CN108101929A - 一种gsh荧光传感器及其制备方法和应用 - Google Patents

一种gsh荧光传感器及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108101929A
CN108101929A CN201711354325.XA CN201711354325A CN108101929A CN 108101929 A CN108101929 A CN 108101929A CN 201711354325 A CN201711354325 A CN 201711354325A CN 108101929 A CN108101929 A CN 108101929A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fluorescent optical
optical sensors
gsh
preparation
gsh fluorescent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711354325.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108101929B (zh
Inventor
杨建海
刘通秀
谢若森
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xian Jiaotong University
Original Assignee
Xian Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xian Jiaotong University filed Critical Xian Jiaotong University
Priority to CN201711354325.XA priority Critical patent/CN108101929B/zh
Publication of CN108101929A publication Critical patent/CN108101929A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108101929B publication Critical patent/CN108101929B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom
    • C09K2211/1037—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom with sulfur

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

一种GSH荧光传感器及其制备方法和应用，室温下，将噻唑吡啶酮酸、双(2‑巯乙基)硫醚、缩合剂碳二亚胺衍生物、酰化催化剂在有机溶剂中反应，反应完成后，将反应后的溶液加入到去离子水中析出固体，干燥，得到GSH荧光传感器。本发明所选用原料成本低，合成步骤简单，后处理十分简单，易于大规模生产。本发明采用羧酸与羟基缩合反应方式，合成方法简单，反应条件温和，产率较高。本发明的传感器在检测到GSH时，发生发射波长红移现象，可经裸眼进行简单区别。

Description

一种GSH荧光传感器及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物化学领域，具体涉及一种GSH荧光传感器及其制备和应用。
背景技术
谷胱甘肽(GSH)广泛存在于动、植物中，并起着重要的作用。GSH在人体内的生化防御体系中起着重要作用，作为人体内重要的抗氧化剂，它能够清除掉人体内的自由基保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基。此外，GSH还具有解毒、保护肝脏、抗辐射、增强免疫力、抗过敏等功能。人体内GSH浓度的异常表现在外在则为健康问题，如：毛发色素脱失、肝损伤、肿瘤等。鉴于GSH浓度对人体如此至关重要，快速方便检测GSH浓度的方法具有十分重要的意义。
目前，传统检测GSH的方法主要有：分光光度法、荧光法、高效液相色谱法(HPLC)、高效毛细管电泳法(HPCE)、流式细胞仪法等。但是，这些方法存在很多的缺点，如所需仪器价格较为昂贵，携带不便，敏感性差，所测定的GSH浓度范围不大，难以测量细胞中GSH浓度含量等。与此相反，由于化学发光不需要任何光源，因而在对荧光探针进行化学发光成像检测时，不存在荧光检测或者荧光成像时不可避免的光学背景的干扰，从而可以获得更好的检测效果。
噻唑吡啶酮酸(TPCA)由于其摩尔吸光系数较大，荧光量子产率高，光谱性能优越，结构简单易于修饰，生物相容性好等优势，可被应用于分子探针设计中的荧光基团。
已报道检测GSH的荧光探针大部分为利用传统的有机发光小分子作为荧光功能基团，例如：萘酰亚胺类衍生物、香豆素衍生物、罗丹明类衍生物以及苯酚衍生物等。上述所说探针不具备良好的生物相容性，且合成困难。
上述缺陷造成至今为止，应用现有工艺方法难以得到合成简单，生物相容性好的GSH传感器制备方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种GSH荧光传感器及其制备和应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种GSH荧光传感器，该荧光传感器的结构式如下：
一种GSH荧光传感器的制备方法，室温下，将噻唑吡啶酮酸、双(2-巯乙基)硫醚、缩合剂碳二亚胺衍生物、酰化催化剂在有机溶剂中反应，反应完成后，将反应后的溶液加入到去离子水中析出固体，干燥，得到GSH荧光传感器。
本发明进一步的改进在于，噻唑吡啶酮酸的结构式如下：
本发明进一步的改进在于，噻唑吡啶酮酸、双(2-巯乙基)硫醚、缩合剂碳二亚胺衍生物与酰化催化剂的摩尔比为2:1:3:3。
本发明进一步的改进在于，反应时间为24～48h。
本发明进一步的改进在于，有机溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或二氧六环。
本发明进一步的改进在于，缩合剂碳二亚胺衍生物为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺或N,N-二异丙基碳二亚胺。
本发明进一步的改进在于，酰化催化剂为1-羟基苯并三唑、4-二甲氨基吡啶或4-二甲氨基吡啶。
本发明进一步的改进在于，去离子水的温度为-5～5℃。
一种GSH荧光传感器在检测谷胱甘肽中应用。
与现有技术相比本发明具有的有益效果：
本发明以噻唑吡啶酮酸为主体合成了一种新型GSH荧光传感器，荧光发光基团噻唑吡啶酮酸具有良好的光稳定性、高量子产率、良好的生物相容性等，使得该荧光传感器具有良好的光稳定性，高量子产率，良好的生物相容性等优点。本发明所选用原料成本低，合成步骤简单，后处理十分简单，易于大规模生产。本发明采用羧酸与羟基缩合反应方式，合成方法简单，反应条件温和，产率较高。
本发明的传感器在检测到GSH时，发生发射波长红移现象，可经裸眼进行简单区别，便于对GSH进行检测。
附图说明
图1为本发明的合成路线图。
图2为本发明的GSH荧光传感器1H NMR。
图3为本发明的GSH荧光传感器13C NMR。
图4为本发明的GSH荧光传感器的荧光检测前后荧光图片。
图5为本发明的GSH荧光传感器的荧光响应测试图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明进行详细说明。
本发明提供的GSH荧光传感器的结构式如下：
参见图1，本发明中如上述结构式的GSH荧光传感器的制备方法，包括以下步骤：
室温下，将噻唑吡啶酮酸、双(2-巯乙基)硫醚、缩合剂碳二亚胺衍生物、酰化催化剂按摩尔比2:1:3:3加入有机溶剂中，反应24～48h后，将反应溶液加入到-5～5℃的水中，析出淡黄色粉末，抽滤，烘干，得到干燥的淡黄色粉末，即GSH荧光传感器。其中，噻唑吡啶酮酸的结构式如下：
双(2-巯乙基)硫醚的结构式如下：
实施例1
将噻唑吡啶酮酸(10mmol)、双(2-巯乙基)硫醚(5mmol)、催化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)(15mmol)以及1-羟基苯并三唑(HOBT)(15mmol)，加入到30mL二甲基亚砜中室温反应48h，反应完成后，将反应液加入到-5℃水中，析出淡黄色粉末，抽滤、干燥，得到淡黄色粉末，即为GSH荧光传感器。
实施例2
将噻唑吡啶酮酸(10mmol)、双(2-巯乙基)硫醚(5mmol)、催化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)(15mmol)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(15mmol)，加入到30mL N,N-二甲基乙酰胺中室温反应48h。反应完成后，将反应溶液加入到0℃水中析出淡黄色粉末，抽滤得到干燥的淡黄色粉末，即为GSH荧光传感器。
实施例3
将噻唑吡啶酮酸(10mmol)、双(2-巯乙基)硫醚(5mmol)、催化剂二环己基碳二亚胺(DCC)(15mmol)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(15mmol)加入到30mL二氧六环中室温反应24h。反应完成后，将反应溶液加入到0℃水中析出淡黄色粉末，抽滤、干燥得到淡黄色粉末，即为GSH荧光传感器。
实施例4
将噻唑吡啶酮酸(10mmol)、双(2-巯乙基)硫醚(5mmol)、催化剂N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)(15mmol)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(15mmol)，加入到30mL DMF中室温反应30h。反应完成后，将反应溶液加入到5℃水中析出淡黄色粉末，抽滤得到干燥的淡黄色粉末，即为GSH荧光传感器。
本发明制备的GSH荧光传感器的1H NMR，13C NMR分别如图2和图3所示。GSH荧光传感器的核磁共振氢谱图数据如下所示：(1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.89,6.62,4.58,4.56,4.54,4.53,4.51,4.49,3.49,3.47,3.45,3.05,3.04,3.02,1.91.)，由此可知与所得目标结构吻合。
荧光性能测试
将本发明制备的GSH加入荧光传感器的溶液中，进行荧光响应的照片和测试，具体如下：
将GSH荧光传感器(5μmol/L)与谷胱甘肽(1mmol/L)混合均匀后，放入45℃的烘箱中孵化3h，将检测过谷胱甘肽的荧光传感器和空白的荧光传感器在365nm的荧光灯下可得照片分别为蓝绿色荧光和蓝色的液体，可由裸眼区别，如图4所示，图中左侧为蓝绿色，右侧为蓝色。
本发明制备的GSH荧光传感器在用于检测生物体的谷胱甘肽中应用，具体如下：
本发明制备的GSH荧光传感器在丙酮中具有良好的溶解性，将其丙酮溶液(2mmol/L)滴入到去离子水中，得到20μmol/L的荧光传感器溶液，该溶液作为母液进行低温储备，用时进行稀释。
精确配制不同浓度的谷胱甘肽(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、6μmol/L、8μmol/L、10μmol/L、12μmol/L、14μmol/L、16μmol/L、18μmol/L、20μmol/L)与相同浓度的GSH荧光传感器(5μmol/L)，在45℃下孵化3h后，测其荧光强度，观察图5可知，GSH荧光传感器对不同浓度谷胱甘肽的响应。当GSH荧光传感器响应GSH时其荧光发射波长发生红移现象，经裸眼可察。同时随着GSH浓度的增加，其荧光发射强度降低。可见，本发明制备的荧光传感器对GSH有很好的检测效果。
细胞毒性测试表明本发明荧光传感器对细胞几乎没有毒性作用，同时，本发明采用的原料易得，采用一步合成法，后处理亦十分的简便，易实现大规模生产。

Claims (10)

1.一种GSH荧光传感器，其特征在于，该荧光传感器的结构式如下：
2.一种如权利要求1所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，室温下，将噻唑吡啶酮酸、双(2-巯乙基)硫醚、缩合剂碳二亚胺衍生物、酰化催化剂在有机溶剂中反应，反应完成后，将反应后的溶液加入到去离子水中析出固体，干燥，得到GSH荧光传感器。
3.根据权利要求2所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，噻唑吡啶酮酸的结构式如下：
4.根据权利要求2或3所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，噻唑吡啶酮酸、双(2-巯乙基)硫醚、缩合剂碳二亚胺衍生物与酰化催化剂的摩尔比为2:1:3:3。
5.根据权利要求2所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，反应时间为24～48h。
6.根据权利要求2所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，有机溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或二氧六环。
7.根据权利要求2所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，缩合剂碳二亚胺衍生物为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺或N,N-二异丙基碳二亚胺。
8.根据权利要求2所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，酰化催化剂为1-羟基苯并三唑、4-二甲氨基吡啶或4-二甲氨基吡啶。
9.根据权利要求2所述的GSH荧光传感器的制备方法，其特征在于，去离子水的温度为-5～5℃。
10.一种如权利要求1-9中任意一项所述的GSH荧光传感器在检测谷胱甘肽中应用。
CN201711354325.XA 2017-12-15 2017-12-15 一种gsh荧光传感器及其制备方法和应用 Active CN108101929B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711354325.XA CN108101929B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一种gsh荧光传感器及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711354325.XA CN108101929B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一种gsh荧光传感器及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108101929A true CN108101929A (zh) 2018-06-01
CN108101929B CN108101929B (zh) 2020-10-27

Family

ID=62217391

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711354325.XA Active CN108101929B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一种gsh荧光传感器及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108101929B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109438479A (zh) * 2018-10-31 2019-03-08 深圳市康勋新材科技有限公司 紫外线吸收剂及其制备方法和应用
GB2627949A (en) * 2023-03-08 2024-09-11 Swan Thomas & Co Ltd Detergent comprising environmentally acceptable fluorescent whitening agent
GB2627945A (en) * 2023-03-08 2024-09-11 Swan Thomas & Co Ltd Environmentally acceptable fluorescent whitening agent
GB2627950A (en) * 2023-03-08 2024-09-11 Swan Thomas & Co Ltd Fluorescent whitening agent delivery composition
WO2024184492A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Thomas Swan & Co. Ltd. Fluorescent whitening agents

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103289681A (zh) * 2013-06-09 2013-09-11 南京工业大学 谷胱甘肽荧光探针及其制备方法和用途
CN104530089A (zh) * 2015-01-06 2015-04-22 南京大学 一种荧光分子tpca及其制备方法
CN106188191A (zh) * 2016-07-13 2016-12-07 西安电子科技大学 基于gsh响应的诊治一体化有机分子探针及其制备方法
CN106478505A (zh) * 2016-08-28 2017-03-08 浙江工业大学 一种双光子gsh探针及其制备与应用
CN107033879A (zh) * 2017-04-26 2017-08-11 许昌学院 一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针及其制备方法和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103289681A (zh) * 2013-06-09 2013-09-11 南京工业大学 谷胱甘肽荧光探针及其制备方法和用途
CN104530089A (zh) * 2015-01-06 2015-04-22 南京大学 一种荧光分子tpca及其制备方法
CN106188191A (zh) * 2016-07-13 2016-12-07 西安电子科技大学 基于gsh响应的诊治一体化有机分子探针及其制备方法
CN106478505A (zh) * 2016-08-28 2017-03-08 浙江工业大学 一种双光子gsh探针及其制备与应用
CN107033879A (zh) * 2017-04-26 2017-08-11 许昌学院 一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JING XU，等: "Rendering Protein-Based Particles Transiently Insoluble for Therapeutic Applications", 《J. AM. CHEM. SOC.》 *
ZHAOHUI HUANG，等: "Synthesis and Fluorescent Property of Biodegradable Polyphosphazene Targeting Long-Term in Vivo Tracking", 《MACROMOLECULES》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109438479A (zh) * 2018-10-31 2019-03-08 深圳市康勋新材科技有限公司 紫外线吸收剂及其制备方法和应用
GB2627949A (en) * 2023-03-08 2024-09-11 Swan Thomas & Co Ltd Detergent comprising environmentally acceptable fluorescent whitening agent
GB2627945A (en) * 2023-03-08 2024-09-11 Swan Thomas & Co Ltd Environmentally acceptable fluorescent whitening agent
GB2627950A (en) * 2023-03-08 2024-09-11 Swan Thomas & Co Ltd Fluorescent whitening agent delivery composition
WO2024184492A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Thomas Swan & Co. Ltd. Fluorescent whitening agents

Also Published As

Publication number Publication date
CN108101929B (zh) 2020-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108101929A (zh) 一种gsh荧光传感器及其制备方法和应用
Luo et al. Cyclization of chalcone enables ratiometric fluorescence determination of hydrazine with a high selectivity
Lee et al. Near-infrared fluorescent probes for the detection of glutathione and their application in the fluorescence imaging of living cells and tumor-bearing mice
CN105924394B (zh) 一种双光子甲醛荧光探针及其制备与应用
Yan et al. A practical pH-compatible fluorescent sensor for hydrazine in soil, water and living cells
Li et al. A visible and near-infrared dual-fluorescent probe for discrimination between Cys/Hcy and GSH and its application in bioimaging
Wang et al. Discriminating normal and inflammatory models by viscosity changes with a mitochondria-targetable fluorescent probe
JP5997288B2 (ja) ナフタレンを基本骨格とする二光子蛍光プローブ、その製造方法及びその利用方法
Liu et al. A phthalimide-based fluorescent probe for thiol detection with a large Stokes shift
CN106518855B (zh) 一种以半川菁及黄酮醇为荧光团的二氧化硫衍生物比例荧光探针及其应用
Zhang et al. A near-infrared rhodamine-based lysosomal pH probe and its application in lysosomal pH rise during heat shock
Muthusamy et al. An azido coumarin-quinoline conjugated fluorogenic dye: Utilizing amide-iminol tautomerism for H2S detection in live MCF-7 cells
CN105693703A (zh) 一种用于细胞内溶酶体pH成像的新型比率型荧光探针
Sheng et al. A near infrared cyanine‐based fluorescent probe for highly selectively detecting glutathione in living cells
Pan et al. Dual-response near-infrared fluorescent probe for detecting cyanide and mitochondrial viscosity and its application in bioimaging
CN108641710B (zh) 一种检测蛋白质硫巯基化的荧光探针及其制备方法和应用
CN108864056A (zh) 具有aie性能的近红外荧光化合物及其制备方法和应用
Mora et al. Monitoring the formation of insulin oligomers using a NIR emitting glucose-conjugated BODIPY dye
CN106632212A (zh) 一种检测细胞内半胱氨酸的荧光探针
Wang et al. Design and synthesis of a novel “turn-on” fluorescent probe based on benzofuran-3 (2H)-one for detection of hydrazine in water samples and biological systems
Szwaczko Fluorescent Coumarin-based Probe for Detection of Biological Thiols
CN109320537A (zh) 一种用于面粉和活体内过氧苯甲酰检测的可溶性双光子荧光探针及其制备方法和应用
CN109503550B (zh) 2-氮杂芳基-6-取代氨基喹唑啉酮化合物及其制备方法和应用
CN106929004B (zh) 一种信号增强型近红外荧光探针及其制备方法和应用
CN115322133B (zh) 一种化合物在制备肺纤维化粘度响应性荧光探针中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant