CN108181248A - 一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明之目的是提供一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂,包括试剂R1、试剂R2和标准品;试剂R1由甘氨酸、沙丁胺醇‑牛血清白蛋白复合物,调PH至8.6,加蒸馏水定容至 1000ml制成,所述试剂R2由甘氨酸、聚乙二醇6000、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳、牛血请白蛋白、Proclin300,调PH至8.6,加蒸馏水定容至 1000ml制成,本发明组方科学合理,易生产制备,使用方便、安全、准确,可有效用于快速检测食品中的沙丁胺醇,确保食品安全,经济和社会效益显著。
Description
技术领域
本发明涉及食品安全检测,特别是一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂。
背景技术
沙丁胺醇(salbutamol;SAL),别名:羟甲叔丁肾上腺素,柳丁氨醇等。其剂型有片剂、胶囊剂、气雾剂及注射剂等,沙丁胺醇为选择性β2受体激动剂,能有效地抑制组胺等致过敏性物质的释放,防止支气管痉挛。适用于支气管哮喘、喘息性支气管炎、支气管痉挛、肺气肿等症。
硫酸沙丁胺醇为白色或类白色的粉末,无臭,味微苦。该品在水中易溶,在乙醇中极微溶解,在三氯甲烷或乙醚中几乎不溶。其为选择性激动支气管平滑肌上的β2-受体,使支气管平滑肌松弛,从而解除支气管平滑肌痉挛。不良反应主要是对心脏及中枢神经系统的兴奋作用,如头痛、头晕、失眠,偶见肌肉和手指震颤、心悸、血压波动等。长期使用能产生耐药性,可能加重哮喘。剂型有硫酸沙丁胺醇片、硫酸沙丁胺醇注射液、硫酸沙丁胺醇胶囊、硫酸沙丁胺醇缓释片、硫酸沙丁胺醇缓释胶囊。其中硫酸沙丁胺醇片为白色片;硫酸沙丁胺醇注射液为无色澄明液体;硫酸沙丁胺醇缓释胶囊为硬胶囊,内容物为白色或类白色球形小丸;硫酸沙丁胺醇缓释片白色或类白色片。
瘦肉精是一类药物统称,而不是某一种特定的药物,任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时,即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解、抑制脂肪沉积,能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率,因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。“沙丁胺醇”是“瘦肉精”的一种,全世界都在禁用。在动物实验中发现,沙丁胺醇会造成骨骼发育迟缓,唇颚裂等症状,代谢时间比莱克多巴胺长。
毒物专家表示,“沙丁胺醇”比莱克多巴胺毒上2千倍。在动物实验中发现,“沙丁胺醇”会造成骨骼发育迟缓,唇颚裂等症状,代谢时间需要3天,也比莱克多巴胺还要久。
2002年,农业部、原卫生部、原国家药品监督管理局联合发布《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》(农业部公告第176号)禁止使用克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等“瘦肉精”类物质在动物养殖中的使用。2011年12月5日,工信部、农业部、商务部、原卫生部、国家工商行政管理总局、国家质量监督检验检疫总局六部委发布联合公告(2011年第41号),要求即日起在我国境内禁止生产和销售克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇。
目前我国检测饲料、猪肌肉及其脏器、猪尿中沙丁胺醇的常规方法是酶联免疫(ELISA)法、高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MSIMS)、气相色谱-质谱(GC-MS)法和胶体金免疫层析法。
酶联免疫(ELISA)法定量检测沙丁胺醇其主要工作原理如下:利用免疫学竞争法的原理,固相载体微孔板上包被有沙丁胺醇蛋白偶联物,加入待测沙丁胺醇标准品或样品溶液及特异性的抗沙丁胺醇的抗体,包被在微孔板上的沙丁胺醇蛋白偶联物和标准品或样品中的沙丁胺醇竞争性地与抗体结合;再加入酶标二抗,形成抗原抗体复合物;洗涤后加入显色剂,结合的酶将无色的显色剂转化为蓝色的产物;加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色;在450nm波长进行检测,样品中的沙丁胺醇浓度与吸收光强度成反比。该方法操作步骤多,反应时间长,检测费用昂贵,不适于分析大批量的样品。
高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MSIMS)法定量检测沙丁胺醇其主要工作原理如下:试样中的β-受体激动剂残留物经酶解,离心后将上清液调pH,用异丙醇-乙酸乙酯提取,再用MCX柱子净化,吹干浓缩后用高效液相色谱-串联质谱法测定,同位素内标法定量。其中需要使用高效液相色谱仪(配荧光检测器)、冷冻离心机、振荡器、涡旋混合器、分析天平、旋转蒸发仪、氮吹仪一系列仪器设备。沙丁胺醇对照溶液和试液分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积进行计算样品含量。该方法操作步骤繁琐,反应时间长,需要大量精密仪器和化学试剂,对试验人员要求高,检测费用昂贵,仅适合实验室定量分析使用,不适于大批量的样品分析和基层实验室使用。
气相色谱-质谱法(GC-MS)定量检测沙丁胺醇其主要工作原理如下:试样中呈结合态的β-受体激动剂残留物在乙酸铵缓冲液中经酶解后成游离状态,调节提取液pH,然后用乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂萃取,萃取液旋转蒸干后用乙酸铵缓冲液溶解,过阳离子交换柱。净化后的样品氮气吹干后用双三甲基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,然后选择离子模式进行在气相色谱-质谱仪上进行测定,内标法定量。该方法灵敏度高,但操作步骤繁琐,反应时间长,需要使用精密仪器,对试验人员要求高,检测费用昂贵,仅适合实验室定量分析使用,不适于大批量的样品分析和基层实验室使用。
胶体金免疫层析方法(CIA)检测沙丁胺醇的主要工作原理:采用胶体金免疫层析技术和竞争抑制原理,将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内蛋白质标记形成胶体金免疫复合物的技术。检测时,样品中的沙丁胺醇在流动过程中与胶体金标记的特异性沙丁胺醇抗体结合,抑制了沙丁胺醇抗体与固相载体膜上的沙丁胺醇-BSA偶联物的结合,如果样品中含有沙丁胺醇时,则检测线T在规定时间内不显颜色,结果为阳性,反之,若检测线T显红色色带,结果为阴性。无论样品中沙丁胺醇浓度高低,C线均显红色色带。该方法操作方便,检测时间短,但是,只能对样品进行定性检测,不能实现对样品定量检测和动态监测,满足不了对沙丁胺醇检测的实际需要。
发明内容
针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本发明之目的是提供一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂,可有效解决快速、准确、定性与定量的动态监测食品中是否含有沙丁胺醇,确保食品安全的问题。
本发明解决的技术方案是,本发明试剂包括试剂R1、试剂R2和标准品;
所述的试剂R1由甘氨酸3.75-15.01g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物0.2-1.1g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成,其中,沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物的制备方法是:沙丁胺醇150mg,加入4ml含22.8mg戊二酸酐的吡啶溶液中,室温搅拌下反应22h,搅拌速度150rpm;反应后真空抽干反应物中的吡啶;沉淀物溶解于8ml由二甲基甲酰胺(DMF)与1,4-二恶烷按体积比1:1配制成的溶剂中,加入正三丁胺52.4μl和氯甲酸异丁酯28.8μl,2-4℃下反应1h,随后将该反应液逐滴加入10ml,4℃预冷的质量浓度为0.2%的牛血清白蛋白溶液,4℃反应48小时,反应物在pH7.2磷酸缓冲盐溶液(PBS)中透析48小时,透析期间,每4小时换磷酸缓冲盐溶液一次,除去未反应的试剂,成沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物;
所述试剂R2由甘氨酸3.75-15.01g、聚乙二醇6000 10-30g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳100-600mg、牛血清白蛋白(BSA)10-30g、Proclin300 1-5ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成,其中,抗沙丁胺醇单抗交联胶乳的制备方法是:(l)活化羧基:称取羧基胶乳颗粒20-200mg,胶乳颗粒直径50-500nm,溶于pH6.5,50mM 10ml的2-吗啉乙磺酸(MES)中,得胶乳溶液,再将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)20mg、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)20mg依次加入上述胶乳溶液中,震荡反应1h成活化胶乳,随后22000rpm下离心40分钟,弃去上清液,沉淀使用pH6.5、浓度为50mM的2-吗啉乙磺酸(MES)10ml复溶,重复离心二次,弃去上清液;沉淀溶于10ml 0.01M的pH7.2磷酸缓冲盐溶液(PBS)中,成活化胶乳;(2)活化胶乳每毫升中加入400μg抗沙丁胺醇单克隆抗体,室温搅拌下反应4小时,成反应液,反应液每毫升中加入10%牛血清白蛋白(BSA)溶液500μl,继续室温搅拌反应2小时;20000rpm下离心40分钟,弃去上清液,沉淀用0.05M,pH 8.6的甘氨酸缓冲液复溶成抗沙丁胺醇抗体羧基胶乳交联的羧基胶乳溶液;
标准品制备方法:(1)pH 7.4 0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)的配制:将磷酸氢二钠1.44g,磷酸二氢钾0.24g,氯化钠8g,氯化钾0.2g用蒸馏水溶解、混匀,定容至1000ml,用盐酸或氢氧化钠调pH值至7.4,备用;(2)标准品的配制:将质量纯度99.5%的沙丁胺醇(购自中国药品生物制品鉴定所对照品)1mg,用pH7.4,0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)完全溶解,定容至浓度100μg/ml;取10μL,100μg/ml沙丁胺醇标准品,用pH7.4,0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)定容至浓度100ng/ml;取4mL浓度为100ng/ml的沙丁胺醇溶液,用pH7.4,0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)定容至浓度4.0ng/ml的标准品。
本发明组方科学合理,易生产制备,使用方便、安全、准确,可有效用于快速检测食品中的沙丁胺醇,确保食品安全,经济和社会效益显著。
具体实施方式
以下结合具体情况和实施例对本发明的具体实施方式做详细说明。
本发明在具体实施中可由以下实施例给出:
实施例1:本发明试剂包括试剂R1、试剂R2和标准品;
所述的试剂R1由甘氨酸3.75g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物0.2g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成,其中,沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物的制备方法是:沙丁胺醇150mg,加入4ml含22.8mg戊二酸酐的吡啶溶液中,室温搅拌下反应22h,搅拌速度150rpm;反应后真空抽干反应物中的吡啶;沉淀物溶解于8ml由二甲基甲酰胺(DMF)与1,4-二恶烷按体积比1:1配制成的溶剂中,加入正三丁胺52.4μl和氯甲酸异丁酯28.8μl,2-4℃下反应1h,随后将该反应液逐滴加入10ml,4℃预冷的质量浓度为0.2%的牛血清白蛋白溶液,4℃反应48小时,反应物在pH7.2磷酸缓冲盐溶液(PBS)中透析48小时,透析期间,每4小时换磷酸缓冲盐溶液一次,除去未反应的试剂,成沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物;
所述试剂R2由甘氨酸3.75g、聚乙二醇6000 10g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳100mg、牛血清白蛋白(BSA)10g、Proclin300 1ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成,其中,抗沙丁胺醇单抗交联胶乳的制备方法是:(l)活化羧基:称取羧基胶乳颗粒20mg,胶乳颗粒直径120nm,溶于pH6.5,50mM 10ml的2-吗啉乙磺酸(MES)中,得胶乳溶液,再将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)20mg、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)20mg依次加入上述胶乳溶液中,震荡反应1h成活化胶乳,随后22000rpm下离心40分钟,弃去上清液,沉淀使用pH6.5、浓度为50mM的2-吗啉乙磺酸(MES)10ml复溶,重复离心二次,弃去上清液;沉淀溶于10ml 0.01M的pH7.2磷酸缓冲盐溶液(PBS)中,成活化胶乳;(2)活化胶乳每毫升中加入400μg抗沙丁胺醇单克隆抗体,室温搅拌下反应4小时,成反应液,反应液每毫升中加入10%牛血清白蛋白(BSA)溶液500μl,继续室温搅拌反应2小时;20000rpm下离心40分钟,弃去上清液,沉淀用0.05M,pH 8.6的甘氨酸缓冲液复溶成抗沙丁胺醇抗体羧基胶乳交联的羧基胶乳溶液;
标准品制备方法:(1)pH 7.4 0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)的配制:将磷酸氢二钠1.44g,磷酸二氢钾0.24g,氯化钠8g,氯化钾0.2g用蒸馏水溶解、混匀,定容至1000ml,用盐酸或氢氧化钠调pH值至7.4,备用;(2)标准品的配制:将质量纯度99.5%的沙丁胺醇(购自中国药品生物制品鉴定所对照品)1mg,用pH7.4,0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)完全溶解,定容至浓度100μg/ml;取10μL,100μg/ml沙丁胺醇标准品,用pH7.4,0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)定容至浓度100ng/ml;取4mL浓度为100ng/ml的沙丁胺醇溶液,用pH7.4,0.01M磷酸缓冲盐溶液(PBS)定容至浓度4.0ng/ml的标准品。
实施例2:所述试剂R1由甘氨酸7.505g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物0.4g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成;
所述试剂R2由甘氨酸7.505g、聚乙二醇6000 20g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳300mg、牛血清白蛋白(BSA)20g、Proclin300 2ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成;
制备方法同实施例1。
实施例3:所述试剂R1由甘氨酸15.01g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物1.1g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成;
所述试剂R2:由甘氨酸15.01g、聚乙二醇6000 30g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳600mg、牛血清白蛋白(BSA)30g、Proclin300 5ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成;
制备方法同实施例1。
本发明的使用情况是:本操作方法使用半自动生化分析仪或全自动生化分析仪进行检测。基本参数如下:反应温度37℃;比色杯光径1.0cm;主波长570nm,副波长800nm;反应时间8分钟;样品和标准品量10ul;所说的样品为饲料、猪肌肉及其脏器、猪尿,所说的标准品为纯度达99.5%沙丁胺醇纯品。
首先使用梯度稀释的系列标准品做标准曲线,取10ul待测物品溶液加试剂R1150ul混匀,37℃孵育3-5分钟后,加试剂R2 50ul混匀,37℃孵育30秒后读取吸光度值A1,3分钟后读取吸光度值A2,ΔA=A2-A1。以空白管调零读取各管吸光度。
试验结果的计算:
注:待测物品ΔA:以空白管吸光度为对照的待测物品管吸光度
标准品ΔA:以空白管吸光度为对照的标准品管吸光度
本发明的测量原理是:纳米胶乳颗粒包被的是沙丁胺醇单克隆抗体,在液相中与一定量的沙丁胺醇-牛血清白蛋白抗原发生抗原抗体反应,形成不溶性的免疫复合物,进一步产生浊度。该浊度在波长570nm可被检测到,在全自动生化分析仪上该浊度变化表现为相应的吸光度值。当被测物中含有沙丁胺醇时,由于竞争原理,所形成的吸光度变化值与无被测物质时相比下降,在竞争法中吸光度的变化值与被测物质沙丁胺醇含量负相关,使用已知浓度的标准品绘制标准曲线,则可根据被测标本的反应吸光度变化计算出其含量。
试剂性能稳定可靠,并经试验得到了充分证明,有关试验情况如下:
1、试剂组成
本发明试剂由试剂R1、试剂R2、标准品4.0ng/ml组成。
2、制备方法
试剂R1、试剂R2、标准品的制备方法见发明内容部分。
3、试剂性能测试
试验质控品
水平质控品I:靶值:0.5ng/ml,允许范围:0.475~0.625ng/ml;
水平质控品II:靶值:2.0ng/ml,允许范围:1.8~2.2ng/ml。
测试仪器:日立7060全自动生化分析仪。
准确度试验
用水平质控品进行测试,重复检测3次,取测试结果均值(M),按下列公式计算相对偏差(B)。
式中:
M—测试结果均值;
T—有证参考物质标志值,或各浓度动物源样品定值。
测定准确度结果如下表:
水平质控品I测定结果:靶值:0.50ng/ml,允许范围:0.475~0.625ng/ml
水平质控品II测定结果:靶值:2.0ng/ml,允许范围:1.8~2.2ng/ml
精密度(变异系数CV)试验
取本发明试剂,对水平质控品II:2.0ng/ml进行10次重复测定,然后计算测定值的均数X、测定值的标准差S与测定值的变异系数CV值,其公式如下:
式中:
—为测定值的平均数;
S—为测定值的标准差;
CV—为测定值的变异系数。
试剂测定结果如下表:
水平质控品II:靶值:2.0ng/ml,允许范围::1.8~2.2ng/ml
线性试验
取SAL浓度为10ng/ml左右的猪尿标本,用生理盐水作梯度稀释,稀释比例为0.05ng/mL、0.10ng/mL、0.50ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL。将系列稀释样品和生理盐水进行测定,每点测定3次,取平均值,对系列6点的实测平均值与相应理论值作回归分析,结果见下表
线性试验结果
线性试验结果
以上结果表明SAL胶乳增强免疫比浊法在0.05-4.0ng/ml范围内线性关系良好。
临床对比试验
同时用本发明试剂与现有的德国拜发R-Biopharm公司沙丁胺醇酶联免疫试剂盒检测20份猪尿标本,数据和统计结果如下:
原始试验数据记录表
本发明试剂测定结果与德国拜发公司沙丁胺醇酶联免疫试剂盒对照结果的相关系数r=0.9983。
本发明具有以下突出的有益技术效果:
(1)本发明选择交联沙丁胺醇-牛血清蛋白合成人工抗原为反应抗原,该抗原与抗沙丁胺醇单抗有良好的反应性,具有准确性好,特异性高的优点,准确性高达99.8%以上,可动态下测试,快速,仅需8分钟。
(2)本发明选择纳米胶乳颗粒直径在50~500nm作为沙丁胺醇单克隆抗体的包被载体,它能够通过特定的交联技术高效交联沙丁胺醇单克隆抗体,从而完成特异性的抗原抗体反应。
(3)本发明选择甘氨酸缓冲液,使整个配方处于一种极其稳定的状态,提高了试剂的稳定性。
(4)本发明中选取聚乙二醇6000作为促凝剂,也是反应的促凝剂,它提高检测的灵敏度,促进样本中的抗原与结合有沙丁胺醇单克隆抗体的纳米胶乳微粒产生特异性的抗原抗体反应。
(5)本发明中选取稳定性较强,不易分解的Proclin300作为防腐剂,有效的避免了试剂在存储过程中细菌生长的问题,从而保证了试剂的稳定性。
(6)本发明中选取牛血清白蛋白(BSA)作为稳定剂,从而保证羧基胶乳交联沙丁胺醇单克隆抗体的稳定性。
(7)采用本发明的方法定量检测沙丁胺醇,检测时间仅需8分钟。
综上所述,本发明胶乳增强免疫比浊法测定沙丁胺醇试剂与其它检测方法试剂相比,本发明的试剂既保留了现有试剂的优点:试剂可定量、检测时间短、仅需8min,准确率高达99.8%以上,保存期长,又降低了成本,成本降低50%以上;且易生产,性能稳定,测试准确,可定量,无环境污染,操作更简便,使用样品量小,是定量测定沙丁胺醇试剂上的创新,经济和社会效益巨大。
Claims (4)
1.一种胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂,其特征是:本发明试剂包括试剂R1、试剂R2和标准品;
所述的试剂R1由甘氨酸 3.75-15.01g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物 0.2-1.1g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至 1000ml制成,其中,沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物的制备方法是:沙丁胺醇150mg,加入4ml含22.8mg戊二酸酐的吡啶溶液中,室温搅拌下反应22h,搅拌速度150rpm;反应后真空抽干反应物中的吡啶;沉淀物溶解于8ml由二甲基甲酰胺(DMF)与1,4-二恶烷按体积比1:1配制成的溶剂中,加入正三丁胺52.4μl和氯甲酸异丁酯28.8μl,2-4℃下反应1h,随后将该反应液逐滴加入10ml,4℃预冷的质量浓度为0.2%的牛血清白蛋白溶液,4℃反应48小时,反应物在pH7.2磷酸缓冲盐溶液( PBS)中透析48小时,透析期间,每4小时换磷酸缓冲盐溶液一次,除去未反应的试剂,成沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物;
所述试剂R2由甘氨酸 3.75-15.01g、聚乙二醇6000 10-30 g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳 100-600mg、牛血清白蛋白(BSA)10-30 g、Proclin300 1-5 ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至 1000ml制成,其中,抗沙丁胺醇单抗交联胶乳的制备方法是:(l)活化羧基:称取羧基胶乳颗粒20-200mg,胶乳颗粒直径50-500nm,溶于pH6.5,50mM 10ml 的2-吗啉乙磺酸(MES)中,得胶乳溶液,再将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC) 20mg、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 20mg依次加入上述胶乳溶液中,震荡反应1h成活化胶乳,随后22000rpm下离心40分钟,弃去上清液,沉淀使用pH6.5、浓度为50mM的2-吗啉乙磺酸(MES)10ml复溶,重复离心二次,弃去上清液;沉淀溶于10ml 0.01M 的pH7.2磷酸缓冲盐溶液( PBS)中,成活化胶乳;(2)活化胶乳每毫升中加入400μg抗沙丁胺醇单克隆抗体,室温搅拌下反应4小时,成反应液,反应液每毫升中加入10%牛血清白蛋白(BSA)溶液500μl,继续室温搅拌反应2小时;20000rpm下离心40分钟,弃去上清液,沉淀用0.05M ,pH 8.6 的甘氨酸缓冲液复溶成抗沙丁胺醇抗体羧基胶乳交联的羧基胶乳溶液;
标准品制备方法:(1)pH 7.4 0.01M磷酸缓冲盐溶液( PBS)的配制:将磷酸氢二钠1.44g,磷酸二氢钾 0.24g,氯化钠8 g,氯化钾0.2g用蒸馏水溶解、混匀,定容至1000ml,用盐酸或氢氧化钠调pH值至7.4,备用;(2)标准品的配制:将质量纯度99.5%的沙丁胺醇(购自中国药品生物制品鉴定所对照品)1mg,用pH7.4 ,0.01M磷酸缓冲盐溶液( PBS)完全溶解,定容至浓度100μg/ml;取10μL ,100μg/ml沙丁胺醇标准品,用pH7.4, 0.01M磷酸缓冲盐溶液( PBS)定容至浓度100ng/ml;取4mL浓度为 100ng/ml的沙丁胺醇溶液,用pH7.4, 0.01M磷酸缓冲盐溶液( PBS)定容至浓度4.0ng/ml的标准品。
2.根据权利要求1所述的胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂,其特征是:所述的试剂R1由甘氨酸 3.75g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物 0.2g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至 1000ml制成,所述试剂R2由甘氨酸 3.75g、聚乙二醇6000 10 g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳 100mg、牛血请白蛋白(BSA)10 g、Proclin300 1 ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成。
3.根据权利要求1所述的胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂,其特征是:所述试剂R1由甘氨酸 7.505g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物 0.4g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成;
所述试剂R2由 甘氨酸 7.505g、聚乙二醇6000 20g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳300mg、牛血请白蛋白(BSA)20g、Proclin300 2ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成。
4.根据权利要求1所述的胶乳增强免疫比浊法定量检测沙丁胺醇的试剂,其特征是:所述试剂R1由甘氨酸 15.01g、沙丁胺醇-牛血清白蛋白复合物 1.1g,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成;
所述试剂R2:由甘氨酸 15.01g、聚乙二醇6000 30g、抗沙丁胺醇单抗交联胶乳 600mg、牛血请白蛋白(BSA)30g、Proclin300 5ml,调PH至8.6,加蒸馏水定容至1000ml制成。
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