CN108132326A - 一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法 - Google Patents

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张翼
李宝林
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Abstract

本发明涉及一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法。本发明所述方法包括以下步骤：使用水溶解小麦水解蛋白，料液比为0.1～0.3g/5mL；加入等体积的三氯乙酸溶液，混合均匀并静置一段时间，之后分离上清液并测定上清液中的蛋白含量，即为小麦水解蛋白中酸溶蛋白的含量；其中，所述三氯乙酸溶液为25～35m/v％三氯乙酸溶液。本发明所述方法具有能够充分降低小麦水解蛋白的粘度、促进酸溶蛋白的溶解，确保检测结果稳定可靠的优点。

Description

一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法
技术领域
本发明涉及生化检测领域，具体而言，涉及一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法。
背景技术
酸溶蛋白是指分子量较低的蛋白水解物，包括肽和游离氨基酸，主要是可溶于酸性(三氯乙酸)溶液的蛋白，故又名三氯乙酸可溶蛋白。分子量较大的蛋白和长肽遇酸会沉淀，无法溶解。因此，通过酸溶蛋白的含量可以直接反映蛋白质水解程度。
酸溶蛋白是蛋白类饲料原料的重要指标之一，用于衡量蛋白类饲料原料的营养价值高低和品质好坏。因此，对饲料原料中的酸溶蛋白进行准确测定具有重大的经济价值。
目前饲料行业测定饲料原料中酸溶蛋白含量时，通常使用QB/T2653-2004进行测定。其具体测定方法为：称取样品2.00g，加入15％TCA(三氯乙酸)溶液10mL，混合均匀，静置5min。将溶液定量转移，在4000r/min离心下10min后，取全部上清液，按食品中蛋白质的测定方法测定上清液可溶蛋白质。
小麦水解蛋白是重要的饲料原料，小麦水解蛋白中的酸溶蛋白含量反应小麦蛋白的水解程度和营养价值，具有重要的检测意义。然而，上述方法在测定小麦水解蛋白中酸溶蛋白的含量时经常出现测定结果不稳定的现象，无法获得准确的测定结果。
因此，本领域亟待提出一种改进的小麦水解蛋白中酸溶含量的检测方法，确保检测结果的稳定性和准确性。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法，本发明所述方法能够充分降低小麦水解蛋白的粘度、促进酸溶蛋白的溶解，确保检测结果稳定可靠。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)使用水溶解小麦水解蛋白，料液比为0.1～0.3g/5mL；
(2)加入等体积的三氯乙酸溶液，混合均匀并静置一段时间，之后分离上清液并测定上清液中的蛋白含量，即为小麦水解蛋白中酸溶蛋白的含量；其中，所述三氯乙酸溶液为25～35m/v％三氯乙酸溶液。
具体实施方式
本发明涉及一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)使用水溶解小麦水解蛋白，料液比为0.1～0.3g/5mL；
(2)加入等体积的三氯乙酸溶液，混合均匀并静置一段时间，之后分离上清液并测定上清液中的蛋白含量，即为小麦水解蛋白中酸溶蛋白的含量；其中，所述三氯乙酸溶液为25～35m/v％三氯乙酸溶液。
检测酸溶蛋白的常规测定方法为GB/T 2653-2004，该方法最初用于测定大豆肽粉中酸溶蛋白的含量，后推广成为测定蛋白质原料中酸溶蛋白的含量的通用方法。但由于小麦水解蛋白的粘性高，按照GB/T 2653-2004所述方法测定酸溶蛋白含量时，容易出现小麦水解蛋白粘成团，无法与三氯乙酸溶液充分接触的问题，极易造成检测结果不稳定。
为解决上述技术问题，本发明所述方法对现有酸溶蛋白含量测定方法进行改进，一方面，本发明所述方法在溶剂体积基本不变的情况下，极大地减少样品的用量，减少由于样品量过大而无法有效溶解的情况，另一方面，本发明所述方法先用水将样品溶解，再将样品的水溶液与三氯乙酸溶液混合，避免样品直接与三氯乙酸溶液接触后粘结成团，蛋白样品无法与三氯乙酸溶液混合均匀的缺陷。因此，与常规的检测方法相比，本发明所述酸溶蛋白含量的检测方法能够避免小麦水解蛋白粘结成团，具有促进样品与三氯乙酸溶液充分接触、确保检测结果稳定可靠的优点，特别适合检测高粘度的小麦水解蛋白中酸溶蛋白的含量。
在一些具体的实施方式中，所述方法还包括以下步骤：(3)测定小麦水解蛋白中总蛋白的含量，计算酸溶蛋白含量与总蛋白含量之间的比值。
在一些具体的实施方式中，步骤(2)中所述蛋白含量通过凯氏定氮法、双缩脲法、lowry法或紫外吸收法测定；
优选地，步骤(2)中所述蛋白含量通过凯氏定氮法测定。
在一些具体的实施方式中，步骤(3)中所述总蛋白含量通过凯氏定氮法、双缩脲法、lowry法或紫外吸收法测定；
优选地，步骤(3)中所述总蛋白含量通过凯氏定氮法测定。
在一些具体的实施方式中，所述小麦水解蛋白为饲料用小麦水解蛋白，步骤(2)中所述蛋白含量的测定方法为检测饲料中粗蛋白含量的方法；
优选地，所述检测饲料中粗蛋白含量的方法为GB/T 6432-1994。
在一些具体的实施方式中，所述小麦水解蛋白为饲料用小麦水解蛋白，步骤(3)中所述总蛋白含量的测定方法为检测饲料中粗蛋白含量的方法；
优选地，所述检测饲料中粗蛋白含量的方法为GB/T 6432-1994。
GB/T 2653-2004所述方法中对于粗蛋白含量的测定采用的是“GB/T 14771蛋白质测定方法”，其检测的是食品中的粗蛋白。由于小麦水解蛋白主要用于作为饲料原料，本发明所述方法的实施人主要为饲料生产厂家而非食品厂家，其检测平台一般适用于饲料样品检测，不适合检测检测食品样本。为解决该技术问题，本发明所述方法优选使用检测饲料中粗蛋白含量的方法检测蛋白含量，更优选地，使用GB/T 6432-1994进行检测，所述方法更适合饲料生产厂家的检测平台。
在一些具体的实施方式中，所述料液比为0.1g/5mL、0.15g/5mL、0.2g/5mL、0.25g/5mL或0.3g/5mL；
优选地，所述料液比为0.2g/5mL。
在一些具体的实施方式中，所述三氯乙酸溶液为25m/v％、26m/v％、27m/v％、28m/v％、29m/v％、30m/v％、31m/v％、32m/v％、33m/v％、34m/v％或35m/v％三氯乙酸溶液；
优选地，所述三氯乙酸溶液为30m/v％三氯乙酸溶液。
本发明所述方法进一步对料液比和三氯乙酸的质量分数进行优化，使用优化后的方法能够进一步促进酸溶蛋白在三氯乙酸溶液中的溶解度，进一步增强检测的准确性和稳定度。
在一些具体的实施方式中，步骤(2)中所述静置时间为5～15min；优选地，步骤(2)中所述静置时间为10min。
在一些具体的实施方式中，步骤(2)中所述分离上清液的方式为离心或者过滤。
技术效果
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明所述方法能够充分降低小麦水解蛋白样品的粘度，避免样品粘结成团，促进酸溶蛋白在三氯乙酸溶液中的溶解，从而确保检测结果稳定可靠。
(2)本发明优选的方法适合饲料生产厂家实施，所述方法与饲料生产厂家的检测平台相适应，能够解决现有酸溶蛋白检测方法不适合饲料生产厂家检测的缺陷。
(3)本发明所述方法进一步对料液比和三氯乙酸的质量分数进行优化，使用优化后的方法能够进一步促进酸溶蛋白在三氯乙酸溶液中的溶解度，进一步增强检测的准确性和稳定度。
实施例
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购买获得的常规产品。
下述实施例、对比例以及实验例使用的部分试剂和仪器：
试剂：
去离子水；三氯乙醇：分析纯，30％(m/v)。
仪器和设备：
分析天平：感量0.0001g；离心管15-50mL；锥形瓶：250mL；台式离心机：定时，调速，转速可达4000r/min；普通磁力搅拌器；移液管：25mL；称样皿。
实施例1
一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比的方法，所述方法包括：
(1)称取小麦水解蛋白0.1g，加入到5mL去离子水中，搅拌直至所述小麦水解蛋白充分溶解；
(2)加入5mL质量体积分数为35％的三氯乙酸溶液，搅拌均匀，静置10min；
(3)静置结束后，在4000r/min的转速下离心10min，取上清液；
(4)按GB/T 6432-1994规定的方法测定所述上清液的粗蛋白含量，计算上清液中粗蛋白的含量，其中，蛋白质换算系数为6.25；
(5)称取小麦水解蛋白0.1g，加入到5mL去离子水中，搅拌直至所述小麦水解蛋白充分溶解，之后按照GB//T 6432-1994规定的方法测定小麦水解蛋白水溶液中粗蛋白的含量，其中，蛋白质换算系数为6.25；
(6)计算酸溶蛋白在总蛋白中的占比，计算公式如下所示：
酸溶蛋白在总蛋白中的占比＝上清液中粗蛋白含量/小麦水解蛋白水溶液中粗蛋白含量。
实施例2
一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比的方法，所述方法包括：
(1)称取小麦水解蛋白0.2g，加入到5mL去离子水中，搅拌直至所述小麦水解蛋白充分溶解；
(2)加入5mL质量体积分数为30％的三氯乙酸溶液，搅拌均匀，静置10min；
(3)静置结束后，在4000r/min的转速下离心10min，取上清液；
(4)按GB/T 6432-1994规定的方法测定所述上清液的粗蛋白含量，计算上清液中粗蛋白的含量，其中，蛋白质换算系数为6.25；
(5)称取小麦水解蛋白0.2g，加入到5mL去离子水中，搅拌直至所述小麦水解蛋白充分溶解，之后按照GB//T 6432-1994规定的方法测定小麦水解蛋白水溶液中粗蛋白的含量，其中，蛋白质换算系数为6.25；
(6)计算酸溶蛋白在总蛋白中的占比，计算公式如下所示：
酸溶蛋白在总蛋白中的占比＝上清液中粗蛋白含量/小麦水解蛋白水溶液中粗蛋白含量。
实施例3
一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比的方法，所述方法包括：
(1)称取小麦水解蛋白0.3g，加入到5mL去离子水中，搅拌直至所述小麦水解蛋白充分溶解；
(2)加入5mL质量体积分数为25％的三氯乙酸溶液，搅拌均匀，静置10min；
(3)静置结束后，在4000r/min的转速下离心10min，取上清液；
(4)按GB/T 6432-1994规定的方法测定所述上清液的粗蛋白含量，计算上清液中粗蛋白的含量，其中，蛋白质换算系数为6.25；
(5)称取小麦水解蛋白0.3g，加入到5mL去离子水中，搅拌直至所述小麦水解蛋白充分溶解，之后按照GB//T 6432-1994规定的方法测定小麦水解蛋白水溶液中粗蛋白的含量，其中，蛋白质换算系数为6.25；
(6)计算酸溶蛋白在总蛋白中的占比，计算公式如下所示：
酸溶蛋白在总蛋白中的占比＝上清液中粗蛋白含量/小麦水解蛋白水溶液中粗蛋白含量。
对比例1
参照GB/T 2653-2004，检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比。
实验例1
参照实施例1～3所述方法分别检测1～3#小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比，具体检测结果参见表1。
表1 1～3#小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比
注：差异的计算公式为：差异＝|检测值1-检测值2|/平均值
实验例2
参照实施例2所述方法和对比例1所述方法检测4～15#小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比，具体检测结果参见表2。根据表2所述检测结果可知，本发明实施例2所述方法在检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白的含量时，检测结果明显比对比例1所述方法稳定。
表2 4～15#小麦水解蛋白中酸溶蛋白在总蛋白中的占比
注：差异的计算公式为：差异＝|检测值1-检测值2|/平均值
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种检测小麦水解蛋白中酸溶蛋白含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)使用水溶解小麦水解蛋白，料液比为0.1～0.3g/5mL；
(2)加入等体积的三氯乙酸溶液，混合均匀并静置一段时间，之后分离上清液并测定上清液中的蛋白含量，即为小麦水解蛋白中酸溶蛋白的含量；其中，所述三氯乙酸溶液为25～35m/v％三氯乙酸溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述料液比为0.15～0.25g/5mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述料液比为0.2g/5mL，所述三氯乙酸溶液为30m/v％三氯乙酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
(3)测定小麦水解蛋白中总蛋白的含量，计算酸溶蛋白含量与总蛋白含量之间的比值。
5.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述蛋白含量和/或步骤(3)中所述总蛋白含量通过凯氏定氮法、双缩脲法、lowry法或紫外吸收法测定。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述蛋白和/或步骤(3)中所述总蛋白含量通过凯氏定氮法测定。
7.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述小麦水解蛋白为饲料用小麦水解蛋白，步骤(2)中所述蛋白含量和/或步骤(3)中所述总蛋白含量的测定方法为检测饲料中粗蛋白含量的方法。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述检测饲料中粗蛋白含量的方法为GB/T6432-1994。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述静置时间为5～15min；优选地，步骤(2)中所述静置时间为10min。
10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述分离上清液的方式为离心或者过滤。
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