CN108079285A - 用于蛇毒酶制剂的门冬氨酸稳定剂及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于制药领域。本发明所述的用于蛇毒酶制剂的门冬氨酸稳定剂的制备方法由以下步骤组成：称取药用级门冬氨酸13.31g加适量注射用水加热至沸，用药用级精氨酸或者药用级赖氨酸调PH值为4.5‑8.0，补加注射用水至200ml，配成以门冬氨酸计0.5M浓度的稳定剂。本稳定剂的优点：①分子量小；②与主药蛇毒酶制剂没有拮抗作用或有协同作用；③没有紫外吸收，对制剂HPLC纯度的测定没有干扰；④两组氨基酸所带电荷相反，对制剂SDS电泳的纯度检测没有影响；⑤不干扰主药效价测定，能使主药准确投料，提高临床用药的准确性安全性和疗效。

Description

用于蛇毒酶制剂的门冬氨酸稳定剂及制备方法
技术领域
本发明属于制药领域。
背景技术
中国专利申请号201410348725.X公开了“一种稳定药物组合物的辅剂及含有该辅剂的药物组合物”，该发明申请提供一种稳定药物组合物的辅剂及含有该辅剂的药物组合物，特别是一种高稳定性的以降纤酶为主药的药物组合物。在原有降纤酶粉针和注射液组方中添加了酶活力保护剂，其药品活性成分是降纤酶，处方中其他的非活性成分为稳定剂和赋形剂右旋糖酐和酶活力保护剂，酶活力保护剂为小分子酶活力保护剂或大分子酶活力保护剂、或小分子酶活力保护剂和大分子酶活力保护剂的组合，以保证生产、储存、销售过程中降纤酶效价的稳定，减少了生产投料比、保证了成品的效价稳定、提高了临床用药的安全性和疗效。
除了以上专利外，没有检索到有关蛇毒酶制剂稳定剂方面的专利和文献。然而蛇毒酶是有活性的蛋白酶，也就是利用其活性才能制备成针对不同疾病的药剂。一般蛇毒酶都是不稳定，更何况其使用剂量一般都是微克级的，微量的蛇毒酶极易受温度、PH值、聚合、降解和氧化等多种因素的影响，其酶活力是不稳定的。导致从生产、运输、销售等环节中蛇毒酶制剂效价的下降，因此在蛇毒酶制剂的生产过程，为了保证制剂效价符合质量标准，各生产厂家根据自己的经验采取不同措施，仍然得不到一个圆满的效果，只是苦于没有找到很好的稳定剂而已。由于效价的不稳定或保护剂或PH值调节剂的因素，严重影响了按处方剂量合理用药的疗效和很多不明不良反应产生的风险。
已有的技术方案是在蛇毒酶制剂的生产过程中在药品组方中添加0.01-5％的人血白蛋白和0.001％-0.5％(W/V)的部分水解明胶或水解明胶作为酶活的保护剂。当然人血清白蛋白和明胶或部分水解明胶及水解明胶确实对酶活有保护作用，但对蛇毒酶的药理起不良反应，这些物质对蛇毒酶有膨胀作用，导致蛇毒酶减量投料，严重影响按处方剂量合理用药的疗效，也不符合GMP的要求；更为致命的是它们在成品HPLC纯度检测和SDS-聚丙烯酰胶凝胶电泳测定时，不符合标准的要求，不符合标准就谈不上效价稳定，更谈不上提高了临床用药的安全性和疗效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种使蛇毒酶制剂更安全、更有效、更稳定的稳定剂的制备方法。
本发明的另一目的在于提供这种门冬氨酸稳定剂。
本发明所述的用于蛇毒酶制剂的门冬氨酸稳定剂的制备方法由以下步骤组成：称取药用级门冬氨酸13.31g加适量注射用水加热至沸，用药用级精氨酸或者药用级赖氨酸调PH值为4.5-8.0，补加注射用水至200ml，配成以门冬氨酸计0.5M浓度的稳定剂。
为了找到一种适合蛇毒酶制剂的电荷平衡剂，本申请人花了多年时间，做了多次试验，投入了大量资金最终才找到本申请所述的电荷平衡剂——稳定剂。本稳定剂是一类崭新的化合物小分子肽，由酸性氨基酸和碱性氨基酸反应结合而成，前人没有使用过、没有命名过，所以本申请称之为稳定系统。本稳定剂的优点：①分子量小，是由人体所需的两组氨基酸组合；②与主药蛇毒酶制剂没有拮抗作用或有协同作用；③没有紫外吸收，对制剂HPLC纯度的测定没有干扰；④两组氨基酸所带电荷相反，对制剂SDS电泳的纯度检测没有影响；⑤不干扰主药效价测定，能使主药准确投料，提高临床用药的准确性安全性和疗效；⑥在制剂里不需再加入其它非人体所需的PH值调节剂，安全性更高，使制剂组份单一，便于鉴定，更符合GMP的要求。
本发明所述的门冬氨酸稳定剂主要用于蛇毒酶制剂中。
本发明超越了现有技术的思路，用一个稳定系统作为稳定剂。与现有技术大相径庭，其关键的作用在于取得了意想不到的效果——不需要超量投料和具有极佳的稳定性。
实验数据：
对比实验：
制备对比剂1：
降纤酶冻干粉针剂(规格5U/瓶)
降纤酶总量 5000U
右旋糖酐40 10.0g
补加注射用水至 1000ml
制备方法为：用天平称取10.0g注射用右旋糖酐40，加适量注射用水煮沸溶解至澄清，冷却至室温备用。将上述右旋糖酐40液和降纤酶液5000U于量筒中混匀并补加注射用水至1000ml，除菌过滤，按1.0ml/瓶分装于3ml西林瓶中，半压塞，送入冻干箱中，冻结至-35℃以下，抽真空，每小时搁板设定加温1℃-5℃，最高预设温度不超过28℃，达到预设最高温度后保持3小时，即可全压塞、出箱、轧盖。
检测：每瓶投5U，冻干后实测只有2.73U，不符合要求。
在上述对比剂1中加入10ml 0.5M PH值6.25门冬氨酸-精氨酸的稳定剂，制备方法同对比剂1。
检测：每瓶投5U，冻干后实测5.32U，符合要求。
制备对比剂2：
降纤酶水针剂(规格5U/瓶)
降纤酶总量 5000U
补加注射用水至 1000ml
制备方法：将降纤酶5000U于量筒中并补加注射用水至1000ml，除菌过滤，按1.0ml/瓶分装于2ml安剖瓶中。
检测：每瓶投5U，实测只有5.42U，暂时符合要求。
在上述对比剂2中加入0.5M PH6.0门冬氨酸-赖氨酸稳定剂10ml，制备方法完全相同。
检测：每瓶投5U，实测5.18U，符合要求。
制备对比剂3：
注射用血凝酶(巴曲亭)(规格1KU/瓶)
血凝酶总量 100KU
右旋糖酐40 1.0g
补加注射用水至 100ml
制备方法：用天平称取1.0g注射用右旋糖酐40，加适量注射用水煮沸溶解至澄清，冷却至室温备用。将上述右旋糖酐40液和血凝酶液100KU于100ml量筒中混匀并补加注射用水至100ml，除菌过滤，按1.0ml/瓶分装于3ml西林瓶中，半压塞，送入冻干箱中，冻结至-35℃以下，抽真空，每小时搁板设定加温1℃-5℃，最高预设温度不超过28℃，达到预设最高温度后保持3小时，即可全压塞、出箱、轧盖。
检测：每瓶投1KU，冻干后实测0.54KU，不符合要求。
在上述对比剂3中加入0.5M PH6.0门冬氨酸-精氨酸稳定系统2.0ml，制备方法同对比剂3。
检测：每瓶投1KU，冻干后实测1.05KU，符合要求。
制备对比剂4：
巴曲酶注射液(规格5BU/瓶)
巴曲酶总量 500BU
补加注射用水至 100ml
制备方法：准确量取巴曲酶500BU的量于100ml量筒中，补加注射用水至100ml，除菌过滤，1.0ml/瓶分装。
检测：每瓶投5BU，实测5.12BU，暂时符合要求。
在上述对比剂4中，加入0.5MPH6.0门冬氨酸-精氨酸稳定系统2.0ml，制备方法同对比剂4。
检测：每瓶仍投5BU，实测5.06BU，符合要求。
表1加速稳定性实验
综上所述，从对比实验来看不加本稳定系统，冻干过程中损失较大，不符合要求，水针剂能暂时满足效价的要求，但稳定性不符合要求；只有添加本稳定系统，冻干粉针剂和水针剂才能满足稳定性的要求；本稳定系统不仅适合降纤酶，也适合其它蛇毒酶制剂。
具体实施方式
实施例1：
降纤酶冻干粉针剂(规格5U/瓶)
稳定系统配制：称取药用级门冬氨酸13.31g加适量注射用水加热至沸，用药用级精氨酸调PH值为6.25，补加注射用水至200ml，配成以门冬氨酸计0.5M浓度备用，10ml实用。制备方法同对比剂1。
实施例2：
降纤酶水针剂(规格5U/瓶)
稳定系统配制：称取药用级门冬氨酸13.31g加适量注射用水加热至沸，用药用级赖氨酸调PH值为6，补加注射用水至200ml，配成以门冬氨酸计0.5M浓度备用，10ml实用。制备方法同对比剂2。
实施例3：
注射用血凝酶(巴曲亭)(规格1KU/瓶)
稳定系统配制：称取药用级门冬氨酸13.31g加适量注射用水加热至沸，用药用级精氨酸调PH值为6.0，补加注射用水至200ml，配成以门冬氨酸计0.5M浓度备用，2.0ml实用。制备方法同对比剂3。
实施例4：
巴曲酶注射液(规格5BU/瓶)
巴曲酶总量 500BU
0.5M PH6.0门冬氨酸-精氨酸稳定系统 2.0ml
补加注射用水至 100ml
稳定系统配制：称取药用级门冬氨酸13.31g加适量注射用水加热至沸，用药用级精氨酸调PH值为6.0，补加注射用水至200ml，配成以门冬氨酸计0.5M浓度备用，2.0ml实用。制备方法同对比剂4。
注：血凝酶(巴曲亭)和巴曲酶，均购于市场。血凝酶先加适量注射用水溶解，巴曲酶先冷冻干燥浓缩至适量，再用特殊工艺脱弃原制剂里所有辅料，由于数量限制所做实验量较少。

Claims (2)

1.一种用于蛇毒酶制剂的门冬氨酸稳定剂的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：称取药用级门冬氨酸13.31g，加适量注射用水加热至沸，用药用级精氨酸或者药用级赖氨酸调PH值为4.5-8.0，补加注射用水至200ml，配成以门冬氨酸计0.5M浓度的稳定剂。
2.一种如权利要求1所述的用于蛇毒酶制剂的门冬氨酸稳定剂，其特征在于由上述方法制备而成。
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