CN108210983A

CN108210983A - 一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法

Info

Publication number: CN108210983A
Application number: CN201711272026.1A
Authority: CN
Inventors: 金玉
Original assignee: Nanjing Tianzong Yikang Biological Science & Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Tianzong Yikang Biological Science & Technology Co Ltd
Priority date: 2017-11-27
Filing date: 2017-11-27
Publication date: 2018-06-29

Abstract

本发明涉及一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(0.5％～2.5％)、酶切寡聚透明质酸(0.05％～1.0％)、碱性成纤维生长因子(0.001％～0.02％)、辛夷提取物(0.005～0.3％)、甘油(0.5％～5％)、纯化水(91.2％～98.9％)。与现有技术相比，本发明海绵具有优异的粘附性、柔韧性和降解性，生物相容性好，体内降解周期与创面愈合周期一致，不粘连创面，无胶状物残留，具有良好的止血、修复功能。

Description

一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法

技术领域

本发明涉及医用材料技术领域，具体涉及一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法。

背景技术

鼻腔手术是国内乃至全球范围内非常常见的外科，鼻腔手术因范围小，局部血管丰富，易出血，位置深而术后不能缝扎止血，必须依靠填塞止血。鼻腔填塞是防止鼻腔鼻窦术后出血、粘连或再狭窄的重要措施。挑选正确和适宜患者情况的鼻内填塞物是鼻内镜手术至关重要的主要技术之一。

目前大多数的情况中，医院还在使用不可降解伤口敷料，弊端甚多。透明质酸鼻腔填充物作为一种可降解鼻用敷料近年得到广泛应用，其相比传统的凡士林纱条、PVA类膨胀海绵填塞效果优异，但目前市场中透明质酸鼻用填充物多为未改性透明质酸制备而成，所用透明质酸分子量小、材料弹性不高、压迫止血不够、吸血欠佳。但透明质酸作为一种天然存在于人体内的高分子多糖物质，其具有极佳的生物相容性、降解性、消炎、修复愈合功效。因此，如何通过改性处理制备一种含透明质酸的鼻用止血海绵具有重要意义。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法，经过琼脂糖改性后的透明质酸具有优异的止血效果，同时具有修复受损面，快速愈合伤口作用。

本发明采用以下技术方案：

一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(0.5％～2.5％)、酶切寡聚透明质酸(0.05％～1.0％)、碱性成纤维生长因子 (0.001％～0.02％)、辛夷提取物(0.005～0.3％)、甘油(0.5％～5％)、纯化水(91.2％～98.9％)。

本发明的琼脂糖接枝透明质酸形成海绵结构体，起到吸收血液和渗出液，粘附损伤表面，润湿损伤面，加速创面表层修复。酶切寡聚透明质酸渗透至鼻腔创面深层清除过多的自由基，促进血管生成，增加血液循环，改善中间代谢，实现损伤的愈合。本发明的鼻腔用海绵将改性高分子透明质酸和小分子透明质酸协同使用，加速促进鼻腔创面修复。

碱性成纤维生长因子是一种多功能细胞生长因子，具有广泛的生物活性，能促进与创伤修复有关的所有细胞迅速增殖和分化，从而主动促进创面修复，全面提高愈合质量，是一种安全有效的创伤修复新原料。作用机理：早期趋化炎症细胞，诱导免疫细胞移形，缩短炎症反应期，中期促进修复细胞分裂和增殖，晚期调控细胞外基质分布排列，刺激胶原酶的合成和分泌，分解过剩胶原，减少瘢痕形成。

辛夷提取物富含α-松油二环烯、桉油精、胡椒酚甲醚、丁香油酚、黄樟醚等，采用水蒸气蒸馏法提取，具有良好的抗炎作用，可降低鼻腔分泌、抑制喷嚏频率、减轻鼻粘膜的病理改变。

优选地，一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(1.5％)、酶切寡聚透明质酸(0.3％)、碱性成纤维生长因子(0.01％)、辛夷提取物 (0.01％)、甘油(3％)、纯化水(97.88％)。

优选地，琼脂糖接枝透明质酸制备所用的高分子量透明质酸的分子量为1.5×10⁶Da～ 2.0×10⁶Da，优选2.0×10⁶Da；酶切寡聚透明质酸的分子量为1.0×10³Da～1.0×10⁴Da，优选4000 Da。

优选地，碱性成纤维生长因子为重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)，是通过基因重组技术对牛bFGF和人bFGF基因进行修饰和重组，并获得rh-bFGF高效表达工程菌株，工程菌株通过高密度发酵、蛋白分离纯化等获取rh-bFGF，规格为15000IU/mg～2500IU/mg。

优选地，所述辛夷提取物为辛夷花蕾的水提物，规格为10∶1，粒径80目。

优选地，所述甘油为天然医用级甘油。

本发明还提供了一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法，包括以下步骤：

(1)将琼脂糖接枝透明质酸和酶切寡聚透明质酸轻撒于适量纯化水表面，静置浸泡过夜，制得第一组分；

(2)将剩余纯化水加入容器内，开启搅拌，速度300r/min，然后常温下加入所需的碱性成纤维生长因子、甘油和辛夷提取物，搅拌30min，分散均匀后作为第二组分；

(3)在搅拌速度300r/min下将第一组加入第二组分中，常温搅拌90min分散均匀；

(4)将(3)中制备的凝胶倒入冻干盘，所用冻干盘为玻璃、不锈钢等材质的扁平状定型容器，凝胶厚度控制在4mm～8mm；

(5)最后将冻干盘在冷冻干燥机中-45℃预冻8h～12h，再进行-15℃低温升华32h～40h，以形成止血海绵；

(6)密封包装。

本发明制备的鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵经过辐照灭菌处理。

本发明具有以下有益效果：

本发明的一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵可以快速粘附于鼻腔手术创面，其中透明质酸起到吸止血、保湿、创面修复作用，碱性成纤维生长因子和辛夷提取物起到消炎、愈合和淡疤痕作用，海绵降解周期与创面愈合周期一致，不粘连创面，无胶状物残留，具有良好的止血、修复功能。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细介绍。

实施例1

一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(1.5％)、酶切寡聚透明质酸(0.3％)、碱性成纤维生长因子(0.01％)、辛夷提取物(0.01％)、甘油(3％)、纯化水(97.88％)。

酶切寡聚透明质酸的分子量为4000Da。

上述鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵的制备方法，包括以下步骤：

(6)密封包装，并辐照灭菌。

实施例2

一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(1.2％)、酶切寡聚透明质酸(0.8％)、碱性成纤维生长因子(0.015％)、辛夷提取物(0.02％)、甘油(4％)、纯化水(93.97％)。

酶切寡聚透明质酸的分子量为5000Da。

(6)密封包装，并辐照灭菌。

实施例3

一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(2.0％)、酶切寡聚透明质酸(0.5％)、碱性成纤维生长因子(0.01％)、辛夷提取物(0.1％)、甘油(5％)、纯化水(92.39％)。

酶切寡聚透明质酸的分子量为7000Da。

(6)密封包装，并辐照灭菌。

实施例4

一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(0.8％)、酶切寡聚透明质酸(1.0％)、碱性成纤维生长因子(0.02％)、辛夷提取物(0.2％)、甘油(1％)、纯化水(96.98％)。

酶切寡聚透明质酸的分子量为5000Da。

(6)密封包装，并辐照灭菌。

实施例5

一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(2.5％)、酶切寡聚透明质酸(0.5％)、碱性成纤维生长因子(0.01％)、辛夷提取物(0.07％)、甘油(2％)、纯化水(94.92％)。

酶切寡聚透明质酸的分子量为6000Da。

(6)密封包装，并辐照灭菌。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明所揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

临床试验例1

为表明本发明之效果，现将使用本发明的临床结果报告如下：

患者年龄：30～52岁，男166例，女34例，随机分为两组。治疗组100例(男86例，女14例)，对照组100例(男80例，女20例)，两组患者性别、年龄、病程和病例类型等方面比较无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

试验方法：

对照组：鼻腔手术后常规以凡士林纱条压迫止血，多为鼻腔完全填塞，置放时间为24h～48h。

治疗组：鼻腔手术后根据手术部位将琼脂糖接枝透明质酸海绵修剪成相应形状置于鼻道内，1min内海绵将迅速膨胀并均匀压迫在创面伤，于24h～48h后取出。

观察指标：

术后主要观察指标包括填塞期鼻腔疼痛和或头痛、填塞期及抽取时的出血量、术后鼻腔黏膜肿胀和鼻腔粘连情况。

疗效评定标准：

(1)填塞期患者鼻腔疼痛和(或)头痛以视觉模拟评分法(VAS)进行评分：0分为无痛；3分以下为轻微疼痛，患者能忍受(-)；4～6分为患者疼痛并影响睡眠，但尚能忍受(+)；7～10分为患者有逐渐强烈的疼痛，疼痛难忍(++)，由患者估计其疼痛程度分出3个等级。

(2)填塞期和抽取时的出血量：无明显出血为(-)；出血少量为(+)，是指少量渗血，无需再处理，自行停止；出血较多为(++)，是指需再进行处理的出血。

(3)术后鼻腔黏膜肿胀：由医师评判，无明显肿胀为(-)；轻度肿胀为(+)；重度肿胀为(++)。

(4)术后鼻腔粘连：鼻腔无粘连为(-)；粘连为(+)。

统计学方法：所有数据采用SPSS 13.0统计学软件进行处理，所有数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

试验结果：

治疗组无鼻腔疼痛和(或)头痛53例，轻微鼻腔疼痛和(或)头痛33例，明显鼻腔疼痛和(或)头痛14例；对照组无鼻腔疼痛和(或)头痛9例，轻微鼻腔疼痛和(或)头痛30例，明显鼻腔疼痛和(或)头痛61例。两组患者鼻腔填塞期间鼻腔疼痛和(或)头痛比较差异有显著性(P＜0.05)，治疗组鼻腔疼痛和(或)头痛明显轻于对照组。

治疗组填塞期和抽取时无明显出血52例，少量出血30例，出血较多18例；对照组无明显出血48例，少量出血37例，出血较多15例。两组患者填塞期和抽取时出血量比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

治疗组术后鼻腔黏膜无明显肿胀85例，轻度肿胀12例，重度肿胀3例；对照组鼻腔黏膜无明显肿胀33例，轻度肿胀37例，重度肿胀30例。两组患者术后鼻腔黏膜肿胀比较差异有显著性(P＜0.05)，治疗组鼻腔黏膜肿胀明显轻于对照组。

治疗组术后鼻腔无粘连99例，粘连1例；对照组术后鼻腔无粘连78例，粘连22例。两组患者术后鼻腔粘连比较差异有显著性(P＜0.05)，治疗组鼻腔粘连明显少于对照组，见表1：

表1治疗组合对照组患者填塞效果比较

试验结论：临床观察表明，采用琼脂糖接枝透明质酸海绵填塞，大多数患者无明显的鼻腔胀痛及头痛，鼻腔黏膜肿胀和鼻腔粘连方面明显优于凡士林纱条。

本发明发现，琼脂糖接枝透明质酸海绵吸水性强劲，特有的柔韧性和贴敷性让患者舒适，不存在纤维脱落的问题，大大减少了引发再次感染的危险，而且黏膜反应轻，鼻腔粘连少，值得在临床上推广应用。

Claims

1.一种鼻腔用琼脂糖接枝透明质酸海绵及其制备方法，其特征在于，包括以下质量百分比的组分：琼脂糖接枝透明质酸(0.5％～2.5％)、酶切寡聚透明质酸(0.05％～1.0％)、碱性成纤维生长因子(0.001％～0.02％)、辛夷提取物(0.005～0.3％)、甘油(0.5％～5％)、纯化水(91.2％～98.9％)。

2.根据权利要求1所述的琼脂糖接枝透明质酸为琼脂糖降解物与高分子量透明质酸通过化学反应获得，制备方法如下：

将体积分数2％琼脂糖溶于90℃～95℃热水中，降温至55℃，加入体积分数2％过氧化氢，恒温反应6h。将溶液减压浓缩后，以V_水∶V_乙醇＝1∶4的离心-溶剂沉淀法得到降解琼脂糖沉淀，经冷冻干燥后用去离子水洗去残留的过氧化氢，过滤沉淀后再冷冻干燥得降解琼脂糖粉末；然后将质量分数1.5％的降解琼脂糖粉末溶于热水，降温至30℃，加入质量分数0.5％的氢氧化钠溶液和体积分数1％的环氧氯丙烷，30℃磁力搅拌反应3h；真空除去多余的环氧氯丙烷，HCl将溶液调至中性。加入相同质量的透明质酸，30℃磁力搅拌，反应48h～60h，用透析袋(分子截流量8KD～12KD)透析72h，冷冻干燥后得到琼脂糖与透明质酸接枝物粉末。

3.根据权利要求1所述的琼脂糖接枝透明质酸制备使用的透明质酸分子量为1.5×10⁶Da～2.0×10⁶Da；酶切寡聚透明质酸的分子量为1.0×10³Da～1.0×10⁴Da。

4.根据权利要求1所述的高分子量透明质酸和酶切寡聚透明质酸通常以盐的形式存在，如其钠盐或锌盐。

5.根据权利要求1所述的碱性成纤维生长因子为重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)，是通过基因重组技术对牛bFGF和人bFGF基因进行修饰和重组，并获得rh-bFGF高效表达工程菌株，工程菌株通过高密度发酵、蛋白分离纯化等获取rh-bFGF，规格为15000IU/mg～2500IU/mg。

6.根据权利要求1所述的辛夷提取物为辛夷花蕾的水提物，规格为10∶1，粒径80目。

7.根据权利要求1所述的甘油为天然来源的医用级甘油。

8.根据权利要求1所述的制备方法如下：

(4)将(3)中制备的凝胶倒入冻干盘，所用冻干盘为玻璃、不锈钢等材质的扁平状定型容器，凝胶厚度控制在4-8mm；

(5)最后将冻干盘在冷冻干燥机中-45℃预冻8-12h，再进行-15℃低温升华32-40h，以形成止血海绵；

(6)密封包装。

9.根据权利要求1所述的包装完成的海绵经过辐照灭菌处理。