CN108152426B - 一种烟叶中硒元素的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于烟草测试技术领域，具体公开了一种烟叶中硒元素的含量测定方法。其包括将烟叶打碎，使用纤维素酶以及NaOH的混合溶液100ml浸泡45‑60min，静置3h，取液体注入高效液相色谱仪，于以下条件进行分离，并通过待测液和标准液之间色谱峰的比值换算，计算得到实际的Se元素含量。本发明通过使用纤维素酶以及NaOH溶液的处理，分解细胞壁并且将Cu、Cr等离子多数消除，排除这些离子对Se元素测试的干扰，并且，在合适的测试条件参数下，Se的测试结果极为精确。

Description

一种烟叶中硒元素的含量测定方法
技术领域
本发明涉及烟草测试技术领域，具体涉及一种烟叶中硒元素的含量测定方法。
背景技术
硒(Se)是生命必需的微量元素，是人体谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)重要活性成分，起到清除体内自由基的作用；缺硒与人体40多种疾病有关(如恶性肿瘤、乙型肝炎、心血管病和糖尿病等等)，硒在人体内能保护蛋白质和DNA大分子结构以及功能免受自由基的损伤，起到降低基因突变性、修复DNA的作用，人体内硒的摄入量与癌症的发病率成负相关；同时硒能降低烟碱和焦油的毒性，对肿瘤起抑制，对烟气中多种致癌物质具有拮抗作用。因此如何提高烟草中的硒含量是困扰目前的烟草行业的重要命题。
基于此，对于硒元素的检测技术也至关重要，由于烟叶中微量元素较多，在进行检测时，这些微量元素之间在测试时会互相干扰，造成检测结果不准确。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中存在的上述不足，提供一种烟叶中硒元素的含量测定方法，其通过选择合适的测试条件，同时通过处理，排出烟叶中Cu、Cr、Mn和Fe等元素的干扰，使硒元素的测试结果更加精确。
本发明所要解决的上述技术问题通过以下技术方案予以实现：
一种烟叶中硒元素的含量测定方法，包括以下步骤：将烟叶打碎，使用纤维素酶以及NaOH的混合溶液100ml浸泡45-60min，静置3h，取液体注入高效液相色谱仪，于以下条件进行分离：
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括流动相A和流动相B，其中，所述流动相A为体积比为(10:90)～(20:80)的乙腈～缓冲溶液，所述流动相B为乙腈；
所述乙腈～缓冲溶液中的缓冲溶液为pH值为2～2.4的醋酸铵和高氯酸钠的混合溶液；
洗脱条件：洗脱时间及所述洗脱时间内所述流动相中的所述流动相B的体积含量如下：0～18min，0％；18～25min，0～30％；25～39min，30％；39～40min，30～0％；40～50min，0％；
配制硒元素的标准对照液；同条件进行色谱检测，并按以下方式计算所述待测品溶液中所述物质成分的含量：
w物质成分＝(A测物质成分×m对物质成分)/(A对物质成分×m测)×100％；
其中，A测为待测品溶液中含硒物质的色谱峰面积，A对为对照液中含硒物质的色谱峰面积，m对为对照液中含硒物质的质量，m测为待测品溶液中含硒物质的质量。
优选地，分离过程中的柱温为38～42℃。
优选地，分离过程中所述流动相A和所述流动相B的流速均为0.8～1.2mL/min。
优选地，所述液体注入高效液相色谱仪前，用极性溶剂稀释至浓度为0.5～1.5mg/mL，离心，取上清液。
优选地，所述极性溶液为纯化水或浓度为0.08～0.12mol/L的盐酸。
优选地，所述待测品溶液注入所述高效液相色谱仪的体积为10～20μL。
优选地，所述纤维素酶与NaOH的质量比为3:2。
优选地，纤维素酶与NaOH的混合溶液中，NaOH的浓度为0.1-0.15mol/L。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种烟叶中硒元素的含量测定方法，通过使用纤维素酶以及NaOH溶液的处理，分解细胞壁并且将Cu、Cr等离子多数消除，排除这些离子对Se元素测试的干扰，并且，在合适的测试条件参数下，Se的测试结果极为精确。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1
成熟烟叶，使用搅拌粉碎成渣，使用纤维素酶以及NaOH的混合溶液100ml浸泡45-60min，静置3h，其中，纤维素酶以及NaOH的混合溶液中，纤维素酶与NaOH的质量比为3:2，NaOH的浓度为0.1mol/L。
取静置后的液体注入高效液相色谱仪，于以下条件进行分离：
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括流动相A和流动相B，其中，所述流动相A为体积比为(10:90)～(20:80)的乙腈～缓冲溶液，所述流动相B为乙腈；
所述乙腈～缓冲溶液中的缓冲溶液为pH值为2～2.4的醋酸铵和高氯酸钠的混合溶液；
洗脱条件：洗脱时间及所述洗脱时间内所述流动相中的所述流动相B的体积含量如下：0～18min，0％；18～25min，0～30％；25～39min，30％；39～40min，30～0％；40～50min，0％；
配制硒元素的标准对照液；同条件进行色谱检测，按计算公式计算Se元素的含量。
实施例2
成熟烟叶，使用搅拌粉碎成渣，使用纤维素酶以及NaOH的混合溶液100ml浸泡45-60min，静置3h，其中，纤维素酶以及NaOH的混合溶液中，纤维素酶与NaOH的质量比为3:2，NaOH的浓度为0.15mol/L。
取静置后的液体注入高效液相色谱仪，于以下条件进行分离：
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括流动相A和流动相B，其中，所述流动相A为体积比为(10:90)～(20:80)的乙腈～缓冲溶液，所述流动相B为乙腈；
所述乙腈～缓冲溶液中的缓冲溶液为pH值为2～2.4的醋酸铵和高氯酸钠的混合溶液；
洗脱条件：洗脱时间及所述洗脱时间内所述流动相中的所述流动相B的体积含量如下：0～18min，0％；18～25min，0～30％；25～39min，30％；39～40min，30～0％；40～50min，0％；
配制硒元素的标准对照液；同条件进行色谱检测，按计算公式计算Se元素的含量。
实施例3
成熟烟叶，使用搅拌粉碎成渣，使用纤维素酶以及NaOH的混合溶液100ml浸泡45-60min，静置3h，其中，纤维素酶以及NaOH的混合溶液中，纤维素酶与NaOH的质量比为3:2，NaOH的浓度为0.13mol/L。
取静置后的液体注入高效液相色谱仪，于以下条件进行分离：
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括流动相A和流动相B，其中，所述流动相A为体积比为(10:90)～(20:80)的乙腈～缓冲溶液，所述流动相B为乙腈；
所述乙腈～缓冲溶液中的缓冲溶液为pH值为2～2.4的醋酸铵和高氯酸钠的混合溶液；
洗脱条件：洗脱时间及所述洗脱时间内所述流动相中的所述流动相B的体积含量如下：0～18min，0％；18～25min，0～30％；25～39min，30％；39～40min，30～0％；40～50min，0％；
配制硒元素的标准对照液；同条件进行色谱检测，按计算公式计算Se元素的含量。
实施例4
成熟烟叶，使用搅拌粉碎成渣，使用纤维素酶以及NaOH的混合溶液100ml浸泡45-60min，静置3h，其中，纤维素酶以及NaOH的混合溶液中，纤维素酶与NaOH的质量比为3:2，NaOH的浓度为0.12mol/L。
取静置后的液体注入高效液相色谱仪，于以下条件进行分离：
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括流动相A和流动相B，其中，所述流动相A为体积比为(10:90)～(20:80)的乙腈～缓冲溶液，所述流动相B为乙腈；
所述乙腈～缓冲溶液中的缓冲溶液为pH值为2～2.4的醋酸铵和高氯酸钠的混合溶液；
洗脱条件：洗脱时间及所述洗脱时间内所述流动相中的所述流动相B的体积含量如下：0～18min，0％；18～25min，0～30％；25～39min，30％；39～40min，30～0％；40～50min，0％；
检测条件：所述羟苯甲酸、所述杂质E、所述环丙沙星和所述杂质A的检测波长分别为250nm、300nm、294nm和235nm，
配制硒元素的标准对照液；同条件进行色谱检测，按计算公式计算Se元素的含量。
其中实施例1-4均选用同一片烟叶进行测试，其测试计算结果数据如表1所示。
表1硒元素测试结果数据表
组别 实测值
实施例1 0.223μg/g
实施例2 0.219μg/g
实施例3 0.224μg/g
实施例4 0.220μg/g
由表1数据可以看出，本发明各个实施例获得的测试数据的重复性极高，测试偏差小，测试结果可靠。
试验例
配置0.5μg/g的硒酸钠溶液，向其中加入0.1μg/g的Cu离子、Fe离子和Mn离子，按实施例1-4所示的方式进行测试。另设置对照组：对照组采用同实施例1相同的参数进行高效液相色谱测试，区别在于不使用纤维素酶和NaOH的混合溶液进行处理。试验测试结果见表2.
表2试验例硒元素测试结果数据表
Figure GDA0003148890360000051
由表2数据可以看出，由于没有对样品进行处理，对于标准溶液的测试结果，偏差极大。因此说明本发明通过对烟叶样品进行预处理，可以有效的避免其他元素对硒测定时的影响，提高测试结果的精确性。

Claims (4)

1.一种烟叶中硒元素的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
将烟叶打碎，使用纤维素酶以及NaOH的混合溶液100ml浸泡45-60min，静置3h，取液体注入高效液相色谱仪，于以下条件进行分离，其中，所述纤维素酶与NaOH的质量比为3:2，纤维素酶与NaOH的混合溶液中，NaOH的浓度为0.1-0.15mol/L：
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括流动相A和流动相B，其中，所述流动相A为乙腈～缓冲溶液，体积比为10:90～20:80，所述流动相B为乙腈，分离过程中的柱温为38～43℃，分离过程中所述流动相A和所述流动相B的流速均为0.8～1.2mL/min；
所述乙腈～缓冲溶液中的缓冲溶液为pH值为2～2.4的醋酸铵和高氯酸钠的混合溶液；
洗脱条件：洗脱时间及所述洗脱时间内所述流动相中的所述流动相B的体积含量如下：0～18min，0％；18～25min，0～30％；25～39min，30％；39～40min，30～0％；40～50min，0％；
配制硒元素的标准对照液；同条件进行色谱检测，并按以下方式计算待测品溶液中物质成分的含量：
w物质成分＝(A测×m对)/(A对×m测)×100％；
其中，A测为待测品溶液中含硒物质的色谱峰面积，A对为对照液中含硒物质的色谱峰面积，m对为对照液中含硒物质的质量，m测为待测品溶液中含硒物质的质量。
2.根据权利要求1所述的烟叶中硒元素的含量测定方法，其特征在于，所述液体注入高效液相色谱仪前，用极性溶剂稀释至浓度为0.5～1.5mg/mL，离心，取上清液。
3.根据权利要求2所述的烟叶中硒元素的含量测定方法，其特征在于，所述极性溶剂为纯化水或浓度为0.08～0.12mol/L的盐酸。
4.根据权利要求1所述的烟叶中硒元素的含量测定方法，其特征在于，所述待测品溶液注入所述高效液相色谱仪的体积为10～20μL。
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