CN108135168B - Ccr2调节剂 - Google Patents

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Abstract

提供了作为CCR2受体的调节剂的化合物。该化合物具有通式(I)并可用于药物组合物、用于治疗涉及CCR2受体的病理活性的疾病和病症的方法。
Figure DDA0001476504360000011

Description

CCR2调节剂
相关申请的交叉引用
依照35U.S.C.§119(e)，本申请要求2015年5月21日提交的美国申请序列号62/164,957的优先权，其公开内容通过引用并入本文。
联邦资助研发下所作发明的权利的声明
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对以光盘形式递交的"序列表"、表格或计算机程序列表附件的引用
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发明背景
趋化因子，也被称为趋化性细胞因子，是由多种细胞释放并具有多种生物学活性的一组小分子量蛋白质。趋化因子吸引各种类型的免疫系统细胞，如巨噬细胞，T细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞，使它们从血液迁移到各种淋巴组织和非淋巴组织。它们介导炎症细胞向炎症部位的浸润，并且是许多炎症疾病的引发和延续的原因(综述见Schall,Cytokine,3:165-183(1991)，Schall等，Curr.Opin.Immunol.,6:865-873(1994))。
除了刺激趋化性之外，趋化因子还可以诱导响应细胞的其他变化，包括细胞形状的变化，颗粒胞吐，整联蛋白上调，生物活性脂质(例如，白三烯)形成，与白细胞活化有关的呼吸爆发，细胞增殖，对诱导细胞凋亡和血管生成的抗性。因此，趋化因子是炎症反应的早期触发剂，引起炎症介质释放、趋化和外渗至感染或炎症部位。它们也是具有重要生理功能和病理后果的多种细胞过程的刺激物。
趋化因子通过激活响应细胞表达的趋化因子受体来发挥其作用。趋化因子受体是一类G蛋白偶联受体，也被称为七跨膜受体，在多种细胞类型，如白细胞、内皮细胞、平滑肌细胞和肿瘤细胞的表面上发现。
趋化因子和趋化因子受体在肾脏炎症期间由固有肾细胞和浸润细胞表达(Segerer等，J.Am.Soc.Nephrol.，11:152-76(2000)；Morii等，J.DiabetesComplications，17:11-5(2003)；Lloyd等.J.Exp.Med，185:1371-80(1997)；Gonzalez-Cuadrado等。Clin.Exp.Immuno，106:518-22(1996)；Eddy和Giachelli,Kidney Int.，47:1546-57(1995)；Diamond等,Am.J.Physiol.,266:F926-33(1994))。在人类中，CCR2和配体MCP-1是肾纤维化中表达的蛋白质之一，并与巨噬细胞向间质浸润的程度相关(Yang等，中华医学杂质,81:73-7(2001)；Stephan等,J.Urol，167：1497-502(2002)；Amann等,DiabetesCare，26:2421-5(2003)；Dai等,Chin.Med.J.(Engl),114:864-8(2001))。在肾纤维化的动物模型中，阻断CCR2或MCP-1导致肾脏炎症严重程度的显著降低(Kitagawa等,Am.J.Pathol.,165:237-46(2004)；Wada等,Am.J.Pathol.,165:237-46(2004)；Shimizu等,J.Am.Soc.Nephrol.,14:1496-505(2003))。
此外CCR2在多囊肾病(PKD)的发展中起了作用。ADPKD的病理特征是肾囊肿，其由肾小管上皮细胞产生并在患者一生中不断扩大。扩大的囊肿伴随着大量浸润性巨噬细胞的出现，其被募集到肾脏以响应受伤。因此，抑制向肾脏的免疫募集构成了PKD的治疗策略。JAm Soc Nephrol.2011Oct；22(10):1809-14.)
类风湿性关节炎是关节的以滑膜炎症为特征的慢性疾病，其导致软骨和骨的破坏。尽管这一疾病的潜在原因未知，人们认为，巨噬细胞和Th-1型T细胞在慢性炎症过程的起始和延续中起了关键作用(Vervoordeldonk等,Curr.Rheumatol.Rep.,4:208-17(2002))。
MCP-1是几种趋化因子之一，包括MIP-1α和IL-8，在类风湿滑膜中确认(Villiger等,J.Immunol.,149:722-7(1992)；Scaife等,Rheumatology(牛津),43:1346-52(2004)；Shadidi等,Scand.J.Immunol.,57:192-8(2003)；Taylor等,Arthritis Rheum.,43:38-47(2000)；Tucci等,Biomed.Sci.Instrum.,34:169-74(1997))。趋化因子受体CCR1、CCR2、CCR3和CCR5在关节炎小鼠的关节中上调(Plater-Zyberk等,Immunol.Lett.,57:117-20(1997)。用CCR2拮抗剂或针对MCP-1的抗体阻断MCP-1活性在类风湿性关节炎实验模型中减少关节炎症已被证明是有效的(Gong等,J.Exp.Med.,186:131-7(1997)；Ogata等,J.Pathol.,182:106-14(1997))。
趋化因子受体介导的巨噬细胞在脂肪组织中的浸润也可能促成由肥胖引起的并发症，由于脂肪在体内储存过多而导致的状况。肥胖使受影响的个体易患如非胰岛素依赖性糖尿病、高血压、中风和冠状动脉疾病的各种疾病。在肥胖症中，脂肪组织改变了的代谢和内分泌功能，导致脂肪酸、激素和促炎分子的释放增加。脂肪组织巨噬细胞被认为是促炎细胞因子(包括TNF-α，iNOS和IL-6)的关键来源(Weisberg等,J.Clin.Invest.,112:1796-808(2003))。巨噬细胞向脂肪组织的募集很可能是由脂肪细胞产生的MCP-1介导(Christiansen T,等,Int J Obes(Lond).2005一月；29(1):146-50；Sartipy等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,100:7265-70(2003))。
MCP-1升高可能诱导脂肪细胞分化和胰岛素抵抗，以及促成对高胰岛素血和肥胖相关的病理。与瘦对照组相比，肥胖小鼠中MCP-1在血浆中过表达，而白色脂肪是主要来源。MCP-1也已经显示出加速伤口愈合，并且对上皮细胞有直接的血管生成作用，并且可能在肥胖中的脂肪组织重塑中起直接作用。(Sartipy P,Loskutoff DJ.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,100:7265(2003))。
饮食诱导肥胖(DIO)小鼠中MCP-1血浆水平显著升高，以及血浆MCP-1水平和体重之间的强相关性已被确定。此外，由高脂饮食诱导的MCP-1升高造成DIO小鼠中CD11b阳性单核细胞群的变化。(Takahashi K等,J.Biol.Chem.,46654(2003))。
此外，脂肪中的慢性炎症被认为在肥胖相关的胰岛素抵抗的发展中起关键作用(Xu H等，J Clin Invest.2003 12月；112(12)：1821-30)。已经提出肥胖相关的胰岛素抵抗是，至少部分是，在脂肪组织中引发的慢性炎性疾病。在遗传和高脂饮食诱导的肥胖(DIO)的小鼠模型中，在白色脂肪组织中许多炎症和巨噬细胞特异性基因显著上调，并且这种上调先于循环胰岛素的急剧增加。
在涉及糖尿病患者的研究中发现了糖尿病患者中单核细胞CCR2和单核细胞趋化蛋白-1的表达水平增加(Biochemical and Biophysical Research Communications,344(3):780-5(2006))。糖尿病患者的血清MCP-1浓度及单核细胞上CCR2的表面表达明显高于非糖尿病患者，以及血清MCP-1水平与HbA1c、甘油三酯、BMI、hs-CRP相关。糖尿病患者中单核细胞上CD36和CD68的表面表达水平显著升高，且在糖尿病中更不受MCP-1调控，增加了ox-LDL的摄取，以及因此可能的泡沫细胞转化。血清MCP-1升高和单核细胞CCR2、CD36、CD68表达增加与血糖控制不良相关并可能与血管壁单核细胞募集增加相关。
MCP-1是脂肪组织和骨骼肌之间负相关的潜在参与者(Bianco JJ等，Endocrinology，2458(2006))。MCP-1可显著降低胰岛素刺激的葡萄糖摄取并是人骨骼肌细胞中胰岛素抵抗的显著诱导物。脂肪组织是产生调节能量代谢和胰岛素敏感性的生物活性蛋白质的主要分泌和内分泌活性器官。
CCR2调节炎症和高脂喂养的代谢作用(Weisberg SP等，J.Clin.Invest，115(2006))。CCR2的遗传缺乏减少了食物的摄入量，并减弱了喂食高脂饮食的小鼠的肥胖发展。匹配肥胖的肥胖小鼠中，CCR2缺乏降低了巨噬细胞含量和脂肪组织的炎症分布，增加了脂联素表达，并改善了葡萄糖体内平衡和胰岛素敏感性。在瘦动物中，没有发现CCR2基因型对代谢性状的影响。在高脂饮食小鼠中，CCR2基因型调节喂养、肥胖发展和脂肪组织炎症。一旦建立起来，短期的拮抗显示出减弱巨噬细胞在脂肪组织中的积累和胰岛素抵抗。
趋化因子和趋化因子受体是免疫细胞运输的关键调节因子。MCP-1是单核细胞和T细胞的一种有效化学引诱物；在包括促炎细胞因子刺激和缺氧的炎症条件下诱导其表达。MCP-1和CCR2之间的相互作用介导单核细胞、巨噬细胞以及活化的T细胞的迁移，在许多炎症性疾病的病理中起关键作用。使用本发明中描述的小分子拮抗剂抑制CCR2功能代表了一种治疗炎性疾病的新方法。
银屑病是以角质形成细胞过度增殖和明显的白细胞浸润为特征的慢性炎性疾病。已知，来自银屑病损伤的角质形成细胞表达丰富的CCR2配体MCP-1，特别是当被如TNF-α的促炎性细胞因子刺激时(Vestergaard等，Acta.Derm.Venereol.,84(5):353-8(2004)；Gillitzer等,J.Invest.Dermatol.,101(2):127-31(1993)；127-31(1993)；Deleuran等,J.Dermatol.Sci.,13(3):228-36(1996))。由于MCP-1可以吸引表达CCR2的巨噬细胞和树突状细胞向皮肤迁移，这种受体和配体对被认为在银屑病发展期间在调节增殖性角质形成细胞和皮肤巨噬细胞之间的相互作用中很重要。因此小分子拮抗剂对治疗银屑病有用。
除了炎性疾病之外，趋化因子和趋化因子受体还涉及癌症(Broek等，Br.J.Cancer，88(6)：855-62(2003))。肿瘤细胞刺激分泌各种基质的形成，其分泌对于肿瘤生长关键的各种介质，包括生长因子、细胞因子和蛋白酶。已知MCP-1的水平与肿瘤相关的巨噬细胞积聚显著相关，并且预后分析显示MCP-1的高表达是乳腺癌早期复发的重要指标(Ueno等，Clin.Cancer Res，6(8)：3282-9(2001))。因此趋化因子的小分子拮抗剂能够通过阻断巨噬细胞在肿瘤形成部位的积聚来减少生长刺激性细胞因子的释放。
CCR2及其配体CCL2在调节肿瘤微环境和调节有益和有害免疫细胞群向肿瘤的流入也起主要作用。正如最近的临床和临床前文献已经证明，CCR2在多种实体瘤中的作用，或者通过其在转化细胞中的表达上调或者增强炎性单核细胞向最终分化成骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)的肿瘤或巨噬细胞(TAM)相关的肿瘤的趋化性。MDSCs/TAMs被认为通过以下机制促进肿瘤发生：(1)有助于一般免疫抑制性微环境，从而促进肿瘤生长，消除浸润性细胞毒性T细胞的细胞毒性功能(Mitchem等，Cancer Res 73(3)：1128-1141)，(2)通过分泌血管内皮生长因子(VEGF)和其他生长因子来增强血管生成(Murdoch等，Nat Rev Cancer8：618-631)，(3)防止肿瘤衰老(Di Mitri等，AOP，Nature，2014)，和(4)促进肿瘤转移到远端器官中(Qian等人，Nature 475：222-227)。因此，小分子拮抗剂在限制肿瘤发生、增强肿瘤特异性免疫活性和肿瘤转移中有用。
本文提供了为CCR2调节剂的化合物，并解决了早期CCR2调节剂的一些缺点。
发明内容
一方面，本发明提供了具有下式的化合物：
Figure BDA0001476504340000041
或其药学上可接受的盐，水合物，立体异构体或旋转异构体；其中符号R1，R2，R3，R4，A和下标m和n具有详述中提供的意义。
除本文提供的化合物外，本发明还提供了含有一种或多种这些化合物的药物组合物，以及在治疗方法中使用这些化合物的方法，主要用于治疗与CCR2信号传导活性相关疾病。
另一方面，本发明提供了在个体中诊断疾病的方法。在这些方法中，将本文提供的化合物以被标记形式给予受试者，之后进行诊断成像以确定CCR2的存在或不存在。在一个相关方面，诊断疾病的方法通过将本文提供的被标记化合物与组织或血液样品接触并确定样品中CCR2的存在、不存在或量来实施。
另一方面，本发明提供了调节趋化因子功能的方法，其包含将治疗有效量的本发明的化合物或组合物与趋化因子受体接触。
另一方面，本发明提供了治疗趋化因子介导的病症或疾病的方法，其包含向受试者施用安全有效量的本发明的化合物或组合物。
在一个具体的方面，本发明涉及治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，其包含向受试者施用治疗有效量的式I化合物或式I化合物的药学上可接受的盐。在某些实施例中，CCR2介导的病症或疾病是动脉粥样硬化。在某些实施例中，CCR2介导的病症或疾病是再狭窄。在某些实施例中，CCR2介导的病症或疾病是多发性硬化症。在某些实施例中，CCR2介导的病症或疾病选自炎症性肠病、肾纤维化、类风湿性关节炎、肥胖症和非胰岛素依赖性糖尿病。在某些实施例中，CCR2介导的病症或疾病是2型糖尿病。在某些实施例中，CCR2介导的病症或疾病选自慢性阻塞性肺病，特发性肺纤维化和特发性肺炎综合征。
除本文提供的化合物外，本发明还提供了含有一种或多种这些化合物的药物组合物，以及在治疗方法中使用这些化合物的方法，主要用于治疗与趋化因子信号传导活性相关的疾病。
附图简要说明
图1A-1Y提供了本发明代表性化合物的结构和活性。化合物如下文一般性描述以及通过实施例中提供的方法来制备。本文所述的结合测定中的活性如下：+，501nM≤IC50<5000nM；++，101nM≤IC50<500nM；和+++，1nM≤IC50≤100nM。
图2提供了本文所述化合物的组成部分的ORTEP结构，并显示了四价中心的立体化学(显示为带有环丙基并被确定具有“S”手性)。
发明详述
I.缩写和定义
除非另有表述，术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳原子数的直链或支链烃基(即，C1-8表示1-8个碳)。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。术语“烯基”指具有一个或多个双键的不饱和烷基。类似地，术语“炔基”指具有一个或多个三键的不饱和烷基。此类不饱和烷基的例子包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基和更高级的同系物和异构体。术语“环烷基”是指具有指定环原子数(例如，C3-6环烷基)并且完全饱和的或在环顶之间具有不超过一个双键的烃环。“环烷基”也指双环和多环烃环，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。术语“杂环烷基”是指含有一至五个选自N、O和S的杂原子的环烷基，其中氮和硫原子任选被氧化，且氮原子任选被季铵化。杂环烷基可以是单环、双环或多环体系。杂环烷基的非限制性例子包括吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、苯邻二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二噁烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。杂环烷基可以经环碳或杂原子连接于分子的其余部分。对于诸如环烷基烷基和杂环烷基烷基的术语，是指环烷基或杂环烷基通过烷基或亚烷基连接体连接到分子的其余部分。例如，环丁基甲基-是连接到分子其余部分的亚甲基连接基上的环丁基环。
术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指衍生自烷烃的二价基团，例如-CH2CH2CH2CH2-。烷基(或亚烷基)通常具有1-24个碳原子，其中本发明优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是较短链烷基或亚烷基，通常具有4个或更少的碳原子。类似地，“亚烯基”或“亚炔基”分别指具有双键或三键的不饱和形式的“亚烷基”。
除非另有说明，术语“杂烷基”本身或与其它术语组合是指的稳定的直链或支链或环状烃基或其组合，由指定数目的碳原子和和1至3个选自O，N，Si和S的杂原子组成，且其中氮和硫原子可选地被氧化，氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O，N和S可以位于杂烷基的任何内部位置。杂原子Si可以位于杂烷基的任何位置，包括烷基连接到分子其余部分的位置。实施例包括-CH2-CH2-O-CH3,-CH2-CH2-NH-CH3,-CH2-CH2-N(CH3)-CH3,-CH2-S-CH2-CH3,-CH2-CH2,-S(O)-CH3,-CH2-CH2-S(O)2-CH3,-CH＝CH-O-CH3,-Si(CH3)3,-CH2-CH＝N-OCH3,和-CH＝CH-N(CH3)-CH3。最多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。类似地，除非另有说明，术语“杂烯基”和“杂炔基”其本身或与另一个术语的组合分别指烯基或炔基，其分别含有指定数目的碳和1至3个选自O，N，Si和S的杂原子，且其中氮和硫原子可选地被氧化，氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O，N和S可以位于杂烷基的任何内部位置。
术语“杂亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指由杂烷基衍生的饱和或不饱和或多不饱和的二价基团，例如-CH2-CH2-S-CH2CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-,-O-CH2-CH＝CH-,-CH2-CH＝C(H)CH2-O-CH2-和-S-CH2-C≡C-。对于杂亚烷基，杂原子也可以占据链末端中的任一个或两个(例如，亚烷基氧基，亚烷基二氧基，亚烷基氨基，亚烷基二氨基等)。
术语"烷氧基"、"烷氨基"和"烷硫基"(或硫代烷氧基)以其常规意义使用，指代分别经氧原子、氨基或硫原子连接于分子的其余部分的那些烷基。此外，对于二烷基氨基，烷基部分可以相同或不同，也可和与各烷基相连的氮原子组合形成3-7元环。因此，-NRaRb所示基团表示包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂环丁烷基(azetidinyl)等。
除非另有表述，术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴、或碘原子。此外，诸如“卤代烷基”等术语表示包括单卤代烷基或多卤代烷基。例如，术语“C1-4卤代烷基”表示包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另有表述，术语“芳基”表示多不饱和的(通常芳香性)的烃基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(最多三环)。术语"杂芳基"是指含有1至5个选自N、O、和S的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接于分子的其余部分。芳基的非限制性例子包括苯基、萘基和联苯基，而杂芳基的非限制性例子包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基(benzotriazinyl)、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基(isobenzofuryl)、异吲哚基、中氮茚基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等等。以上芳基和杂芳基环系统各自的取代基选自下述可接受的取代基的组。
为简洁起见，当术语“芳基”与其它术语(例如芳氧基，芳硫基，芳烷基)组合使用时，包括如上所定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”是指包括其中芳基连接到与分子的其余部分连接的烷基的那些基团(例如苄基，苯乙基，吡啶基甲基等)。
在一些实施例中，上述术语(如“烷基”，“芳基”和“杂芳基”)将包括指定基团的取代和未取代形式。下面提供了每种类型基团的优选取代基。为简洁起见，术语芳基和杂芳基将指代如下文所提供的取代或未取代的形式，而术语“烷基”和相关的脂肪族基团是指未取代的形式，除非指明被取代。
烷基(包括通常称为亚烷基，烯基，炔基和环烷基的那些基团)的取代基可以是选自下组的各种基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2，数量从零到(2m’+1)，其中m’是这种基团中的碳原子总数。R’、R”和R”’各自独立地表示氢，未取代的C1-8烷基，未取代的杂烷基，未取代的芳基，被1-3个卤素取代的芳基，未取代的C1-8烷基，C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基，或未取代的芳基-C1-4烷基。当R’和R”连接到相同的氮原子时，它们可以与氮原子结合形成3-，4-，5-，6-或7-元环。例如，-NR’R”是指包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。术语“酰基”，单独或作为另一基团的一部分使用，是指其中在最接近该基团的连接点的碳上两个取代基的被取代基＝O取代(例如-C(O)CH3,-C(O)CH2CH2OR’等)。
类似地，芳基和杂芳基的取代基是多种的，并且通常选自：-卤素、-OR’、-OC(O)R’、-NR’R”、-SR’、-R’、-CN、-NO2、-CO2R’、-CONR’R”、-C(O)R’、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR”C(O)2R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-N3、全氟(C1-C4)烷氧基和全氟(C1-C4)烷基，数量从零到芳香环体系上的开放化合价的总数；其中R’、R”和R”’独立地选自氢，C1-8烷基，C3-6环烷基，C2-8烯基，C2-8炔基，未取代的芳基和杂芳基，(未取代的芳基)-C1-4烷基和未取代的芳氧基-C1-4烷基。其它合适的取代基包括通过1-4个碳原子的亚烷基链连接到环原子上的每一个上述芳基取代基。
芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式-T-C(O)-(CH2)q-U-的取代基取代，其中T和U独立地为-NH-，-O-，-CH2-或单键，且q是0至2的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式-A-(CH2)r-B-，其中A和B独立地是-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR’-或单键，且r是1至3的整数。由此形成的新环中的一个单键可以任选地被双键取代。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选地被式-(CH2)s-X-(CH2)t-的取代基替代，其中s和t独立地为0至3的整数，并且X是-O-、-NR’-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、或-S(O)2NR’-。-NR'-和-S(O)2NR'-中的取代基R'选自氢或未取代的C1-6烷基。
如本文所用，术语“杂原子”意在包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
对于本文提供的化合物，从取代基(通常为R基团)到芳香环(例如苯，吡啶等)的中心的键将被理解为是指在芳香环的任何可用顶点提供连接的键。在一些实施例中，该描述也包括稠合在芳环上的环上的连接。例如，绘制到吲哚苯部分的中心的键将表示与吲哚的六元或五元环部分的任何可用顶点连接的键。
术语"药学上可接受的盐"意在包括活性化合物与相对无毒的酸或碱制备的盐，其取决于本文所述化合物上具体的取代基。当本发明化合物含有相对酸性的官能团时，可通过将中性形式的此类化合物与充足量的所需碱(无溶剂的或在合适的惰性溶剂中的)接触来获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的例子包括铝、铵、钙、铜、铁，亚铁、锂、镁、锰，亚锰、钾、钠、锌等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括取代的胺、环状胺、自然产生的胺等等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴明、异丙胺、赖氨酸、甲葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等等。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可通过将中性形式的此类化合物与充足量的所需酸(无溶剂的或在合适的惰性溶剂中的)接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的例子包括衍生自无机酸的那些，例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸、或亚磷酸等等；以及衍生自相对无毒的有机酸的盐，例如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、扁桃酸、苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸，酒石酸、甲磺酸等等。还包括氨基酸的盐，例如精氨酸盐等等，和有机酸的盐，例如葡萄糖醛酸(glucuronic acid)或半乳糖醛酸(galactunoric acid)等(参见，例如Berge,S.M.等,“药学上的盐(PharmaceuticalSalts)”,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，从而能将化合物转换成碱加成盐或酸加成盐。
通过将盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物，可以再生该化合物的中性形式。化合物的母体形式与各种盐形式在某些物理性能(例如在极性溶剂中的溶解度)上不同，但除此之外，就本发明的目的而言，那些盐与母体形式化合物是等价的。
除盐形式外，本发明提供前药形式的化合物。本文所述的化合物的前药是在生理条件下很容易经历化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可以在离体环境中通过化学或生物化学方法转变为本发明化合物。例如，当置于含合适的酶或化学试剂的经皮贴片贮器中时，前药可缓慢转变为本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水化形式。溶剂化形式通常与非溶剂化形式等价，应包括在本发明范围内。本发明的某些化合物可以多晶型或无定形形式存在。通常，就本发明所考虑的应用而言，所有物理形式是等价的，应包括在本发明范围内。
本发明的某些化合物拥有不对称碳原子(光学中心)或双键；消旋体、非对映体、几何异构体、区域异构体和单独的异构体(例如，分离的对映体)均应包括在本发明范围内。当本文提供的化合物具有确定的立体化学(表示为R或S，或具有虚线或楔形键指明)时，被本领域技术人员将理解那些化合物为基本上不含其他异构体(例如至少80％，90％，95％，98％，99％和至多100％不含其他异构体)。
本发明化合物还可在构成此类化合物的一个或多个同位素原子处含有非天然比例的原子同位素。某同位素的非天然比例可以定义为从所讨论原子的天然发现的量到100％该原子的量。例如，化合物可以掺入放射性同位素，例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)，或非放射性同位素，例如氘(2H)或碳-13(13C)。除了本申请所述的那些用途，此类同位素变体可提供额外的用途。例如，本发明化合物的同位素变体可以有额外的用途，包括但不限于作为诊断的和/或成像试剂，或作为细胞毒性/放射毒性治疗剂。另外，本发明化合物的同位素变体可具有改变的药代动力学和药效学特征，从而有助于增加治疗期间的安全性、耐受性或疗效。无论是否有放射性，本发明化合物的所有同位素变体均应包括在本发明范围内。
II.概述
本发明涉及用于调节趋化因子受体功能，特别是CCR2功能的化合物及其盐、组合物和方法。趋化因子受体活性的调节，如本文中以其各种形式使用，是指包括与特定趋化因子受体相关的活性的拮抗作用，激动作用，部分拮抗作用，反向激动作用和/或部分激动作用，优选为CCR2受体。因此，本发明的化合物是调节哺乳动物CCR2(例如人CCR2蛋白)的至少一种功能或特征的化合物。化合物调节CCR2功能的能力可以通过结合测定(例如配体结合或激动剂结合)，迁移测定，信号传导测定(例如，哺乳动物G蛋白的激活，胞质游离钙浓度的快速诱导和瞬时增加)和/或细胞响应测定(例如趋化性的刺激，胞吐作用或白细胞释放炎性介质)证实。
III.化合物
在一方面，本发明提供了式(I)化合物：
Figure BDA0001476504340000101
或其药学上可接受的盐，水合物，立体异构体或旋转异构体；其中
A是C(R5)(R6)或N(R5)
下标m和n各自独立地为0至2的整数，并且m+n≤3；
R1选自下组：芳基、芳基-C1-4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-4烷基，其中所述杂芳基部分具有1-3个选自N、O和S的杂原子作为环成员；并且其中所述芳基和杂芳基基团或部分任选地被1至5个Rx取代基取代；
R2选自下组：H、C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基-C1-4烷基、芳基、芳基-C1-4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-4烷基，其中所述杂芳基部分具有1-3个选自N、O和S的杂原子作为环成员；并且其中所述芳基和杂芳基基团或部分任选地被1至4个Rx取代基取代；
或可选地，R1和R2和与其各自连接的氮原子结合形成6至11元单环或稠合双环杂环或杂芳环，其中–NR1R2任选地进一步被1至4个Rx取代基取代；
R3选自下组：H、C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基-C1-4烷基，其各自任选地被1-3个Ry取代基取代；
R4选自下组：H、任选地被1至2个Ry取代的C1-8烷基，和–CO2H；
R5选自下组：C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷基、C3-8环烷基氧基、C3-8环烷基-C1-4烷基、C1-8烷基氨基、二-C1-8烷基氨基、芳基、芳氧基、芳氨基、芳基-C1-4烷基、杂芳基、杂芳基氧基、杂芳基氨基和杂芳基-C1-4烷基，其各自任选地被1至5个Rz取代基取代；
R6选自下组：H、F、OH、C1-8烷基和C1-8烷氧基,其中C1-8烷基和C1-8烷氧基任选被1至3个Rz取代基取代；
或可选地，R5和R6连接形成螺环5或6元环烷基环，其任选地是不饱和的，并具有任选地被1至4个Rz取代基取代的稠合芳基；
各个Rx各自独立地选自下组：卤素、-CN、-Rc、-CO2Ra、-CONRaRb、-C(O)Ra、-OC(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-NRbC(O)2Rc、-NRa-C(O)NRaRb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaRb、-ORa、-O-X1-ORa、-O-X1-NRaRb、-O-X1-CO2Ra、-O-X1-CONRaRb、-X1-ORa、-X1-NRaRb、-X1-CO2Ra、-X1-CONRaRb、-SF5、-S(O)2NRaRb、和5或6元芳基或杂芳基，其中每个X1是C1-4亚烷基；每个Ra和Rb独立地选自氢，C1-8烷基和C1-8卤代烷基，或者当Ra和Rb与相同的氮原子连接时，可以与该氮原子结合形成具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子作为环成员并任选地被氧代的五元或六元环；每个Rc独立地选自下组：C1-8烷基，C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；并且任选地当两个Rx取代基在相邻的原子上时，结合形成稠合的五元或六元碳环，且其中所述芳基或杂芳基任选被1-3个选自卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基和C1-4卤代烷氧基的成员取代；
每个Ry独立地选自下组：卤素、-CN、-Rf,-CO2Rd、-CONRdRe、-C(O)Rd、-OC(O)NRdRe、-NReC(O)Rd、-NReC(O)2Rf、-NRdC(O)NRdRe,-NRdC(O)NRdRe、-NRdRe、-ORd、和-S(O)2NRdRe；其中每个Rd和Re独立地选自氢，C1-8烷基和C1-8卤代烷基，或者当Rd和Re与相同的氮原子连接时，可以与该氮原子结合形成具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的五元或六元环；每个Rf独立地选自C1-8烷基，C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；
每个Rz独立地选自下组：卤素、-CN、-Ri、-CO2Rg、-CONRgRh、-C(O)Rg、-OC(O)NRgRh、-NRhC(O)Rg、-NRhC(O)2Ri、NRgC(O)NRgRh、-NRgRh、-ORg、-S(O)2NRgRh、-X1-Rj、-X1-NRgRh、-X1-CONRgRh、X1-NRhC(O)Rg、-NHRj、-NHCH2Rj、和四唑；其中每个Rg和Rh独立地选自氢，C1-8烷基、C3-6环烷基和C1-8卤代烷基，或者当Rg和Rh与相同的氮原子连接时，可以与该氮原子结合形成具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子作为环成员并任选地被一个或两个氧取代的五元或六元环；每个Ri独立地选自下组：C1-8烷基，C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；且每个Rj选自下组：C3-6环烷基、吡咯啉基、哌啶基、吗啉基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。
应当理解，当R1和R2和与其各自连接的氮原子结合形成6至11元单环或稠合双环杂环或杂芳环，6至11元单环或稠合双环杂环包含与芳基或杂芳基环稠合的单环杂环。
式I中，取代基R3是，在一个实施例中，选自下组：H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基和环丁基甲基。
在本文的描述中，本领域的技术人员将理解，与键相交的波浪线旨在确定所给出的取代基或基团与分子其余部分的连接点。
如上所述，下标m和n各自选自0、1和2，且m+n≤3；当下标为0时，本领域的技术人员将理解，具有环顶点A的环状结构是预期的，但括号的任意一侧上的相邻环顶点通过键连接。因此，本发明包括包含以A作为顶点的环的结构：
Figure BDA0001476504340000111
在一组所选的实施例中，m和n都为0。在另一组所选的实施例中，m和n都为1。在另一组所选的实施例中，m是1且n是0。在另一组实施例中，m是1且n是2。
在其他所选的实施例中，具有顶点A的环由下式表示：
Figure BDA0001476504340000121
在实施例的一个子组中，式(I)化合物由下式表示：
Figure BDA0001476504340000122
在式(Ia)中，多个所选的实施例由通式Ia1，Ia2，Ia3，Ia4和Ia5表示。
Figure BDA0001476504340000123
在每个式Ia，Ia1，Ia2，Ia3，Ia4和Ia5中，标记的取代基(R1至R6，Rx和Rz)和下标m和n具有上述式I方面提供的含义。下标，p和q，具有下述含义：对于Ia1、Ia4和Ia5，下标q是从0到5的整数；对于Ia2和Ia4，下标p是0到4的整数；以及对于Ia3和Ia5，下标p是从0到5的整数。
在其他所选的实施例中，本文提供的化合物由下式表示：
Figure BDA0001476504340000131
其中每种化合物基本上不含其他立体异构体，以及其中标记的取代基(R1至R6，Rx和Rz)和下标m和n具有上述式I方面提供的含义。下标，p和q，具有下述含义：对于Ia1’、Ia4’和Ia5’，下标q是从0到5的整数；对于Ia2’和Ia4’，下标p是0到4的整数；以及对于Ia3’和Ia5’，下标p是从0到5的整数。
在式I的另一组实施例中，A是C(R5)(R6)，其中R5和R6结合形成环。所选的实施例提供如下：
Figure BDA0001476504340000132
在每个式Ib，Ib1和Ib2中，标记的取代基(R1至R6，Rx和Rz)和下标m和n具有上述式I方面提供的含义。下标，p和q，具有下述含义：对于Ib、Ib1和Ib2，下标q是从0到5的整数；对于Ib1，下标p是0到4的整数；以及对于Ib2，下标p是从0到5的整数。
在式I的另一组实施例中，A是NR5(参见式Ic)。所选的实施例提供如下：
Figure BDA0001476504340000141
在每个式Ic、Ic1、Ic2、Ic3、Ic4和Ic5中，标记的取代基(R1至R6，Rx和Rz)和下标m和n具有上述式I方面提供的含义。下标，p和q，具有下述含义：对于Ic1、Ic4和Ic5，下标q是从0到5的整数；对于Ic2和Ic4，下标p是0到4的整数；以及对于Ic3和Ic5，下标p是从0到5的整数。
在其他所选的实施例中，本文提供的化合物由下式表示：
Figure BDA0001476504340000151
其中每种化合物基本上不含其他立体异构体，以及其中标记的取代基(R1至R6，Rx和Rz)和下标m和n具有上述式I方面提供的含义。下标，p和q，具有下述含义：对于Ic1’、Ic4’和Ic5’，下标q是从0到5的整数；对于Ic2’和Ic4’，下标p是0到4的整数；以及对于Ic3’和Ic5’，下标p是从0到5的整数。
在其他所选的实施例中，化合物是上述每个I、Ia、Ia1、Ia1'、Ib、Ic、Ic1和Ic1'提供的化合物，其中-N(R1)(R2)选自：
Figure BDA0001476504340000161
在其他所选的实施例中，化合物是上述每个I、Ia、Ia1、Ia1'、Ib、Ic、Ic1和Ic1'提供的，其中-N(R1)(R2)选自：
Figure BDA0001476504340000171
在其他所选的实施例中，化合物是上述每个I、Ia、Ia1、Ia1'、Ib、Ic、Ic1和Ic1'提供的，其中-N(R1)(R2)选自：
Figure BDA0001476504340000181
在一些实施例中，提供了式I、Ia、Ia2、Ia3、Ia2'和Ia3'的化合物，其中A为C(R5)(R6)，或者在式中显示为C(R5)(R6)，其中R5选自：芳基、芳氧基、芳基氨基、芳基-C1-4烷基、杂芳基，杂芳氧基、杂芳基氨基和杂芳基-C1-4烷基，其中芳基或杂芳基基团或部分选自：
组1
Figure BDA0001476504340000191
在某些所选实施例中，提供了式I、Ia、Ia2、Ia3、Ia2'和Ia3'的化合物，其中A为C(R5)(R6)，或者在式中显示为C(R5)(R6)，其中R5选自：芳基、芳氧基、芳基氨基和芳基-C1-4烷基，其中，芳基或杂芳基基团或部分选自：
小组1a
Figure BDA0001476504340000201
在其他所选的实施例中，提供了式I、Ia、Ia2、Ia3、Ia2'和Ia3'的化合物，其中A为C(R5)(R6)，或者在式中显示为C(R5)(R6)，其中R5选自：杂芳基，杂芳基氧基，杂芳基氨基和杂芳基-C1-4烷基，其中杂芳基基团或部分选自：
小组1b
Figure BDA0001476504340000211
在一些实施例中，提供了式I、Ic、Ic2、Ic3、Ic2’和Ic3’的化合物，其中A为N(R5)，或者在式中显示为N(R5)，其中R5选自：芳基、芳基-C1-4烷基、杂芳基和杂芳基-C1-4烷基，其中芳基或杂芳基基团或部分选自上组1。在某些所选实施例中，提供了式I、Ic、Ic2、Ic3、Ic2’和Ic3’的化合物，其中A为N(R5)，或者在式中显示为N(R5)，其中R5选自：芳基和芳基-C1-4烷基，其中芳基基团或部分选自上述小组1a。在其他所选实施例中，提供了式I、Ic、Ic2、Ic3、Ic2’和Ic3’的化合物，其中A为N(R5)，或者在式中显示为N(R5)，其中R5选自：杂芳基和杂芳基-C1-4烷基，其中芳基基团或部分选自上述小组1b。
化合物的制备
本领域技术人员将认识到，有多种方法可用于合成如权利要求所述的分子。一般来说，合成如权利要求中所述的化合物的有用方法如方案1所述：
方案1
Figure BDA0001476504340000221
i:DIEA,NaBH(OAc)3,DCE
ii.Pd/C,H2,MeOH
iii.HATU,DIEA,DMF
iv：多聚甲醛，TsOH，甲苯，回流
上述方法的变化已用于制备本发明化合物，其中一些在实施例中描述。
具有式I的特别关注的特定化合物家族由化合物，其药学上可接受的盐、水合物、立体异构体和旋转异构体组成，如图1所示。
IV.药物组合物
除了上述的化合物之外，用于调节人和动物中CCR2活性的组合物通常包含药学上的载体或稀释剂。
如本文所用，术语“组合物”是指包含特定量的特定成分的产品，以及直接或间接地由特定量的特定成分的组合而产生的任何产品。“药学上可接受的”是指载体，稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成分兼容并且对其接受者无害。
用于施用本发明化合物的药物组合物可以方便地以单位剂量形式存在，并且可以通过制药和药物输送领域中众所周知的任何方法来制备。所有方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，药物组合物通过将活性成分与一种液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合来制备，然后，如果需要，将产品成型为所需的剂型。药物组合物中包含的活性目标化合物的量足以对疾病的过程或情况产生期望的效果。
含有活性成分的药物组合物可以是适于口服使用的形式、例如、如美国专利申请2002-0012680中所述的作为片剂、锭剂、含片、水性或油性混悬剂、分散的粉剂或颗粒剂、乳剂和自乳化剂、硬胶囊或软胶囊、糖浆、酏剂、溶液、口腔贴剂、口腔凝胶、口香糖、咀嚼片、泡腾粉和泡腾片。旨在用于口服的组合物可根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法来制备以及这种组合物可包含一种或多种选自下组的试剂：甜味剂，调味剂，着色剂，抗氧化剂和防腐剂，以提供药学上精致和可口的制剂。片剂包含与适于制备片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂相混合的活性成分。这些赋形剂可以是，例如惰性稀释剂，如纤维素、二氧化硅、氧化铝、碳酸钙、碳酸钠、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如，玉米淀粉，或者海藻酸；结合剂，例如PVP、纤维素、PEG、淀粉、明胶或阿拉伯胶，和润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石粉。片剂可以是未包衣的或是以肠溶或其他方式包衣的，，通过已知技术延缓在胃肠道中的崩解和吸收从而提供较长时间的持续作用。例如，可以采用延时材料如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。它们也可以通过美国专利号4,256,108；4,166,452；和4,265,874所述技术进行包衣以形成用于控释的渗透治疗片剂。
用于口服制剂也可以是硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙，磷酸钙或高岭土混合，或者是软明胶胶囊，其中活性成分与水或油性介质，例如花生油，液体石蜡或橄榄油混合。另外，乳剂可以用非水混溶性成分如油来制备以及用表面活性剂如单甘油二酯，PEG酯等来稳定。
水悬浮液含有与适于制备水悬浮液的赋形剂混合的活性物质。该赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂,例如卵磷脂，或者烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳乙烯氧基鲸蜡醇，或者环氧乙烷与脂肪酸衍生的偏酯和己糖醇的缩合产物如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或者环氧乙烷与脂肪酸衍生的偏酯与己糖醇酐的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水悬浮液还可含有一种或多种防腐剂，例如乙基、或正丙基、对羟基苯甲酸酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，和一种或多种甜味剂，如蔗糖或糖精。
油状悬浮液可以通过使活性成分悬浮于植物油(例如花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油状悬浮液可以含有增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或十六烷醇。可以添加上述的甜味剂和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸来保存。
适于通过加水制备水悬浮液的分散粉剂和颗粒，提供了与分散剂或润湿剂，悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂的例子如上所述。另外的可以有例如甜味剂，调味剂和着色剂的赋形剂。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍胶，天然存在的磷脂例如大豆、卵磷脂、以及脂肪酸衍生的酯或偏酯和己糖醇酐，例如山梨醇单油酸酯，所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。乳液也可以含有甜味剂和调味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)配制。该制剂还可以含有缓和剂，防腐剂，调味剂和/或着色剂。口服溶液可以通过与例如，环糊精、PEG和表面活性剂组合制备。
药物组合物可以是无菌注射水性或油状悬浮液的形式。该悬浮液可以根据已知的技术用那些合适的分散剂或润湿剂和上述悬浮剂来配制，无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的载体和溶剂中，可以采用水，林格溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌、固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的固定油包括合成的甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于制备注射剂。
本发明的化合物也可以以栓剂的形式施用，为直肠给药。这些组合物可以通过将药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，其在常温下为固体但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这种材料包括可可脂和聚乙二醇。此外，所述化合物可以通过溶液或软膏经眼给药。更进一步，目标化合物的透皮给药可以通过离子电渗贴片等方式实现。对于局部使用，可以使用含有本发明的化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液或悬浮液等。如本文所用，局部应用还指包括漱口水和漱口剂的使用。
本发明的化合物还可以偶联到为合适聚合物载体的载体上，例如靶向的药物载体。所述聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟基乙基-天冬酰胺-苯酚、或用棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可以偶联到载体上，所述载体是用于实现药物的控制释放的一类生物可降解聚合物，例如聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚ε己内酯，聚羟基丁酸，聚原酸酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。聚合物和半透性聚合物基质可以制成成形制品，例如瓣膜，支架，管道，假体等。在本发明的一个实施例中，本发明化合物偶联到形成为支架或覆膜支架装置的聚合物或半透性聚合物基质上。
在一些实施例中，提供了包含本发明的化合物和进一步包含一种或多种另外的治疗化合物的医药组合物。
在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物选自如下的一种或多种：Btk酪氨酸激酶抑制剂、Erbb2酪氨酸激酶受体抑制剂；Erbb4酪氨酸激酶受体抑制剂、mTOR抑制剂、胸苷酸合成酶抑制剂，EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂、表皮生长因子拮抗剂、Fyn酪氨酸激酶抑制剂，Kit酪氨酸激酶抑制剂、Lyn酪氨酸激酶抑制剂、NK细胞受体调节剂，PDGF受体拮抗剂，PARP抑制剂、聚ADP核糖聚合酶抑制剂、聚ADP核糖聚合酶1抑制剂、聚ADP核糖聚合酶2抑制剂、聚ADP核糖聚合酶3抑制剂、半乳糖基转移酶调节剂、二氢嘧啶脱氢酶抑制剂、乳清酸磷酸核糖基转移酶抑制剂、端粒酶调节剂、粘蛋白1抑制剂、粘蛋白抑制剂、促胰液素激动剂、TNF相关凋亡诱导配体调节剂、IL17基因刺激剂、白细胞介素17E配体、神经激肽受体激动剂、细胞周期蛋白G1抑制剂、检查点抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA4抑制剂、拓扑异构酶I抑制剂、Alk-5蛋白激酶抑制剂，结缔组织生长因子配体抑制剂、Notch-2受体拮抗剂、Notch-3受体拮抗剂、透明质酸酶刺激剂、MEK-1蛋白激酶抑制剂、MEK-2蛋白激酶抑制剂、GM-CSF受体调节剂；TNFα配体调节剂、间皮素调节剂、天冬酰胺酶刺激剂、胱天蛋白酶-3刺激剂；胱天蛋白酶-9刺激剂、PKN3基因抑制剂、刺猬蛋白抑制剂、平滑受体拮抗剂、AKT1基因抑制剂、DHFR抑制剂、胸苷激酶刺激剂、CD29调节剂、纤连蛋白调节剂、白细胞介素-2配体、丝氨酸蛋白酶抑制剂，D40LG基因刺激剂；TNFSF9基因刺激剂、2-酮戊二酸脱氢酶抑制剂、TGF-βII型受体拮抗剂、Erbb3酪氨酸激酶受体抑制剂、胆囊收缩素CCK2受体拮抗剂、维尔姆斯肿瘤蛋白质调节剂、Ras GTP酶调节剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、细胞周期蛋白-依赖性激酶4抑制剂A调节剂、雌激素受体β调节剂、4-1BB抑制剂、4-1BBL抑制剂、PD-L2抑制剂、B7-H3抑制剂、B7-H4抑制剂、BTLA抑制剂、HVEM抑制剂、TIM3抑制剂、GAL9抑制剂、LAG3抑制剂、VISTA抑制剂、KIR抑制剂、2B4抑制剂、CD160抑制剂、CD66e调节剂、血管紧张素II受体拮抗剂、结缔组织生长因子配体抑制剂、Jak1酪氨酸激酶抑制剂、Jak2酪氨酸激酶抑制剂、双重Jak1/Jak2酪氨酸激酶抑制剂、血管紧张素转化酶2刺激剂、生长激素受体拮抗剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2抑制剂、内皮素ET-A拮抗剂、盐皮质激素受体拮抗剂、内皮素ET-B拮抗剂、高级糖基化产物受体拮抗剂、促肾上腺皮质激素配体、法尼酯(Farnesoid)X受体激动剂、G蛋白偶联胆汁酸受体1激动剂、醛糖还原酶抑制剂、黄嘌呤氧化酶抑制剂、PPARγ激动剂、前列腺素受体拮抗剂、FGF受体拮抗剂、PDGF受体拮抗剂、TGFβ拮抗剂、p38MAP激酶抑制剂、VEGF-1受体拮抗剂、蛋白酪氨酸磷酸酶β抑制剂、Tek酪氨酸激酶受体刺激剂、PDE5抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂、ACE抑制剂、I-κB激酶抑制剂、NFE2L2基因刺激剂物、核因子κB抑制剂、STAT3基因抑制剂、NADPH氧化酶1抑制剂、NADPH氧化酶4抑制剂、PDE4抑制剂、肾素抑制剂、MEKK-5蛋白激酶抑制剂、膜铜胺氧化酶抑制剂、整联蛋白α-V/β-3拮抗剂、胰岛素敏化剂、激肽释放酶1调节剂、环加氧酶1抑制剂和苯丙氨酸羟化酶刺激剂。
在一些实施例中，所述一种或多种另外的治疗化合物选自如下的一种或多种：巴维昔单抗、IMM-101、CAP1-6D、雷克辛-G(Rexin-G)、染料木素、CVac、MM-D37K、PCI-27483、TG-01、莫替司他(mocetinostat)、LOAd-703、CPI-613、乌帕姆诺斯特(upamostat)、CRS-207、诺瓦卡普(NovaCaps)、曲美替尼(trametinib)、Atu-027、索尼得吉(sonidegib)、GRASPA、特拉贝德森(trabedersen)、纳特莱泽派(nastorazepide)、树突状细胞免疫疗法(Vaccell)、奥戈伏单抗、伊斯蒂单抗(istiratumab)、雷法替尼(refametinib)、瑞格拉非尼、拉帕替尼、司美替尼、瑞卡帕布、佩拉雷奥雷派(pelareorep)、他雷单抗(tarextumab)、聚乙二醇化的透明质酸酶、瓦利替尼(varlitinib)、阿格马基因贝萨诺克(aglatimagenebesadenovec)、GBS-01、GI-4000、WF-10、高路瑟尼(galunisertib)、阿法替尼、RX-0201、FG-3019、帕妥珠单抗、DCVax-Direct、塞利那瑟(selinexor)、葡磷酰胺、维如利金、钇(90Y)西瓦图单抗特踹齐坦(clivatuzumab tetraxetan)、溴夫定、尼妥珠单抗、阿尔甘盼图赛-L(algenpantucel-L)、替加氟+吉莫斯特+氧嗪酸钾+亚叶酸钙、奥拉帕尼、依鲁替尼、吡柔比星、Rh-Apo2L、特脱莫肽(tertomotide)、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、马西替尼(masitinib)、雷克辛-G、丝裂霉素(mitomycin)、厄洛替尼、阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康(topotecan)、紫杉酚、干扰素、铂衍生物、紫杉烷、紫杉醇、长春花生物碱、长春碱、蒽环类、多柔比星、表鬼臼毒素类、依托泊苷、顺铂、雷帕霉素、氨甲喋呤、放线菌素D、多拉司他汀10(dolastati10)、秋水仙碱、吐根碱、三甲曲沙、氯苯氨啶、环孢素、柔红霉素、替尼泊苷、两性霉素、烷化剂、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶、喜树碱、顺铂、甲硝唑、格列卫、阿瓦斯汀、帕尼单抗、阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷、AZD9291、卡介苗活菌、贝伐单抗、氟尿嘧啶、蓓萨罗丁、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡普睾酮、卡培他滨、喜树碱、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、更生霉素、阿法达贝泊汀柔红霉素、地尼白(denileukin)、右雷佐生、多西他赛、多柔比星(中性)、盐酸阿霉素、屈他雄酮丙酸酯、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷磷酸盐、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷氟达拉滨、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥单抗、醋酸戈舍瑞林、组氨瑞林醋酸盐、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来那度胺、来曲唑、亚叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、6-MP、美司钠、氨甲喋呤、甲氧沙林、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、奈拉滨、诺非单抗(nofetumomab)、奥普瑞白介素、奥沙利铂、白蛋白结合型紫杉醇、帕利夫明、帕米膦酸二钠、培加酶、天门冬酰胺酶、培非司亭、培美曲塞二钠、喷司他丁、哌泊溴烷、普利霉素、卟菲尔钠、甲基苄肼、阿的平、拉布立酶、利妥昔单抗、洛昔替尼(rociletinib)、沙格司亭、索拉非尼、链脲霉素、马来酸舒尼替尼、滑石、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、VM-26、睾内脂、硫鸟嘌呤、6-TG、塞替派、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维A酸、ATRA、尿嘧啶芥末、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、唑来膦酸、唑来膦酸、派姆单抗、纳武单抗、IBI-308、mDX-400、BGB-108、MEDI-0680、SHR-1210、PF-06801591、PDR-001、GB-226、STI-1110、德瓦鲁单抗、阿替珠单抗、阿维单抗、BMS-936559、ALN-PDL、TSR-042、KD-033、CA-170、STI-1014、FOLFIRINOX、KY-1003、奥美沙坦酯、坎地沙坦、PBI-4050、巴瑞克替尼、GSK-2586881、氯沙坦、达格列净丙二醇、培维索孟、GR-MD-02、卡格列净、厄贝沙坦、FG-3019、阿曲生坦、菲涅任侬(finerenone)、斯帕森坦(sparsentan)、波生坦、去纤维蛋白多核苷酸、非马沙坦、阿泽里拉贡(azeliragon)、吡哆胺、促肾上腺皮质激素、INT-767、依帕司他、托匹司他、SER-150-DN、吡非尼酮、VEGFR-1mAb、AKB-9778、PF-489791、SHP-627、CS-3150、咪达普利、培哚普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、佐芬普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利、群多普利、西拉普利、福辛普利、雷米普利、甲基巴多索隆、厄贝沙坦+丙亢、GKT-831、MT-3995、TAK-648、TAK-272、GS-4997、DW-1029M、ASP-8232、VPI-2690B、DM-199、大黄酸、PHN-033、GLY-230、和沙丙蝶呤、舒洛地昔。
在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或血管紧张素受体II阻断剂(ARB)。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是血管紧张素受体II阻断剂(ARB)。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是奥美沙坦酯、坎地沙坦、氯沙坦、厄贝沙坦、斯帕森坦(sparsentan)、非马沙坦、GSK-2586881、咪达普利、培哚普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、佐芬普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利、群多普利、西拉普利、福辛普利或雷米普利。
在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是FOLFIRINOX。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是吉西他滨和紫杉醇。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇。
调节CCR2活性的化合物
本发明提供了调节至少一种CCR2活性的化合物。趋化因子受体是与胞外配体例如趋化因子相互作用并介导细胞对配体的反应如趋化性，增加的细胞内钙离子浓度等的内在膜蛋白。因此，调节趋化因子受体功能，例如干扰趋化因子受体配体相互作用，将调节趋化因子受体介导反应，并治疗或预防趋化因子受体介导的病症或疾病。趋化因子受体功能的调节包括功能的诱导和抑制。实现的调节类型取决于化合物的特征，即拮抗剂或全部，部分或反向激动剂。
不受任何特定理论的束缚，可以认为，本文提供的化合物干涉趋化因子受体与一种或多种同源配体之间的相互作用。特别是，可以认为所述化合物干扰CCR2与CCR2配体如MCP-1之间的相互作用。本发明所考虑的化合物包括，但不限于，本文所述的示例性化合物及其盐。
例如，本发明的化合物作为有效的CCR2拮抗剂，且这种拮抗活性进一步在用于炎症(一种CCR2的标志性疾病状态)的动物试验中得到证实。因此，本文提供的化合物可用于药物组合物，治疗CCR2介导的疾病的方法以及用于鉴定竞争性CCR2拮抗剂的测定中的对照。
治疗方法
CCR2受体功能的调节
本发明的化合物可以用作体内和体外的各种情况下的CCR2受体的激动剂、(优选地)拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂。在一个实施例中，本发明的化合物是CCR2拮抗剂，其可用于在体外或体内抑制CCR2受体配体与CCR2受体的结合。一般来说，所述方法包括使CCR2受体与有效量的本文提供的一种或多种CCR2受体调节剂接触，在CCR2受体配体存在于水溶液中和其他适于配体与CCR2受体结合的条件下。CCR2受体可以存在于悬浮液(如，分离的膜或细胞制剂中)中，于培养的或分离的细胞中，或于组织或器官中。
优选地，与受体接触的CCR2受体调节剂的量应经测定足以在体外抑制配体与CCR2受体的结合，例如，使用本文所述的放射性配体结合测定，钙动员测定或趋化性测定。
在本发明的一个实施例中，本发明的CCR2调节剂可以用于调节，优选地抑制CCR2受体的信号转导活性，例如，通过使本发明的一种或多种化合物与CCR2受体(体外或体内)在适合调节剂与受体结合的条件下接触。受体可以存在于溶液或悬浮液，于培养或分离的细胞制剂中或在患者体内。信号转导活性的任何调节可以通过检测对钙离子钙动员的影响或者通过检测对CCR2受体介导的细胞趋化性的影响进行评估。一般来说，CCR2调节剂的有效量是一个足以在钙动员测定中在体外调节CCR2受体信号转导活性或在迁移测定中调节CCR2受体介导的细胞趋化性的量。
当本发明的化合物用于抑制CCR2受体介导的细胞趋化性，优选地白细胞趋化性时，在体外趋化性测定中，所述方法包括将白血球(尤其是灵长类白血球，特别是人类白血球)与一种或多种本发明化合物接触。优选地，浓度足以在体外趋化性测定中抑制白血球的趋化性，从而，如上所述，在对照测定中观察到的趋化性水平明显高于添加了本发明化合物的测定中观察到的趋化性水平。
在另一个实施例中，本发明的化合物可进一步用于治疗患有对CCR2受体调节有响应症状的病人。如本文所用，术语“治疗”或“疗法”包括疾病改善治疗和对症治疗，其中任一个可以是预防性的(即在症状发作之前，为了预防，延缓或减轻症状的严重程度)或治疗性的(即在症状发作后，为了减轻症状的严重性和/或持续时间)。如本文所用，被认为是“对CCR2受体调节响应”的条件，CCR2受体活性的调节是否导致CCR2受体的不适当的活性的减少。如本文所用，术语“患者”包括灵长类动物(特别是人)，家养伴侣动物(如狗，猫，马等)和家畜(如牛，猪，绵羊等)以本文所述剂量。
在一些实施例中，本发明的化合物可以进一步用于治疗患有炎性疾病或病症，心血管或脑血管病症，自身免疫病症，癌症或实体瘤的患者。在一些实施例中，本发明的化合物可以用于治疗患有选自下组疾病或病症的患者：糖尿病肾病、肾病、中性粒细胞减少、中性粒细胞增多、蛋白尿、糖尿病性视网膜病变、局灶节段性肾小球硬化、肾小球硬化、过敏、纤维化、NASH(非酒精性脂肪性肝炎)、溶血性尿毒症综合征、非典型溶血性尿毒综合征(aHUS)、C3-肾小球病、C3-肾小球肾炎、致密沉积病、膜增生性肾小球肾炎、脓血症、感染性休克、阿尔茨海默氏病、多发性硬化症、中风、炎症性肠病、慢性阻塞性肺病、与烧伤相关的炎症、肺损伤、骨性关节炎、特应性皮炎、慢性荨麻疹、缺血再灌注损伤、急性呼吸窘迫综合征、全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征、组织移植排斥、移植物抗宿主病、移植器官超急性排斥反应、心肌梗塞、冠状动脉血栓形成、血管闭塞、手术后血管再闭塞、动脉粥样硬化、创伤性中枢神经系统损伤、缺血性心脏病、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、格林-巴利综合征、胰腺炎、狼疮性肾炎、狼疮性肾小球肾炎、银屑病、克罗恩病、血管炎、ANCA血管炎、过敏性肠综合征、皮肌炎、多发性硬化症、支气管哮喘、天疱疮、类天疱疮、硬皮病、重症肌无力、自身免疫性溶血和血小板减少症状态、古德帕斯丘综合征、免疫血管炎、组织移植排斥、移植器官超急性排斥反应、黑色素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾细胞癌、结直肠癌、肝细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、食道癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、急性骨髓性白血病、白血病、与选自下组疾病相关的病理性后遗症：胰岛素依赖性糖尿病、糖尿病、狼疮性肾病、海曼(Heyman)肾炎、膜性肾炎、肾小球肾炎、接触敏感性反应、以及血液与人造表面接触引起的炎症。
在一些实施例中，本发明的化合物可以用于治疗患有疾病或病症的患有以及与一种或多种另外的治疗化合物一起施用。在一些实施例中，所述一种或多种另外的治疗化合物选自如下的一种或多种：Btk酪氨酸激酶抑制剂、Erbb2酪氨酸激酶受体抑制剂；Erbb4酪氨酸激酶受体抑制剂、mTOR抑制剂、胸苷酸合成酶抑制剂，EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂、表皮生长因子拮抗剂、Fyn酪氨酸激酶抑制剂，Kit酪氨酸激酶抑制剂、Lyn酪氨酸激酶抑制剂、NK细胞受体调节剂，PDGF受体拮抗剂，PARP抑制剂、聚ADP核糖聚合酶抑制剂、聚ADP核糖聚合酶1抑制剂、聚ADP核糖聚合酶2抑制剂、聚ADP核糖聚合酶3抑制剂、半乳糖基转移酶调节剂、二氢嘧啶脱氢酶抑制剂、乳清酸磷酸核糖基转移酶抑制剂、端粒酶调节剂、粘蛋白1抑制剂、粘蛋白抑制剂、促胰液素激动剂、TNF相关凋亡诱导配体调节剂、IL17基因刺激剂、白细胞介素17E配体、神经激肽受体激动剂、细胞周期蛋白G1抑制剂、检查点抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA4抑制剂、拓扑异构酶I抑制剂、Alk-5蛋白激酶抑制剂，结缔组织生长因子配体抑制剂、Notch-2受体拮抗剂、Notch-3受体拮抗剂、透明质酸酶刺激剂、MEK-1蛋白激酶抑制剂、MEK-2蛋白激酶抑制剂、GM-CSF受体调节剂；TNFα配体调节剂、间皮素调节剂、天冬酰胺酶刺激剂、胱天蛋白酶-3刺激剂；胱天蛋白酶-9刺激剂、PKN3基因抑制剂、刺猬蛋白抑制剂、平滑受体拮抗剂、AKT1基因抑制剂、DHFR抑制剂、胸苷激酶刺激剂、CD29调节剂、纤连蛋白调节剂、白细胞介素-2配体、丝氨酸蛋白酶抑制剂，D40LG基因刺激器；TNFSF9基因刺激物、2-酮戊二酸脱氢酶抑制剂、TGF-βII型受体拮抗剂、Erbb3酪氨酸激酶受体抑制剂、胆囊收缩素CCK2受体拮抗剂、维尔姆斯肿瘤蛋白质调节剂、Ras GTP酶调节剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、细胞周期蛋白-依赖性激酶4抑制剂A调节剂、雌激素受体β调节剂、4-1BB抑制剂、4-1BBL抑制剂、PD-L2抑制剂、B7-H3抑制剂、B7-H4抑制剂、BTLA抑制剂、HVEM抑制剂、TIM3抑制剂、GAL9抑制剂、LAG3抑制剂、VISTA抑制剂、KIR抑制剂、2B4抑制剂、CD160抑制剂、CD66e调节剂、血管紧张素II受体拮抗剂、结缔组织生长因子配体抑制剂、Jak1酪氨酸激酶抑制剂、Jak2酪氨酸激酶抑制剂、双重Jak1/Jak2酪氨酸激酶抑制剂、血管紧张素转化酶2刺激剂、生长激素受体拮抗剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2抑制剂或内皮素ET-A拮抗剂、盐皮质激素受体拮抗剂、内皮素ET-B拮抗剂、高级糖基化产物受体拮抗剂、促肾上腺皮质激素配体、法尼酯(Farnesoid)X受体激动剂、G蛋白偶联胆汁酸受体1激动剂、醛糖还原酶抑制剂、黄嘌呤氧化酶抑制剂、PPARγ激动剂、前列腺素受体拮抗剂、FGF受体拮抗剂、PDGF受体拮抗剂、TGFβ拮抗剂、p38MAP激酶抑制剂、VEGF-1受体拮抗剂、蛋白酪氨酸磷酸酶β抑制剂、Tek酪氨酸激酶受体刺激剂、PDE5抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂、ACE抑制剂、I-κB激酶抑制剂、NFE2L2基因刺激物、核因子κB抑制剂、STAT3基因抑制剂、NADPH氧化酶1抑制剂、NADPH氧化酶4抑制剂、PDE4抑制剂、肾素抑制剂、MEKK-5蛋白激酶抑制剂、铜胺胺氧化酶抑制剂、整联蛋白α-V/β-3拮抗剂、胰岛素敏化剂、激肽释放酶1调节剂、环加氧酶1抑制剂和苯丙氨酸羟化酶刺激剂。
在一些实施例中，所述一种或多种另外的治疗性化合物选自一种或多种：巴维昔单抗、IMM-101、CAP1-6D、雷克辛-G、染料木素、CVac、MM-D37K、PCI-27483、TG-01、莫替司他(mocetinostat)、LOAd-703、CPI-613、乌帕姆诺斯特(upamostat)、CRS-207、诺瓦卡普(NovaCaps)、曲美替尼(trametinib)、Atu-027、索尼吉步(sonidegib)、GRASPA、特拉贝德森(trabedersen)、纳特莱泽派(nastorazepide)、树突状细胞免疫疗法(Vaccell)、奥戈伏单抗、伊斯蒂单抗(istiratumab)、赖方替尼(refametinib)、瑞格拉非尼、拉帕替尼、司美替尼、瑞卡帕布、佩拉雷奥雷派(pelareorep)、塔赖单抗(tarextumab)、聚乙二醇化的透明质酸酶、瓦利替尼(varlitinib)、阿格马基因贝萨诺克(aglatimagene besadenovec)、GBS-01、GI-4000、WF-10、高路瑟尼(galunisertib)、阿法替尼、RX-0201、FG-3019、帕妥珠单抗、
Figure BDA0001476504340000301
-直接(DCVax-Direct)、塞利那瑟(selinexor)、葡磷酰胺、维如利金、钇(90Y)西瓦图单抗特踹齐坦(clivatuzumab tetraxetan)、溴夫定、尼妥珠单抗、阿尔甘盼图赛-L(algenpantucel-L)、替加氟+吉莫斯特+氧嗪酸钾+亚叶酸钙、奥拉帕尼、依鲁替尼、吡柔比星、Rh-Apo2L、特脱莫肽(tertomotide)、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、马西替尼(masitinib)、雷克辛-G(Rexin-G)、丝裂霉素(mitomycin)、厄洛替尼(erlotinib)、阿霉素(adriamycin)、地塞米松(dexamethasone)、长春新碱(vincristine)、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康(topotecan)、紫杉酚、干扰素、铂衍生物、紫杉烷、紫杉醇、长春花生物碱、长春碱、蒽环类、多柔比星、表鬼臼毒素类、依托泊苷、顺铂、雷帕霉素、氨甲喋呤、放线菌素D、多拉司他汀10(dolastati10)、秋水仙碱、吐根碱、三甲曲沙、氯苯氨啶、环孢素、柔红霉素、替尼泊苷、两性霉素、烷化剂、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶、喜树碱、顺铂、甲硝唑、格列卫、阿瓦斯汀、帕尼单抗、阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷、AZD9291、卡介苗活菌、贝伐单抗、氟尿嘧啶、蓓萨罗丁、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡普睾酮、卡培他滨、喜树碱、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、更生霉素、阿法达贝泊汀柔红霉素、地尼白(denileukin)、右雷佐生、多西他赛、多柔比星(中性)、盐酸阿霉素、屈他雄酮丙酸酯、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷磷酸盐、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷氟达拉滨、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥单抗、醋酸戈舍瑞林、组氨瑞林醋酸盐、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来那度胺、来曲唑、亚叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、6-MP、美司钠、氨甲喋呤、甲氧沙林、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、奈拉滨、诺非单抗(nofetumomab)、奥普瑞白介素、奥沙利铂、白蛋白结合型紫杉醇、帕利夫明、帕米膦酸二钠、培加酶、天门冬酰胺酶、培非司亭、培美曲塞二钠、喷司他丁、哌泊溴烷、普利霉素、卟菲尔钠、甲基苄肼、阿的平、拉布立酶、利妥昔单抗、洛昔替尼(rociletinib)、沙格司亭、索拉非尼、链脲霉素、马来酸舒尼替尼、滑石、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、VM-26、睾内脂、硫鸟嘌呤、6-TG、塞替派、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维A酸、ATRA、尿嘧啶芥末、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、唑来膦酸、唑来膦酸、派姆单抗、纳武单抗、IBI-308、mDX-400、BGB-108、MEDI-0680、SHR-1210、PF-06801591、PDR-001、GB-226、STI-1110、德瓦鲁单抗、阿替珠单抗、阿维单抗、BMS-936559、ALN-PDL、TSR-042、KD-033、CA-170、STI-1014、FOLFIRINOX、KY-1003、奥美沙坦酯、坎地沙坦、PBI-4050、巴瑞克替尼、GSK-2586881、氯沙坦、达格列净丙二醇、培维索孟、GR-MD-02、卡格列净、厄贝沙坦、FG-3019、阿曲生坦、菲涅任侬(finerenone)、斯帕森坦(sparsentan)、波生坦、去纤维蛋白多核苷酸、非马沙坦、阿泽里拉贡(azeliragon)、吡哆胺、促肾上腺皮质激素、INT-767、依帕司他、托匹司他、SER-150-DN、吡非尼酮、VEGFR-1mAb、AKB-9778、PF-489791、SHP-627、CS-3150、咪达普利、培哚普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、佐芬普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利、群多普利、西拉普利、福辛普利、雷米普利、甲基巴多索隆、厄贝沙坦+丙亢、GKT-831、MT-3995、TAK-648、TAK-272、GS-4997、DW-1029M、ASP-8232、VPI-2690B、DM-199、大黄酸、PHN-033、GLY-230、和沙丙蝶呤、舒洛地昔。
在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或血管紧张素受体II阻断剂(ARB)。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是血管紧张素受体II阻断剂(ARB)。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是奥美沙坦酯、坎地沙坦、氯沙坦、厄贝沙坦、斯帕森坦(sparsentan)、非马沙坦、GSK-2586881、咪达普利、培哚普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、佐芬普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利、群多普利、西拉普利、福辛普利或雷米普利。
在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是FOLFIRINOX。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是吉西他滨和紫杉醇。在一些实施例中，一种或多种另外的治疗化合物是吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇。
可以通过CCR2调节治疗的情况：
自身免疫失调-例如,类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、格林-巴利综合征、胰腺炎、狼疮性肾炎、狼疮性肾小球肾炎、银屑病、克罗恩病、血管炎、过敏性肠综合征、皮肌炎、多发性硬化症、支气管哮喘、天疱疮、类天疱疮、硬皮病、重症肌无力、自身免疫性溶血和血小板减少症状态、古德帕斯丘综合征(和相关的肾小球肾炎和肺出血)、免疫血管炎、组织移植排斥、移植器官超急性排斥反应等等。
炎性疾病和相关病症-例如,中性粒细胞减少、脓血症、感染性休克、阿尔茨海默氏病、多发性硬化症、中风、炎症性肠病(IBD)、与严重烧伤相关的炎症、肺损伤、和缺血再灌注损伤、骨性关节炎、以及急性(成人)呼吸窘迫综合征(ARDS)、慢性阻塞性肺病(COPD)、全身炎症反应综合征(SIRS)、特应性皮炎、银屑病、慢性荨麻疹和多器官功能障碍综合征(MODS)。还包括与胰岛素依赖性糖尿病(包括糖尿病性视网膜病)相关的病理性后遗症，狼疮性肾病、海曼(Heyman)肾炎、膜性肾炎和其他形式的肾小球肾炎、接触敏感性反应,以及导致的补体激活的血液与人造表面接触所引起的炎症,例如,在体外血液循环期间(例如，在血液透析期间或通过心肺机,例如,与血管手术如冠状动脉旁路移植或心脏瓣膜置换相关)时发生,或与其他人造器皿或容器表面(例如，心室辅助装置、人造心脏机器、输液管、血袋、血浆置换、采血小板,等等)。还包括与缺血/再灌注损伤相关的疾病，例如由移植物(包括实体器官移植物)和诸如缺血性再灌注损伤/缺血性结肠炎和心脏缺血等综合征引起的疾病。本发明化合物也可用于治疗年龄相关性黄斑变性(Hageman等人,P.N.A.S.102:7227-7232,2005)。
心血管和脑血管疾病-例如,心肌梗塞，冠状动脉血栓形成，血管闭塞，手术后血管再闭塞，动脉粥样硬化，创伤性中枢神经系统损伤和缺血性心脏病。在一个实施例中，有效量的本发明化合物可以给予有心肌梗塞或血栓形成风险的患者(即，具有一种或多种已识别的心肌梗塞或血栓形成的危险因素，例如,但不限于肥胖症、吸烟、高血压、高胆固醇血症、有既往或遗传史的心肌梗塞或血栓形成的患者)以减少心肌梗塞或血栓形成的风险。
血管炎疾病-以血管炎症为特征的血管炎疾病。白细胞的浸润导致血管壁的破坏，补体途径被认为在启动白细胞迁移以及在炎症部位表现出的造成的损伤方面起主要作用(Vasculitis，第二版，Ball和Bridges编辑，牛津大学出版社，47-53页，2008)。本发明提供的化合物可以用于治疗白细胞性血管炎、韦格纳肉芽肿病、显微镜下多血管炎、变应性肉芽肿性血管炎、过敏性紫癜、多节炎结节、快速进展性肾小球肾炎(RPGN)、冷球蛋白血症、巨细胞动脉炎(GCA)、白塞氏病和Takayasu动脉炎(TAK)。
癌症--CCR2及其配体CCL2在调节肿瘤微环境和调节有益和有害免疫细胞群体对肿瘤的流入方面也起主要作用。正如最近的临床和临床前文献已经证明了CCR2在各种实体瘤中的作用，包括黑素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、食道癌、卵巢癌、前列腺癌和胃癌。
HIV毒感染，AIDS和病毒感染--本文提供的CCR2受体调节剂可用于抑制HIV感染，延缓AIDS进展或降低症状严重程度或HIV感染和AIDS，以及用于治疗丙型肝炎
神经退行性疾病及相关疾病--在进一步的方面，本文提供的CCR2拮抗剂可用于治疗阿尔茨海默病，多发性硬化以及与体外循环手术和相关程序相关的认知功能下降。
在本发明的一个实施例中，本发明的化合物可以用于治疗选自下组的疾病：脓毒症(和相关病症)，COPD，类风湿性关节炎，狼疮肾炎和多发性硬化症。
本文提供的治疗方法通常包括向患者施用有效量的一种或多种本文提供的化合物。合适的患者包括患有或易患(即预防性治疗)本文确定的病症或疾病的那些患者。如本文所述待治疗的典型患者包括哺乳动物，特别是灵长类，尤其是人。其他合适的患者包括家养伴侣动物，例如，狗、猫、马等，或家畜，如牛、猪、绵羊等。
一般来说，本文提供的治疗方法包括向患者施用有效量的本文提供的一种或多种化合物。优选实施例中，本发明化合物优选地口服或局部向患者(例如人)给予。有效量可以是足以调节CCR2受体活性的量和/或足以减少或减轻患者所呈现症状的量。优选地，给予的量足以产生足够高的化合物(或其活性代谢物，如果化合物是前药)的血浆浓度以在体外可检测地抑制白细胞趋化性。治疗方案可以根据使用的化合物和待治疗的特定病症而变化；为了治疗大多数病症，优选日给药频率4次或更少。一般而言，每日2次的剂量方案是更优选的，每天一次给药是特别优选的。然而，应该理解，对于任何特定患者的特定剂量水平和治疗方案将取决于各种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合(即给予患者的其它药物)和正在进行治疗的特定疾病的严重程度，以及处方医师的判断。一般来说，使用足以提供有效治疗的最小剂量是优选的。通常可以使用适合于正在治疗或预防的病症的医学或兽医标准来监测患者的治疗有效性。
根据待治疗的疾病和患者的状况，本发明的化合物和组合物可以通过口服、肠胃外(例如，肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入、鼻腔、阴道、直肠/舌下或者局部给药途径给予，和可以单独或一起以合适的剂量单位剂型配制，所述剂型含有适合于每次给药的常规无毒的药学上可接受的载体，佐剂和赋形剂。本发明还考虑了本发明的化合物和组合物在长效制剂中给药。
大约0.1mg至大约140mg每天每千克体重的剂量水平可用于治疗或预防涉及致病性CCR2活性的病症(每人每天约0.5mg至约7g)。可以与载体材料结合以生产单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主和特定的给药模式而变化。单位剂型通常含有约1mg至约500mg之间的活性成分。对于口服、透皮、静脉或皮下给予的化合物，优选地，给予足够量的化合物以达到5ng(纳克)/mL血清-10g(微克)/mL血清的血清浓度，更优选地，应该给予足够的化合物以达到血清浓度为20ng-1μg/ml血清，最优选地，应给予足够的化合物以达到为50ng/ml-200ng/ml血清的血清浓度。对于直接注射到滑膜(用于治疗关节炎)应该给予足够的化合物以达到约1微摩尔的局部浓度。
剂量的频率也可以根据所用的化合物和治疗的特定疾病而变化。然而，对于大多数病症的治疗，优选每日4次，每日3次或更少的剂量方案，每日一次或每日2次的剂量方案是特别优选的。然而，应该理解，对于任何特定患者的特定剂量水平将取决于各种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药途径，和排泄速率、药物组合(即将给予患者的其它药物)、正在进行治疗的特定疾病的严重程度，以及其他的因素，包括处方医师的判断。
在一些实施例中，需要CCR2受体调节的病症的治疗或预防，适合的剂量水平通常为每千克患者体重每天约0.001至100mg，其可以单剂量或多剂量给予。优选地，剂量水平应为每天约0.01至约25mg/kg；更优选地，每天约0.05至约10mg/kg。合适的剂量水平可以是每天约0.01至25mg/kg，每天约0.05至10mg/kg，或每天约0.1至5mg/kg。在这个范围内剂量可以是每天0.005到0.05、0.05到0.5、0.5到5.0或5.0到50mg/kg。对于口服给予，组合物优选以片剂的形式给予，其含有1.0至1000毫克活性成分，特别地，1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分，为给待治疗患者的对症调整剂量。化合物可以以每天1至4次的方案给予，优选地每天一次或两次。
然而，应当理解，对任何特定患者的特定剂量水平和剂量频率可以变化并将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性，化合物的代谢稳定性和作用时间，年龄，体重，遗传特征，一般健康状况，性别，饮食，给药方式和时间，排泄速率，药物组合，特定病症的严重程度以及接受治疗的宿主。
联合治疗-与CCR2化合物联合使用的药物
可以与本发明的CCR2拮抗剂联用的药理学试剂包含用于治疗动脉粥样硬化、再狭窄、多发性硬化症、肺纤维化、炎症性肠病、类风湿关节炎、移植物抗宿主病、肾纤维化、银屑病、移植排斥、肥胖、糖尿病、高胆固醇血症和癌症的药理学试剂。
在癌症的治疗中，免疫调节剂，例如本发明那些可以与调节免疫应答或肿瘤免疫环境的其他化合物和试剂联用的免疫调节剂。这被称为“免疫肿瘤学”，可以单独或组合使用各种各样的试剂，包括小分子，蛋白质和肽，抗体，镜像核苷酸(speigelmers)，病毒，寡核糖核苷酸和其他遗传信息传递方法和本领域公知的其他治疗方法。如此,本发明的组合物可以用于免疫肿瘤药物的制剂。
在其他实施例中，本发明的方法涉及过敏性疾病的治疗，其中本发明的化合物或组合物单独给予或与第二治疗剂联用给予，其中所述第二治疗剂是抗组胺药。当联用时，从业者可以给予本发明的化合物或组合物与第二治疗剂的组合。而且，所述化合物或组合物和第二治疗剂可以以任何顺序依次给予。
本发明的化合物和组合物可以与具有预防和治疗感兴趣病症和疾病的相关用途的其它化合物和组合物联用，如炎症病症和疾病，包括炎症性肠病，过敏性疾病，银血病，特应性皮炎和哮喘和上述那些病理。本领域的普通技术人员可以选择联合治疗所用的适合的试剂。治疗剂的组合可协同作用以实现各种病症的治疗或预防。使用这种方法，可以用较低剂量的每种药物达到治疗效果，从而减少不良副作用的可能性。
在治疗、预防、改善、控制或减少实体瘤生长和转移中，本发明的化合物可以与下述共同使用：(1)癌症疫苗接种策略，(2)免疫检查点调节剂，例如针对免疫检查点抑制剂的拮抗性抗体(抗-PD1、抗-PD-L1、抗-CTLA4，抗-Tim3、抗-VISTA、抗-KIR)或针对免疫促进剂的激动性抗体(抗-Lag3、抗-OX40、抗-ICOS、抗4-1BB，(3)阻断或消除针对通常在转化细胞中上调的细胞表面蛋白抗体(CEACAM1、多配体聚糖(Syndecan)-2、GRP78)，(4)抗血管生成疗法(抗-VEGF，抗-VEGFR，VEGFR小分子抑制剂)，(5)抗-淋巴管生成(针对VEGF、FDF2、PDGF的阻断抗体或抑制剂以及其各自的受体)，(6)标准化疗疗法(吉西他滨，紫杉醇，FOLFORINOX)，(7)照射疗法，(8)其他趋化因子拮抗剂(CCR1，CCR4，CCR6，CXCR4，CXCR2，CXCR7小分子抑制剂，阻断性抗体或消耗性抗体)，(9)针对激活上述趋化因子受体的趋化因子的消耗性抗体，(10)靶向癌症中常见的体细胞突变的抑制剂，如专门针对以下基因的那些抑制剂(BRAF、KRAS、NRAS、EGFR、CTNNB1、NOTCH1、PIK3CA、PTEN、APC、FLT3、IDH1、IDH2、KIT、TP53、JAK2)。
在治疗、预防、改善、控制或降低炎症风险中，本发明的化合物可以与抗炎剂或镇痛剂，例如，阿片剂激动剂，脂氧合酶抑制剂，如5-脂氧合酶的抑制剂，环氧合酶抑制剂，如环氧合酶-2抑制剂，白细胞介素抑制剂，如白细胞介素-1抑制剂，NMDA拮抗剂，一氧化氮抑制剂或一氧化氮合成抑制剂，非甾体抗炎剂，或细胞因子抑制抗炎剂联用，例如与乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因、生物TNF多价螯合剂、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、酮咯酸、吗啡、萘普生、非那西丁、吡罗昔康、类固醇止痛剂、舒芬太尼、苏林、替尼达普等等的化合物联用。
相似地，本发明的化合物可以与止镇痛药；增效剂如咖啡因、H2-拮抗剂、西甲硅油、铝或镁的氢氧化物；减充血剂如伪麻黄碱；镇咳药如可待因；利尿剂；镇静或非镇静抗组胺剂；非常晚期抗原(VLA-4)拮抗剂；免疫抑制剂如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、EDG受体激动剂、或其他FK-506型免疫抑制剂；类固醇；非甾族抗哮喘药如β2-激动剂、白三烯拮抗剂、或白三烯生物合成抑制剂；IV型磷酸二酯酶(PDE-IV)的抑制剂；胆固醇降低剂，如HMG-CoA还原酶抑制剂、螯合剂、或胆固醇吸收抑制剂；和抗糖尿病剂等，如胰岛素、α-葡萄糖苷酶抑制剂或格列酮。
本发明的化合物与第二活性成分的重量比可以变化且取决于每个成分的有效剂量。一般来说，使用各自的有效剂量。因此，例如，当本发明化合物与NSAID组合时，本发明化合物与NSAID的重量比通常为从约1000:1至约1:1000，优选地，从约200:1至约1：200。本发明化合物和其它活性成分的组合通常也在上述范围内，但是在每种情况下，应使用每种活性成分的有效剂量。
鉴于以上所述，本文提供了多个所选的实施例。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病是动脉粥样硬化。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病是再狭窄。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病是多发性硬化症。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病选自下组：炎症性肠病、肾纤维化、类风湿关节炎、肥胖和非胰岛素依赖型糖尿病。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病是2型糖尿病。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病是糖尿病肾病。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病是胰腺癌。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病是癌症或免疫肿瘤相关适应症。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中CCR2介导的病症或疾病选自下组：慢性阻塞性肺病，特发性肺纤维化和特发性肺炎综合征。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中给药是口服，肠胃外，直肠，透皮，舌下，鼻腔或局部地给予。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中化合物与抗炎剂或镇痛剂联合给药。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中还给予抗炎或镇痛剂。
在一个实施例中，本发明提供了一种调节细胞中CCR2功能的方法，其中细胞中CCR2功能通过将细胞与CCR2调节量的本发明化合物接触来调节。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗CCR2介导的病症或疾病的方法，涉及向受试者给予安全有效量的本发明的化合物或组合物，其中所述疾病选自下组：肺纤维化、移植排斥、移植物抗宿主疾病和癌症。
在其他实施例中，本发明的方法涉及银屑病的治疗，本发明的化合物或组合物单独使用或与第二治疗剂(如，皮质类固醇、润滑剂、角质层分离剂、维生素D3衍生物、PUVA和蒽林)联用。
在其他实施例中，本方法涉及特应性皮炎的治疗，本发明的化合物或组合物单独使用或与第二治疗剂(如，润滑剂和皮质类固醇)联用。
在进一步实施例中，本方法涉及哮喘的治疗，本发明的化合物或组合物单独使用或与第二治疗剂(如，β2-激动剂和皮质类固醇)联用。
在本发明的另一个方面，本发明的化合物可以用于各种非药学上的体外和体内应用。例如，本发明化合物可以被标记并用作用于检测和定位CCR2受体的探针(细胞制剂或组织切片样品)。本发明的化合物还可以用作CCR2受体活性测定的阳性对照，即，作为确定候选试剂结合CCR2受体能力的标准，或作为正电子发射断层扫描(PET)成像或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)的放射性示踪剂。所述方法可以用来表征活体中的CCR2受体。例如，CCR2受体调节剂可以使用各种公知技术(例如，用如氚的放射性核素放射性标记)中的任一种进行标记，并在适合的培养时间(例如，通过第一次测定结合的时间过程来确定)下培养样品。培养后，去除未结合的化合物(如，通过洗涤)，并且用任何适合于所用标记的方法检测结合的化合物(例如，放射性标记的化合物的放射自显影或闪烁计数；可以使用光谱方法检测发光基团和荧光基团)。作为对照，含有被标记化合物和更多(例如，10倍以上)量的未标记化合物的配对样品可以以相同的方式处理。测试样品中残留的可检测标记的量大于对照样品，表明样品中存在CCR2受体。检测测定，包括在培养细胞或组织样品中CCR2受体的受体放射自显影(受体映射)可以按照Kuhar在药物学实验室指南――Current Protocols inPharmacology(1998)，约翰威利和儿子们，纽约的第8.1.1至8.1.9节中所述的进行。
本文提供的化合物也可以用于各种众所周知的细胞分离方法中。例如，调节剂可以连接到组织培养板或其他支持物的内表面，用于用作体外固定用的亲和配体并由此分离CCR2受体(例如分离受体表达细胞)的亲和配体。在一个优选的应用中，连接至荧光标记物的调节剂，如荧光素，与细胞接触，其后通过荧光激活细胞分选(FACS)进行分析(或分离)。
在图1中，提供了本文所述代表性化合物的结构和活性。本文所述的结合测定的活性提供如下：+,501nM≤IC50＜5000nM；++,101nM≤IC50＜500nM；以及+++,1nM≤IC50≤100nM。
实施例
下述实施例为了说明而非限制要求保护的发明。
以下使用的试剂和溶剂可以获自商业来源，例如奥尔德里奇化学公司(密尔沃基，威斯康星州，美国)。1H-NMR谱用Varian Mercury 400MHz NMR波谱仪记录。有效峰是相对于TMS提供且以以下规则制表：多重性(s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰)及质子数量。质谱结果是以质荷比、各离子的相对丰度(括号中)来报告。在实施例中，单一m/e值用于报告含最常见原子同位素的M+H(或标记为M-H)离子。在所有情况下，同位素分布对应于预期的通式。电喷雾电离(ESI)质谱分析用Hewlett-Packard MSD电喷雾质谱仪进行，用HP1100HPLC递送样品。通常将分析物以0.1mg/mL溶解在甲醇中，并将1微升用递送溶剂注入质谱仪中，所述质谱仪扫描100至1500道尔顿。所有化合物都可以用正ESI模式分析，使用含有1％甲酸的乙腈/水作为递送溶剂。下述化合物也可以用负ESI模式分析，使用含有2mMNH4OAc的乙腈/水作为递送系统。
在实施例和整个本发明的描述中使用以下缩写：
aq：水溶液；BBr3：三溴化硼；CH2Cl2或DCM：二氯甲烷；CH3CN：乙腈；CH3OH或MeOH：甲醇；DAST，(二乙氨基)三氟化硫；DavePhos，2-二环己基膦基-2'-(N，N-二甲基氨基)联苯；1,2-DCE，1,2-二氯乙烷；DIEA：N，N-二异丙基乙胺；DMF：二甲基甲酰胺；DMP，戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martinperiodinane)；DMSO：二甲基亚砜；equiv.或者eq.：当量；Et3N：三乙胺；Et2O：乙醚；EtOH：乙醇；EtONa，乙醇钠；h：小时；HATU，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；HCl：氯化氢；H2O：水；K2CO3：碳酸钾；KHSO4：硫酸氢钾；LAH，氢化铝锂；LDA，二异丙基氨基锂；MgSO4：硫酸镁；ml：毫升；NaCl：氯化钠；NaH：氢化钠；NaHCO3：碳酸氢钠；NaOEt：乙醇钠；NaOH：氢氧化钠；NaOMe：甲醇钠；Na2SO4：硫酸钠；NH4Cl：氯化铵；NMP：N-甲基吡咯烷酮；pH：-log[H+]；POCl3,三氯化磷；PPTS，对甲苯磺酸吡啶鎓；RP-HPLC，反相高效液相色谱；RT，室温；TEA，三乙胺；TFA：三氟乙酸；TFAA，三氟乙酸酐；THF：四氢呋喃；TLC：薄层色谱
本发明范围内的化合物可用本领域技术人员已知的各种反应如下所述进行合成。本领域技术人员也将认识到，可以采用替代方法来合成本发明的目标化合物，并且在本文中主要描述的方法不是穷尽的，而是提供了到目标化合物的广泛适用的和实用的途径。
本专利中要求保护的某些分子可以以不同的对映体和非对映体形式存在，以及要求保护这些化合物的所有这些变体。
本文中用于合成关键化合物的实验过程的详细描述指向了由鉴别其的物理数据以及与其相关的结构描述说明的分子。
本领域技术人员还将认识到，在有机化学的标准后处理过程中，经常使用酸和碱。如果它们具有必要的内在酸性或碱性，在本专利中描述的实验程序期间，有时会产生母体化合物的盐。
实施例
实施例1：
[(2S,5S)-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]-2-甲基-四氢吡喃-2-基]-[3-(三氟甲基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基]甲酮和[(2R,5R)-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]-2-甲基-四氢吡喃-2-基]-[3-(三氟甲基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基]甲酮的合成
Figure BDA0001476504340000391
步骤a：向微波瓶中装入新鲜蒸馏的丙烯醛(40.0g，48.0mL，710mmol)和对苯二酚(50mg)。混合物在140℃下加热70分钟，随后150℃下30分钟。之后，过滤小瓶的内容物，用CH2Cl2洗涤并减压浓缩。所得的3,4-二氢-2H-吡喃-2-甲醛(20.0g，50％)足够纯净，可以立即用于下一步。
步骤b：将AgNO3(65g，383mmol)于水(400mL)中的溶液加入进搅拌的3,4-二氢-2H-吡喃-2-甲醛(13g，116mmol)于乙醇(300mL)的溶液，随后经1小时缓慢加入KOH(43g，766mmol)的水(300mL)溶液。混合物过滤并蒸发。残余物用乙醚萃取。水层用6N HCl调节至pH＝3，并用MTBE(2×200mL)萃取。将有机层蒸发，残余物用1N NaOH处理直至pH＝12。混合物与甲醇共蒸发至干，得到3,4-二氢-2H-吡喃-2-甲酸(8g)。
步骤c：在室温下，向搅拌的之前获得的甲酸(8.0g，53.0mmol)在DMF(70mL)中的悬浮液加入Na2CO3(5.0g,47.2mmol)和乙基碘(9.9g,63.6mmol)反应混合物在110℃下搅拌6h之后使其冷却至室温并用H2O(100mL)稀释。粗产物用Et2O(4×100mL)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色油状的3,4-二氢-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(5g，60％)。
步骤d：向3,4-二氢-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(10.4g,66.6mmol)于无水THF(150mL)中的冷(-78℃)溶液中加入LDA于THF(2.0M,40mL,80.0mmol)中的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时，用碘甲烷(16.6mL，266.4mmol)处理，在-78℃下搅拌1小时，并升温至室温。反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，用乙醚(2×100mL)萃取。有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩得到无色油状的3,4-二氢-2-甲基-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(5.1g，45％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ 6.39(dt,J＝1.9Hz,1H),4.73-4.69(m,1H),4.21(d,J＝7.5Hz,2H),2.23(dt,J＝1.9Hz,1H),2.0-1.95(m,2H),1.79-1.71(m,1H),1.48(s,3H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤e:在0℃下，向搅拌的3,4-二氢-2-甲基-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(5.1g,30.0mmol)于THF(50mL)中的溶液中，缓慢加入THF中的BH3(60mL,60.0mmol,1M溶液)。反应混合物在0℃下搅拌4小时，并将混合物在0℃保持16小时。然后混合物用NaOAc(7.98g，60.0mmol)，接着H2O2(14.0mL，70.0mmol，30％溶液)处理。反应混合物在0℃下搅拌2h之后，使其升温至室温并用饱和Na2SO3溶液淬灭。混合物用EtOAc(2x100mL)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用10％至60％乙酸乙酯/己烷梯度的乙酸乙酯-己烷洗脱得到无色粘稠液体状的四氢-5-羟基-2-甲基-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(4.43g，79％)。
步骤f：在0℃下，向搅拌的四氢-5-羟基-2-甲基-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(4.4g，23.6mmol)于CH2Cl2(150mL)中的溶液中，加入戴斯-马丁氧化剂(15.0g,35.4mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完成之后，混合物用饱和Na2S2O4溶液淬灭，之后搅拌30分钟。所得的混合物用CH2Cl2(2x150mL)萃取并用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。粗残余物用己烷研磨并过滤得到四氢-2-甲基-5-氧代-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(3.45g)。
步骤g:在室温下，向四氢-2-甲基-5-氧代-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(0.75g，4.07mmol)，4-(4-氟苯基)哌啶(963mg，4.48mmol)于CH2Cl2(15ml)中的混合溶液加入Na(OAc)3BH(27.8g,124.05mmol)。反应混合物在50℃下加热16小时。反应完成之后，混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭。所得的混合物用CH2Cl2(2x150mL)萃取用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用10％至60％乙酸乙酯/己烷梯度的乙酸乙酯-己烷洗脱以获得5-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)-四氢-2-甲基-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(1.2g，47％)。MS:(ES)m/z计算值C20H29FNO3[M+H]+350.2,实测值350.2。
步骤h：在室温下，向搅拌的5-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)-四氢-2-甲基-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(1.2g，14.9mmol)于MeOH(5mL)中的溶液，加入4M NaOH(3.0mL)。反应混合物在80℃下加热16小时。反应完成之后，将其冷却至室温并用2N HCl(3mL)淬灭，在此之后pH＝5。水溶液用CHCl3:iPrOH 3:1(3x50mL)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，粗化合物(1.05g)以褐色固体回收，不经纯化直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C18H24FNO3[M+H]+321.2,实测值321.2。
步骤i：5-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)-四氢-2-甲基-2H-吡喃-2-羧酸(150mg，0.467mmol)，3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶HCl(143mg，0.70mmol)，HATU(266mg,0.70mmol)和二异丙基乙胺(300mg,2.33mmol)于DMF中混合。反应混合物搅拌16小时。反应完成之后，混合物用H2O稀释，水溶液用EtOAc(2×25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯-己烷(20-100％)洗脱，得到非对映异构体混合物，其在制备型TLC板(8:2乙酸乙酯：己烷)上进一步纯化以分离非对映异构体。分离得到白色蓬松固体状的外消旋的顺式异构体，[(2S，5S)-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]-2-甲基-四氢吡喃-2-基]-[3-(三氟甲基)-7,8-二氢-5H-1，6-萘啶-6-基]甲酮和[(2R，5R)-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]-2-甲基-四氢吡喃-2-基]-[3-(三氟甲基)-7,8-二氢-5H-1,6-萘啶-6-基]甲酮，(20mg,10％)1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.71(s,1H),8.04(s,1H),7.23(dd,J＝7.4,5.5Hz,2H),7.04(dd,J＝8.6,5.5Hz,2H),5.35-5.25(m,1H),5.05(dd,J＝18.4,Hz,1H),4.72-4.62(m,1H),4.40-4.35(m,1H),4.30-4.22(m,1H),4.15-3.90(m,1H),3.70-3.55(m,2H),3.50-3.40(m,2H),3.28-3.05(m,4H),2.95-2.80(m,1H),2.75-2.60(m,1H),2.28-2.20(m,1H),2.15-2.05(m,2H),1.95-1.75(m,3H),1.53(s,3H).MS:(ES)m/z计算值C27H32F4N3O2[M+H]+506.2,实测值506.2。
(2S)-2-环丙基-3,4-二氢吡喃-2-羧酸的合成
Figure BDA0001476504340000421
步骤a：向装有磁力搅拌器的5L烧瓶中加入Mg屑(106g，4.34mol，1.58当量)和无水THF(2.00L)，并用N2吹扫。通过加入Br2(1mL，19.5mmol)活化Mg并在室温下搅拌15分钟。超过2小时缓慢加入环丙基溴(500g，4.13mol，1.5当量)于无水THF(1.9L)中的溶液。加入过程中将反应保持在冰上，控制速度使内部温度保持在35℃以下。加入后，混合物在室温下搅拌1.5小时，然后在冰上过夜冷却。第二天将反应渐渐地升温至22℃以重新溶解大部分沉淀物并用于下一步。
步骤b：在装有机械搅拌器的12L烧瓶(用无水THF冲洗1次)中，将草酸二乙酯(373mL，2.75mol，1当量)溶于THF(1.00L)中，并将该溶液在试剂醇/干冰浴中冷却。第一步所得的格氏溶液经过3.5小时通过聚四氟乙烯套管转移到草酸盐溶液中，保持内部温度低于-60℃。格氏烧瓶用THF(100mL)冲洗，并且也通过聚四氟乙烯套管将其转移至反应混合物中。加完后，反应再搅拌1.5小时，然后通过加入H2SO4水溶液(3M，740mL)直到
Figure BDA0001476504340000422
淬灭。反应从浴中移去使升温至室温并搅拌过夜。向混合物加入盐水(600mL)，H2O(500mL)和己烷(1.5L)。混合物剧烈搅拌并分层。水层用Et2O(2x400mL)萃取。用MgSO4干燥，过滤并浓缩以得到棕色油状物。将油在真空
Figure BDA0001476504340000423
下蒸馏，得到黄色油状物(318g，通过1H NMR，纯度为88％)，其用于下一步。
步骤c：配有机械搅拌器和内部温度计的12L三颈烧瓶用无水THF(3x)冲洗并加入[3aR-[2(3'aR*，8'aS*)，3'aβ，8'aβ]]-(+)-2,2'-亚甲基双[3a，8a-二氢-8H-茚并[1，2-d]噁唑](49.56g，0.15mol，0.055当量)和无水THF(6L)和3A分子筛(500g)。用N2吹扫混合物5分钟，然后加入Cu(OTf)2。该混合物搅拌1小时，然后在试剂醇/干冰浴中冷却。当内部温度达到-50℃时，经过15分钟将酮(467g，84％纯度，2.76mol，1当量)加入THF(200mL)中。加完后，将反应混合物搅拌45分钟，在此期间内部温度达到-75℃。经过60分钟加入在THF(200mL)中的二烯(510g，2.96mol，1.07当量)，保持内部温度低于-67℃。然后将反应在-78℃浴中搅拌18小时。之后反应从浴中移去并加入1M盐水中的HCl(3L，3.00mol)，并将反应物搅拌2小时。加入己烷(1L)，然后分层。水层用MTBE(750mL)萃取以及合并的有机层用盐水(750mL)洗涤，用MgSO4干燥并通过硅藻土过滤。滤液浓缩以得到深棕色油状物(867g)。该油溶于丙酮(1L)中，然后加入MTBE(2L)，此时形成沉淀。该混合物通过硅藻土过滤并浓缩。将产物溶于MeCN(1L)中并用己烷(3×400mL)洗涤。合并的己烷用MeCN(200mL)萃取，然后浓缩合并的MeCN，得到深棕色油状物产物(715g，86％ee)。用Pirkle共价(R，R)Whelk-01 5/100Kromasil手性柱(30:70iPrOH：己烷作为洗脱剂，1mL/分钟，tR(主要)＝8.4分钟和tR(次要)＝10.6分钟)通过HPCL建立对映体纯度。
步骤d：向配有机械搅拌器和内部温度计的12L三颈烧瓶中装入CeCl3·7H2O(514g，1.38mol，0.5当量)和MeOH(2.2L)。一旦所有固体溶解，将混合物冷却至0℃，并加入在CH2Cl2(2.2L)中的粗中间体1(714g，2.76mol，1当量)。当混合物达到5℃的内部温度时，分批(
Figure BDA0001476504340000431
/份)加入固体NaBH4(124g，3.28mol，1.2当量)，保持内部温度低于16℃。加完之后，移去浴。缓慢加入H2O(3L)，然后加入1M柠檬酸(2.2L)。分层，水层用CH2Cl2(3x500mL)萃取。合并的有机层用1:1的H2O:盐水(600mL)洗涤，之后用MgSO4干燥，过滤并浓缩。回收产物为含有15mol％CH2Cl2的深色油(598g)并在冷冻器中过夜。第二天不经纯化直接用于下一步反应。
步骤e:在配有机械搅拌器和加料漏斗的12L三颈烧瓶中，将上步的产物(598g，92％纯度，2.59mol)溶于CH2Cl2(4L)中并在试剂醇/干冰浴中冷却。当内部温度达到-75℃时，加入Et3SiH(497mL,3.11mol,1.2当量)并搅拌5分钟。然后经1.5小时逐滴加入于CH2Cl2(768mL)中的BF3·Et2O(384mL，3.11mol，1.2当量)，保持内部温度低于-68℃。移去冷却浴并搅拌反应1.5h，这段时间后内部温度达到2℃。用H2O(1L)稀释反应物并小心地用饱和NaHCO3(2.5L)淬灭。在室温下反应搅拌20分钟之后有机层分离，水层用CH2Cl2(500mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩以获得粗产品(558g,>100％)，其用于下一步。
步骤f：在配备有磁力搅拌器的5L单颈烧瓶中，将粗起始原料(2.59mol)溶于甲苯(2.59L)中，并将N2鼓泡通过溶液20分钟。加入Et3SiH(414mL，2.59mol)，随后加入威尔金森(Wilkinson)催化剂(43.1g，47mmol，0.018当量)。将N2鼓泡通过反应5分钟以上，然后将混合物在室温下搅拌过夜。蒸发反应物。加入在MeOH:H2O(1:1)中的4M NaOH(1.13L，4.53mol，1.75当量)，并将混合物在70℃搅拌1小时。将反应物真空浓缩至初始体积的～50％，并用2MNaHSO4中和至pH＝1-2。深棕色混合物用EtOAc(3x1.0L)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥并过滤。该溶液用EtOAc稀释至9.0L总体积。剧烈搅拌溶液同时加入于EtOH(150mL)中的(S)-1-(1-萘基)乙胺(314g，1.83mol，0.7当量)。立即沉淀出白色固体并将混合物搅拌2小时，然后过滤，用EtOAc(500mL)冲洗固体。真空中干燥得到棕褐色固体状产物(456g,88％ee)。向该固体中加入10L MeCN，并回流1小时。过滤反应物，得到灰白色固体状的产物(428g，91％ee)。向该固体中加入MeCN(6.8L)和H2O(270ml)，混合物回流9小时。使其冷却到室温。过滤固体，用MeCN洗涤。其在真空干燥箱中干燥以得到灰白色固体状产物(352g,98％ee)。
步骤g：向之前获得的盐(46.0g，136mmol，1.0当量)中加入Et2O(500mL)和0.5MHCl水溶液(326mL，163mmol，1.2当量)。搅拌混合物直至酸完全溶解，然后分层。水相用Et2O(2x350mL)萃取。合并的有机相之后用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到不经纯化而使用的游离酸。
(2S)-2-环丙基-5-氧代-四氢吡喃-2-羧酸苄酯的合成
Figure BDA0001476504340000441
步骤a：向溶于DMF(70mL)中的(2S)-2-环丙基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-甲酸(5.4g，32.1mmol，1当量)中加入Na2CO3(5.1g，48.1mmol，1.5当量)。其在50℃下搅拌5分钟，之后加入苄基溴(4.6mL，38.5mmol，1.2当量)，反应在90℃下搅拌3小时。使反应物冷却至室温，然后用H2O(150mL)稀释并用Et2O(100mL，之后2×50mL)萃取。合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(8.3g)
步骤b：(2S)-2-环丙基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-羧酸苄酯(8.3g，32mmol，1当量)溶于THF(100mL)中，并在盐/冰中降温。经过5分钟滴加BH 3·THF(1M THF中，32mL，32mmol，1当量)。将反应物保持在8℃冰箱中过夜，然后放回盐/冰浴中。然后缓慢加入NaOAc(5.3g，64mmol，2当量)于H2O(20ml)中的溶液，并将反应搅拌10分钟。然后一次加入H2O2(9.7mL，96mmol，3当量)，除去冷却浴，并将反应搅拌3小时。用盐水(50mL)稀释反应物，分离有机层。水层用Et2O(100ml)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物重新溶解在Et2O中并通过硅藻土过滤除去白色沉淀。浓缩滤液以得到黄色油状物(8.8g)。
步骤c：将前述步骤的油状物(99g，359mmol，1当量)溶于CH2Cl2(100mL)中并分批加入戴斯-马丁氧化剂(82.5g，430mmol，1.5当量)。加完后，将反应加热至回流并搅拌5.5小时。加入戴斯-马丁氧化剂(15.2g，35.9mmol，0.1当量)，并将混合物回流搅拌5小时。使反应降温至室温并搅拌过夜。将饱和NaHCO3水溶液(3L)小心地加入到反应中，然后加入饱和Na2S2O3水溶液(100mL)并将混合物搅拌1.5小时。然后通过硅藻土过滤，分离有机层。水层用CH2Cl2(2x300mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩至总体积的三分之一。加入环己烷(500mL)并蒸发至体积的三分之一。加入环己烷(1L)和硅藻土(35g)，混合物在40℃搅拌5分钟。然后将其通过硅藻土过滤，用环己烷洗涤并蒸发，得到深黄色油状物(93.5g)。将一部分该物质(31.5g)通过硅胶色谱使用8:2的己烷:EtOAc作为洗脱剂纯化，得到纯产物(21g，67％)。
实施例2：
5-[1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]-4-哌啶基]-2-氟苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000461
步骤a：向(2S)-2-环丙基-3,4-二氢-2H-2-羧酸(730mg,4.3mmol)，3-氟-5-三氟甲基-苄基胺(1.0g,5.2mmol)和二乙基异丙基胺(650mg,5mmol)于DMF中的混合物加入HATU(2.2g,5.8mmol)。所得溶液在室温下搅拌3小时。反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取并以盐水洗涤。有机层真空浓缩且残余物通过快速色谱(2至25％乙酸乙酯的己烷作为洗脱剂)纯化，得到浅黄色糖浆状的1.2g(2S)-2-环丙基-N-(3-氟-5-(三氟甲基)苄基)-3,4-二氢-2H-吡喃-2-甲酰胺(产率84％)，并直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C17H18F4NO2[M+H]+344.1，实测值344.1。
步骤b：将上面制备的酰胺(1.2g，3.5mmol)溶于THF(10mL)中，在N2下在冰浴中冷却并用THF中的甲硼烷(1M，10mL，10mmol)处理。将所得混合物在0℃下搅拌4小时(通过LC-MS监测)，并用水(6mL)中的NaOAc三水合物(2g，15mmol)以及随后的30％H2O2(2.5mL)缓慢淬灭。所得的混合物升温至室温并搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用NaHCO3和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物溶于CH2Cl2(50mL)中并用戴斯-马丁氧化剂(3.2g，7.5mmol)处理。混合物在室温下搅拌过夜，用饱和Na2S2O3溶液淬灭并减压浓缩。残余物用EtOAc稀释，用NaHCO3，1N HCl和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过快速色谱(20至45％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，得到浅黄色糖浆状的0.97g(2S)-2-环丙基-N-(3-氟-5-(三氟甲基)苄基)-5-氧代四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺(产率60％)，并直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C17H18F4NO3[M+H]+360.1,实测值360.1。
步骤c：将上面制备的酮(140mg，0.39mmol)加入到2-氟-5-(哌啶-4-基)苯甲酸甲酯盐酸盐(200mg，0.73mmol)和N，N-二异丙基乙胺(650mg，5mmol)在CH2Cl2(10mL)中的混合物中，随后加入NaBH(OAc)3(160mg，0.76mmol)。所得混合物在室温下搅拌1小时，然后在45℃浴中过夜。将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3溶液淬灭，用10％MeOH的CH2Cl2萃取，用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过快速色谱法(2至5％MeOH的CH2Cl2作为洗脱剂)纯化，然后通过制备型TLC(75％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，得到黄色泡沫状30mg的5-((3R，6S)-6-环丙基-6-(3-氟-5-(三氟甲基)苄基氨基甲酰基)四氢-2H-吡喃-3-基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酸甲酯，并直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C30H34F5N2O4[M+H]+581.2,实测值581.3。
步骤d：上面制备的酯(30mg，0.05mmol)溶于MeOH(3mL)和水(1mL)中并用LiOH一水合物(100mg，2.38mmol)处理。所得混合物在室温下搅拌过夜，用2N HCl稀释并用10％MeOH的CH2Cl2萃取并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过制备型TLC(75％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，接着通过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化，得到25mg标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.84(br,1H),7.83(dd,J＝2.5,6.9Hz,1H),7.49(dt,J＝2.1,7.9Hz,2H),7.36(dd,J＝7.9,9.3Hz,2H),7.19(dd,J＝8.5,10.6Hz,1H),4.68(dd,J＝7.1,15.4Hz,1H),4.36(dd,J＝5.4,15.4Hz,1H),4.22-4.18(m,1H),3.66-3.62(m,3H),3.40-3.18(m,4H),2.98-2.93(m,1H),2.69-2.63(m,1H),2.27-2.10(m,3H),1.97-1.93(m,2H),1.75-1.57(m,2H),1.17-1.06(m,1H),0.70-0.65(m,1H),0.60-0.36(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C29H32F5N2O4[M+H]+567.2,实测值567.3。
实施例3：
3-[(3S，4R)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸和3-(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000481
步骤a：3-(乙氧基羰基)苯基硼酸(4.0g，20.6mmol)，4-(三氟甲基磺酰氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(4.0g,12mmol),K2CO3(4.2g,30mmol)和LiCl(4.3g,100mmol)于对二噁烷(75mL)和水(15mL)中的混合物中加入Pd(PPh3)4(600mg,0.5mmol)。所得混合物用N2吹扫，然后在N2下加热至100℃3小时。冷却至室温后，混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。有机层真空浓缩且残余物通过快速色谱(2至25％乙酸乙酯的己烷作为洗脱剂)纯化，得到浅黄色浆状的2.4g 4-(3-(乙氧基羰基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(产率60％)。将其溶于装有10％Pd/C(400mg)的EtOH(40mL)中，并在室温下用H2球氢化过夜。将混合物通过硅藻土过滤并将滤液真空浓缩，得到2.4g浅黄色浆状的4-(3-(乙氧基羰基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，其直接用于下一步骤。MS:(ES)m/z计算值C19H28NO4[M+H]+334.2,实测值334.2。
步骤b：将上述制备的Boc-哌啶(1.4g，4.2mmol)溶于EtOAc(70mL)中并缓慢(经30分钟)加入到RuO4(200mg，1.21mmol)和NaIO4(5g，23.4mmol)在水(20mL)中的溶液中。得到的深色混合物在室温下搅拌3小时。用10％Na2S2O3溶液(100mL)淬灭反应后，混合物用EtOAc萃取，用NaHCO3、盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过快速色谱法(5至25％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，得到浅黄色糖浆状的4-(3-(乙氧基羰基)苯基)-2-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(900mg)，将其直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C19H25NNaO5[M+H]+370.2,实测值370.1。
步骤c：将上面制备的Boc-哌啶酮(900mg，2.6mmol)溶解在THF(5mL)中并在-78℃下在N2下滴加到LiHMDS(1M，3mL，3mmol)的THF溶液中。将所得溶液在-78℃下搅拌30分钟，然后加入MeI(710mg，5mmol)，然后经3小时将温度缓慢升温至-20℃。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应后，将混合物用EtOAc萃取并用盐水洗涤。有机层真空浓缩，残余物通过快速色谱法(5至25％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，得到浅黄色糖浆状的～((±)-(3S，4R)-4-(3-(乙氧基羰基)苯基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(230mg)，将其直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C20H27NNaO5H[M+Na]+384.2,实测值384.1。
步骤d：将上面制备的Boc-甲基吡啶酮(230mg，0.63mmol)溶于CH2Cl2(5mL)中，用4NHCl的二噁烷(5mL，20mmol)处理。在室温下搅拌2小时后，溶剂真空浓缩并将残余物溶于THF(5mL)中。向冰浴冷却的该溶液中缓慢加入BH3·Me2S(2M，1mL)。所得混合物在0℃下搅拌6小时，随后在4℃放置72小时。溶剂真空浓缩并将残余物溶于含有浓HCl(0.1mL，12mmol)的EtOH(5mL)中。混合物在50℃下搅拌30分钟。有机层真空浓缩，残余物通过快速色谱法(含有2％NH4OH的2至20％MeOH的CH2Cl2作为洗脱剂)纯化，得到110mg浅黄色泡沫状的(±)3-((3S，4R)-3-甲基哌啶-4-基)苯甲酸乙酯，其直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C15H22NO2[M+H]+248.2,实测值248.2。
步骤e:将上述制备的胺(110mg，0.44mmol)溶解在CH2Cl2(10mL)中并加入N，N-二异丙基乙胺(390mg，3mmol)，(2S)-2-环丙基-N-(3-氟-5-(三氟甲基)苄基)-5-氧代四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺(120mg，0.33mmol)，随后加入NaBH(OAc)3(110mg，0.52mmol)。所得混合物在室温下搅拌1小时，然后在45℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3水溶液淬灭，用10％MeOH的CH2Cl2萃取，用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过快速色谱法(2至5％MeOH的CH2Cl2作为洗脱剂)和制备型TLC(60％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，得到3-(3S，4R)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]四氢呋喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸乙酯和3-(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸乙酯的黄色泡沫状的混合物(75mg)并直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C32H39F4N2O4[M+H]+591.3,实测值591.2。
步骤f：向上述制备的酯(75mg，0.13mmol)在MeOH(5mL)和水(2mL)的溶液中加入LiOH一水合物(210mg，5mmol)。所得混合物在80℃下搅拌2小时，用2N HCl稀释并用10％MeOH的CH2Cl2萃取并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过制备型TLC(20％MeOH的EtOAc作为洗脱剂)纯化，然后通过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)得到30mg灰白色固体的标题化合物(非对映体混合物)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.87(br,1H),7.85-7.91(m,2H),7.27-7.51(m,5H),4.68(ddd,J＝4.0,7.0,15.6Hz,1H),4.37(dt,J＝4.6,15.4Hz,1H),4.26-4.20(m,1H),3.75-3.55(m,3H),3.34-3.15(m,3H),2.90(q,J＝11.9Hz,1H),2.70-2.63(m,1H),2.57-2.52(m,1H),2.33-2.20(m,1H),2.10-1.96(m,2H),1.72-1.55(m,3H),1.15-1.06(m,1H),0.77(d,J＝8.0Hz,3H),0.76-0.67(m,1H),0.61-0.38(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C30H35F4N2O4[M+H]+563.3,实测值563.3。
实施例4：
5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰
基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸的合成。
Figure BDA0001476504340000501
步骤a：向(S)-2-氟-5-(2-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯二盐酸盐(150mg,0.46)和N，N-二异丙基乙胺(390mg,3mmol)于CH2Cl2(10mL)的混合物中加入(2S)-2-环丙基-N-(3-氟-5-(三氟甲基)苄基)-5-氧代四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺(150mg,0.42mmol)和NaBH(OAc)3(211mg,1mmol)。所得混合物在室温下搅拌1小时，然后在45℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3水溶液淬灭，用10％MeOH的CH2Cl2萃取，用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过快速色谱法(2到5％MeOH的CH2Cl2作为洗脱剂)纯化，然后通过制备型TLC(50％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，得到黄色泡沫状的5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸甲酯(60mg)，直接在下一步使用。MS:(ES)m/z计算值C30H35F5N3O4[M+H]+596.3,实测值596.4。
步骤b：向上述制备的酯(60g，0.10mmol)在MeOH(5mL)和水(2mL)中的溶液中加入LiOH一水合物(210mg，5mmol)。所得混合物在80℃下搅拌2小时，用2N HCl稀释并用10％MeOH的CH2Cl2萃取并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过制备型TLC(EtOAc溶液作为洗脱剂)纯化，然后通过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)得到30mg灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.67(br,1H),7.51-7.29(m,4H),7.16-6.99(m,2H),4.59(dd,J＝6.8,15.4Hz,1H),4.43(dd,J＝5.6,15.4Hz,1H),3.99(ddd,J＝2.2,4.3,11.4Hz,1H),3.54(dt,J＝3.3,6.3Hz,1H),3.44-3.32(m,1H),3.10-3.02(m,2H),2.86-2.82(m,2H),2.75-2.67(m,1H),2.67-2.47(m,3H),2.05-1.97(m,1H),1.55(dt,J＝3.6,13.4Hz,1H),1.44-1.26(m,1H),1.15-1.02(m,1H),0.94(d,J＝6Hz,3H),0.94-0.83(m,1H),0.77-0.66(m,1H),0.61-0.36(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C29H33F5N3O4[M+H]+582.2,实测值582.2。
实施例5：
5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羰基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000511
步骤a：(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3S)-4-(4-氟-3-甲氧基羰基-苯基)-3-甲基-哌嗪-1-基]四氢吡喃-2-羧酸(70mg,0.17mmol),1-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪(70mg,0.3mmol),N，N-二异丙乙胺(130mg,1mmol)于DMF(5mL)中的混合物中加入HATU(110mg,0.29mmol)。所得溶液在室温下搅拌1小时。反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤。有机层真空浓缩，残余物通过快速色谱法(10至35％乙酸乙酯的己烷作为洗脱剂)纯化得到85mg的酯中间体。将其溶于MeOH(5mL)和水(2mL)中，并用LiOH一水合物(210mg，5mmol)处理。所得混合物在室温下搅拌2小时，用2N HCl稀释并用10％MeOH的CH2Cl2萃取，以及用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过制备型TLC(EtOAc作为洗脱剂)和随后通过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化得到50mg的灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.18-7.80(m,7H),4.20-4.40(m,4H),3.20-3.98(m,14H),3.01-2.88(m,1H),2.63(d,J＝13.7Hz,1H),2.35-2.25(m,1H),1.85-1.78(m,1H),1.56-1.48(m,1H),1.30-1.20(m,1H),1.04-0.94(m,3H),0.92-0.83(m,1H),0.74-0.60(m,2H),0.49-0.40(m,1H).MS:(ES)m/z计算值C32H39F4N4O4[M+H]+619.3,实测值619.2。
(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3S，4R)-4-(4-氟苯基)-3-甲氧羰基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸的合成
Figure BDA0001476504340000521
步骤a：[(3S，4R)-4-(4-氟-苯基)-哌啶-3-基]-甲醇(3.00g,14.3mmol,1当量)悬浮于CH2Cl2(10mL)中并加入Boc酸酐(3.23g,14.8mmol,1.03当量)。将其搅拌2小时，然后浓缩得到粗品，其不经进一步纯化用于下一步反应。
步骤b：向来自步骤a的粗品(298mg，0.965mmol，1当量)中加入CH2Cl2(2mL)和戴斯-马丁氧化剂(449mg，1.06mmol，1.1当量)。反应在室温下搅拌1.5小时。该混合物之后通过硅胶色谱法(己烷：EtOAc作为洗脱剂)纯化，得到(3S，4R)-4-(4-氟-苯基)-3-羟甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(167mg，56％)。
步骤c：向(3S，4R)-4-(4-氟-苯基)-3-羟甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(167mg,0.543mmol,1当量)加入含有t-BuOH(3.5mL)和2-甲基-2-丁烯的THF(2M,2mL,4mmol,7当量)。将其在冰浴中冷却并添加NaClO2(80％，329mg，2.9mmol，5当量)和NaH2PO4(535mg，3.88mmol，7当量)于H2O(1.8mL)中的混合物。混合物搅拌30分钟后浓缩。将残余物在EtOAc和H2O之间分配，分离并用EtOAc(3x)萃取。有机物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗品(176mg)。
步骤d：向前一步的粗产物(4.17g，11mmol，1当量)中加入MeOH(15mL)，并将溶液在冰浴中冷却。加入含有三甲基甲硅烷基重氮甲烷的己烷(2M，10mL，20mmol，1.8当量)，直到溶液保持黄色。然后将其浓缩并通过硅胶色谱法(己烷:EtOAc作为洗脱剂)纯化，得到(3S，4R)-4-(4-氟-苯基)-哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(3.69g)。
步骤e:向(3S，4R)-4-(4-氟-苯基)-哌啶-1,3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(3.67g，10.9mmol，1当量)中加入CH2Cl2(10mL)和含有HCl的二噁烷(4M，10mL，40mmol，3.7当量)。将其搅拌1.5小时，然后浓缩。将残余物用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。用CH2Cl2(2x)萃取水层，然后将有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到(3S，4R)-4-(4-氟-苯基)-哌啶-3-甲酸甲酯(2.55g)。
步骤f：向(3S，4R)-4-(4-氟-苯基)-哌啶-3-甲酸甲酯(2.55g,10.8mmol,1.1当量)加入于二氯乙烷(30mL)中的(2S)-2-环丙基-5-氧代-四氢-吡喃-2-羧酸苄基酯(2.73g,9.95mmol,1当量)，混合物在冰浴中冷却。加入NaBH(OAc)3(3.28g，15.5mmol，1.5当量)，然后将反应在室温下搅拌过夜。反应用CH2Cl2稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。水层用CH2Cl2(2x)萃取，然后有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法(己烷：EtOAc作为洗脱剂)纯化，得到作为顺式/反式混合物的产物(3.74g)。
步骤g:向步骤f的混合物(3.74g，7.54mmol)中加入MeOH(25mL)，随后加入10％湿德固赛(Degussa)型Pd/C(304mg)。反应在H2下搅拌3小时。然后反应物通过硅藻土过滤，用MeOH和CH2Cl2冲洗。然后将溶液浓缩并通过硅胶色谱法(CH2Cl2：MeOH作为洗脱剂)纯化，得到纯异构体的(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3S，4R)-4-(4-氟苯基)-3-甲氧羰基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-甲酸(1.318g，43％)。
实施例6：
(3S，4R)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-氟-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-4-(4-氟苯基)哌啶-3-羧酸的合成
Figure BDA0001476504340000541
步骤a：向(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3S，4R)-4-(4-氟苯基)-3-甲氧羰基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸(100mg,0.25mmol),2-(氨基甲基)-6-氟-4-(三氟甲基)苯酚(80mg,0.38mmol)和N，N-二异丙基乙胺(390mg,3mmol)于DMF(6mL)的混合物中加入HATU(150mg,0.39mmol)。所得溶液在室温下搅拌1小时。反应混合物用水淬灭，用DCM萃取，用盐水洗涤。有机层真空浓缩，将残余物溶于甲苯(10mL)中，用多聚甲醛(600mg，20mmol)和p-TsOH(150mg，0.87mmol)处理。所得混合物在100℃下搅拌6小时。冷却至室温后，将混合物用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过快速色谱法(10％至30％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化，获得黄色泡沫状的(3S，4R)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-氟-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-4-(4-氟苯基)哌啶-3-羧酸甲酯(80mg)，其直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C31H34F5N2O5[M+H]+609.2,实测值609.3。
步骤b：前面制备的酯(80mg,0.13mmol)溶于MeOH(5mL)和水(2mL)中并用LiOH一水合物(210mg，5mmol)处理。所得混合物在60℃下搅拌1小时，用2N HCl稀释并用10％MeOH的CH2Cl2萃取，以及用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过制备型TLC(EtOAc作为洗脱剂)，以及随后通过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化得到50mg的灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.40-7.36(m,2H),7.32-7.20(m,2H),7.04(td,J＝2.4,9.1Hz,1H),6.20(br,1H),5.75(br,1H),4.98-4.88(m,1H),4.45-4.36(m,1H),3.77-3.40(m,4H),3.35-2.98(m,8H),2.65(dt,J＝3.6,13.7Hz,1H),2.33-2.23(m,1H),2.09-1.95(m,2H),1.84-1.72(m,1H),1.65-1.58(m,1H),1.25-1.15(m,1H),0.65-0.46(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C30H32F5N2O5[M+H]+595.2,实测值595.3。
3-[(3R，4S)-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸乙酯的合成
Figure BDA0001476504340000551
步骤a：将3-乙酯基苯基硼酸(6.0g，31mmol，2.2当量)溶解于二噁烷(50mL)中并在冰浴中冷却。加入K2CO3(4.6g，33mmol，2.4当量)，随后加入H2O(5mL)。N2鼓泡通过溶液2分钟，然后加入(Rh(cod)Cl)2(600mg，1.2mmol，0.08当量)和(S)-BINAP(1.68g，2.56mmol，0.18当量)。N2鼓泡通过溶液5分钟以上，随后缓慢加入6-氧代-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(2.70g，14mmol，1当量)。N2鼓泡通过溶液5分钟以上，然后反应经1小时升温至室温。反应在45℃下加热1小时，然后冷却至室温并搅拌过夜。反应物用EtOAc稀释，用H2O以及随后用盐水洗涤，然后浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(5％至20％EtOAc的己烷)纯化，得到(S)-4-(3-乙氧基羰基-苯基)-2-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.5g,74％)。
步骤b：将LiHMDS(1M，13.4mL，13.4mmol，1.3当量)加入到THF(20mL)中并将该溶液冷却至-60℃。然后经10分钟加入含有(S)-4-(3-乙氧基羰基-苯基)-2-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.5g，10mmol，1当量)的THF，同时保持内部温度低于-45℃。反应在-78℃浴中搅拌45分钟，然后加入MeI(2mL)。反应在浴中搅拌3小时，然后通过加入NH4OH淬灭并升温至室温。混合物用EtOAc(150mL)萃取并浓缩。所得的残余物通过硅胶色谱法(5％至15％EtOAc的己烷)纯化得到(3R，4S)-4-(3-乙氧基羰基-苯基)-3-甲基-2-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.0g,83％)。
步骤c：将(3R，4S)-4-(3-乙氧基羰基-苯基)-3-甲基-2-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.0g,8.3mmol)溶于CH2Cl2(20mL)并加入含有HCl的二噁烷(4N,20mL,80mmol)。该混合物在室温下搅拌4小时，然后浓缩得到产物，将其直接用于下一步。
步骤d：3-((3R，4S)-3-甲基-2-氧代-哌啶-4-基)-苯甲酸乙酯(8.3mmol,1当量)溶于THF(35mL)并加缓慢入含有BH3·SMe2的THF(2M,12mL,24mmol,3当量)。将反应物置于4℃冰箱中3天，然后浓缩溶液。将残余物溶于EtOH(35mL)中并加入浓HCl(1.8mL，22mmol)。该溶液在60℃下搅拌2小时，然后浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(5％至15％MeOH的CH2Cl2)纯化，得到3-[(3R，4S)-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸乙酯(1.2g，59％)。
实施例7：
3-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-氟-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000561
步骤a：向(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3R，4S)-4-(3-乙氧基羰基苯基)-3-甲基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸(85mg,0.21mmol)，2-(氨基甲基)-6-氟-4-(三氟甲基)苯酚(60mg,0.29mmol),N，N-二异丙基乙胺(390mg,3mmol)于DMF(6mL)的混合物中加入HATU(120mg,0.32mmol)。所得溶液在室温下搅拌1小时。反应混合物用水(25mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取，用盐水(25mL)洗涤。有机层真空浓缩，将残余物溶于甲苯(10mL)中，用多聚甲醛(600mg，20mmol)和p-TsOH(150mg，0.87mmol)在100℃下处理6小时。冷却至室温后，混合物用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，并经MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过制备型TLC(35％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化获得黄色泡沫状的3-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-氟-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸乙酯(15mg)，其直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C33H39F4N2O5[M+H]+619.3,实测值619.3。
步骤b：前面制备的酯(15mg,0.024mmol)溶于MeOH(5mL)和水(2mL)中并用LiOH一水合物(210mg，5mmol)在60℃下处理3小时。反应物用2N HCl稀释，用10％MeOH的CH2Cl2萃取并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过制备型TLC(EtOAc作为洗脱剂)，然后通过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化得到7mg的灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.94-7.82(m,2H),7.48-7.37(m,4H),6.20(br,1H),5.75(br,1H),4.98-4.90(m,1H),4.45-4.35(m,1H),3.70-3.38(m,4H),3.35-3.02(m,4H),2.90-2.80(m,1H),2.68-2.62(m,1H),2.60-2.53(m,1H),2.32-1.92(m,3H),1.85-1.70(m,1H),1.65-1.55(m,1H),1.32-1.20(m,2H),0.75(d,J＝6.7Hz,3H),0.65-0.46(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C31H35F4N2O5[M+H]+591.2,实测值591.3。
2-(氨基甲基)-6-氯-4-(三氟甲基)苯酚的合成
Figure BDA0001476504340000571
步骤a：在冰浴上，2-氟-5-(三氟甲基)苄腈(50.0g，265mmol，1当量)于THF(1.0L)中的溶液用NaOtBu(30.5g，317mmol，1.2当量)处理10分钟，然后在室温下过夜。然后浓缩混合物，残余物用H2O(400mL)稀释并用己烷(2×300mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩得到黄色油状物(61.7g，96％)，静置后固化。其用于步骤b。
步骤b：2-叔-丁氧基-5-三氟甲基-苄腈(20.0g,82.3mmol)溶于THF(100mL)中。加入NH4OH(10mL)，随后加入雷尼镍的水浆液(5mL)。反应物在H2(50psi)下振荡过夜。该混合物通过硅藻土过滤并浓缩。将残余物溶于己烷中并用MgSO4干燥，过滤并浓缩获得黄色油状物(19.8g,97％)。
步骤c：在搅拌下将三氟乙酸(2mL)加入到2-叔-丁氧基-5-三氟甲基-苄胺(2.5g，10mmol，1当量)中。小心地将三氟甲磺酸(10mL)加入到溶液中，接着分批加入N-氯代琥珀酰胺(2.7g，20mmol，2当量)。反应在室温下搅拌2小时，然后倒入H2O中，用饱和NaHCO3水溶液中和。混合物用EtOAc(2x25mL)萃取，然后合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将所得棕色残余物溶于最少量的MeOH中，形成灰色沉淀。过滤固体并用最少量的MeOH洗涤得到灰色固体状产物(850mg，37％)。
实施例8：
3-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-[8-氯-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000581
步骤a：向(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3R，4S)-4-(3-乙氧基羰基苯基)-3-甲基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸(80mg,0.19mmol)，2-(氨基甲基)-6-氟-4-(三氟甲基)苯酚(50mg,0.22mmol),N，N-二异丙基乙胺(260mg,2mmol)于DMF(6mL)的混合物中加入HATU(100mg,0.26mmol)。所得溶液在室温下搅拌1小时。反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤。有机层真空浓缩，将残余物溶于甲苯(10mL)中，用多聚甲醛(600mg，20mmol)和p-TsOH(150mg，0.87mmol)处理。所得混合物在100℃下搅拌6小时。冷却至室温后，将混合物用EtOAc(25mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(15mL)和盐水洗涤(15mL)，并经MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物通过制备型TLC(35％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化获得50mg黄色泡沫状的3-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-[8-氯-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸乙酯，其直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C33H39ClF3N2O5[M+H]+635.2,实测值635.2。
步骤b：含有前面制备的酯(50mg,0.079mmol)的MeOH(5mL)和水(2mL)用LiOH一水合物(210mg，5mmol)在60℃下处理3小时。混合物用2N HCl稀释，并用10％MeOH的CH2Cl2萃取并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化得到40mg的灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.96-7.84(m,2H),7.61-7.53(m,2H),7.45(d,J＝4.7Hz,2H),6.17(br,1H),5.88(br,1H),4.98-4.90(m,1H),4.45-4.35(m,1H),3.70-3.37(m,4H),3.35-3.05(m,4H),2.85(t,J＝12.2Hz,1H),2.65(td,J＝3.7,13.9Hz,1H),2.54(dt,J＝4.8,11.2Hz,1H),2.34-2.26(m,1H),2.16-1.92(m,2H),1.85-1.70(m,1H),1.65-1.55(m,1H),1.32-1.20(m,2H),0.75(d,J＝6.7Hz,3H),0.65-0.46(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C31H35ClF3N2O5[M+H]+607.2,实测值607.4。
实施例9：
5-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000591
(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3R，4S)-4-(4-氟-3-甲氧基羰基-苯基)-3-甲基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸(35mg,0.083mmol)，3-氟-5-三氟甲基-苄胺(40mg,0.2mmol)，N，N-二异丙乙胺(130mg,1mmol)于DMF(5mL)的混合物中加入HATU(60mg,0.15mmol)。所得溶液在室温下搅拌1小时。反应混合物用水(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(25mL)萃取，用盐水(25mL)洗涤。有机层真空浓缩，残余物通过制备型TLC(75％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化得到50mg酯中间体。将其溶于MeOH(5mL)和水(2mL)中再用LiOH一水合物(210mg，5mmol)处理。所得混合物在60℃下搅拌3小时，用2N HCl稀释并用10％MeOH的CH2Cl2萃取并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化得到50mg的灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.87(t,,J＝6.3Hz,1H),7.79(dd,J＝2.4,6.9Hz,1H),7.53-7.32(m,3H),7.20(dd,,J＝8.5,10.6Hz,1H),4.98-4.90(m,1H),4.66(dd,,J＝7.0,15.6Hz,1H),4.36(dd,,J＝5.4,15.6Hz,1H),4.23-4.15(m,1H),3.69-3.52(m,3H),3.44-3.22(m,3H),3.22-3.10(m,1H),2.87(t,J＝12.0Hz,1H),2.70-2.60(m,1H),2.54(dt,J＝3.9,11.8Hz,1H),2.30-2.20(m,1H),2.10-1.86(m,3H),1.75-1.57(m,2H),1.17-1.05(m,1H),0.78(d,J＝6.5Hz,3H),0.70-0.46(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C30H34F5N2O4[M+H]+581.2,实测值581.4。
实施例10：
3-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[4-[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-羰基]四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000601
步骤a：向1-溴-3-氟-5-(三氟甲基)苯(1.0g,4.1mmol)，哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.0g,5.4mmol)和Cs2CO3(2.4g,7.4mmol)于p-二噁烷(10mL)中的溶液中加入DavePhos(120mg，0.3mmol)。用氮气吹扫得到的混合物然后加热至100℃13小时。冷却至室温后，将反应混合物用EtOAc稀释并通过硅藻土过滤。滤液真空浓缩，残余物通过快速色谱法(2至25％乙酸乙酯的己烷作为洗脱剂)纯化得到中间体Boc-哌嗪。其溶于CH2Cl2(5mL)，并用4N HCl的二噁烷(6mL，24mmol)处理。在室温下搅拌3小时后，真空浓缩溶剂得到1.2g黄色固体状的1-(3-氟-5-(三氟甲基)苯基)哌嗪二盐酸盐，其直接用于下一步。MS:(ES)m/z计算值C11H13F4N2[M+H]+249.1,实测值249.1。
步骤b：向上面制备的哌嗪二盐酸盐(60mg,0.19mmol)，(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3R，4S)-4-(3-乙氧基羰基苯基)-3-甲基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸(75mg,0.18mmol)和N，N-二异丙基乙胺(130mg,1mmol)于DMF(5mL)的混合物中加入HATU(110mg,0.29mmol)。所得溶液在室温下搅拌1小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤。有机层真空浓缩，残余物通过制备型TLC(75％EtOAc的己烷作为洗脱剂)纯化得到15mg酯中间体。其溶于MeOH(5mL)和水(2mL)中，然后在室温下用LiOH一水合物(210mg，5mmol)处理2小时，用2NHCl稀释，用10％MeOH的CH2Cl2萃取并用MgSO4干燥。过滤并真空浓缩后，残余物经过反相HPLC(C18柱，含有0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱剂)纯化得到12mg的灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.97-7.85(m,2H),7.51-7.42(m,2H),7.08-6.94(m,2H),6.82(d,J＝13.7Hz,1H),4.38-4.30(m,2H),4.30-4.14(m,4H),3.90-3.55(m,5H),3.48-3.05(m,4H),2.92-2.82(m,1H),2.66-2.49(m,2H),2.27-1.98(m,4H),1.85-1.72(m,1H),1.60-1.50(m,1H),1.25-1.18(m,1H),0.95-0.82(m,1H),0.78(d,J＝6.5Hz,3H),0.74-0.60(m,2H),0.50-0.42(m,1H).MS:(ES)m/z计算值C33H40F4N3O4[M+H]+618.3,实测值618.3。
实施例11：
(2S，5R)-2-环丙基-N-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基]-5-[4-羟基-4-(3-吡啶基)-1-哌啶基]四氢吡喃-2-甲酰胺的合成
Figure BDA0001476504340000611
步骤a：向3-溴吡啶(1.58g，10mmol)在20mL THF中的-78℃溶液中加入BuLi(1.6M，6.25mL，10mmol)。所得的混合物在-78℃下搅拌20分钟。滴加1-Boc-4-哌啶酮(1.99g，10mmol)的THF(10mL)溶液。反应混合物经夜缓慢加热至室温。反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭，用醚(100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥。浓缩后，粗品通过硅胶色谱法(20％EtOAc的己烷)纯化得到无色油状物(1.5g,50％)，其溶于CH2Cl2(30mL)并冷却至0℃。加入2.0mL TFA，所得混合物在室温下搅拌4小时，然后减压浓缩，得到粘性油状物(2.1g，95％)，其不经进一步纯化即用于下一步。
步骤b：在室温下，将胺的TFA盐(202mg，0.5mmol)溶于1,2-二氯乙烷(2mL)中，随后加入iPr2NEt(130mg，1mmol)。所得的混合物在室温下搅拌30分钟。加入酮(104mg，0.3mmol)在1,2-二氯乙烷(1.0mL)中的溶液，然后加入NaBH(OAc)3(318mg，1.5mmol)。所得的混合物在室温下搅拌过夜。反应加入5mL NaHCO3水溶液淬灭并用30mL CH2Cl2萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥。浓缩后，通过反相制备型HPLC纯化粗品得到期望的产品(12mg).1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ 8.75(s,1H),7.37(s,1H),7.22(d,J＝8.7Hz,2H),7.00–6.84(m,2H),4.69(dd,J＝15.6,7.1Hz,1H),4.42(dd,J＝15.6,5.6Hz,1H),3.91(ddd,J＝10.9,4.4,2.2Hz,1H),3.35(t,J＝10.7Hz,1H),3.08–2.68(m,4H),2.69–2.56(m,1H),2.50–1.96(m,6H),1.98–1.88(m,1H),1.75-1.69(m,2H),1.55–1.35(m,2H),1.12(tt,J＝8.5,5.5Hz,1H),0.61–0.35(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C27H32F4N3O3[M+H]+522.2,实测值522.2。
实施例12：
2-[3-[[[(2S，5R)-2-环丙基-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羰基]氨基]甲基]-5-(三氟甲基)苯氧基]醋酸的合成
Figure BDA0001476504340000621
步骤a：向3-溴-5-三氟甲基苯酚(7.2g，30mmol)于DMF(100mL)中的溶液中加入Zn(CN)2(3.51g，30mmol)和Pd(PPh3)4(3.5g，6mmol)。所得混合物在100℃下在氮气氛下搅拌4小时。加入EtOAc(250mL)并将混合物用水(2×50mL)和盐水(100mL)洗涤，然后用MgSO4干燥并减压浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(20％EtOA的己烷)纯化获得无色油状物(3.36g,60％)。
步骤b：向3-氰基-5-三氟甲基苯酚(1.87g，10mmol)的DMF(20mL)溶液中加入2-溴乙酸乙酯(2.5g，15mmol)，Cs2CO3(6.5g，20mmol)和NaI(1.5g，10mmol)。所得混合物在100℃下搅拌过夜，然后其冷却至室温。加入EtOAc(250mL)并将混合物用水(2×50mL)和盐水(100mL)洗涤，然后其用MgSO4干燥并减压浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(10％EtOA的己烷)纯化获得无色油状物(2.18g,80％)。
步骤c：向氰化物(1.35g，5mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中加入雷尼镍浆液(1mL)和NH4OH(2mL)。将得到的悬浮液在室温下在45psi氢气下搅拌4小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤，然后减压浓缩，得到浅蓝色油状物(1.1g),其不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤d：向(2S，5R)-2-环丙基-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸中间体(52mg，0.149mmol)的DMF(2mL)的溶液中加入来自步骤c的胺(100mg)，三乙胺(0.5ml)和HATU(190mg)。所得的混合物在室温下搅拌过夜。加入EtOAc(20mL)并将混合物用饱和NaHCO3水溶液(2×5mL)和盐水(5mL)洗涤。合并的有机相用Mg2SO4干燥并减压浓缩。残余物通过制备型TLC(100％EtOAc)纯化，得到期望的产品(35mg)。
步骤e:将酯(35mg)在THF(1mL)和1N LiOH水溶液(1mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。缓慢加入1N HCl水溶液以将混合物的pH调节至7.0，然后用2:1的CHCl3:iPrOH(20mL)萃取混合物。有机相用Mg2SO4干燥并减压浓缩。残余物用反相HPLC纯化得到期望的产品(15mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.51(brs,1H),7.40-7.30(m,2H),7.24-7.18(m,2H),7.02-6.95(m,2H),4.55,4.44(ABq,J＝15.4Hz,2H),3.94(ddd,J＝11.2,4.4,2.2Hz,1H),3.39(t,J＝11.0Hz,1H),3.00-2.90(m,4H),2.58-2.41(m,3H),2.39-2.24(m,2H),2.00-1.92(m,1H),1.82-1.60(m,4H),1.52(td,J＝13.5,3.7Hz,1H),1.40-1.26(m,1H),1.10-1.02(m,1H),0.70-0.64(m,1H),0.57-0.49(m,1H),0.46-0.30(m,3H).MS:(ES)m/z计算值C30H35F4N2O5[M+H]+579.2,实测值579.6。
(2S，5R)-2-环丙基-5-[4-(4-氟-3-甲氧基羰基-苯基)-1-哌啶基]四氢吡喃-2-甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000641
步骤a：将含有2-氟-5-哌啶-4-基-苯甲酸甲酯盐酸盐(5.0g，18mmol，1当量)和二异丙基乙胺(3.2mL，18.2mmol，1当量)的1,2-二氯乙烷(100mL)在回流下搅拌直至均匀。使该溶液冷却至室温，加入(2S)-2-环丙基-5-氧代-四氢-吡喃-2-羧酸苄酯(5.0g，18.2mmol，1当量)，随后加入NaBH(OAc)3(7.7g，36.4mmol，2当量)。其在室温下搅拌2天，然后用饱和NaHCO3水溶液中和。有机层分离，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到粗品。
步骤b：向来自步骤a的粗品(18.2mmol)中加入MeOH(100mL)和10％Pd/C(50％湿，7.7g，3.6mmol，0.2当量)。其在充满H2的气球下搅拌。完成后，通过硅藻土过滤反应物，滤饼用1:1的MeOH:AcOH洗涤。随后浓缩溶液。残余物用丙酮稀释。过滤所得的白色沉淀得到纯顺式非对映异构体的(2S，5R)-2-环丙基-5-[4-(4-氟-3-甲氧基羰基-苯基)-1-哌啶基]四氢吡喃-2-羧酸(1.1g，15％)。
5-氯-7-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢异喹啉的合成
Figure BDA0001476504340000642
步骤a：向0℃的2-氯-4-三氟甲基苯甲醛(1.8g，9mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中加入CH3NO2(610mg，10mmol)。逐滴加入NaOH水溶液(10M，1mL)，并将所得混合物在室温下搅拌1小时。反应物用1N HCl(10mL)淬灭，用EtOAc(200mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，然后用MgSO4干燥并减压浓缩得到无色油状物,其不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤b：将前面步骤得到的油状物溶于CH2Cl2(20mL)，将溶液冷却至0℃，然后加入三乙胺(3.3g，30mmol)。逐滴加入MsCl(3.42g，30mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌30分钟，然后其用CH2Cl2(200mL)稀释。合并的有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，然后其用MgSO4干燥并减压浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(5％EtOAc的己烷)纯化得到1.35g黄色固体状的期望化合物。
步骤c：向上述步骤的产物(625mg，2.5mmol)在THF(20mL)中的0℃溶液中滴加LiAlH4的THF溶液(1M，8mL)。所得混合物升温至50℃搅拌五小时。将混合物冷却至0℃并缓慢用水淬灭，随后通过硅藻土垫过滤并用MTBE洗涤。将滤液干燥并浓缩得到无色油状物,其用于下一步。
步骤d：将来自步骤c的油溶于CH2Cl2(20mL)中并将溶液冷却至0℃。滴加三氟乙酸酐(630mg，3mmol)，随后在室温下搅拌1小时。混合物用CH2Cl2(100mL)稀释并用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，然后其用MgSO4干燥并减压浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(10％EtOAc的己烷)纯化得到600mg白色固体状的期望化合物。
步骤e:向来自前一步骤的TFA-保护的胺(1.0g，3.13mmol)在H2SO4(4mL)和HOAc(8mL)混合物中的溶液中加入多聚甲醛(290mg)。所得混合物在室温下搅拌72小时，然后其用EtOAc(200mL)稀释。混合物用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(10％EtOAc的己烷)纯化得到300mg白色固体状的期望化合物。
步骤f：将来自步骤e的固体溶于MeOH(6mL)和水(2mL)的混合物中，然后加入K2CO3(300mg)。所得的混合物在室温下搅拌过夜。加入200mL的CHCl3：iPrOH(2:1)，分离有机物，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。该残余物通过硅胶色谱法(50％EtOAc的己烷)纯化得到190mg无色油状的期望产品。
实施例13：
5-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-[5-氯-7-(三氟甲基)-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-羰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000661
步骤a：向酸中间体(52mg，0.149mmol)的DMF(2mL)溶液中加入胺(100mg)，三乙胺(0.5ml)和HATU(190mg)。所得的混合物在室温下搅拌过夜。加入EtOAc(20mL)并将混合物用饱和NaHCO3水溶液(2×5mL)和盐水(5mL)洗涤。合并的有机相用Mg2SO4干燥并减压浓缩。残余物通过制备型TLC(100％EtOAc)纯化，得到25mg期望产品。
步骤b：如前所述，步骤a所得产品用含有水性LiOH的THF处理，得到最终产物(12mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.43-7.40(m,1H),7.34-7.26(m,1H),7.20-7.14(m,1H),7.04-6.96(m,2H),5.49-5.16(m,1H),4.85-4.52(m,1H),4.25-3.96(m,2H),3.30-3.18(m,1H),3.12-2.85(m,4H),2.59-2.38(m,3H),2.36-2.19(m,2H),2.09-1.97(m,1H),1.85-1.74(m,2H),1.73-1.58(m,2H),1.56-1.38(m,1H),1.34-1.27(m,1H),1.23-0.97(m,1H),0.78(d,J＝6.5Hz,3H),0.76-0.20(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C32H36F4ClN2O4[M+H]+623.2,实测值623.1。
实施例14：
3-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-[5-氯-7-(三氟甲基)-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-羰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-4-哌啶基]苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000671
步骤a：酸中间体(52mg，0.149mmol)的DMF(2mL)的溶液中加入胺(100mg)，三乙胺(0.5ml)和HATU(190mg)。所得的混合物在室温下搅拌过夜。加入EtOAc(20mL)，混合物用饱和NaHCO3水溶液(2×5mL)和盐水(5mL)洗涤。合并的有机相用Mg2SO4干燥并减压浓缩。残余物通过制备型TLC(100％EtOAc)纯化，得到25mg期望产品。
步骤b：如前所述，步骤a所得产品含有水性LiOH的THF处理，得到最终产物(12mg)。1H NMR 1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.41-7.38(m,2H),7.34-7.26(m,1H),7.20-7.14(m,1H),7.04-6.96(m,2H),5.49-5.16(m,1H),4.85-4.52(m,1H),4.25-3.96(m,2H),3.30-3.18(m,1H),3.12-2.85(m,4H),2.59-2.38(m,3H),2.36-2.19(m,2H),2.09-1.97(m,1H),1.85-1.74(m,2H),1.73-1.58(m,2H),1.56-1.38(m,1H),1.34-1.27(m,1H),1.23-0.97(m,1H),0.78(d,J＝6.5Hz,3H),0.76-0.20(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C32H37F3ClN2O4[M+H]+605.2,实测值605.1。
实施例15：
N-[[3,5-双(三氟甲基)苯基]甲基]-5-螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-基-四氢吡喃-2-甲酰胺的合成
Figure BDA0001476504340000681
步骤a：将5-羟基四氢吡喃-2-羧酸乙酯(2.0g，11.5mmol)溶于无水CH2Cl2(80mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(7.3g，17.2mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后加入10％Na2S2O3溶液(50mL)和饱和NaHCO3(50mL)。混合物搅拌15分钟，分离有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物用Et2O稀释，滤出白色固体，蒸发滤液，得到黄色油状的粗产物(1.5g，76％)。
步骤b：向4-螺茚-哌啶盐酸盐(554mg，2.5mmol)在无水1,2-二氯乙烷(10mL)中的悬浮液中加入三乙胺(0.35mL，2.5mmol)，并将该混合物在室温下搅拌15分钟。加入来自步骤a的粗酮(400mg，2.3mmol)，然后加入固体NaBH(OAc)3(0.97g，4.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后加入H2O(10mL)和2M K2CO3(10mL)。分离有机层，水相进一步用CH2Cl2(2x15mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。该残余物通过柱色谱(硅胶，CH2Cl2→10％MeOH的CH2Cl2)纯化得到非对映体混合物的产物(460mg，59％)。MS:(ES)m/z计算值C21H28NO3[M+H]+342.2,实测值342.1。
步骤c：向3,5-双(三氟甲基)苯基)-甲胺盐酸盐(195.7mg，0.7mmol)在无水甲苯(1mL)中的悬浮液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.12mL，0.7mmol)，混合物在室温下搅拌15分钟。逐滴加入2M AlMe3(0.7mL，1.4mmol)，10分钟后，加入来自步骤b的酯(120mg，0.35mmol)于无水甲苯(2mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后加入H2O(5mL)和酒石酸钾(500mg)。分离有机层并将水相进一步用Et2O萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。残余物通过柱层析(硅胶，CH2Cl2→1：1的CH2Cl2:EtOAc)纯化，然后通过C18HPLC纯化，得到非对映体混合物的产物(75mg，33％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.83-7.71(m,3H),7.41-7.27(m,4H),7.05(t,J＝6.3Hz,1H),6.94-6.87(m,1H),6.74-6.66(m,1H),4.80-4.32(m,3H),4.21-3.92(m,1H),3.90-3.60(m,2H),3.27-2.89(m,6H),2.86-2.63(m,1H),2.58-2.38(m,1H),2.24-1.94(m,2H),1.72-1.47(m,2H).MS:(ES)m/z计算值C28H29F6N2O2[M+H]+539.2,实测值539.2。
实施例16：
(2S，5R)-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]-2-异丙基-N-[[5-(三氟甲基)-3-吡啶基]甲基]四氢吡喃-2-甲酰胺和(2R，5S)-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]-2-异丙基-N-[[5-(三氟甲基)-3-吡啶基]甲基]四氢吡喃-2-甲酰胺的合成
Figure BDA0001476504340000691
步骤a：将2-异丙基-3,4-二氢-2H-吡喃-2-羧酸乙酯(7.0g，35.0mmol)溶于无水THF(100mL)中并冷却至-10℃，然后滴加1M BH3的THF(75mL，75.0mmol)。将反应保持在4℃过夜，然后冷却至-10℃，缓慢加入NaOAc(5.7g，70mmol)的H2O(15mL)溶液。10分钟后，加入35％H2O2(10.2mL，105mmol)，将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应物用盐水(50mL)稀释，分离有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。残余物用Et2O(150mL)稀释，滤出白色固体，蒸发滤液，得到油状的粗产物(7.5g,98％)。
步骤b：进行类似于实施例15的氧化步骤，得到黄色油状物，96％。
步骤c：进行类似于实施例15的还原胺化步骤，得到非对映体混合物的产品(52％)。MS:(ES)m/z计算值C22H33FNO3[M+H]+378.2,实测值378.1。
步骤d：将来自步骤c的产物(4.6g，12.2mmol)溶于DMSO(25mL)中并加入KOtBu(3.4g，30.5mmol)。混合物在100℃下搅拌20分钟，然后冷却并用H2O(100mL)，AcOH(10mL)稀释，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。残余物用Et2O(50mL)稀释，滤出白色固体状产物((外消旋)-顺式非对映异构体)并真空干燥(600mg，14％)。MS:(ES)m/z计算值C20H29FNO3[M+H]+350.2,实测值350.1。
步骤e:向得自步骤d的酸(40mg，0.115mmol)，HATU(87mg，0.23mmol)于无水DMF(1mL)中的混合物中加入二异丙基乙基胺(0.1mL，0.575mmol)。混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入5-三氟甲基-吡啶-3-基)-甲基胺二盐酸盐(29mg，0.116mmol)。反应在室温下搅拌过夜，然后用H2O(8mL)稀释并用EtOAc(2×5mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。残余物通过制备型TLC(硅胶，2:8的己烷：EtOAc)纯化得到(外消旋)-顺式非对映异构体的产物(10mg，17％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.85-8.76(m,2H),8.14(brs,1H),7.28-7.13(m,2H),7.06-6.90(m,2H),4.54,4.49(ABq,J＝15.1Hz,2H),3.97(ddd,J＝11.3,4.6,2.4Hz,1H),3.35(t,J＝10.9Hz,1H),3.00-2.83(m,2H),2.57-2.21(m,5H),2.01-1.92(m,1H),1.88-1.58(m,5H),1.44(td,J＝13.2,3.6Hz,1H),1.36-1.23(m,1H),0.91(d,J＝6.9Hz,3H),0.83(d,J＝6.9Hz,3H).MS:(ES)m/z计算值C27H34F4N3O2[M+H]+508.3,实测值508.0。
实施例17：
(2S，5R)-2-环丙基-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]-N-[[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基]四氢吡喃-2-甲酰胺的合成
Figure BDA0001476504340000711
步骤a：向4-(4-氟苯基)哌啶(3.3g，13.9mmol)和(2S)-2-环丙基-5-氧代-四氢吡喃-2-羧酸苄酯(4.0g，14.6mmol)的无水1,2-二氯乙烷(100mL)的溶液中加入固体NaBH(OAc)3(5.9g，27.8mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后加入H2O(100mL)和2M K2CO3(10mL)。分离有机层，水相进一步用CH2Cl2(2x50mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物重新溶于MeOH(100mL)中，并在N2下加入10％Pd/C(50％湿)(3g，1.4mmol)。将反应混合物在H2气氛(气球)下剧烈搅拌过夜，然后通过硅藻土过滤并蒸发。残留物用丙酮(15mL)和Et2O(15mL)稀释。滤出白色固体产物，用Et2O(15mL)洗涤并真空干燥(850mg，15％)。MS:(ES)m/z计算值C20H27FNO3[M+H]+348.2,实测值348.4。
步骤b：进行类似于实施例16的酰胺偶联步骤，得到52％的淡黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.51(brs,1H),7.40-7.30(m,2H),7.24-7.18(m,2H),7.02-6.95(m,2H),4.55,4.44(ABq,J＝15.4Hz,2H),3.94(ddd,J＝11.2,4.4,2.2Hz,1H),3.39(t,J＝11.0Hz,1H),3.00-2.90(m,2H),2.58-2.41(m,3H),2.39-2.24(m,2H),2.00-1.92(m,1H),1.82-1.60(m,4H),1.52(td,J＝13.5,3.7Hz,1H),1.40-1.26(m,1H),1.10-1.02(m,1H),0.70-0.64(m,1H),0.57-0.49(m,1H),0.46-0.30(m,2H).MS:(ES)m/z计算值C28H32F5N2O2[M+H]+523.2,实测值523.0。
实施例18：
[(2S，5R)-2-环丙基-5-[4-(4-氟苯基)-1-哌啶基]四氢吡喃-2-基]-[5-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基]甲酮的合成
Figure BDA0001476504340000721
步骤a：通过类似于实施例16的酰胺偶联获得标题化合物(18％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.38(brs,1H),7.34-7.26(m,1H),7.25-7.14(m,2H),7.04-6.91(m,2H),5.49(brd,J＝17.4Hz,0.5H),5.16(brd,J＝17.3Hz,0.5H),4.85-4.52(m,1H),4.25-3.96(m,2H),3.30-3.18(m,1H),3.12-2.85(m,4H),2.59-2.38(m,3H),2.36-2.19(m,2H),2.09-1.97(m,1H),1.85-1.74(m,2H),1.73-1.58(m,2H),1.56-1.38(m,2H),1.34-1.27(m,1H),1.23-0.97(m,1H),0.76-0.20(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C30H34F5N2O2[M+H]+549.3,实测值549.0。
实施例19：
5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000731
步骤a：(3S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(10.0g，50.0mmol)和5-溴-2-氟-苯甲酸甲酯(11.6g，50mmol)于无水脱气的1,4-二噁烷(100mL)中加入无水Cs2CO3(24.4g，75.0mmol)，然后加入DaveP小时os(1.2g，3.0mmol)和Pd2(dba)3(2.3g，2.5mmol)。将反应混合物在N2气氛下搅拌过夜，然后冷却至室温,通过硅藻土过滤并蒸发。将残余物重新溶于EtOAc(200mL)中，用0.5M AcOH(2×100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗(3S)-4-(4-氟-3-甲氧基羰基-苯基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯溶于1,4-二噁烷(40mL)和含有4MHCl的1,4-二噁烷(40mL)中。反应混合物在室温下搅拌过夜，随后蒸发。将残余物用饱和NaHCO3(100mL)稀释并用EtOAc(2×100mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物(5g，40％)不经进一步纯化而使用。
步骤b：进行类似于实施例17的还原胺化步骤和酸合成。产物通过柱层析(硅胶，CH2Cl2→9：1的CH2Cl2:MeOH)获得黄色固体(32％)。MS:(ES)m/z计算值C22H30FN2O5[M+H]+421.2,实测值421.0。
步骤c：向得自步骤b的酸(150mg,0.36mmol)，HATU(205mg,0.54mmol)于无水DMF(3mL)中的混合物中加入二异丙基乙基胺(0.19mL,1.1mmol)。混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入2-叔丁氧基-5-(三氟甲基)苯基]甲胺(99mg，0.4mmol)。反应在室温下搅拌过夜，然后用H2O(8mL)稀释并用EtOAc(2×5mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物溶于1,4-二噁烷(2mL)和含有4M HCl的1,4-二噁烷(2mL)中并在室温搅拌1小时，然后蒸发。将残余物用饱和NaHCO3(10mL)稀释并用EtOAc(3×5mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物(170mg，80％)不经进一步纯化而使用。
步骤d：将来自步骤c的粗酚(170mg，0.29mmol)，多聚甲醛(900mg)和p-TsOH·H2O(300mg)于甲苯(10mL)中的混合物在回流下(迪恩·斯塔克(Dean Stark)装置)搅拌3小时，然后蒸发。将残余物用饱和NaHCO3(10mL)稀释并用EtOAc(3×5mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将粗品酯溶于MeOH(2mL)中并加入4M NaOH溶液(0.5mL，1:1的MeOH:H2O)。混合物在室温下搅拌2小时，然后加入AcOH(0.5mL)。反应混合物经C18HPLC纯化，得到产物(52mg，22％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.65(s,1H),7.54(s,1H),7.51-7.44(m,1H),7.35(s,1H),7.23-7.13(m,1H),7.04(d,J＝8.6Hz,1H),6.27-6.09(m,1H),5.73-5.57(m,1H),4.87-4.76(m,1H),4.48-4.33(m,1H),3.71-3.34(m,4H),3.28-2.85(m,5H),2.64(dt,J＝14.0,3.7Hz,1H),2.37-2.24(m,1H),1.82-1.67(m,1H),1.58(td,J＝13.2,3.6Hz,1H),1.35-1.14(m,2H),1.05-0.85(m,3H),0.72-0.36(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C30H34F4N3O5[M+H]+592.2,实测值592.0。
实施例20：
5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-氟-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000751
步骤a：向冷却至0℃的20％发烟H2SO4(100mL)中加入1,2-二氟-4-(三氟甲基)苯(52.0g，285.7mmol)，然后加入固体NIS(70.7g，314.3mmol)。将深棕色浓稠混合物在0℃下搅拌5分钟，然后缓慢升温至室温，并搅拌1小时。将反应混合物倒入冰中并用己烷(2×300mL)萃取。将合并的有机物用10％Na2SO3溶液，饱和NaHCO3洗涤，最后用盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到澄清油状的粗产物(74g，84％)。
步骤b：向冷却至0℃的来自步骤a的1,2-二氟-3-碘-5-(三氟甲基)苯(60.0g，194.8mmol)在无水DMF(200mL)中加入固体KOtBu(24.0g，214.3mmol)。反应在0℃下搅拌30分钟，然后用H2O(1L)稀释并用己烷(3×300mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶垫过滤纯化，并用10％EtOAc的己烷洗涤，得到黄色油状物(63g，89％)。
步骤c：将来自步骤b的2-叔丁氧基-1-氟-3-碘-5-(三氟甲基)苯(30.0g，82.9mmol)溶于无水脱气的DMF(200mL)中，然后加入Zn(CN)2(9.7g，82.9mmol)，随后加入Pd(PPh3)4(4.7g，4.1mmol)。反应混合物在100℃下在N2中搅拌过夜，然后用H2O(1L)稀释并用Et2O(2×300mL)萃取。将合并的有机物用1M NaOH(2×80mL)洗涤，然后水层用2M HCl中和并用Et2O(2×300mL)萃取。将合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物，为黄色油状物(11g，65％)，其未经进一步纯化而使用。
步骤d：将来自步骤c的3-氟-2-羟基-5-(三氟甲基)苄腈(11.0g，53.6mmol)溶于EtOH(50mL)并加入28％NH4OH(5mL)和雷尼镍2800于水中的浆液(3mL)。将反应混合物在H2(50psi)下在帕尔装置中摇动过夜，然后通过硅藻土过滤并蒸发。粗产物用Et2O洗涤，得到产物，为黄色固体(4.6g，41％)。MS:(ES)m/z计算值C8H8F4NO[M+H]+210.1,实测值210.2。
步骤e:类似于前述实施例获得标题化合物(27％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.69-7.60(m,1H),7.46-7.28(m,3H),7.18(t,J＝9.5Hz,1H),6.40-6.14(m,1H),5.85-5.63(m,1H),5.11-4.92(m,1H),4.51-4.31(m,1H),3.71-3.36(m,4H),3.28-2.74(m,6H),2.65(dt,J＝13.4,3.4Hz,1H),2.40-2.24(m,1H),1.83-1.67(m,1H),1.59(td,J＝13.5,3.8Hz,1H),1.32-1.11(m,1H),1.08-0.84(m,3H),0.77-0.27(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C30H33F5N3O5[M+H]+610.2,实测值610.0。
实施例21：
5-[1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-氟-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-4-哌啶基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000761
步骤a：类似于前述实施例获得标题化合物(42％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.80(dd,J＝6.9,2.5Hz,1H),7.53-7.43(m,1H),7.44-7.34(m,2H),7.17(dd,J＝10.6,8.5Hz,1H),6.25(brs,1H),5.72(brs,1H),5.12-4.91(m,2H),4.51-4.21(m,1H),3.75-3.51(m,3H),3.46-3.35(m,1H),3.23-3.08(m,2H),2.99-2.86(m,1H),2.70-2.56(m,1H),2.33-2.20(m,1H),2.20-2.06(m,2H),1.95-1.67(m,3H),1.68-1.53(m,1H),1.32-1.11(m,1H),0.79-0.22(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C30H32F5N2O5[M+H]+595.2,实测值595.0。
实施例22：
5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[4-氟-7-(三氟甲基)-3,4-二氢-1H-异喹啉-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000771
步骤a：将2-苄基-7-(三氟甲基)-1,3-二氢异喹啉-4-酮(3.0g，8.8mmol)溶于AcOH(40mL)并在N2下加入10％Pd/C(50％湿)(1.9g，0.9mmol)。将反应混合物在H2气氛(气球)下剧烈搅拌过夜，然后通过硅藻土过滤并蒸发。将残余物用CH3CN和Et2O洗涤，得到淡绿色固体(2g，90％)。MS:(ES)m/z计算值C10H11F3NO[M+H]+218.1,实测值218.0。
步骤b：进行类似于前述实施例的酰胺偶联步骤(53％)。MS:(ES)m/z计算值C32H38F4N3O5[M+H]+620.3,实测值620.0。
步骤c：向冷却至-78℃的来自步骤b的粗品醇(111mg，0.18mmol)的无水CH2Cl2(5mL)溶液中加入(二乙基氨基)三氟化硫(94μL,0.72mmol)，并将反应物在-78℃下搅拌1小时。加入MeOH(1mL)并蒸发溶剂。将残余物溶于MeOH(1mL)中并加入4M NaOH溶液(1mL，1:1的MeOH:H2O)。混合物在室温下搅拌1小时，然后加入AcOH(0.5mL)。反应混合物经C18HPLC纯化，得到产物(15mg，10％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.73-7.63(m,4H),7.42-7.29(m,1H),7.22-7.12(m,1H),5.94-5.58(m,2H),5.52-5.25(m,1H),4.50-4.22(m,1H),3.80-3.36(m,3H),3.26-2.80(m,7H),2.68-2.56(m,2H),2.35-2.20(m,1H),1.86-1.46(m,2H),1.35-0.30(m,8H).MS:(ES)m/z计算值C31H35F5N3O4[M+H]+608.3,实测值608.0。
2-氟-5-[[(3R)-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸甲酯的合成
Figure BDA0001476504340000781
步骤a：向5-溴-2-氟-苯甲酸(6.38g，29.1mmol，1当量)中加入亚硫酰氯(10mL，290mmol，10当量)。混合物在80℃下搅拌直至完成，然后浓缩。加入K2CO3(10.87g，78.6mmol，2.7当量)，然后加入MeOH(30mL)。该溶液在室温下搅拌。将反应物过滤并将固体用CH2Cl2冲洗。然后将有机相用H2O洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到产物(3.29g，14.1mmol，49％)。
步骤b：向5-溴-2-氟-苯甲酸甲酯(652mg，2.80mmol，1当量)中加入Cs2CO3(2.34g，7.18mmol，2.5当量)，随后加入2-二环己基膦基-2'-(N，N-二甲基氨基)联苯(132mg，0.335mmol，0.12当量)，二噁烷(6mL)和(R)-3-氨基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.695mL，3.37mmol，1.2当量)。N2鼓泡通过混合物5分钟，然后将Pd2(dba)3加入到反应中，N2再次鼓泡通过混合物5分钟。然后将反应物加热至90℃2天。使反应冷却至室温，然后用CH2Cl2稀释，用H2O(3×20mL)洗涤，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。其通过硅胶色谱法(己烷/EtOAc)纯化，得到产物(328mg,0.969mmol,35％)。
步骤c：向(R)-3-(4-氟-3-甲氧基羰基-苯基氨基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(328mg，0.969mmol)中加入CH2Cl2(1mL)，然后加入含有4N HCl的二噁烷(1mL，4mmol)。将其搅拌过夜，然后浓缩。将残余物在饱和NaHCO3和EtOAc之间分配。分离各层，水层用2:1的CHCl3:iPrOH(5x)萃取。然后用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到(R)-2-氟-5-(吡咯烷-3-基氨基)-苯甲酸甲酯(216mg)。
实施例23：
5-[[(3R)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]吡咯烷-3-基]氨基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000791
步骤a：向(2S)-2-环丙基-3,4-二氢吡喃-2-甲酸(6.5g，38.9mmol)和HATU(16.3g，42.8mmol)在无水DMF(80mL)中的混合物中加入二异丙基乙胺(13.5mL，77.8mmol)，并将混合物在室温下搅拌15分钟。然后加入2-叔丁氧基-5-(三氟甲基)苯基]甲胺(10.5g，42.8mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液，并将反应在室温下搅拌1天。其用H2O(600mL)稀释并用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(4×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物通过柱色谱(硅胶，己烷→9：1的己烷:EtOAc)获得白色固体(10.4g,67％)。
步骤b：将来自步骤a的产物(10.0g，25.2mmol)溶于无水THF(100mL)并冷却至-10℃，然后滴加含有1M BH3的THF(25.2mL，25.2mmol)。反应保持在4℃过夜，然后冷却至-10℃，缓慢加入含有NaOAc(4.1g,50.4mmol)的H2O(15mL)。10分钟后，加入35％H2O2(7.6mL,75.6mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。其用盐水(50mL)稀释，分离有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物用Et2O(150mL)稀释，滤出白色固体，蒸发滤液，得到油状的粗产物(10.5g,定量)。
步骤c：向步骤b的产物(10.4g，25.2mmol)中加入无水CH2Cl2(150mL)中的三乙胺(5.3mL，37.8mmol)和DMAP(0.3g，2.5mmol)。在室温下逐滴加入乙酸酐(3.6mL，37.8mmol)并将混合物搅拌1天。反应物用H2O(100mL)然后用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤，有机层用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物通过柱色谱法(硅胶，己烷→7：3的己烷:EtOAc)获得黄色稠油(8.0g,70％)。
步骤d：将来自步骤c的产物溶于无水1,4-二噁烷(10mL)和含有4M HCl的1,4-二噁烷(10mL)中；并在室温搅拌1小时，然后蒸发。将残余物溶于甲苯(10mL)中，然后加入多聚甲醛(20g)和p-TsOH·H2O(332mg)，将反应物在回流下(迪恩·斯塔克装置)搅拌2小时，然后蒸发。残余物通过柱色谱法(硅胶，己烷→7：3的己烷:EtOAc)获得黄色稠油(6.2g,86％)。
步骤e:将来自步骤d的产物(6.2g,15.0mmol)溶于MeOH(70mL)中并加入LiOH·H2O(3.1g,75mmol)于H2O(35mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用2M AcOH中和至pH＝7并蒸发。残余物用盐水(100mL)稀释，用CH2Cl2(3×50mL)萃取，合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到白色固体(5.3g，95％)。
步骤f：进行类似于前述实施例的氧化步骤，得到黄色油状物(定量)。
步骤g：向含有步骤f的产物(150mg，0.4mmol)和2-氟-5-[[(3R)-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸甲酯(98mg，0.4mmol)的无水1,2-二氯乙烷(5mL)中加入NaBH(OAc)3(174mg，0.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用饱和NaHCO3溶液(10mL)洗涤。分离有机层，用MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶于MeOH(1mL)中并加入4M NaOH溶液(1mL，1:1的MeOH:H2O)。混合物在室温下搅拌1小时，然后加入AcOH(0.5mL)。反应混合物经C18HPLC纯化，得到产物(39mg,12％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.57-7.40(m,2H),7.14-6.95(m,3H),6.86-6.77(m,1H),6.27-6.07(m,1H),5.69-5.54(m,1H),4.38-4.10(m,2H),3.57-3.34(m,2H),2.63-2.51(m,2H),2.29-2.16(m,2H),2.15-1.90(m,2H),1.80-1.62(m,2H),1.55(td,J＝13.3,3.8Hz,2H),1.30-1.09(m,2H),0.72-0.36(m,5H).MS:(ES)m/z计算值C29H32F4N3O5[M+H]+578.2,实测值577.9.
实施例24：
3-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]丙酸的合成
Figure BDA0001476504340000811
步骤a：类似于前述实施例但使用3-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]丙酸乙酯获得标题化合物(7.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.56-7.43(m,2H),7.05-6.97(m,1H),6.22-6.06(m,1H),5.80-5.61(m,1H),4.16-3.98(m,1H),3.60-3.39(m,2H),3.27-2.87(m,8H),2.79-2.57(m,4H),2.57-2.41(m,2H),2.05-1.91(m,1H),1.54-1.39(m,2H),1.32(d,J＝6.4Hz,3H),1.22-1.06(m,1H),0.70-0.33(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C26H35F3N3O5[M+H]+526.3,实测值526.0.
实施例25：
5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-乙氧基-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000821
步骤a：向2-叔丁氧基-5-(三氟甲基)苯基]甲胺(4.0g，16.2mmol)在TFA(20mL)中的溶液中加入N-碘代琥珀酰胺(4.4g，19.4mmol)，反应在室温搅拌30分钟。将其蒸发，然后将残余物溶于EtOAc(250mL)中并用饱和NaHCO3溶液(50mL)和随后的10％Na2SO3(50mL)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到黄色固体(4.8g，93％)。
步骤b：类似于前述实施例进行步骤b，得到黄色固体(90％)。MS:(ES)m/z计算值C31H35F4IN3O5[M+H]+732.2,实测值732.2.
步骤c：将来自步骤b的产物(100mg，0.14mmol)，1,10-菲咯啉(13mg，0.07mmol)，CuI(13mg，0.07mmol)和Cs2CO3(91mg，0.28mmol)置于微波瓶中，用无水EtOH(3mL)稀释。反应在微波反应器中在110℃下进行1小时，然后加入AcOH(1mL)，反应混合物通过C18HPLC纯化，得到产物(12mg，10％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.78-7.59(m,1H),7.45-7.27(m,1H),7.25-7.03(m,3H),6.32-6.15(m,1H),5.69-5.51(m,1H),4.83-4.72(m,1H),4.51-4.34(m,1H),4.10(q,J＝7.0Hz,2H),3.70-3.36(m,4H),3.27-2.82(m,5H),2.64(dt,J＝13.7,3.6Hz,1H),2.37-2.25(m,1H),1.83-1.66(m,1H),1.59(td,J＝13.4,3.7Hz,1H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H),1.39-1.14(m,2H),1.07-0.85(m,3H),0.73-0.37(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C32H38F4N3O6[M+H]+636.3,实测值636.0。
3-[(3R，4S)-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸甲酯的合成
Figure BDA0001476504340000831
步骤a：向冰浴冷却的3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(189.2g，1.0mol)，梅尔达姆酸(144.1g，1.0mol)和DMAP(135.0g，1.1mol)的DMF(400mL)溶液中加入EDCI(191.7g，1.0mol)。所得的反应物在室温下搅拌过夜。反应用200mL H2O淬灭。将所得混合物在机械搅拌下滴加到H2O(2.0L)中。过滤所得固体并用水充分洗涤至pH7，得到产物(283g，90％收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ 4.9(bs,1H),3.55(q,2H),3.45-3.25(t,3H),1.75(s,6H),1.4(s,9H).
步骤b：将3-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁酯(100g，317.46mmol)在甲苯(1500mL)中的溶液在100℃下加热4小时。将反应物冷却至室温，减压浓缩，得到粗产物。通过MTBE-研磨纯化得到产物(56g，83％产率)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ 4.1(t,2H),3.5(s,2H),2.6(t,2H),1.55(s,9H).
步骤c：将2,4-二氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(106.5g，500mmol)溶于CH2Cl2(1.0L)和HOAc(60mL)中。将所得溶液冷却至0℃，然后分批加入NaBH3CN(37.8g，600mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物冷却至0℃，缓慢加入NH4OH水溶液调节pH至9。将有机相分离并用盐水(2×400mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到粘稠油状产物。
步骤d：将来自步骤c的产物溶于CH2Cl2(1.0L)中并将溶液冷却至0℃。加入三乙胺(151.5g，1.5mol)且所得混合物在0℃下搅拌30分钟。逐滴加入乙酸酐(53.5g，525mmol)。在室温下搅拌过夜后，加入水(400ml)，分离有机层，用5％KHSO4溶液(3×300ml)洗涤。有机相用MgSO4干燥再减压浓缩。将残余物通过SiO2快速垫(500g)，并用20％EtOA的己烷洗涤。将合并的有机物浓缩，得到无色油状的产物(69g)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。
步骤e:将氯化(1,5-环辛二烯)铑(I)二聚体(493mg，1mmol)和(S)-BINAP(1.56g，2.5mmol)加入到3-甲氧基羰基苯基硼酸(9.0g，50mmol)在二噁烷(65mL)中的混合物中。所得混合物在室温下在氮气氛下搅拌1小时。将混合物冷却至0℃，加入H2O(10mL)，然后加入含有6-氧代-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(9.3g，47.5mmol)的二噁烷(5mL)和三乙胺(4.8g，47.5mmol)中。所得的混合物在室温下在氮气氛围下搅拌过夜。混合物用庚烷(65mL),MTBE(17.5mL)和H2O(50mL)稀释。将有机相分离并用H2O(50mL)洗涤。合并水相并用MTBE/庚烷(1：2,50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用MgSO4干燥。减压浓缩得到浅色固体，将其用10％EtOAc的己烷(100mL)洗涤，得到10g白色固体(化合物5，产率60％，99％ee)。％ee剂通过HPLC测量，使用手性柱(Regiscell 25cm×4.6mm，5微米球形)，使用30％iPrOH的己烷作为洗脱剂。
步骤f：将4-(3-甲氧基羰基-苯基)-2-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(40g，120mmol)溶于无水THF(120mL)中并将溶液冷却至-78℃。逐滴加入含有LiHMDS的THF(1M，122mL，122mmol)，将所得混合物在-78℃下搅拌3小时，然后在相同温度下滴加MeI(33.84g，240mmol)。混合物经过夜缓慢加热至室温。加入水(100mL)，分离有机层，用盐水洗涤并干燥。减压浓缩得到棕色固体，将其用10％EtOAc的己烷(400mL)重结晶，得到灰白色固体产物(35g，84％)。
步骤g：将4-(3-甲氧基羰基-苯基)-3-甲基-2-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.4g,30mmol)分批加入含有HCl的二噁烷(4N,20mL,80mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌2小时，然后减压浓缩，得到白色固体。
步骤h：将来自步骤g的产物溶于30mL无水THF中。将所得溶液冷却至-78℃，逐滴加入BH3·SMe2在THF中的溶液(2M，45mL，90mmol)。加入后，将混合物在室温下搅拌48小时，然后冷却至-78℃。小心加入MeOH(10mL)以淬灭反应。加入浓HCl(8mL)并将混合物在60℃下搅拌2小时。减压除去MeOH，残余物用水(20mL)稀释。所得的水性混合物用MTBE/庚烷(1：2,50mL)萃取。通过加入NH4OH水溶液将分离的水层调节至pH 9，接着用iPrOH：CHCl3(1：2,3×100mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，然后减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法(10％MeOH的CH2Cl2，加上1％NH4OH)纯化，得到所需无色油状的产物。
2-(氨基甲基)-4,6-双(三氟甲基)苯酚的合成
Figure BDA0001476504340000851
步骤a：将H2O(30mL)和H2SO4(30mL)的混合物在冰浴中冷却。经5分钟加入含有2-氯-3,5-双-三氟甲基苯胺(5.00g，19.0mmol，1当量)的MeCN(30mL)。将其搅拌10分钟，然后经5分钟滴加含有NaNO2(2.36g，34.2mmol，1.8当量)的H2O(17mL)，在此期间内部温度达到10℃。将其搅拌10分钟，然后倒入KI(11.0g，66.5mmol，3.5当量)于H2O(30mL)中的冰冷溶液。将其搅拌2小时，然后用CHCl3(60mL)稀释。分层，水层用CHCl3萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(2x)洗涤，然后用饱和Na2S2O3水溶液洗涤。然后将有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到浅棕色油状产物(6.58g，93％)。
步骤b：将2-氯-1-碘-3,5-双-三氟甲基-苯(11.8g，31.5mmol，1当量)溶于N-甲基吡咯烷酮(32mL)中，并加入CuCN(3.4g，38.2mmol，1.2当量)。将反应物加热至120℃经6小时。使反应冷却至室温，然后用H2O(100mL)和庚烷(100mL)稀释。然后通过硅藻土过滤，分层。有机层通过硅胶(10g)过滤用庚烷(50mL)洗脱。随后浓缩溶液，得到产物(6.6g，76％)。
步骤c：将2-氯-3,5-双-三氟甲基-苄腈(57.1g，209mmol，1当量)溶于THF(417mL)中并在冰浴中冷却。经10分钟分批加入NaOtBu(24.0g，250mmol，1.2当量)，保持内部温度低于8℃。30分钟后，使反应温热至室温，然后搅拌3小时。加入HCl水溶液(4N，627mL，2.51mol，12当量)并将其在室温下搅拌过夜。然后将反应物加热至50℃经2小时。将溶液浓缩，然后加入庚烷(400mL)。分层且有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得油用庚烷稀释至总重量为160g，然后冷却至-20℃。将其过滤并将固体用冷庚烷(60mL)洗涤，得到产物(23.6g，44％)。
步骤d：将2-羟基-3,5-双-三氟甲基-苄腈(2.79g，10.9mmol)溶于EtOH(50mL)和NH4OH(5mL)中。加入雷尼镍的水浆液(2.00mL)，并将反应在H2(40psi)下振荡3天。过滤反应物，用MeOH冲洗滤饼，然后浓缩合并的溶液。将所得残余物溶于MeOH中，加入含有HCl的Et2O(2M，6mL，12mmol)。将混合物浓缩，然后溶于EtOAc中。其用NH4OH洗涤，然后浓缩。所得固体用Et2O研磨，得到2-氨基甲基-4,6-双-三氟甲基-苯酚(1.55g，55％)。
实施例26：
3-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-[6,8-双(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000861
步骤a：向3-[(3R，4S)-3-甲基-4-哌啶基]苯甲酸酯(4.5g，19.3mmol)，(2S)-2-环丙基-5-氧代-四氢吡喃-2-羧酸苄酯(5.8mmol,21.2mmol)和三乙胺(5.4mL)的无水1,2-二氯乙烷(100mL)混合物中加入Na(OAc)3BH(8.2g，38.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用H2O(100mL)稀释，分离有机层。将水层用CH2Cl2(50mL)萃取，合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物溶于MeOH(100mL)中，并在N2下加入10％Pd/C(50％湿)(2.1g,1.0mmol)。将反应混合物在55psiH2下在帕尔装置中剧烈摇动过夜，然后通过硅藻土过滤并蒸发。残余物用丙酮(45mL)稀释，滤出产物，用丙酮(5mL)和Et2O(15mL)洗涤并真空干燥(2.4g，31％)。
步骤b：向得自步骤a的酸(2.2g,5.5mmol)，HATU(2.2g,5.8mmol)于无水DMF(30mL)中的混合物中加入二异丙基乙基胺(1.9mL,11.0mmol)。将混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入在无水DMF(10mL)中的2-(氨基甲基)-4,6-双(三氟甲基)苯酚(1.5g，5.8mmol)。将反应在室温下搅拌过夜，然后用H2O(300mL)稀释并用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机物用盐水(4×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物溶于甲苯(300mL)中并加入多聚甲醛(20g)、p-TsOH·H2O(2.1g，11mmol)和MsOH(0.7mL，11mmol)。将反应物在回流(迪恩·斯塔克装置)下搅拌5小时，然后冷却至室温，用饱和NaHCO3(200mL)稀释并用EtOAc(2×100mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗酯通过柱色谱(硅胶，己烷→1：1的己烷:EtOAc)获得白色固体(2.5g,70％)。MS:(ES)m/z计算值C33H37F6N2O5[M+H]+655.3,实测值655.5.
步骤c：用1M NaOH(40mL，95:5；MeOH:H2O)稀释来自步骤b的产物(2.5g，3.8mmol)并在40℃下搅拌5小时。加入AcOH(2.3mL，40mmol)并将混合物蒸发。残余物用H2O(200mL)稀释并用CH2Cl2(2x100mL)萃取。将合并的有机物用MgSO4干燥，过滤，并加入含有2M HCl的Et2O(5.7mL，11.4mmol)。将混合物蒸发，残余物用Et2O(50mL)洗涤，得到淡黄色固体，其为HCl盐形式的产物(2.15g，83％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.97-7.83(m,3H),7.81-7.73(m,1H),7.51-7.41(m,2H),6.21-5.89(m,2H),5.19-4.92(m,2H),4.45-4.32(m,1H),3.71-3.52(m,3H),3.48-3.35(m,1H),3.24-3.09(m,1H),2.85(t,J＝12.0Hz,1H),2.71-2.60(m,1H),2.60-2.48(m,1H),2.37-2.24(m,1H),2.23-2.08(m,1H),2.08-1.94(m,2H),1.89-1.70(m,1H),1.70-1.55(m,1H),1.24-1.13(m,1H),0.75(d,J＝6.6Hz,3H),0.72-0.28(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C32H35F6N2O5[M+H]+641.2,实测值641.5。
实施例27：
5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-[[3-氯-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000881
步骤a：在室温下，在20mL小瓶中，加入(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3S)-4-(4-氟-3-甲氧基羰基-苯基)-3-甲基-哌嗪-1-基]四氢吡喃-2-羧酸(39.7mg，0.094mmol)，然后加入HATU(38.2mg，0.100mmol)和DMF(0.5mL)。加入iPr2NEt(25μL,0.144mmol)后，将反应物搅拌1分钟，然后加入3-氯-5-三氟甲基苄胺(18μL,0.116mmol)。反应混合物搅拌过夜。反应物用乙酸乙酯(20mL)和水(10mL)稀释。分层，水层用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。用无水硫酸钠干燥后，将粗反应混合物减压浓缩。产物用快速硅胶色谱法，使用15％至33％乙酸乙酯的己烷的梯度来纯化。获得59％产率的5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-[[3-氯-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸甲酯(34.2mg)。
步骤b：5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-[[3-氯-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸甲酯(34.2mg，0.0559mmol)在室温下溶于THF(0.25mL)。加入1.5N氢氧化锂溶液(60μL,0.090mmol)，然后加入甲醇(60μL)。反应混合物搅拌过夜。粗产物用反相HPLC，使用含有0.01％三氟甲基乙酸的乙腈水溶液
Figure BDA0001476504340000882
梯度来纯化。去除溶剂后，获得5-[(2S)-4-[(3R，6S)-6-[[3-氯-5-(三氟甲基)苯基]甲基氨基甲酰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-氟-苯甲酸，为双TFA盐(39.0mg，84％收率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ 8.85(t,J＝6.3Hz,1H),7.71(br,1H),7.63(d,J＝16Hz,1H),7.61(s,1H),7.40(br,1H),7.22-7.17(m,1H),4.84-4.90(m,1H),4.70(dd,J＝15.5,7.1Hz,1H),4.32(dd,J＝15.6,5.3Hz,1H),4.24(d,J＝11.3Hz,1H),3.62(t,J＝10.8Hz,1H),3.00–3.62(m,8H),2.74–2.58(m,1H),2.32-2.27(m,1H),1.79–1.52(m,2H),1.22–1.06(m,1H),0.99(br,3H),0.71(dt,J＝9.5,4.6Hz,1H),0.55(dt,J＝9.8,5.4Hz,1H),0.47(ddq,J＝13.9,9.0,4.4Hz,1H).MS:(ES)m/z计算值C29H33ClF4N3O4[M+H]+598.2,实测值598.1。
实施例28：
(3S，4R)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-乙氧基-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基-(4-氟苯基)哌啶-3-羧酸的合成
Figure BDA0001476504340000891
步骤a：在室温下，20mL小瓶装有(2S，5R)-2-环丙基-5-[(3S，4R)-4-(4-氟苯基)-3-甲氧羰基-1-哌啶基]四氢吡喃-2-甲酸(360mg，0.887mmol)，HATU(356mg，0.936mmol)和DMF(3.5mL)。加入iPr2NEt(234μL,1.34mL)，反应混合物搅拌15分钟。部分反应混合物(1.56mL)被移出用于不同的反应。向剩余的反应混合物中加入2-羟基-3-碘-5-三氟甲基苄胺(188mg，0.593mmol)，将反应物搅拌5小时。另外加入2-羟基-3-碘-5-三氟甲基苄胺(34.1mg，0.108mmol)以完成反应。当全部原料消耗完后，用水(10mL)和乙酸乙酯(25mL)稀释反应物。分层，水层用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，然后减压除去溶剂。获得的粗产物直接用于下一步反应。
步骤b：将来自步骤a的粗产物(～0.5mmol)溶于甲苯(5mL)中。加入对甲苯磺酸一水合物(195mg，1.03mmol)，然后加入多聚甲醛(
Figure BDA0001476504340000892
5.71mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌。将升华的多聚甲醛从壁上刮下到反应混合物中，同时，加入更多的低聚甲醛(每10至20分钟一勺)。在100℃下加热的同时继续该过程，直至反应转化率达到60％以上(约5小时)。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)稀释。分离有机层并用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂后，使用硅胶色谱法纯化产物。使用17％至50％乙酸乙酯的己烷梯度洗脱化合物。该产物以69％的收率得到(247mg)。
步骤c：将前一步产物(97.5mg，0.136mmol)添加到微波容器，接着加入碳酸铯(89.5mg，0.275mmol)，1,10-菲咯啉(12.0mg，0.0666mmol)，碘化亚铜(I)(12.9mg，0.0677mmol)和乙醇(1mL)。反应混合物在微波下在100℃下照射45分钟。加入水(0.1mL)，并在100℃进一步照射10分钟。加入1N NaOH(0.1mL)后，反应物用二氯甲烷稀释，随后过滤不溶物质。将滤液浓缩并使用制备TLC，使用含有17％甲醇的乙酸乙酯作为洗脱剂进行纯化。所得的产物用反相HPLC进一步纯化得到作为TFA盐的(3S，4R)-1-[(3R，6S)-6-环丙基-6-[8-乙氧基-6-(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]四氢吡喃-3-基]-4-(4-氟苯基)哌啶-3-羧酸(13.0mg,16％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ 7.23–7.28(m,2H),7.02–7.15(m,4H),6.24-6.21(m,1H),5.63-5.59(m,1H),4.94-4.89(m,1H),4.43-4.35(m,1H),4.10(q,J＝7.0Hz,2H),3.73–3.78(m,1H),3.62–3.67(m,1H),3.53–3.60(m,1H),3.46–3.49(m,1H),3.12–3.37(m,3H),3.04–3.10(m,1H),2.92–2.99(m,1H),2.67-2.61(m,1H),2.30-2.24(m,1H),2.11-2.04(m,1H),1.90–1.97(m,1H),1.69–1.79(m,1H),1.56–1.65(m,1H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H),1.20–1.26(m,1H),0.59–0.70(m,3H),0.44–0.49(m,1H).MS:(ES)m/z计算值C32H37F4N2O6[M+H]+621.3,实测值621.4.
实施例29：
5-[(3R，4S)-1-[(3R，6S)-6-[6,8-双(三氟甲基)-2,4-二氢-1,3-苯并噁嗪-3-羰基]-6-环丙基-四氢吡喃-3-基]-3-甲基-4-哌啶基]-2-氟苯甲酸的合成
Figure BDA0001476504340000901
步骤a：向酸(2.2g,5.5mmol)，HATU(2.2g,5.8mmol)于无水DMF(30mL)中的混合物中，加入二异丙基乙基胺(1.9mL,11.0mmol)。将混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入在无水DMF(10mL)中的2-(氨基甲基)-4,6-双(三氟甲基)苯酚(1.5g，5.8mmol)。将反应在室温下搅拌过夜，然后用H2O(300mL)稀释并用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机物用盐水(4×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发。将残余物溶于甲苯(300mL)中并加入多聚甲醛(20g)，p-TsOHxH2O(2.1g，11mmol)和MsOH(0.7mL，11mmol)。将反应物在回流(迪恩·斯塔克装置)下搅拌5小时，然后冷却至室温，用饱和NaHCO3(200mL)稀释并用EtOAc(2×100mL)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗酯通过柱色谱法(硅胶，己烷→1：1的己烷:EtOAc)获得白色固体(2.5g,70％)。
步骤b：用1N NaOH(40mL，95:5；MeOH:H2O)稀释来自步骤a的产物(2.5g，3.8mmol)，并在40℃搅拌5小时。加入AcOH(2.3mL,40mmol)并蒸发混合物。残余物用H2O(200mL)稀释并用CH2Cl2(2x100mL)萃取。将合并的有机物用MgSO4干燥，过滤，并加入含有2M HCl的Et2O(5.7mL，11.4mmol)。将混合物蒸发，残余物用Et2O(50mL)洗涤，得到淡黄色固体状的产物的HCl盐(2.15g，83％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.97-7.83(m,2H),7.79-7.70(m,1H),7.51-7.41(m,2H),6.21-5.81(m,2H),5.19-4.92(m,2H),4.45-4.32(m,1H),3.71-3.52(m,3H),3.48-3.35(m,1H),3.24-3.09(m,1H),2.85(t,J＝12.0Hz,1H),2.71-2.60(m,1H),2.60-2.48(m,1H),2.37-2.24(m,1H),2.23-2.08(m,1H),2.08-1.94(m,2H),1.89-1.70(m,1H),1.70-1.55(m,1H),1.24-1.13(m,1H),0.75(d,J＝6.6Hz,3H),0.72-0.28(m,4H).MS:(ES)m/z计算值C32H34F7N2O5[M+H]+659.2,实测值658.7。
生物实施例
体外测定
试剂
THP-1细胞从美国典型培养物保藏中心(马纳萨斯，VA)获得，并在补充10％胎牛血清(FCS)的RPMI组织培养基中在37℃下在加湿的5％CO2培养箱中培养。重组人趋化因子蛋白MCP-1自R&D公司(明尼阿波利斯，MN)获得。125I标记的MCP-1蛋白质得自安玛西亚(Amersham)(皮斯卡塔韦，NJ)。
Figure BDA0001476504340000911
趋化微室购自神经探针(Neuro Probe)公司(盖瑟斯堡，MD)。
Figure BDA0001476504340000912
细胞增殖试剂盒购自分子探针公司(尤金，俄勒冈州)。钙指示剂染料Fluo-4AM购自分子器件公司(山景城，CA)。
配体结合测定
配体结合测定可以用于测定潜在的CCR2拮抗剂阻断CCR2与其配体MCP-1之间的相互作用的能力。表达CCR2的THP-1细胞被离心并重悬于测定缓冲液(20mM HEPES pH 7.1，140mM NaCl，1mM CaCl2，5mM MgCl2和0.2％牛血清白蛋白)中至浓度为2.2×105个细胞/mL。结合分析如下设置。首先，将0.09mL细胞(1×105THP-1细胞/孔)添加到含有化合物的测定板中，给出用于筛选的每种化合物的～2-10uM的最终浓度(或化合物IC50测定的剂量响应的一部分)。然后，加入0.09mL的125I标记的MCP-1(自安玛西亚获得；皮斯卡塔韦，NJ)在测定缓冲液中稀释至
Figure BDA0001476504340000921
的终浓度，产生
Figure BDA0001476504340000922
/孔，将平板密封并在振荡器平台上在4℃下温育约3小时。在真空细胞收集器(帕卡德仪器；梅里登，CT)上，将反应物抽吸到预先浸泡在0.3％聚乙烯亚胺(PEI)溶液中的GF/B玻璃滤器上。将闪烁液(50uL；微闪(Microscint)20，帕卡德仪器)加入到每个孔中，将板密封并在顶部计数闪烁计数器(TopCount scintillation counter)(帕卡德仪器)中测量放射性。用仅含有稀释剂(总计数)或过量MCP-1(1ug/mL，用于非特异性结合)的对照孔来计算化合物的总抑制百分比。采用GP公司(GraphPad,Inc.)(圣迭戈,Ca)的计算机程序Prism计算IC50值。IC50值是将标记的MCP-1与受体的结合降低50％所需的那些浓度。
钙通量测定
钙通量测定测量配体诱导的受体激活后细胞内钙的增加并可以在初次筛选之后用作二级分析。这样的测定可以在，例如，FLIPR机器(分子器件公司，山景城，CA)上进行。为了开始测定，趋化因子表达细胞(例如用于CCR2测定用的THP-1细胞)通过细胞悬浮液离心收获，并重悬为1.5x106个细胞/mL的HBSS(含有1％胎牛血清)中的。细胞之后用钙指示剂染料Fluo-4AM在37℃下温和振荡地标记45分钟。温育后，将细胞沉淀，用HBSS洗涤一次，并以1.6×106细胞/mL的密度重悬于相同的缓冲液中。将100微升标记的细胞与10uL适当浓度的测试化合物在测定板上混合。加入趋化因子蛋白质(MCP-1，终浓度为0.1nM用于CCR2测定)以激活受体。通过比较化合物处理和未处理细胞之间的钙信号来确定抑制程度。进一步通过使用绘制医学图表(Graphpad Prism)(GP软件公司，圣迭戈，CA)的非线性平方回归分析进行IC50计算。常规迁移测定
常规迁移测定用于确定潜在的受体拮抗剂阻断通过趋化因子(如CCR2)介导的迁移的效果。该测定通常采用有5-μm孔大小的聚碳酸酯膜的
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微室系统进行。为了开始这样的测定，通过在GS-6R贝克曼离心机上以1000RPM离心细胞悬浮液收获趋化因子表达细胞(例如用于CCR2测定的THP-1细胞)。将细胞沉淀物以10x106个细胞/mL重悬于趋化性缓冲液(含有0.1％BSA的HBSS)中用于CCR2测定。所需浓度的测试化合物通过在趋化性缓冲液中系列稀释从10mM储备溶液中制备。将等体积的细胞和化合物混合并在室温下温育15分钟。之后，20μL的混合物转移到迁移微室的多孔膜上，29μL趋化因子配体(用于CCR2测定的0.1nM趋化因子MCP-1蛋白)置于下室。随后在37℃下温育(对于CCR2，90分钟)，在此期间细胞相对于趋化因子梯度迁移，通过从过滤器顶部除去细胞滴液终止分析。为了定量迁移穿过膜的细胞，将5μL7X
Figure BDA0001476504340000931
溶液加入到下室中的每个孔中，并在Spectrafluor加荧光读板器(帝肯，达勒姆，NC)上测量荧光信号。通过比较化合物处理和未处理细胞之间的迁移信号来确定抑制程度。进一步通过使用绘制医学图表(GP软件公司，圣迭戈，CA)的非线性平方回归分析进行IC50计算。
体内效果
胶原诱导性关节炎大鼠模型中化合物的评价
可以进行关于II型胶原诱导的关节炎的17天研究，以评价本发明化合物对关节炎诱导的临床踝肿胀的作用。大鼠胶原诱导的关节炎是多关节炎的实验模型，其已被广泛用于许多抗关节炎药物的临床前试验(参见Trentham等，J.Exp.Med Med.146(3):857-868(1977),Bendele等,Toxicologic Pathol.27:134-142(1999),Bendele等人,ArthritisRheum.42:498-506(1999))。这种模型的特点是可靠的发作和稳定的发展，容易测量多关节炎症，显著的与关节翳形成和轻度至中度骨吸收相关的软骨破坏和骨膜骨增殖。雌性路易斯大鼠(大约0.2千克)被异氟烷麻醉，并在这个17天研究的第0天和第6天在尾部底部和背部两个部位注射含有2mg/mL牛II型胶原的弗氏不完全佐剂。化合物从第9天至第17天在合适的载体中以，例如，100mg/kg的剂量和1mL/kg的体积每天通过皮下注射给药。每天进行踝关节直径的卡尺测量，关节肿胀的减少作为功效的量度。
人类溃疡性结肠炎动物模型中化合物的评价
Panwala和同事们描述的鼠模型(Panwala等人,J Immunol.,161(10):5733-44(1998))涉及小鼠多重耐药基因(MDR)的基因缺失。MDR敲除小鼠(MDR-/-)当保持在特定的无病原体的设施条件下时容易发生严重的自发性肠道炎症。在MDR-/-小鼠中见到的肠道炎症具有与人类炎症性肠病(IBD)类似的病理并由Th1型T细胞浸润确定在大肠固有层中。
Powrie等在Int Immunol，5(11)：1461-71(1993)中描述了另一种用于IBD的鼠类模型，其中来自免疫活性小鼠的CD4+T细胞的子集(称为CD45RB(高))被纯化并过继转移到免疫缺陷小鼠(例如C.B-17SCID小鼠)中。用CD45RB高CD4+T细胞群恢复的动物发展出一种在结肠中有严重的单核细胞浸润，与人IBD在病理学上相似致命性消耗性疾病。
人类克罗恩病动物模型中化合物的评价
TNF ARE(-/-)模型。最近，Targan等人在N Engl J Med，337(15)：1029-35(1997)中用抗-TNFα抗体治疗的成功证实了TNF在人类克罗恩病中的作用。由于TNF基因(ARE-/-)基因改变而异常产生TNF-α的鼠发展出类似克罗恩样炎症性肠病(参见Kontoyiannis等，Immunity，10(3)：387-98(1999))。
SAMP/yit模型。该模型由Kosiewicz等在J Clin Invest，107(6)：695-702(2001)中描述。小鼠品系，SAMP/YIT，自发形成局限于回肠末端慢性炎症。所产生回肠炎的特点是活化的T淋巴细胞大量浸润到固有层中，与人类克罗恩病有非常相似之处。
在巯基乙酸酯诱导的腹膜炎症的小鼠模型中化合物的评价
进行巯基乙酸酯诱导的炎症的2天研究以评价测试化合物，化合物53(图1)的作用。这个模型的特点是可靠的发作和稳定的发展，容易测量的炎性细胞浸润。为诱导路易斯大鼠炎症性腹膜炎向腹膜内(i.p.)注入布鲁尔-巯基乙酸酯(1.0mL，4％的蒸馏水溶液)。在此注射之前，治疗组接受测试化合物4-氯-3-三氟甲基-N-[5-氯-2-(2-甲磺酰基-苯甲酰基)-吡啶-3-基]-苯磺酰胺，或载体以及对照组通过i.p.注射接受相同体积的PBS。2天后，用含有1mM EDTA的冰冷PBS进行腹腔灌洗。用细胞计数器(库尔特计数器；库尔特制药公司，帕洛阿尔托，CA)计数回收的细胞以及通过使用光散射特性的流式细胞仪鉴定单核细胞/巨噬细胞。
测试化合物显著和特异性地抑制在巯基乙酸酯注射后引起炎性巨噬细胞的数量。
细菌感染小鼠模型中化合物的评价
进行肺炎链球菌感染的1天研究以评价测试化合物的作用。该模型测量细菌感染以及在用活细菌培养物进行肺部感染后在动物中传播，通过炎性细胞浸润和评估细菌负荷测量。C57/B6小鼠在第0天经鼻内接种LD50 400 CFU。各组在细菌接种前1天以及整个研究中每天两次用化合物或载体对照处理。通过在24小时时在琼脂平板上铺板系列稀释的匀浆的肺组织并计数菌落测量细菌负担。
肺癌小鼠模型中化合物的评价
动物中的许多肿瘤模型是本领域已知的，并且可以用于评估实例的化合物。例如，在肺癌异种移植研究中，将A549肿瘤片段(30-40mg)植入裸鼠的皮下空间。允许肿瘤生长至大小大约150mg(100至200mg)，此时小鼠被纳入研究并开始治疗。用感兴趣的化合物或载体对照处理小鼠。可以用美法仑作为阳性对照(9mpk/剂量，ip给予，Q4Dx3)。每周用卡尺测量肿瘤两个维度两次，并使用长椭球(a x b2/2)的公式转换成肿瘤质量，其中a是较长维度，b是较短维度，并假设单位密度(1mm3＝1mg)。也可以每周测量体重两次以评估化合物给药的任何副作用。通过与载体处理的对照组相比，处理组的肿瘤生长的延迟来评估抗肿瘤活性。
胶质母细胞瘤小鼠模型中化合物的评价
动物中的许多肿瘤模型是本领域已知的，并且可以用于评估实例的化合物。例如，在鼠胶质母细胞瘤模型中，将1×106个U251MG细胞通过立体定向注射植入到裸鼠脑中。20天后，用1-15Gy辐射照射肿瘤。照射后，小鼠用化合物或载体对照处理(例如通过皮下，腹膜内，口服，肠胃外或其他途径)，使肿瘤发展。监测肿瘤生长和/或死亡率用于余下的研究。每周用卡尺测量肿瘤两个维度两次，并使用长椭球(a x b2/2)的公式转换成肿瘤质量，其中a是较长维度，b是较短维度，并假设单位密度(1mm3＝1mg)。也可以每周测量体重两次以评估化合物给药的任何副作用。通过与载体处理的对照组相比，处理组的肿瘤生长的延迟来评估抗肿瘤活性。
胰腺癌小鼠模型中化合物的评价
动物中的许多肿瘤模型是本领域已知的，并且可以用于评估实例的化合物。例如，在小鼠胰腺癌模型中，panco2细胞(NCI)原位植入C57bl/6小鼠的胰腺中。允许肿瘤发展三周，然后用化合物53(图1)或载体对照通过每天皮下注射一次，持续三周处理动物。通过分析肿瘤生长来评估化合物功效。用化合物化合物53(图1)处理的动物显示了比载体处理的动物显著更小的肿瘤。
多囊肾病小鼠模型中化合物的评价
在多囊性肾病小鼠模型Pkd1flox/flox：Pkhd1-Cre小鼠(杰克逊实验室，ME)中，由于人类PKD1基因的小鼠直向同源物的肾选择性遗传缺陷，这些小鼠自发地发展成多囊性肾病，其中的突变导致ADPKD最常见和最严重的形式。允许病症发展，并且在第10天用本发明的化合物或载体对照通过皮下注射每天一次处理动物，直至第26天。此时处死动物并进行肾脏质量，血尿素和肾囊肿计数。用化合物化合物53(图1)治疗时这些测量的改善测定为功效。
可以理解的是，本文描述的示例和实施例仅用于说明的目的，并且对于本领域技术人员而言，基于此的各种修改或改变是可以联想到的，并将包括在本申请的实质及范围和所附权利要求的范围内
为了所有目的，本文引用的所有出版物、专利和专利申请通过引用整体并入本文。

Claims (67)

1.具有下式的化合物
Figure FDA0002997392750000011
或其药学上可接受的盐；其中
A是C(R5)(R6)或N(R5)
下标m和n各自独立地为0至2的整数，并且m+n≤3；
R1选自下组：苯基、吡啶基、苯基-C1-4烷基、吡啶基-C1-4烷基和咪唑基-C1-4烷基其中所述苯基、吡啶基和咪唑基基团或部分任选地被1至3个Rx取代基取代；
R2选自下组：H和C1-8烷基；
或可选地，R1和R2和与其各自连接的氮原子结合形成选自下组的环部分：
Figure FDA0002997392750000012
其中–NR1R2任选地进一步被1至3个Rx取代基取代；
R3选自下组：H、C1-8烷基和C3-8环烷基；
R4选自下组：H、任选被1至2个Ry取代的甲基、和–CO2H；
R5选自下组：C1-8烷基、苯基、苯基-C1-4烷基、吡啶基、吡唑基、噻唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基和嘧啶基，其各自任选地被1至2个Rz取代基取代；
R6是选自下组：H和OH；
或可选地，R5和R6连接形成茚基；
各个Rx各自独立地选自下组：卤素、-CN、-Rc、-CO2Ra、-NRaRb、-ORa、-O-X1-CO2Ra、-X1-CO2Ra、-SF5和6元芳基，其中每个X1是C1-4亚烷基；每个Ra和Rb独立地选自氢、C1-8烷基和C1-8卤代烷基，或者当Ra和Rb与相同的氮原子连接时，可以与该氮原子结合形成具有0至1个额外的O作为环成员且任选地被氧代的五元或六元环；每个Rc独立地选自C1-8烷基和C1-8卤代烷基，且其中所述芳基任选被1-2个选自卤素、C1-4烷基、和C1-4卤代烷基的成员取代；
每个Ry为-ORd；其中每个Rd独立地选自氢和C1-8烷基；
每个Rz独立地选自下组：卤素、-CN、-CO2Rg、-CONRgRh、-ORg和四唑；其中每个Rg和Rh独立地选自氢和C1-8烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R3为选自下组的成员：H、甲基、乙基、丙基、丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基和环丁基甲基。
3.如权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述丙基选自下组：正丙基、和异丙基。
4.如权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述丁基选自下组：正丁基、异丁基、和仲丁基。
5.如权利要求1所述的化合物，其中m和n都为0。
6.如权利要求1所述的化合物，其中m和n都为1。
7.如权利要求1所述的化合物，其中m为1和n为0。
8.如权利要求1所述的化合物，其中m为1和n为2。
9.如权利要求1、2、3、4、5、6、7或8中的任意一项所述的化合物，其中具有顶点A的环由选自下组的通式代表：
Figure FDA0002997392750000021
10.如权利要求1所述的化合物，具有下式：
Figure FDA0002997392750000022
11.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000023
其中下标q是1至2的整数。
12.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000031
其中下标p是1至3的整数。
13.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000032
其中下标p是1至3的整数。
14.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000033
其中下标q是1至2的整数，并且下标p是1至3的整数。
15.如权利要求1或12中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000034
其中下标q是1至2的整数，并且下标p是1至3的整数。
16.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000035
其中下标q是1至2的整数。
17.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000041
其中下标q是1至2的整数，且下标p是1至3的整数。
18.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000042
其中下标q是1至2的整数，且下标p是1至3的整数。
19.如权利要求1中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000043
20.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000044
其中下标q是1至2的整数。
21.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000045
其中p是1至3的整数。
22.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000051
其中下标p是1至3的整数。
23.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000052
其中下标q是1至2的整数，且下标p是1至3的整数。
24.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000053
其中下标q是1至2的整数，且下标p是1至3的整数。
25.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000054
其中下标q是1至2的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其他立体异构体。
26.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000061
其中下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其他立体异构体。
27.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000062
其中下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其他立体异构体。
28.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000063
其中下标q是1至2的整数，下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其它立体异构体。
29.如权利要求1或10中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000064
其中下标q是1至2的整数，下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其它立体异构体。
30.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000071
其中所述化合物的至少90％不含其它立体异构体。
31.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000072
其中下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其他立体异构体。
32.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000073
其中下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其他立体异构体。
33.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000074
其中下标q是1至2的整数，下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其它立体异构体。
34.如权利要求1或19中的任意一项所述的化合物，如下式：
Figure FDA0002997392750000081
其中下标q是1至2的整数，下标p是1至3的整数，且其中所述化合物的至少90％不含其它立体异构体。
35.如权利要求1-8、10或19中的任意一项所述的化合物，其中-N(R1)(R2)选自下组：
Figure FDA0002997392750000091
36.如权利要求1-8、10或19中的任意一项所述的化合物，其中-N(R1)(R2)选自下组：
Figure FDA0002997392750000101
37.如权利要求1-8或19中的任意一项所述的化合物，其中-N(R1)(R2)选自下组：
Figure FDA0002997392750000111
38.如权利要求1-8或10中的任意一项所述的化合物，其中A是C(R5)(R6)，其中R5选自下组：苯基、苯基-C1-4烷基、吡啶基、吡唑基、噻唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基和嘧啶基，其中苯基、吡啶基、吡唑基、噻唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基或嘧啶基部分选自下组：
Figure FDA0002997392750000121
39.如权利要求38所述的化合物，其中R5选自下组：苯基、和苯基-C1-4烷基。
40.如权利要求38所述的化合物，其中R5选自下组：吡啶基、吡唑基、噻唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基和嘧啶基。
41.如权利要求1-8或19中的任意一项所述的化合物，其中A是N(R5)，其中R5选自下组：苯基、苯基-C1-4烷基、吡啶基、吡唑基、噻唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基和嘧啶基，其中所述苯基、吡啶基、吡唑基、噻唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基或嘧啶基部分选自下组：
Figure FDA0002997392750000131
42.如权利要求41所述的化合物，其中R5选自下组：苯基和苯基-C1-4烷基。
43.如权利要求41所述的化合物，其中R5选自下组：吡啶基、吡唑基、噻唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基和嘧啶基。
44.如权利要求1-8或19中的任意一项所述的化合物，其中A是N(R5)，其中R5选自下组：
Figure FDA0002997392750000141
45.如权利要求1所述的化合物，选自下组：
Figure FDA0002997392750000142
Figure FDA0002997392750000151
Figure FDA0002997392750000161
Figure FDA0002997392750000171
Figure FDA0002997392750000181
Figure FDA0002997392750000191
Figure FDA0002997392750000201
Figure FDA0002997392750000211
Figure FDA0002997392750000221
Figure FDA0002997392750000231
Figure FDA0002997392750000241
Figure FDA0002997392750000251
Figure FDA0002997392750000261
Figure FDA0002997392750000271
或其药学上可接受的盐。
46.一种如权利要求1所述的化合物，如下式所示
Figure FDA0002997392750000281
或其药学上可接受的盐。
47.一种如权利要求1所述的化合物，如下式所示
Figure FDA0002997392750000282
或其药学上可接受的盐。
48.一种如权利要求1所述的化合物，如下式所示
Figure FDA0002997392750000283
或其药学上可接受的盐。
49.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和如权利要求1-48中任意一项所述的化合物。
50.如权利要求49所述的药物组合物，还包含一种或多种另外的治疗化合物。
51.如权利要求50所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗化合物选自如下的一种或多种：Btk酪氨酸激酶抑制剂、Erbb2酪氨酸激酶受体抑制剂；Erbb4酪氨酸激酶受体抑制剂、mTOR抑制剂、胸苷酸合成酶抑制剂，EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂、表皮生长因子拮抗剂、Fyn酪氨酸激酶抑制剂，Kit酪氨酸激酶抑制剂、Lyn酪氨酸激酶抑制剂、NK细胞受体调节剂，PARP抑制剂、聚ADP核糖聚合酶抑制剂、半乳糖基转移酶调节剂、二氢嘧啶脱氢酶抑制剂、乳清酸磷酸核糖基转移酶抑制剂、端粒酶调节剂、粘蛋白抑制剂、促胰液素激动剂、TNF相关凋亡诱导配体调节剂、IL17基因刺激剂、白细胞介素17E配体、神经激肽受体激动剂、细胞周期蛋白G1抑制剂、检查点抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA4抑制剂、拓扑异构酶I抑制剂、Alk-5蛋白激酶抑制剂，结缔组织生长因子配体抑制剂、Notch-2受体拮抗剂、Notch-3受体拮抗剂、透明质酸酶刺激剂、MEK-1蛋白激酶抑制剂、MEK-2蛋白激酶抑制剂、GM-CSF受体调节剂；TNFα配体调节剂、间皮素调节剂、天冬酰胺酶刺激剂、胱天蛋白酶-3刺激剂；胱天蛋白酶-9刺激剂、PKN3基因抑制剂、刺猬蛋白抑制剂、平滑受体拮抗剂、AKT1基因抑制剂、DHFR抑制剂、胸苷激酶刺激剂、CD29调节剂、纤连蛋白调节剂、白细胞介素-2配体、丝氨酸蛋白酶抑制剂，D40LG基因刺激剂；TNFSF9基因刺激剂、2-酮戊二酸脱氢酶抑制剂、TGF-βII型受体拮抗剂、Erbb3酪氨酸激酶受体抑制剂、胆囊收缩素CCK2受体拮抗剂、维尔姆斯肿瘤蛋白质调节剂、Ras GTP酶调节剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、细胞周期蛋白-依赖性激酶4抑制剂A调节剂、雌激素受体β调节剂、4-1BB抑制剂、4-1BBL抑制剂、PD-L2抑制剂、B7-H3抑制剂、B7-H4抑制剂、BTLA抑制剂、HVEM抑制剂、TIM3抑制剂、GAL9抑制剂、LAG3抑制剂、VISTA抑制剂、KIR抑制剂、2B4抑制剂、CD160抑制剂、CD66e调节剂、血管紧张素II受体拮抗剂、结缔组织生长因子配体抑制剂、Jak1酪氨酸激酶抑制剂、Jak2酪氨酸激酶抑制剂、双重Jak1/Jak2酪氨酸激酶抑制剂、血管紧张素转化酶2刺激剂、生长激素受体拮抗剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2抑制剂、内皮素ET-A拮抗剂、盐皮质激素受体拮抗剂、内皮素ET-B拮抗剂、高级糖基化产物受体拮抗剂、促肾上腺皮质激素配体、法尼酯(Farnesoid)X受体激动剂、G蛋白偶联胆汁酸受体1激动剂、醛糖还原酶抑制剂、黄嘌呤氧化酶抑制剂、PPARγ激动剂、前列腺素受体拮抗剂、FGF受体拮抗剂、PDGF受体拮抗剂、TGFβ拮抗剂、p38MAP激酶抑制剂、VEGF-1受体拮抗剂、蛋白酪氨酸磷酸酶β抑制剂、Tek酪氨酸激酶受体刺激剂、PDE5抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂、ACE抑制剂、I-κB激酶抑制剂、NFE2L2基因刺激剂、核因子κB抑制剂、STAT3基因抑制剂、NADPH氧化酶1抑制剂、NADPH氧化酶4抑制剂、PDE4抑制剂、肾素抑制剂、MEKK-5蛋白激酶抑制剂、膜铜胺氧化酶抑制剂、整联蛋白α-V/β-3拮抗剂、胰岛素敏化剂、激肽释放酶1调节剂、环加氧酶1抑制剂和苯丙氨酸羟化酶刺激剂。
52.如权利要求51所述的药物组合物，所述聚ADP核糖聚合酶抑制剂包括：聚ADP核糖聚合酶1抑制剂、聚ADP核糖聚合酶2抑制剂、聚ADP核糖聚合酶3抑制剂，或其组合。
53.如权利要求51所述的药物组合物，所述粘蛋白抑制剂包括：粘蛋白1抑制剂。
54.如权利要求50所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗化合物选自如下的一种或多种：
巴维昔单抗、IMM-101、CAP1-6D、雷克辛(Rexin)-G、染料木素、CVac、MM-D37K、PCI-27483、TG-01、莫替司他(mocetinostat)、LOAd-703、CPI-613、乌帕姆诺斯特(upamostat)、CRS-207、诺瓦卡普(NovaCaps)、曲美替尼(trametinib)、Atu-027、索尼得吉(sonidegib)、GRASPA、特拉贝德森(trabedersen)、纳特莱泽派(nastorazepide)、树突状细胞免疫疗法(Vaccell)、奥戈伏单抗、伊斯蒂单抗(istiratumab)、雷法替尼(refametinib)、瑞格拉非尼、拉帕替尼、司美替尼、瑞卡帕布、佩拉雷奥雷派(pelareorep)、他雷单抗(tarextumab)、聚乙二醇化的透明质酸酶、瓦利替尼(varlitinib)、阿格马基因贝萨诺克(aglatimagenebesadenovec)、GBS-01、GI-4000、WF-10、高路瑟尼(galunisertib)、阿法替尼、RX-0201、FG-3019、帕妥珠单抗、DCVax-Direct、塞利那瑟(selinexor)、葡磷酰胺、维如利金、钇(90Y)西瓦图单抗特踹齐坦(clivatuzumab tetraxetan)、溴夫定、尼妥珠单抗、阿尔甘盼图赛-L(algenpantucel-L)、替加氟+吉莫斯特+氧嗪酸钾+亚叶酸钙、奥拉帕尼、依鲁替尼、吡柔比星、Rh-Apo2L、特脱莫肽(tertomotide)、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、马西替尼(masitinib)、雷克辛-G、丝裂霉素(mitomycin)、厄洛替尼、阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康、紫杉酚、干扰素、铂衍生物、紫杉烷、紫杉醇、长春花生物碱、长春碱、蒽环类、多柔比星、表鬼臼毒素类、依托泊苷、顺铂、雷帕霉素、氨甲喋呤、放线菌素D、多拉司他汀10(dolastati10)、秋水仙碱、吐根碱、三甲曲沙、氯苯氨啶、环孢素、柔红霉素、替尼泊苷、两性霉素、烷化剂、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶、喜树碱、顺铂、甲硝唑、格列卫、阿瓦斯汀、帕尼单抗、阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷、AZD9291、卡介苗活菌、贝伐单抗、氟尿嘧啶、蓓萨罗丁、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡普睾酮、卡培他滨、喜树碱、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、更生霉素、阿法达贝泊汀柔红霉素、地尼白(denileukin)、右雷佐生、多西他赛、多柔比星、盐酸阿霉素、屈他雄酮丙酸酯、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷磷酸盐、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷氟达拉滨、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥单抗、醋酸戈舍瑞林、组氨瑞林醋酸盐、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来那度胺、来曲唑、亚叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、6-MP、美司钠、氨甲喋呤、甲氧沙林、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、奈拉滨、诺非单抗(nofetumomab)、奥普瑞白介素、奥沙利铂、白蛋白结合型紫杉醇、帕利夫明、帕米膦酸二钠、培加酶、天门冬酰胺酶、培非司亭、培美曲塞二钠、喷司他丁、哌泊溴烷、普利霉素、卟菲尔钠、甲基苄肼、阿的平、拉布立酶、利妥昔单抗、洛昔替尼(rociletinib)、沙格司亭、索拉非尼、链脲霉素、马来酸舒尼替尼、滑石、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、VM-26、睾内脂、硫鸟嘌呤、6-TG、塞替派、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维A酸、ATRA、尿嘧啶芥末、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、唑来膦酸、唑来膦酸、派姆单抗、纳武单抗、IBI-308、mDX-400、BGB-108、MEDI-0680、SHR-1210、PF-06801591、PDR-001、GB-226、STI-1110、德瓦鲁单抗、阿替珠单抗、阿维单抗、BMS-936559、ALN-PDL、TSR-042、KD-033、CA-170、STI-1014、FOLFIRINOX、KY-1003、奥美沙坦酯、坎地沙坦、PBI-4050、巴瑞克替尼、GSK-2586881、氯沙坦、达格列净丙二醇、培维索孟、GR-MD-02、卡格列净、厄贝沙坦、FG-3019、阿曲生坦、菲涅任侬(finerenone)、斯帕森坦(sparsentan)、波生坦、去纤维蛋白多核苷酸、非马沙坦、阿泽里拉贡(azeliragon)、吡哆胺、促肾上腺皮质激素、INT-767、依帕司他、托匹司他、SER-150-DN、吡非尼酮、VEGFR-1mAb、AKB-9778、PF-489791、SHP-627、CS-3150、咪达普利、培哚普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、佐芬普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利、群多普利、西拉普利、福辛普利、雷米普利、甲基巴多索隆、厄贝沙坦+丙亢、GKT-831、MT-3995、TAK-648、TAK-272、GS-4997、DW-1029M、ASP-8232、VPI-2690B、DM-199、大黄酸、PHN-033、GLY-230、和沙丙蝶呤、舒洛地昔。
55.一种如权利要求1-48中任意一项所述的化合物或如权利要求49-54中任意一项所述的药物组合物在制备用于治疗患有或易患有涉及CCR2受体病理活性的疾病或病症的哺乳动物的药物中的用途。
56.如权利要求55所述的用途，其中所述疾病或病症是炎性疾病或病症，心血管或脑血管病症，自身免疫病症，癌症或实体瘤。
57.如权利要求55所述的用途，其中所述疾病或病症选自下组：肾病、中性粒细胞减少、中性粒细胞增多、蛋白尿、糖尿病性视网膜病变、局灶节段性肾小球硬化、肾小球硬化、过敏、纤维化、NASH、溶血性尿毒症综合征、非典型溶血性尿毒综合征(aHUS)、C3-肾小球病、C3-肾小球肾炎、致密沉积病、膜增生性肾小球肾炎、脓血症、感染性休克、阿尔茨海默氏病、多发性硬化症、中风、炎症性肠病、慢性阻塞性肺病、与烧伤相关的炎症、肺损伤、骨性关节炎、特应性皮炎、慢性荨麻疹、缺血再灌注损伤、急性呼吸窘迫综合征、全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征、组织移植排斥、移植物抗宿主病、移植器官超急性排斥反应、心肌梗塞、冠状动脉血栓形成、血管闭塞、手术后血管再闭塞、动脉粥样硬化、创伤性中枢神经系统损伤、缺血性心脏病、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、格林-巴利综合征、胰腺炎、狼疮性肾炎、狼疮性肾小球肾炎、银屑病、克罗恩病、血管炎、Anca血管炎、过敏性肠综合征、皮肌炎、多发性硬化症、支气管哮喘、天疱疮、类天疱疮、硬皮病、重症肌无力、自身免疫性溶血和血小板减少症状态、古德帕斯丘综合征、免疫血管炎、组织移植排斥、移植器官超急性排斥反应、黑色素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾细胞癌、结直肠癌、肝细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、食道癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、急性骨髓性白血病、白血病、与选自下组疾病相关的病理性后遗症：胰岛素依赖性糖尿病、糖尿病、海曼(Heyman)肾炎、膜性肾炎、肾小球肾炎、接触敏感性反应、以及血液与人造表面接触引起的炎症。
58.如权利要求57所述的用途，其特征在于，所述肾病包括：糖尿病肾病、狼疮性肾病、或其组合。
59.如权利要求55所述的用途，所述的药物能够进一步地与一种或多种另外的治疗化合物一起施用。
60.如权利要求59所述的用途，其中所述一种或多种另外的治疗化合物选自如下的一种或多种Btk酪氨酸激酶抑制剂、Erbb2酪氨酸激酶受体抑制剂；Erbb4酪氨酸激酶受体抑制剂、mTOR抑制剂、胸苷酸合成酶抑制剂，EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂、表皮生长因子拮抗剂、Fyn酪氨酸激酶抑制剂，Kit酪氨酸激酶抑制剂、Lyn酪氨酸激酶抑制剂、NK细胞受体调节剂，PDGF受体拮抗剂，PARP抑制剂、聚ADP核糖聚合酶抑制剂、半乳糖基转移酶调节剂、二氢嘧啶脱氢酶抑制剂、乳清酸磷酸核糖基转移酶抑制剂、端粒酶调节剂、粘蛋白抑制剂、促胰液素激动剂、TNF相关凋亡诱导配体调节剂、IL17基因刺激剂、白细胞介素17E配体、神经激肽受体激动剂、细胞周期蛋白G1抑制剂、检查点抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA4抑制剂、拓扑异构酶I抑制剂、Alk-5蛋白激酶抑制剂，结缔组织生长因子配体抑制剂、Notch-2受体拮抗剂、Notch-3受体拮抗剂、透明质酸酶刺激剂、MEK-1蛋白激酶抑制剂、MEK-2蛋白激酶抑制剂、GM-CSF受体调节剂；TNFα配体调节剂、间皮素调节剂、天冬酰胺酶刺激剂、胱天蛋白酶-3刺激剂；胱天蛋白酶-9刺激剂、PKN3基因抑制剂、刺猬蛋白抑制剂、平滑受体拮抗剂、AKT1基因抑制剂、DHFR抑制剂、胸苷激酶刺激剂、CD29调节剂、纤连蛋白调节剂、白细胞介素-2配体、丝氨酸蛋白酶抑制剂，D40LG基因刺激剂；TNFSF9基因刺激剂、2-酮戊二酸脱氢酶抑制剂、TGF-βII型受体拮抗剂、Erbb3酪氨酸激酶受体抑制剂、胆囊收缩素CCK2受体拮抗剂、维尔姆斯肿瘤蛋白质调节剂、Ras GTP酶调节剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、细胞周期蛋白-依赖性激酶4抑制剂A调节剂、雌激素受体β调节剂、4-1BB抑制剂、4-1BBL抑制剂、PD-L2抑制剂、B7-H3抑制剂、B7-H4抑制剂、BTLA抑制剂、HVEM抑制剂、TIM3抑制剂、GAL9抑制剂、LAG3抑制剂、VISTA抑制剂、KIR抑制剂、2B4抑制剂、CD160抑制剂、CD66e调节剂、血管紧张素II受体拮抗剂、结缔组织生长因子配体抑制剂、Jak1酪氨酸激酶抑制剂、Jak2酪氨酸激酶抑制剂、双重Jak1/Jak2酪氨酸激酶抑制剂、血管紧张素转化酶2刺激剂、生长激素受体拮抗剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2抑制剂、内皮素ET-A拮抗剂、盐皮质激素受体拮抗剂、内皮素ET-B拮抗剂、高级糖基化产物受体拮抗剂、促肾上腺皮质激素配体、法尼酯(Farnesoid)X受体激动剂、G蛋白偶联胆汁酸受体1激动剂、醛糖还原酶抑制剂、黄嘌呤氧化酶抑制剂、PPARγ激动剂、前列腺素受体拮抗剂、FGF受体拮抗剂、TGFβ拮抗剂、p38MAP激酶抑制剂、VEGF-1受体拮抗剂、蛋白酪氨酸磷酸酶β抑制剂、Tek酪氨酸激酶受体刺激剂、PDE5抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂、ACE抑制剂、I-κB激酶抑制剂、NFE2L2基因刺激剂、核因子κB抑制剂、STAT3基因抑制剂、NADPH氧化酶1抑制剂、NADPH氧化酶4抑制剂、PDE4抑制剂、肾素抑制剂、MEKK-5蛋白激酶抑制剂、膜铜胺氧化酶抑制剂、整联蛋白α-V/β-3拮抗剂、胰岛素敏化剂、激肽释放酶1调节剂、环加氧酶1抑制剂和苯丙氨酸羟化酶刺激剂。
61.如权利要求60所述的用途，其特征在于，所述粘蛋白抑制剂包括：粘蛋白1抑制剂。
62.如权利要求60所述的用途，其特征在于，所所述聚ADP核糖聚合酶抑制剂包括：聚ADP核糖聚合酶1抑制剂、聚ADP核糖聚合酶2抑制剂、聚ADP核糖聚合酶3抑制剂，或其组合。
63.如权利要求59所述的用途，其中所述一种或多种另外的治疗化合物选自如下的一种或多种：
巴维昔单抗、IMM-101、CAP1-6D、雷克辛(Rexin)-G、染料木素、CVac、MM-D37K、PCI-27483、TG-01、莫替司他(mocetinostat)、LOAd-703、CPI-613、乌帕姆诺斯特(upamostat)、CRS-207、诺瓦卡普(NovaCaps)、曲美替尼(trametinib)、Atu-027、索尼得吉(sonidegib)、GRASPA、特拉贝德森(trabedersen)、纳特莱泽派(nastorazepide)、树突状细胞免疫疗法(Vaccell)、奥戈伏单抗、伊斯蒂单抗(istiratumab)、雷法替尼(refametinib)、瑞格拉非尼、拉帕替尼、司美替尼、瑞卡帕布、佩拉雷奥雷派(pelareorep)、他雷单抗(tarextumab)、聚乙二醇化的透明质酸酶、瓦利替尼(varlitinib)、阿格马基因贝萨诺克(aglatimagenebesadenovec)、GBS-01、GI-4000、WF-10、高路瑟尼(galunisertib)、阿法替尼、RX-0201、FG-3019、帕妥珠单抗、DCVax-Direct、塞利那瑟(selinexor)、葡磷酰胺、维如利金、钇(90Y)西瓦图单抗特踹齐坦(clivatuzumab tetraxetan)、溴夫定、尼妥珠单抗、阿尔甘盼图赛-L(algenpantucel-L)、替加氟+吉莫斯特+氧嗪酸钾+亚叶酸钙、奥拉帕尼、依鲁替尼、吡柔比星、Rh-Apo2L、特脱莫肽(tertomotide)、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、替加氟+吉莫斯特+奥替拉西钾、马西替尼(masitinib)、雷克辛-G、丝裂霉素(mitomycin)、厄洛替尼、阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康(topotecan)、紫杉酚、干扰素、铂衍生物、紫杉烷、紫杉醇、长春花生物碱、长春碱、蒽环类、多柔比星、表鬼臼毒素类、依托泊苷、顺铂、雷帕霉素、氨甲喋呤、放线菌素D、多拉司他汀10(dolastati10)、秋水仙碱、吐根碱、三甲曲沙、氯苯氨啶、环孢素、柔红霉素、替尼泊苷、两性霉素、烷化剂、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶、喜树碱、顺铂、甲硝唑、格列卫、阿瓦斯汀、帕尼单抗、阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷、AZD9291、卡介苗活菌、贝伐单抗、氟尿嘧啶、蓓萨罗丁、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡普睾酮、卡培他滨、喜树碱、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、更生霉素、阿法达贝泊汀柔红霉素、地尼白(denileukin)、右雷佐生、多西他赛、多柔比星、盐酸阿霉素、屈他雄酮丙酸酯、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷磷酸盐、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷氟达拉滨、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥单抗、醋酸戈舍瑞林、组氨瑞林醋酸盐、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来那度胺、来曲唑、亚叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、6-MP、美司钠、氨甲喋呤、甲氧沙林、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、奈拉滨、诺非单抗(nofetumomab)、奥普瑞白介素、奥沙利铂、白蛋白结合型紫杉醇、帕利夫明、帕米膦酸二钠、培加酶、天门冬酰胺酶、培非司亭、培美曲塞二钠、喷司他丁、哌泊溴烷、普利霉素、卟菲尔钠、甲基苄肼、阿的平、拉布立酶、利妥昔单抗、洛昔替尼(rociletinib)、沙格司亭、索拉非尼、链脲霉素、马来酸舒尼替尼、滑石、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、VM-26、睾内脂、硫鸟嘌呤、6-TG、塞替派、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维A酸、ATRA、尿嘧啶芥末、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、唑来膦酸、唑来膦酸、派姆单抗、纳武单抗、IBI-308、mDX-400、BGB-108、MEDI-0680、SHR-1210、PF-06801591、PDR-001、GB-226、STI-1110、德瓦鲁单抗、阿替珠单抗、阿维单抗、BMS-936559、ALN-PDL、TSR-042、KD-033、CA-170、STI-1014、FOLFIRINOX、KY-1003、奥美沙坦酯、坎地沙坦、PBI-4050、巴瑞克替尼、GSK-2586881、氯沙坦、达格列净丙二醇、培维索孟、GR-MD-02、卡格列净、厄贝沙坦、FG-3019、阿曲生坦、菲涅任侬(finerenone)、斯帕森坦(sparsentan)、波生坦、去纤维蛋白多核苷酸、非马沙坦、阿泽里拉贡(azeliragon)、吡哆胺、促肾上腺皮质激素、INT-767、依帕司他、托匹司他、SER-150-DN、吡非尼酮、VEGFR-1mAb、AKB-9778、PF-489791、SHP-627、CS-3150、咪达普利、培哚普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、佐芬普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利、群多普利、西拉普利、福辛普利、雷米普利、甲基巴多索隆、厄贝沙坦+丙亢、GKT-831、MT-3995、TAK-648、TAK-272、GS-4997、DW-1029M、ASP-8232、VPI-2690B、DM-199、大黄酸、PHN-033、GLY-230、和沙丙蝶呤、舒洛地昔。
64.如权利要求55所述的用途，其特征在于，所述的肾病为糖尿病肾病。
65.如权利要求55所述的用途，其特征在于，所述的疾病或病症为胰腺癌。
66.如权利要求55所述的用途，其特征在于，所述的疾病或病症为NASH。
67.一种体外非治疗性地抑制CCR2受体介导的细胞趋化性的方法，其包括使哺乳动物白细胞与CCR2受体调节量的如权利要求1-48中任意一项所述的化合物或如权利要求49-54中任意一项所述的药物组合物接触。
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