CN108159484A - 一种止血修复水凝胶的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种止血修复水凝胶的制备方法，属于止血水凝胶领域；所述制备方法包括如下步骤：称取蜗牛粘液10～40份、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶90～60份和天然交联剂0.1～0.5份，在25～40℃下反应3～24h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶，以上份数均为质量份数；通过天然交联剂、蜗牛粘液、蚕丝蛋白和止血中药的复配可以有效的提高止血修复水凝胶的止血速度和对创伤的修复性能，同时增加止血修复水凝胶与皮肤之间的粘附性能。

Description

一种止血修复水凝胶的制备方法
技术领域
本发明涉及止血水凝胶，特别是涉及一种具有修复功能的止血水凝胶。
背景技术
突发事件造成的意外伤害中，不受控制的大出血导致的死亡，一直是各类战争和手术中难以解决的问题，当伤者的血量损失达20％，约800mL时就有可能出现休克的症状，甚至会危及生命。如何解决大出血的问题，己经越来越引起人们的重视。交通伤、自然灾害等往往巧不及防，意外事故造成的大创面损伤或动脉损伤，血压大，血液喷射而出，短时间内大量出血，抢救成功率低。突如其来的大出血既是对伤者的考验，也是对医疗研发的考验。如何避免因出血导致的休克或死亡，己经成为摆在科学家面前的一道难题。在出血后的黄金1分钟内完成止血，减少失血性休克的发生率，争取时间等待救援，可大大提髙患者的生还几率。但是现有的止血材料有以下问题：第一，由于止血材料与出血创面的粘附性差，止血材料在基底材料中分散效果不好以及不能有效释放，不能及时的封堵伤口，因此止血不够迅速，不能够在2分内止住大动脉出血；第二，极少具有促进组织愈合功能，延长了伤口的修复时间，增加了伤者的痛苦。
发明内容
本发明的目的在于提出一种止血修复水凝胶，解决现有止血材料与出血创面粘附性差，且不具有修复功能的技术问题。
本发明的技术问题通过以下的技术方案予以解决：
一种止血修复水凝胶的制备方法，包括如下步骤：称取蜗牛粘液10～40份、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶90～60份和天然交联剂0.1～0.5份，在25～40℃下反应3～24h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶，以上份数均为质量份数。
进一步地，所述蜗牛粘液的提取方法包括如下步骤：
S1、取20克以上的鲜活白玉蜗牛，用清水洗净蜗牛后置于室温下自然晾干；
S2、在28℃以下的环境中取出蜗牛，用电瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复2-4次，空载电压>1000V，负载电流<3mA；
S3、用器皿接取蜗牛足腺分泌的粘液，提取粘液后的蜗牛需补充清水和精饲料饲养6天后方可再次提取粘液；
S4、将提取的粘液在0～5℃的环境中速冻5～8h；
S5、在28℃以下的工作环境中通过胶磨机反复研磨直至打碎粘液；
S6、在10℃以下的工作环境中将研磨好的粘液用450目以上的过滤网过滤，再通过8000～10000转/分转速的离心机离心12分钟以上，将沉底的渣滓分离，得到蜗牛粘液。
进一步地，所述含止血中药的蚕丝蛋白溶胶的制备方法包括如下步骤：
T1、将蚕茧切碎，置于蒸汽锅中蒸煮30～60min，蒸汽压力为103.4～105.4kPa、温度为110～130℃，用去离子水洗涤后在室温下干燥，得到粗蚕丝；
T2、称取2～5份所述粗蚕丝和100份7-12M LiBr水溶液，混合，在50～70℃下搅拌2～3h，过滤，得到蚕丝粗液，以上份数均为质量份数；
T3、通过分子量为12000～14000Da的透析膜除去上述蚕丝粗液中的杂质，得到蚕丝蛋白溶胶；
T4、称取一定量的止血中药，加至步骤T3中得到的蚕丝蛋白溶胶中，超声分散30～60min，得到含有止血中药的蚕丝蛋白溶胶，以上份数均为质量份数。
进一步的，所述止血中药包括：三七粉末5～20份、仙鹤草提取液5～35份、紫草提取液10～30份或白芨提取物5～30份，以上份数均为质量份数。
更进一步地，所述蚕茧包括桑蚕茧、柞蚕茧、蓖麻蚕茧或木薯蚕茧。
进一步地，所述天然交联剂包括京尼平、橄榄苦苷、原花青素、单宁酸或茶多酚。
本发明还提供一种止血修复水凝胶，所述止血修复水凝胶采用上述制备方法制备。
本发明与现有技术对比的有益效果包括：
本发明的止血修复水凝胶由天然交联剂、蜗牛粘液、蚕丝蛋白和止血中药复合而成。蜗牛粘液中含有天然的胶原蛋白、弹力蛋白、尿囊素、葡萄糖醛酸、维生素等有效成分，能够修复肌肤、增加皮肤营养、促进细胞迅速再生。蚕丝蛋白具有优良的生物相容性、可降解性和机械拉伸性能等，可以有效的提高止血修复水凝胶与皮肤的粘附性能。止血中药具有止血效果好、生物安全性高，可以有效的提高止血修复水凝胶的止血速度。天然交联剂中含有羟基、羧基等化学基团，可以与蜗牛粘液和蚕丝蛋白中的氨基发生化学反应，使得原本相容性不好的蜗牛粘液和蚕丝蛋白之间形成相互交联的网络，有效的提高了蜗牛粘液与蚕丝蛋白之间的相容性。通过天然交联剂、蜗牛粘液、蚕丝蛋白和止血中药的复配可以有效的提高止血修复水凝胶的止血速度和对创伤的修复性能，同时增加止血修复水凝胶与皮肤之间的粘附性能。
附图说明
图1是本发明实施例1中止血修复水凝胶和对照组对家兔伤口在不同时间的修复状态图。
具体实施方式
下面对照附图并结合优选的实施方式对本发明作进一步说明。
本发明提供一种止血修复水凝胶的制备方法，在具体的实施方式中，包括以下步骤：称取蜗牛粘液10～40份、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶90～60份和天然交联剂0.1～0.5份，在25～40℃下反应3～24h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶，以上份数均为质量份数。
其中，所述蜗牛粘液可以是在市场是购买的，也可以是采用鲜活白玉蜗牛提取得到的。
在一些优选的实施例中，所述蜗牛粘液的提取方法包括如下步骤：
S1、取20克以上的鲜活白玉蜗牛，用清水洗净蜗牛后置于室温下自然晾干；
S2、在28℃以下的环境中取出蜗牛，用电瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复2-4次，空载电压>1000V，负载电流<3mA；
S3、用器皿接取蜗牛足腺分泌的粘液，提取粘液后的蜗牛需补充清水和精饲料饲养6天后方可再次提取粘液；
S4、将提取的粘液在0～5℃的环境中速冻5～8h；
S5、在28℃以下的工作环境中通过胶磨机反复研磨直至打碎粘液；
S6、在10℃以下的工作环境中将研磨好的粘液用450目以上的过滤网过滤，再通过8000～10000转/分转速的离心机离心12分钟以上，将沉底的渣滓分离，得到蜗牛粘液。
在一些优选的实施例中，所述含止血中药的蚕丝蛋白溶胶的制备方法包括如下步骤：
T1、将蚕茧切碎，置于蒸汽锅中蒸煮30～60min，蒸汽压力为103.4～105.4kPa、温度为110～130℃，用去离子水洗涤后在室温下干燥，得到粗蚕丝；
T2、称取2～5份所述粗蚕丝和100份浓度为7～12M的LiBr水溶液，混合，在50～70℃下搅拌2～3h，过滤，得到蚕丝粗液，以上份数均为质量份数；
T3、通过分子量为12000～14000Da的透析膜除去上述蚕丝粗液中的杂质，得到蚕丝蛋白溶胶；
T4、称取一定量的止血中药，加至步骤T3中得到的蚕丝蛋白溶胶中，超声分散30～60min，得到含有止血中药的蚕丝蛋白溶胶，以上份数均为质量份数。
在一些优选的实施例中，所述止血中药包括：三七粉末5～20份、仙鹤草提取液5～35份、紫草提取液10～30份或白芨提取物5～30份，以上份数均为质量份数。
其中，仙鹤草提取液购于武汉大华伟业医药化工有限公司，紫草提取液购于吉安市华新天然植物有限公司，白芨提取物购于陕西菲斯特生物科技有限公司，上述提取物或提取液均具有止血的功效。
在一些优选的实施例中，所述蚕茧包括桑蚕茧、柞蚕茧、蓖麻蚕茧或木薯蚕茧。
在一些优选的实施例中，所述天然交联剂包括京尼平、橄榄苦苷、原花青素、单宁酸或茶多酚。
实施例1
1、蜗牛粘液的提取
S1、取20克以上的鲜活白玉蜗牛50Kg，用清水洗净蜗牛后置于室温下自然晾干；
S2、在28℃以下的环境中取出蜗牛，用电瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复3次，空载电压>1000V，负载电流<3mA；
S3、用器皿接取蜗牛足腺分泌的粘液，提取粘液后的蜗牛需补充清水和精饲料饲养6天后方可再次提取粘液；
S4、将提取的粘液在0～5℃的环境中速冻8h；
S5、在28℃以下的工作环境中通过胶磨机反复研磨直至打碎粘液；
S6、在10℃以下的工作环境中将研磨好的粘液用450目以上的过滤网过滤，再通过8000～10000转/分转速的离心机离心12分钟以上，将沉底的渣滓分离，得到蜗牛粘液。
2、含止血中药蚕丝蛋白的制备
T1、将5Kg蚕茧切碎，置于蒸汽锅中蒸煮30min，蒸汽压力为105.4kPa、温度为130℃，用去离子水洗涤后在室温下干燥，得到粗蚕丝；
T2、称取0.2Kg所述粗蚕丝和10Kg浓度为7M的LiBr水溶液，混合，在50℃下搅拌2h，过滤，得到蚕丝粗液；
T3、通过分子量为12000-14000Da透析膜除去上述蚕丝粗液中的杂质，得到蚕丝蛋白溶胶；
T4、称取800-1000目的三七粉末0.5Kg，加至步骤T3中得到的蚕丝蛋白溶胶中，超声分散30min，得到含有止血中药粉的蚕丝蛋白溶胶。
3、止血修复水凝胶的制备
称取蜗牛粘液1Kg、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶9Kg和天然交联剂0.01Kg，在25℃下反应3h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于三七粉末的用量为1Kg。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于三七粉末的用量为2.5Kg。
实施例4
1、蜗牛粘液的提取
S1、取20克以上的鲜活白玉蜗牛50Kg，用清水洗净蜗牛后置于室温下自然晾干；
S2、在28℃以下的环境中取出蜗牛，用电瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复3次，空载电压>1000V，负载电流<3mA；
S3、用器皿接取蜗牛足腺分泌的粘液，提取粘液后的蜗牛需补充清水和精饲料饲养6天后方可再次提取粘液；
S4、将提取的粘液在0～5℃的环境中速冻8h；
S5、在28℃以下的工作环境中通过胶磨机反复研磨直至打碎粘液；
S6、在10℃以下的工作环境中将研磨好的粘液用450目以上的过滤网过滤，再通过8000～10000转/分转速的离心机离心12分钟以上，将沉底的渣滓分离，得到蜗牛粘液。
2、含止血中药蚕丝蛋白的制备
T1、将5Kg蚕茧切碎，置于蒸汽锅中蒸煮45min，蒸汽压力为104.4kPa、温度为120℃，用去离子水洗涤后在室温下干燥，得到粗蚕丝；
T2、称取0.3Kg所述粗蚕丝和10Kg浓度为10M的LiBr水溶液，混合，在60℃下搅拌2.5h，过滤，得到蚕丝粗液；
T3、通过分子量为12000-14000Da透析膜除去上述蚕丝粗液中的杂质，得到蚕丝蛋白溶胶；
T4、称取仙鹤草提取液0.5Kg，加至步骤T3中得到的蚕丝蛋白溶胶中，超声分散45min，得到含有止血中药粉的蚕丝蛋白溶胶。
3、止血修复水凝胶的制备
称取蜗牛粘液2.5Kg、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶7.5Kg和天然交联剂0.03Kg，在30℃下反应12h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶。
实施例5
本实施例与实施例4的区别在于仙鹤草提取液的用量为2Kg。
实施例6
本实施例与实施例4的区别在于仙鹤草提取液的用量为3.5Kg。
实施例7
1、蜗牛粘液的提取
S1、取20克以上的鲜活白玉蜗牛50Kg，用清水洗净蜗牛后置于室温下自然晾干；
S2、在28℃以下的环境中取出蜗牛，用电瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复3次，空载电压>1000V，负载电流<3mA；
S3、用器皿接取蜗牛足腺分泌的粘液，提取粘液后的蜗牛需补充清水和精饲料饲养6天后方可再次提取粘液；
S4、将提取的粘液在0～5℃的环境中速冻8h；
S5、在28℃以下的工作环境中通过胶磨机反复研磨直至打碎粘液；
S6、在10℃以下的工作环境中将研磨好的粘液用450目以上的过滤网过滤，再通过8000～10000转/分转速的离心机离心12分钟以上，将沉底的渣滓分离，得到蜗牛粘液。
2、含止血中药蚕丝蛋白的制备
T1、将5Kg蚕茧切碎，置于蒸汽锅中蒸煮60min，蒸汽压力为103.4kPa、温度为110℃，用去离子水洗涤后在室温下干燥，得到粗蚕丝；
T2、称取0.5Kg所述粗蚕丝和10Kg浓度为12M的LiBr水溶液，混合，在70℃下搅拌3h，过滤，得到蚕丝粗液；
T3、通过分子量为12000-14000Da透析膜除去上述蚕丝粗液中的杂质，得到蚕丝蛋白溶胶；
T4、称取紫草提取液1Kg，加至步骤T3中得到的蚕丝蛋白溶胶中，超声分散60min，得到含有止血中药粉的蚕丝蛋白溶胶。
3、止血修复水凝胶的制备
称取蜗牛粘液4Kg、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶6Kg和天然交联剂0.05Kg，在40℃下反应24h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶。
实施例8
本实施例与实施例7的区别在于紫草提取液的用量为2.5Kg。
实施例9
本实施例与实施例7的区别在于紫草提取液的用量为3Kg。
实施例10
1、蜗牛粘液的提取
S1、取20克以上的鲜活白玉蜗牛50Kg，用清水洗净蜗牛后置于室温下自然晾干；
S2、在28℃以下的环境中取出蜗牛，用电瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复3次，空载电压>1000V，负载电流<3mA；
S3、用器皿接取蜗牛足腺分泌的粘液，提取粘液后的蜗牛需补充清水和精饲料饲养6天后方可再次提取粘液；
S4、将提取的粘液在0～5℃的环境中速冻8h；
S5、在28℃以下的工作环境中通过胶磨机反复研磨直至打碎粘液；
S6、在10℃以下的工作环境中将研磨好的粘液用450目以上的过滤网过滤，再通过8000～10000转/分转速的离心机离心12分钟以上，将沉底的渣滓分离，得到蜗牛粘液。
2、含止血中药蚕丝蛋白的制备
T1、将5Kg蚕茧切碎，置于蒸汽锅中蒸煮45min，蒸汽压力为104.4kPa、温度为120℃，用去离子水洗涤后在室温下干燥，得到粗蚕丝；
T2、称取0.4Kg所述粗蚕丝和10Kg浓度为10M的LiBr水溶液，混合，在60℃下搅拌2.5h，过滤，得到蚕丝粗液；
T3、通过分子量为12000-14000Da透析膜除去上述蚕丝粗液中的杂质，得到蚕丝蛋白溶胶；
T4、称取白芨提取物0.5Kg，加至步骤T3中得到的蚕丝蛋白溶胶中，超声分散45min，得到含有止血中药粉的蚕丝蛋白溶胶。
3、止血修复水凝胶的制备
称取蜗牛粘液2Kg、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶8Kg和天然交联剂0.04Kg，在30℃下反应8h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶。
实施例11
本实施例与实施例10的区别在于白芨提取物的用量为2Kg。
实施例12
本实施例与实施例10的区别在于白芨提取物的用量为3Kg。
结果测试
1、止血修复水凝胶止血时间的测试
在本部分，选取实施例1中得到的止血修复水凝胶、止血纱布和生理盐水分别对家兔的皮肤创伤出血、股动脉创伤出血和肝脏切面出血进行处理，记录各部位伤口止血的时间，结果如下表：
实验结果表明：本发明实施例1中得到的止血修复水凝胶相对止血纱布和生理盐水具有较好止血效果，止血时间控制在10s。
2、止血修复水凝胶修复性能的测试
在本部分，选取实施例1中得到的止血修复水凝胶涂抹在家兔的伤口；另外，设置对照实验，对照实验中家兔伤口不作任何处理。记录家兔伤口在不同时期(开始、第3天、第7天和第14天)修复情况，结果如图1。
实验结果表明：本发明实施例1中得到的止血修复水凝胶对家兔的伤口具有一定的修复能力，有效的加快了伤口的愈合。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干等同替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种止血修复水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：称取蜗牛粘液10～40份、含止血中药的蚕丝蛋白溶胶90～60份和天然交联剂0.1～0.5份，在25～40℃下反应3～24h，冷冻干燥，得到所述止血修复水凝胶，以上份数均为质量份数。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蜗牛粘液的提取方法包括如下步骤：
S1、取20克以上的鲜活白玉蜗牛，用清水洗净蜗牛后置于室温下自然晾干；
S2、在28℃以下的环境中取出蜗牛，用电瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复2-4次，空载电压>1000V，负载电流<3mA；
S3、用器皿接取蜗牛足腺分泌的粘液，提取粘液后的蜗牛需补充清水和精饲料饲养6天后方可再次提取粘液；
S4、将提取的粘液在0～5℃的环境中速冻5～8h；
S5、在28℃以下的工作环境中通过胶磨机反复研磨直至打碎粘液；
S6、在10℃以下的工作环境中将研磨好的粘液用450目以上的过滤网过滤，再通过8000～10000转/分转速的离心机离心12分钟以上，将沉底的渣滓分离，得到蜗牛粘液。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含止血中药的蚕丝蛋白溶胶的制备方法包括如下步骤：
T1、将蚕茧切碎，置于蒸汽锅中蒸煮30～60min，蒸汽压力为103.4～105.4kPa、温度为110～130℃，用去离子水洗涤后在室温下干燥，得到粗蚕丝；
T2、称取2～5份所述粗蚕丝和100份7～12M LiBr水溶液，混合，在50～70℃下搅拌2～3h，过滤，得到蚕丝粗液，以上份数均为质量份数；
T3、通过分子量为12000～14000Da的透析膜除去上述蚕丝粗液中的杂质，得到蚕丝蛋白溶胶；
T4、称取一定量的止血中药，加至步骤T3中得到的蚕丝蛋白溶胶中，超声分散30～60min，得到含有止血中药的蚕丝蛋白溶胶，以上份数均为质量份数。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述止血中药包括：三七粉末5～20份、仙鹤草提取液5～35份、紫草提取液10～30份或白芨提取物5～30份，以上份数均为质量份数。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述蚕茧包括桑蚕茧、柞蚕茧、蓖麻蚕茧或木薯蚕茧。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述天然交联剂包括京尼平、橄榄苦苷、原花青素、单宁酸或茶多酚。
7.一种止血修复水凝胶，其特征在于，所述止血修复水凝胶采用权利要求1-9任一所述的方法制备。
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