背景技术
随着设施农业的推广和蔬菜的连作，蔬菜南方根结线虫发生日益严重，成为危害蔬菜生产的主要病害之一，除辣椒、葱蒜尚未受到感染外，其他蔬菜均有侵染报道，特别是瓜类、茄类、豆类等危害严重，造成减产甚至绝产；根结线虫(Meloidogyne spp.)是一种高度专化型的土传性病原物。据报道，我国约有50％的温室蔬菜被根结线虫为害，每年造成的经济损失约4亿美元。
目前防治蔬菜根结线虫的方式主要有农业防治、物理防治和化学防治方式，农业防治主要采取高抗品种或嫁接苗无土栽培方式；物理防治主要采取氰氨化钙土壤消毒法、蒸汽消毒法；化学防治主要采取化学熏蒸剂消毒法和化学药剂防治，化学药剂熏蒸法的化学药剂如溴甲烷、棉隆、威百亩、噻唑啉等，化学药剂防治主要有阿维菌素、噻唑啉等。市场上生物防治菌剂主要有淡紫拟青霉、厚壁轮枝霉、蜡质芽孢杆菌、伯克氏菌、解淀粉芽孢杆菌，已经农业部登记的防治蔬菜根结线虫病的生物农药有淡紫拟青霉和蜡质芽孢杆菌，但目前在农业生产中的防治效果均低于65％。由于蔬菜根结线虫发生严重，化学用药量随着南方根结线虫抗药性的增加，化学防治效果越来越低，因此，研制一种高效防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌及其配套的使用方法成为市场急需。
发明内容
本发明就是针对上述存在的缺陷而提供一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂及其应用。本发明的微生物菌剂防治蔬菜根结线虫病的防治效果达到75％以上。
本发明的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂及其应用技术方案为，一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，将越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)P418发酵液配合载体制备而成，所述的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)P418在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所，保藏日期是2004年8月30日，保藏编号：CGMCC No.1212。
发酵液和载体的重量比为1:5-7，混合后的微生物菌剂中，有效活菌数达到10CFU/克以上，所述的载体为麦饭石，所述的麦饭石不大于80目。
所述的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，通过以下步骤制备：
(1)种子制备：将伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418 接入固氮培养基活化，挑取单菌落接入液态种子培养基，经28℃、 200r/min培养24-36小时，OD值大于1.0即可作为菌种备用；所述的固氮培养基包括：磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠0.02g，氯化钙0.2g，谷氨酸0.05g，乙二胺四乙酸铁钠盐0.066g，葡萄糖5g，琼脂10g，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4。
(2)发酵液制备：按照1％接种量接入灭菌的发酵培养基中，在28℃、150r/min-200r/min情况下培养36-48小时，发酵菌数达到100CFU/ml 以上停止发酵；
(3)微生物菌剂制备：将发酵液和载体的比例按照1:5-7比例混合，使微生物菌剂的有效活菌数达到10CFU/克以上。
所述的微生物菌剂在防治蔬菜南方根结线虫病中的应用。
所述的应用，包括以下步骤：
①整地：按照每亩地使用200公斤优质有机肥撒入土壤中，旋耕整地；
②育苗：称取微生物菌剂10-50克，稀释50-100倍，将蔬菜种子浸入稀释液内浸泡15分钟，沥干后播种，在育苗过程中可用稀释50倍微生物菌剂液灌根一次；
③穴施：按照每亩施用微生物菌剂30公斤添加到高有机质(每亩50 公斤)基质中，将其平均施入每棵蔬菜根穴内，注意穴施微生物菌剂要与土壤充分混合；
④灌根：在蔬菜生长期可按照每次10公斤的使用量间隔45天后使用一次，保证作物全生长期全程保护。
该微生物菌剂中还含有豆粕。
豆粕在微生物菌剂中的重量占比为50％。
所述的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，通过以下步骤制备：
(1)种子制备：将伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418 接入固氮培养基活化，挑取单菌落接入液态种子培养基，经28℃、 200r/min培养24-36小时，OD值大于1.0即可作为菌种备用；所述的固氮培养基包括：磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠0.02g，氯化钙0.2g，谷氨酸0.05g，乙二胺四乙酸铁钠盐0.066g，葡萄糖5g，琼脂10g，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4；
(2)发酵液制备：按照1％接种量接入灭菌的发酵培养基中，在28℃、 150r/min-200r/min情况下培养36-48小时，发酵菌数达到100CFU/ml 以上停止发酵得到液态发酵液；
(3)微生物菌剂制备：将液态发酵液和麦饭石按照重量比1：5-7比例混合，再按照1：1比列将豆粕与混合好的菌剂混合均匀后低温50 度以下吹干。
所述的微生物菌剂在防治蔬菜南方根结线虫病中的应用。
所述的应用，包括以下步骤：
①整地：按照每亩地使用200公斤优质有机肥撒入土壤中，旋耕整地；
②育苗：称取液态发酵液10-50克，稀释50-100倍，将蔬菜种子浸入稀释液内浸泡15分钟，沥干后播种，在育苗过程中可用稀释50倍液态发酵液灌根一次；
③穴施：按照每亩施用微生物菌剂30公斤平均施入每棵蔬菜根穴内，注意穴施微生物菌剂要与土壤充分混合；
④灌根：在蔬菜生长期可按照每次10公斤微生物菌剂的使用量间隔45天后使用一次，保证作物全生长期全程保护。
本发明的有益效果为：本发明的微生物菌剂防治蔬菜根结线虫病的防治效果达到75％以上。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。
以下实施例所述的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418发酵液配合载体制备而成，所述的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所，保藏日期是2004年8 月30日，保藏编号：CGMCCNo.1212。
实施例1
一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，通过以下步骤制备：
(1)种子制备：将伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418 接入专用固氮培养基(磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠 0.02g，氯化钙0.2g，谷氨酸0.05g，乙二胺四乙酸铁钠盐0.066g，葡萄糖5g，琼脂10g，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4)活化，挑取单菌落接入液态种子培养基，经28℃、200r/min培养24-36小时，OD值大于1.0即可作为菌种备用；
(2)发酵液制备：按照1％接种量接入灭菌的发酵培养基中，在28℃、 150r/min-200r/min情况下培养36-48小时，发酵菌数达到100CFU/ml 以上停止发酵；
(3)微生物菌剂制备：将发酵液和麦饭石按照1:5-7比例混合，所述的麦饭石不大于80目，使微生物菌剂的有效活菌数达到108CFU/ 克以上。
经过以上步骤得到产品A。
实施例2
一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，通过以下步骤制备：
(1)种子制备：将伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418 接入专用固氮培养基(磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠 0.02g，氯化钙0.2g，谷氨酸0.05g，乙二胺四乙酸铁钠盐0.066g，葡萄糖5g，琼脂10g，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4)活化，挑取单菌落接入液态种子培养基，经28℃、200r/min培养24-36小时，OD值大于1.0即可作为菌种备用；
(2)发酵液制备：按照1％接种量接入灭菌的发酵培养基中，在28℃、 150r/min-200r/min情况下培养36-48小时，发酵菌数达到100CFU/ml 以上停止发酵；
(3)微生物菌剂制备：将发酵液和麦饭石按照1：5-7比例混合，所述的麦饭石不大于80目，再按照1：1比列将豆粕与混合好的菌剂混合均匀后低温50度以下吹干。
经过以上步骤得到产品B。
实施例3
1.1供试菌剂(产品A和产品B)、菌肥
微生物菌剂：产品A，活菌量10亿/g、产品B，活菌量5亿/g； BCJB01粉剂，20亿/g；LTR-2和T11-W孢子粉，5亿/g；自制。
所述的BCJB01粉剂中所用的蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus BCJB01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号是：CGMCC NO.10477，保藏日期为2015年1月30日，该菌株在专利号为2015100819737的中国专利中公开；
所述的T11-W孢子粉中所用的哈茨木霉Trichoderma harzianum T11-W在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (简称CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC NO.7938，保藏时间为2013年 7月19日，该菌株在专利号为201310374929.6的中国专利中公开；
生物菌肥：加更优，济南五福生物技术有限公司。
1.2供试作物
黄瓜，品种为“518”
1.3防治对象
黄瓜根结线虫(Meloidogyne spp.)
1.4试验方法
试验在济阳曲堤镇黄瓜棚内进行，黄瓜棚为12年连续种植棚，根结线虫病株率在85％以上。试验于2017年6月19日整地，同时施用生物菌肥、营养基质及微生物菌剂。6月30日移栽黄瓜苗，同时穴施微生物菌剂。至2017年9月26日拉秧调查,试验期间不施用防治根结线虫的其他药剂。
1.5试验处理
撒施底肥及穴施处理共6组，设未施用微生物菌剂、菌肥及营养基质的常规对照1组，每处理6行，共计42行，每组处理面积约66.7 平方米。
表1试验处理
Table 1 experimental treatment
1.6调查及病害统计方法
2017年9月26日，拉秧调查植株受害级别，每处理组调查总株数不低于180株，记录调查总株数和各级病株数，计算根结指数和防治效果；病株根结分级标准为：0级：无根结；1级:有少数根结， 2级:大部分根上有根结；3级：在虫瘿上有再生根结；4级：根结互相连接成根结团块。
病株率＝各级病株总数/调查总株数×100％；
病情指数＝[Σ(各级病株数×相应级数值)/(调查总株数×最高病级)]×100；
防治效果＝(对照根结指数-处理根结指数)/对照根结指数× 100％。
统计分析用SPSS16.0软件进行，多重比较采用邓肯氏新复极差检验法。
2结果与分析
表2越南伯克霍尔德氏菌及其组合生防菌对黄瓜根结线虫的田间防治
Table2 Field control of Burkholderia vietnamiensis and its compositemicrobial flora on cucumber root knot nematodes
注：每行数据后不同字母表示差异显著(P≤0.05)
越南伯克霍尔德氏菌及其组合生防菌对黄瓜根结线虫的田间防治，详见表2。由表2可知，所有处理组的根结线虫病株率均比常规对照的低，不同处理组对黄瓜根结线虫的防治效果存在差异。其中，处理2和处理5，对黄瓜根结线虫的防治效果最好，防效分别为88.04％和90.05％；处理3和处理4对黄瓜根结线虫的防治效果次之，防效分别为73.06％和78.96％。处理1和处理6对黄瓜根结线虫的防治效果较弱，防效分别为60.28％和58.21％。
实施例2
1.1供试菌剂(产品A和产品B)、有机肥及对照药剂
微生物菌剂：产品A，10亿/g；产品B，5亿/g；自制。
对照药剂：10％噻唑膦颗粒剂，日本石原产业株式会杜。
有机肥：海藻生物有机肥，济南澳利新型肥料有限公司。
1.2供试作物
番茄，品种为“天宝一号”,济南大江种子有限公司。
1.3防治对象
番茄根结线虫
1.4试验方法
试验在山东省科学院生态研究所试验田中进行，试验田已连续5年种植番茄，根结线虫病株率在80％以上。试验在2016年6月 10日开始整地，同时施用有机肥、营养基质、P418粉剂及对照药剂10％噻唑膦颗粒剂。6月24日移栽番茄苗，同时穴施BP418粉剂。至 8月24日调查期间，试验不再施用防治根结线虫的药剂。
1.5试验处理
撒施底肥处理共4组，设未施用P418菌剂、有机肥及营养基质的空白对照1组，常规农药对照1组，每处理3行，三次重复，随机分布，每组处理面积约66.7平方米。
空白对照：未施用本发明产品、有机肥及营养基质；
农药对照：10％噻唑膦颗粒剂2kg/666.7m2；
处理1、产品B 60kg/666.7m2+有机肥200kg/666.7m2；
处理2、有机肥200kg/666.7m2+产品A 30kg/666.7m2；
处理3、产品B 60kg/666.7m2；
处理4、产品A 30kg/666.7m2。
1.6调查及病害统计方法
2016年8月24日，调查植株受害级别，每处理组调查总株数不低于90株，记录调查总株数和各级病株数，计算根结指数和防治效果；病株根结分级标准为：0级：无根结；1级:有少数根结， 2级:大部分根上有根结；3级：在虫瘿上有再生根结；4级：根结互相连接成根结团块。
病株率＝各级病株总数/调查总株数×100％；
病情指数＝[Σ(各级病株数×相应级数值)/(调查总株数×最高病级)]×100；
防治效果＝(对照根结指数-处理根结指数)/对照根结指数× 100％。
数据统计分析：统计分析用SPSS16.0软件进行，多重比较采用邓肯氏新复极差检验法。
2结果与分析
表3不同处理方式的P418微生物菌剂对番茄根结线虫的防治效果
注：每行数据后不同字母表示差异显著(P≤0.05)
由表1可知，不同处理方式的P418微生物菌剂对番茄根结线虫的防治效果存在差异，其中，在整地时同时处理1对番茄根结线虫的防治效果最好，防效为80.41％，优于对照药剂10％噻唑膦颗粒剂对番茄根结线虫的防治效果；在整地时处理2好于处理3，对番茄根结线虫的防治效果分别为76.89％和64.37％。产品A和产品B处理对根结线虫的防治效果与单加基质的效果相当。

Claims (10)

1.一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，其特征在于，将越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418发酵液配合载体制备而成，所述的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期是2004年8月30日，保藏编号：CGMCC No.1212。
2.根据权利要求1所述的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，其特征在于，发酵液和载体的重量比为1:5-7，混合后的微生物菌剂中，有效活菌数达到10CFU/克以上，所述的载体为麦饭石，所述的麦饭石不大于80目。
3.根据权利要求1所述的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，其特征在于，通过以下步骤制备：
(1)种子制备：将伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418接入固氮培养基活化，挑取单菌落接入液态种子培养基，经28℃、200r/min培养24-36小时，OD值大于1.0即可作为菌种备用；所述的固氮培养基包括：磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠0.02g，氯化钙0.2g，谷氨酸0.05g，乙二胺四乙酸铁钠盐0.066g，葡萄糖5g，琼脂10g，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4。
(2)发酵液制备：按照1％接种量接入灭菌的发酵培养基中，在28℃、150r/min-200r/min情况下培养36-48小时，发酵菌数达到100CFU/ml以上停止发酵；
(3)微生物菌剂制备：将发酵液和载体的比例按照1:5-7比例混合，使微生物菌剂的有效活菌数达到10CFU/克以上。
4.如权利要求1所述的微生物菌剂在防治蔬菜南方根结线虫病中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
①整地：按照每亩地使用200公斤优质有机肥撒入土壤中，旋耕整地；
②育苗：称取微生物菌剂10-50克，稀释50-100倍，将蔬菜种子浸入稀释液内浸泡15分钟，沥干后播种，在育苗过程中可用稀释50倍微生物菌剂液灌根一次；
③穴施：按照每亩施用微生物菌剂30公斤添加到高有机质(每亩50公斤)基质中，将其平均施入每棵蔬菜根穴内，注意穴施微生物菌剂要与土壤充分混合；
④灌根：在蔬菜生长期可按照每次10公斤的使用量间隔45天后使用一次，保证作物全生长期全程保护。
6.根据权利要求1所述的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，其特征在于，该微生物菌剂中还含有豆粕。
7.根据权利要求6所述的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，其特征在于，豆粕在微生物菌剂中的重量占比为50％。
8.根据权利要求6所述的一种防治蔬菜南方根结线虫病的微生物菌剂，其特征在于，通过以下步骤制备：
(1)种子制备：将伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418接入固氮培养基活化，挑取单菌落接入液态种子培养基，经28℃、200r/min培养24-36小时，OD值大于1.0即可作为菌种备用；所述的固氮培养基包括：磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠0.02g，氯化钙0.2g，谷氨酸0.05g，乙二胺四乙酸铁钠盐0.066g，葡萄糖5g，琼脂10g，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4；
(2)发酵液制备：按照1％接种量接入灭菌的发酵培养基中，在28℃、150r/min-200r/min情况下培养36-48小时，发酵菌数达到100CFU/ml以上停止发酵得到液态发酵液；
(3)微生物菌剂制备：将液态发酵液和麦饭石按照重量比1：5-7比例混合，再按照1：1比列将豆粕与混合好的菌剂混合均匀后低温50度以下吹干。
9.如权利要求6所述的微生物菌剂在防治蔬菜南方根结线虫病中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
①整地：按照每亩地使用200公斤优质有机肥撒入土壤中，旋耕整地；
②育苗：称取液态发酵液10-50克，稀释50-100倍，将蔬菜种子浸入稀释液内浸泡15分钟，沥干后播种，在育苗过程中可用稀释50倍液态发酵液灌根一次；
③穴施：按照每亩施用微生物菌剂30公斤平均施入每棵蔬菜根穴内，注意穴施微生物菌剂要与土壤充分混合；
④灌根：在蔬菜生长期可按照每次10公斤微生物菌剂的使用量间隔45天后使用一次，保证作物全生长期全程保护。
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