CN108051594A - 一种胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂，包括试剂R1、试剂R2和标准品，试剂R1是由三羟甲基氨基甲烷0.558‑3.345 g、1N盐酸45‑270 ml、氯霉素‑载体蛋白复合物0.2‑1.5 g，加蒸馏水定容至1000ml制成所述的试剂R2是由三羟甲基氨基甲烷0.558‑3.345 g、1N盐酸45‑270 ml、聚乙二醇6000 10‑30 g、抗氯霉素交联胶乳微球60‑400mg、牛血清白蛋白10‑30 g、Proclin300 1‑5ml，加蒸馏水定容至1000ml制成，本发明组方科学合理，易生产制备，使用方便、安全、准确，确保食品安全，经济和社会效益显著。

Description

一种胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂
技术领域
本发明涉及食品安全检测分析，特别是一种胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂。
背景技术
氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。由大卫·戈特利布(David Gottlieb)于1947年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌(Streptomyces venezuelae)成功分离，再于1949年合成并引入临床试验。分子量：323.1294，白色针状或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶性粉末；味苦。在甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇中易溶。在干燥时稳定，在弱酸性和中性溶液中较安定，煮沸也不见分解，遇碱类易失效。
氯霉素是一种常用的广谱抗菌素，通过抑制细菌蛋白质合成而发挥抑菌作用，对大多数革兰氏阴性和阳性细菌有效，而对革兰氏阴性菌作用较强，特别是对伤寒、副伤寒杆菌作用最强。但使用氯霉素存在严重的毒副作用，主要是抑制骨髓造血功能，引起粒细胞及血小板减少症以及再生障碍性贫血。再生障碍性贫血虽少见，但难逆转，常可致死。氯霉素(CAP)广泛应用于水产品养殖的病害防治，但其对人体有较大的毒副作用；2002年中国农业部《动物性食品兽药残留规定》中规定氯霉素在可食部分不得检出，在出口的日常检测中列为必检项目。但由于氯霉素价格便宜，且为广谱抗生素，违法使用仍很普遍。因此加强对动物性食品中氯霉素的残留检测是非常必要的。
氯霉素残留的分析检测方法多用微生物学方法、放射免疫法、色谱法和酶免疫分析法等。
微生物学方法是CAP测定的最常用的方法。该方法易操作，费用低，可用于大量样品的筛选。该方法是用拭子采集动物体内的组织液，然后将其放置于涂满枯草杆菌的培养基中，保温过夜。观察在拭子周围是否出现抑菌环，若有即表明组织液中有大量抗生素存在，如果该动物用过CAP进行治疗，则可以认为该组织中存在CAP残留。
微生物学方法的优点是操作简便、样品用量少、预处理简单，在基层大规模筛选中有一定的应用价值；但检测周期较长，易受组织中其他抗菌素影响，特异性低，灵敏度也不高，其使用并不尽人意。
放射免疫分析是建立在免疫反应基础上的核技术，最基本的原理是放射性核素标记的抗原和被测抗原(或标准品)对有限量的抗体进行可逆性的竞争结合反应。Amold等报道了在蛋、肉、奶中CAP的放射免疫痕量分析。对于用CAP治疗的动物组织和其它可食用产品，此方法检出限量约为0.2ng/ml，1ng/ml以上的CAP残留能被准确定量，在蛋、肉中平均回收率为85％，在奶中回收率高于95％。放射免疫法的检测灵敏度较高，但是具有同位素半衰期短、存在放射性污染及需要复杂的仪器设备等技术要求高，成本高，其使用受到限制。
酶联免疫测定法是以酶学和免疫化学为基础发展起来的一种新技术。其原理是试样中残留的CAP与试剂盒中的CAP酶标记物共同竞争CAP抗体，形成有酶标记或无酶标记的抗原抗体复合物而被吸附于微孔板底，用酶标仪在450nm处测定吸光度，根据吸光度值得出样品中CAP的残留量。由于该技术灵敏度高、特异性强、快速经济，已在许多领域中得到广泛应用。现已有试剂盒供应市场，可以直接用于样品检测，是目前最理想的残留筛选性分析方法之一。但是该方法操作步骤多，反应时间长，检测费用昂贵，不适于分析大批量的样品。
气相色谱法具有分离效能高、选择性高和灵敏度高的特定，加上检测快速，因此应用广泛。CAP的分子结构中含有氯，故可以选用高灵敏度的电子捕获检测器。2004年林秋萍等建立了鸡肌肉中CAP残留量的气相色谱测定方法，结果表明其方法的线性范围在10-200ng/ml，最小检出限是1.1ng/mL。
CAP含有苯环、羟基基团等可以使CAP在紫外光下有很强的吸收，可以应用高效液相色谱法紫外检测器对其进行定性定量检测。高效液相色谱法检测CAP是一种灵敏度较高、可靠性较强的一种方法，此法重复性好、假阳性少，但检测限较高，为5.0-10μg/kg。由于动物源性产品成分复杂，一些杂质干扰测定，应用该法检测时，对于样品预处理必须仔细谨慎，以提高测定准确性和灵敏度。
目前，我国国家标准方法有气相色谱法测定饲料中CAP，和水产品中CAP残留。色谱法具有灵敏度高、结果可靠、重复性好等优点，是目前国际公认的测定方法。但是，它也存在一些明显的不足，仪器化程度高且价格昂贵，要求具有较高专业素质的熟练人员操作等，因此不能用于现场监控分析，也不适用于大量筛选。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的是提供一种胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂，可有效解决快速、准确检测食品中是否含有氯霉素，确保食品安全的问题。
本发明解决的技术方案是，本发明试剂包括试剂R1、试剂R2和标准品，试剂R1是由三羟甲基氨基甲烷1.21-12.14g、氯霉素-载体蛋白复合物0.2-1.5g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成，其中，氯霉素—载体蛋白复合物制备方法是：氯霉素65mg，加入0.6M的盐酸5ml中，再加入30mg锌粉，于80℃反应30分钟，将上清液冷却到室温，在搅拌的条件下缓缓加入到5ml质量浓度3％的牛血清白蛋白(BSA)溶液中(即，5mlpH7.2 0.01M PBS缓冲液中含有BSA0.15g),然后再滴加0.02ml戊二醛，搅拌，室温反应4小时，反应物置入pH7.2的PBS缓冲液中，透析48小时，透析期间，每4小时换一次缓冲液，除去未反应的试剂，透析后反应物即为氯霉素-载体蛋白复合物；
所述的试剂R2是由三羟甲基氨基甲烷1.21-12.14g、聚乙二醇6000 10-30g、抗氯霉素交联胶乳微球60-400mg、牛血清白蛋白(BSA)10-30g、Proclin3001-5ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成，所述的抗氯霉素交联胶乳微球的制备方法是：(l)制备活化胶乳：将羧基胶乳颗粒20-200mg，胶乳颗粒直径为50-500nm，溶于pH6.5(50mM)的2-吗啉乙磺酸(MES)10ml中，将交联剂碳二亚胺(EDC)50mg、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)50mg依次加入上述胶乳溶液中震荡反应1h活化胶乳颗粒，随后22000rpm下离心40分钟，离心后去上清，沉淀使用pH6.5,50mM的2-吗啡乙磺酸(MES)10ml复溶，重复离心二次；沉淀溶于10mlpH7.2Tris-HCL缓冲液中，即为活化胶乳；(2)将活化胶乳每毫升中加入400μg氯霉素单克隆抗体，室温搅拌反应4小时，得反应液；随后每毫升反应液中加入质量浓度10％的牛血清白蛋白(BSA)溶液300μl，继续室温搅拌反应2小时；在20000rpm下离心40分钟，弃去上清液，沉淀使用pH 7.2Tris-HCL缓冲液复溶，即成抗氯霉素交联胶乳微球；
所述的标准品制备方法为：(1)pH 7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液的配制：称取三羟甲基氨基甲烷6.057g，蒸馏水溶解、混匀，用HCL调pH至7.2，用蒸馏水定容至1000ml，备用；(2)标准品的配制：精密称取氯霉素(外购)1mg，于10ml容量瓶使用pH 7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液完全溶解后定容至浓度为100μg/ml；取10μL的100μg/ml氯霉素标准品，用pH 7.20.05M Tris-HCL缓冲液定容至浓度为100ng/ml的氯霉素溶液；取1.5mL 100ng/ml氯霉素溶液用pH 7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液定容至浓度为1.5ng/ml的标准品。
本发明组方科学合理，易生产制备，使用方便、安全、准确，可有效用于快速检测食品中的氯霉素，确保食品安全，经济和社会效益显著。
具体实施方式
以下结合具体情况和实施例对本发明的具体实施方式做详细说明。
本发明在具体实施中可由以下实施例给出：
实施例1:本发明试剂包括试剂R1、试剂R2和标准品，试剂R1是由三羟甲基氨基甲烷1.21g、氯霉素-载体蛋白复合物0.2g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成，其中，氯霉素—载体蛋白复合物制备方法是：氯霉素65mg，加入0.6M的盐酸5ml中，再加入30mg锌粉，于80℃反应30分钟，将上清液冷却到室温，在搅拌的条件下缓缓加入到5ml质量浓度3％的牛血清白蛋白(BSA)溶液中(即，5mlpH7.2 0.01M PBS缓冲液中含有BSA0.15g),然后再滴加0.02ml戊二醛，搅拌，室温反应4小时，反应物置入pH7.2的PBS缓冲液中，透析48小时，透析期间，每4小时换一次缓冲液，除去未反应的试剂，透析后反应物即为氯霉素-载体蛋白复合物；
所述的试剂R2是由三羟甲基氨基甲烷1.21g、聚乙二醇6000 10g、抗氯霉素交联胶乳微球60mg、牛血清白蛋白(BSA)10g、Proclin300 1ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成，所述的抗氯霉素交联胶乳微球的制备方法是：(l)制备活化胶乳：将羧基胶乳颗粒50mg，胶乳颗粒直径为80nm，溶于pH6.5(50mM)的2-吗啉乙磺酸(MES)10ml中，将交联剂碳二亚胺(EDC)50mg、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)50mg依次加入上述胶乳溶液中震荡反应1h活化胶乳颗粒，随后22000rpm下离心40分钟，离心后去上清，沉淀使用pH6.5,50mM的2-吗啡乙磺酸(MES)10ml复溶，重复离心二次；沉淀溶于10mlpH 7.2Tris-HCL缓冲液中，即为活化胶乳；(2)将活化胶乳每毫升中加入400μg氯霉素单克隆抗体，室温搅拌反应4小时，得反应液；随后每毫升反应液中加入质量浓度10％的牛血清白蛋白(BSA)溶液300μl，继续室温搅拌反应2小时；在20000rpm下离心40分钟，弃去上清液，沉淀使用pH 7.2Tris-HCL缓冲液复溶，即成抗氯霉素交联胶乳微球；
所述的标准品制备方法为：(1)pH 7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液的配制：称取三羟甲基氨基甲烷6.057g，蒸馏水溶解、混匀，用HCL调pH至7.2，用蒸馏水定容至1000ml，备用；(2)标准品的配制：精密称取氯霉素(外购)1mg，于10ml容量瓶使用pH 7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液完全溶解后定容至浓度为100μg/ml；取10μL的100μg/ml氯霉素标准品，用pH 7.20.05M Tris-HCL缓冲液定容至浓度为100ng/ml的氯霉素溶液；取1.5mL 100ng/ml氯霉素溶液用pH 7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液定容至浓度为1.5ng/ml的标准品。
实施例2：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷6.057g、氯霉素-载体蛋白复合物0.8g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml；
试剂R2：三羟甲基氨基甲烷6.057g、聚乙二醇6000 20g、抗氯霉素交联胶乳微球180mg、牛血清白蛋白(BSA)20g、Proclin300 3ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml；
制备方法同实施例1。
实施例3：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷12.14g、氯霉素-载体蛋白复合物1.5g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml；
试剂R2：三羟甲基氨基甲烷12.14g、聚乙二醇6000 30g、抗氯霉素交联胶乳微球400mg、牛血清白蛋白(BSA)30g、Proclin300 5ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml；
制备方法同实施例1。
本发明的使用情况是：使用半自动生化分析仪或全自动生化分析仪进行检测。基本参数如下：反应温度37℃；比色杯光径1.0cm；主波长546nm，副波长700nm；反应时间10分钟；待测物品和标准品量10μl；所说的待测物品为肉类、水产品、牛奶、蛋类、蜂蜜、蜂皇浆、饲料、血清等样品，所说的标准品为纯度达99.5％氯霉素纯品。
取10μl待测物品(或标准品)加试剂R1 150μl于比色皿中混匀，37℃孵育3-5分钟后,加试剂R2 50μl混匀，37℃孵育20秒，空白管调零，读取吸光度A1，5分钟后读取吸光度A2，ΔA＝A1—A2。
试验结果的计算：
注：待测物品ΔA：以空白管吸光度为对照的待测物品管吸光度
标准品ΔA：以空白管吸光度为对照的标准品管吸光度
本发明的测量原理是:纳米胶乳颗粒包被的是氯霉素单克隆抗体,与一定量的对应的氯霉素抗原发生抗原抗体反应,形成不溶性的免疫复合物,通过全自动生化分析仪在波长546nm上表现为形成一定的吸光度值。当被测物中含有此种抗原时,由于竞争原理,所形成的吸光度变化值与无被测物质时相比下降,在竞争法中吸光度的变化值与被测物质抗原含量负相关,使用已知浓度的标准品绘制标准曲线,则可根据被测标本的反应吸光度变化计算出其含量。
试剂性能稳定可靠，并经试验得到了充分证明，有关试验情况如下：
样品处理程序
(1)牛奶、蜂蜜、蜂皇浆、饲料
取2g样本于玻璃管中，加入3ml蒸馏水(蜂皇浆加0.5M氢氧化钠)，摇匀，再加入8ml乙酸乙酯充分振揺混合10分钟，4000g离心10分钟。取2ml上层液于另一玻璃管中，并用50℃氮气吹干。于试管残留物中加入0.5ml生理盐水，充分摇匀(饲料需再加入0.5ml正己烷震荡混匀后取下层)，取50μl备用；
(2)肉类、水产(虾、鱼)、蛋类
取2g已去除脂肪的肉类、水产(虾、鱼)、蛋类并匀浆化的样品于玻璃管中，加入8ml乙酸乙酯充分振揺混合10分钟，4000g离心10分钟。取2ml上层液于另一玻璃管中，并用50℃氮气吹干。于试管残留物中加入0.5ml生理盐水，并加入0.5ml正己烷，充分混匀，4000g离心10分钟。离心后，若下层液出现乳化现象，应将试管放入80℃水浴5分钟，再进行离心。完全除去上层的正己烷，从试管底部取50μl备用
(3)血清(鸡血、牛血等)
用生理盐水5倍稀释备用。例如：200μl+800μl生理盐水。
1、试剂组成
本发明试剂由试剂R1、试剂R2、标准品1.5ng/ml组成。
2、制备方法
试剂R1、试剂R2、标准品制备方法见发明内容部分。
3、试剂性能测试
实验质控品
水平质控品I：靶值：0.25ng/ml，允许范围：0.213～0.288ng/ml；
水平质控品II：靶值：1.2ng/ml，允许范围：1.02～1.38ng/ml。
测试仪器：日立7060全自动生化分析仪。
准确度试验
用水平质控品进行测试，重复检测3次，取测试结果均值(M)，按下列公式计算相对偏差(B)。
式中：
M—测试结果均值；
T—有证参考物质标志值，或各浓度动物源样品定值。
测定准确度结果如下表：
水平质控品I测定结果：靶值：0.25ng/ml，允许范围：0.213～0.288ng/ml；
水平质控品II测定结果：靶值：1.2ng/ml，允许范围：1.02～1.38ng/ml
精密度(变异系数CV)试验
取本发明试剂，对配制质控品II:1.2ng/ml进行10次重复测定，然后计算测定值的均数X、测定值的标准差S与测定值的变异系数CV值，其公式如下：
式中：
—为测定值的平均数；
S—为测定值的标准差；
CV—为测定值的变异系数。
试剂测定结果如下表：
水平质控品II：靶值：1.2ng/ml，允许范围：1.02～1.38ng/ml
线性试验
取CAP浓度为1.5ng/ml左右的处理后牛奶样品，用生理盐水作梯度稀释，稀释浓度为1.5、0.5、0.25、0.09、0.02、0ng/ml。将系列稀释样品和生理盐水进行测定，每点测定3次，取平均值，对系列6点的实测平均值与相应理论值作回归分析，结果见下表
线性试验结果
线性试验结果
以上结果表明CAP胶乳增强免疫比浊法在0.0-1.5ng/ml范围内线性关系良好。
临床对比试验
同时用本发明试剂与现有的德国拜发(R-Biopharm)公司氯霉素酶联免疫试剂盒检测20份血清(鸡血清)标本，数据和统计结果如下：
原始试验数据记录表
本发明试剂测定结果与德国拜发(R-Biopharm)公司氯霉素酶联免疫试剂盒对照结果的相关系数r＝0.9963。
本发明具有以下特征：
(1)本发明选择交联氯霉素-惰性蛋白合成人工抗原为反应抗原，该抗原与抗氯霉素单抗有良好的反应性，具有准确性好，特异性高的优点。
(2)本发明选择纳米胶乳颗粒直径在50～500nm作为氯霉素单克隆抗体的包被载体，它能够通过特定的交联技术高效交联氯霉素单克隆抗体，从而完成特异性的抗原抗体反应。
(3)本发明选择Tris-HCL缓冲液，使整个配方处于一种极其稳定的状态，提高了试剂的稳定性。
(4)本发明中选取聚乙二醇6000作为促凝剂，也是反应的促凝剂，它提高检测的灵敏度，促进样本中的抗原与结合有氯霉素单克隆抗体的纳米胶乳微粒产生特异性的抗原抗体反应。
(5)本发明中选取稳定性较强，不易分解的Proclin300作为防腐剂，有效的避免了试剂在存储过程中细菌生长的问题，从而保证了试剂的稳定性。
(6)本发明中选取牛血请白蛋白(BSA)作为稳定剂，从而保证纳米胶乳微球交联氯霉素单克隆抗体的稳定性。
(7)采用本发明的方法定量氯霉素，准确率高达99％，检测时间仅需10分钟。
综上所述，本发明胶乳增强免疫比浊法测定氯霉素试剂与其它检测方法试剂相比，本发明的试剂既保留了现有试剂的优点：试剂可定量、检测时间短、仅需10min，准确率高达99％，保存期长，又降低了成本，成本降低50％以上，且易生产，性能稳定，测试准确，可定量，无环境污染，操作更简便，使用样品量小，可用于检测肉类、水产品、牛奶、蛋类、蜂蜜、蜂皇浆、饲料、血清等样品中的氯霉素含量，是定量测定氯霉素试剂上的创新，经济和社会效益巨大。

Claims (4)

1.一种胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂，其特征是：包括试剂R1、试剂R2和标准品，试剂R1是由三羟甲基氨基甲烷1.21-12.14 g、氯霉素-载体蛋白复合物 0.2-1.5g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成，其中，氯霉素—载体蛋白复合物制备方法是：氯霉素65mg，加入0.6M 的盐酸5ml中，再加入30mg锌粉，于80℃反应30分钟，将上清液冷却到室温，在搅拌的条件下缓缓加入到5ml质量浓度 3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液中（即，5mlpH7.2 0.01M PBS缓冲液中含有BSA0.15g）,然后再滴加0.02ml戊二醛，搅拌，室温反应4小时，反应物置入pH7.2的 PBS缓冲液中，透析48小时，透析期间，每4小时换一次缓冲液，除去未反应的试剂，透析后反应物即为氯霉素-载体蛋白复合物；
所述的试剂R2是由三羟甲基氨基甲烷 1.21-12.14g、聚乙二醇6000 10-30 g、抗氯霉素交联胶乳微球 60-400mg、牛血清白蛋白（BSA）10-30 g、Proclin300 1-5ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成，所述的抗氯霉素交联胶乳微球的制备方法是：(l)制备活化胶乳：将羧基胶乳颗粒20-200mg，胶乳颗粒直径为50-500nm，溶于pH6.5（50mM ）的2-吗啉乙磺酸（MES）10ml中，将交联剂碳二亚胺（EDC ）50mg、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS） 50mg依次加入上述胶乳溶液中震荡反应1h活化胶乳颗粒，随后22000rpm下离心40分钟，离心后去上清，沉淀使用pH6.5,50mM 的2-吗啡乙磺酸（MES ）10ml复溶，重复离心二次；沉淀溶于10mlpH7.2 Tris-HCL缓冲液中，即为活化胶乳；(2)将活化胶乳每毫升中加入400μg氯霉素单克隆抗体，室温搅拌反应4小时，得反应液；随后每毫升反应液中加入质量浓度10%的牛血清白蛋白（BSA）溶液300μl，继续室温搅拌反应2小时 ；在20000rpm下离心40分钟，弃去上清液，沉淀使用pH 7.2 Tris-HCL缓冲液复溶，即成抗氯霉素交联胶乳微球；
所述的标准品制备方法为：（1）pH 7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液的配制：称取三羟甲基氨基甲烷6.057g，蒸馏水溶解、混匀，用HCL调pH至7.2，用蒸馏水定容至1000ml，备用；（2）标准品的配制：精密称取氯霉素（外购）1mg，于10ml容量瓶使用pH 7.2 0.05M Tris- HCL缓冲液完全溶解后定容至浓度为100μg/ml；取10μL 的100μg/ml氯霉素标准品，用pH 7.2 0.05MTris-HCL缓冲液定容至浓度为100ng/ml的氯霉素溶液；取1.5mL 100ng/ml氯霉素溶液用pH7.2 0.05M Tris-HCL缓冲液定容至浓度为1.5ng/ml的标准品。
2.根据权利要求1所述的胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂，其特征是：试剂R1是由三羟甲基氨基甲烷1.21 g、氯霉素-载体蛋白复合物 0.2 g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成:；
试剂R2是由三羟甲基氨基甲烷 1.21g、聚乙二醇6000 10 g、抗氯霉素交联胶乳微球60mg、牛血清白蛋白（BSA）10 g、Proclin300 1ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成。
3.根据权利要求1所述的胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂，其特征是：试剂R1由三羟甲基氨基甲烷 6.057g、氯霉素-载体蛋白复合物 0.8 g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成；
试剂R2由三羟甲基氨基甲烷6.057 g、聚乙二醇6000 20 g、抗氯霉素交联胶乳微球180mg、牛血清白蛋白（BSA）20g、Proclin300 3ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成。
4.根据权利要求1所述的胶乳增强免疫比浊法定量检测氯霉素的试剂，其特征是：试剂R1由三羟甲基氨基甲烷12.14g、氯霉素-载体蛋白复合物 1.5g，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成；
试剂R2由三羟甲基氨基甲烷 12.14g、聚乙二醇6000 30g、抗氯霉素交联胶乳微球400mg、牛血清白蛋白（BSA）30g、Proclin300 5ml，用HCL调pH至7.2，加蒸馏水定容至1000ml制成。
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