CN103041380A - 人抗凝血酶制剂干热处理过程中的稳定剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及人血浆蛋白制品技术领域，是一种人抗凝血酶制剂干热处理过程中的稳定剂,本发明的稳定剂是指苯丙氨酸或其盐中的一种、赖氨酸或其盐中的一种、酪氨酸或其盐中的一种、天冬氨酸或其盐中的一种用去离子水配制成的稳定剂溶液；实验证明，在人抗凝血酶制剂100℃，30min干热处理过程，含有质量百分浓度为1.0-2.0%苯丙氨酸或其盐中的一种，0.1-0.6%赖氨酸或其盐酸盐，0.6-2.0%酪氨酸或其盐，0.6-2.0%天冬氨酸或其盐中的一种就能有效保护抗凝血酶的活性，并且干热处理后有较好的制剂外观及复溶澄清度。因此，本发明可作为人抗凝血酶制剂干热处理过程中的稳定剂。

Description

人抗凝血酶制剂干热处理过程中的稳定剂

技术领域

本发明涉及血浆蛋白制品技术领域，是人抗凝血酶制剂干热处理过程中的稳定剂。具体涉及，在抗凝血酶制剂中加入氨基酸或其盐类，可在100℃，30min干热处理过程中能有效保护制剂中主要成分抗凝血酶的活性，从而提高抗凝血酶制剂的产率。

背景技术

人抗凝血酶制剂是血浆蛋白制品中的一种，主要用于先天性抗凝血酶缺乏症和弥散性血管内凝血(DIC)患者的治疗。自1974年该制剂试用于临床以来，其适应症日益增多，如在肝硬化、肝功能衰竭、败血症、产后溶血性尿毒症治疗中也取得了较好的效果，但至今我国没有成型的人抗凝血酶制剂上市。

作为以血浆为原料生产制备的血浆蛋白制品，不能排除甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、艾滋病毒（HIV）或其他病原体传播的可能，为了提高血浆蛋白制品的安全性，生产过程中应有特定的去除或灭活病毒的方法。目前欧美抗凝血酶制剂制备过程通常采用60℃，10小时以上的巴氏病毒灭活法，该方法虽然对HBV、HIV等病毒有较好的灭活效果，但经过加热后，抗凝血酶中有大量蛋白变性，活性损失为20-35%，此外，大量的变性蛋白必须再经过纯化处理，而使生产成本增加，生产效率降低。100℃，30 分钟干热处理对多种病毒（包括脂包膜和非脂包膜病毒）均有作用效果。干热病毒灭活在生产最终步骤进行，处理操作相对简便，可控性强，被越来越多的生产企业所采用，但制剂在高温条件处理，活性蛋白易变性失活，为了维持活性蛋白功能，提高蛋白活性收率，在干热处理过程中通常需添加合适的稳定剂。稳定剂对最终产品的质量、产率有着决定性的影响，至今未见有关苯丙氨酸或赖氨酸或酪氨酸或天冬氨酸用于抗凝血酶制剂干热处理过程稳定剂的文献及专利报道。

发明内容

本发明的目的是为了改善现有技术问题，提供一种在100℃，30min干热处理过程中人抗凝血酶制剂的稳定剂。

本发明技术方案为：

一种人抗凝血酶制剂干热处理过程中稳定剂，为溶质氨基酸或其盐用去离子水配制成的溶液，所述的氨基酸或其盐为苯丙氨酸或其盐中的一种、赖氨酸或其盐中的一种、酪氨酸或其盐中的一种、天冬氨酸或其盐中的一种，将它们用去离子水配制成稳定剂溶液，在冷冻干燥前加入人抗凝血酶制剂中。

上述的稳定剂，其苯丙氨酸或其盐中的一种质量百分浓度为1.0-2.0%，赖氨酸或其盐中的一种质量百分浓度为0.1-0.6%、酪氨酸或其盐中的一种质量百分浓度为0.6-2.0%、天冬氨酸或其盐质中的一种量百分浓度为0.6-2.0%，所述的赖氨酸或其盐中的一种为赖氨酸盐酸盐；上述的质量百分浓度为加入稳定剂后，各组分在制剂中的质量百分浓度。

本发明的有益效果为稳定剂使人抗凝血酶制剂在100℃，30min干热处理过程中，抗凝血酶活性损失减少，收率达83%以上，且干热后制剂外观、干热后复溶时间及复溶澄清度能够达到美国药典第32版（United States Pharmacopeia 32，USP32）和欧洲药典第7版（European Pharmacopoeia 7.0，EP7.0）的要求。在抗凝血酶制剂加入1.0-2.0%苯丙氨酸或其盐，0.1-0.6%赖氨酸或其盐，0.6-2.0%酪氨酸或其盐，0.6-2.0%天冬氨酸或其盐中的一种就能在干热处理过程有效维持人抗凝血酶的活性，提高抗凝血酶的收率。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的稳定剂在抗凝血酶制剂干热处理过程中的作用作详细说明， 

1.抗凝血酶浓缩物的制备

Cohn 氏法血液制品组分IV沉淀糊，柠檬酸钠和NaCl抽提液15℃条件抽提60min，抽提液6000rmp条件离心40min，取上清液，再经0.80μm和0.45μm膜过滤，获得滤液；滤液经有机溶剂/去污剂（S/D）处理后，经亲和层析，获得洗脱液，洗脱液经超滤浓缩处理，即得到抗凝血酶浓缩物（≥6.0IU/mg）。

2.加入稳定剂，冷冻干燥

25-40℃水温条件，用去离子水，按质量百分比，配制浓度为2-16%的苯丙氨酸，赖氨酸盐酸盐、酪氨酸、天冬氨酸溶液，测定并用0.1mol/L-1mol/L的HCl或NaOH溶液调pH至6.0-7.5；根据所需稳定剂终浓度和抗凝血酶浓缩物的量添加稳定剂，例如：抗凝血酶制剂所需苯丙氨酸稳定剂终质量百分浓度为1.2%，配制苯丙氨酸母溶液质量百分浓度为8%，抗凝血酶制剂质量为300g，则称取52.9412g质量百分浓度为8%的苯丙氨酸溶液与300g抗凝血酶制剂混合均匀；再例如：抗凝血酶制剂所需天冬氨酸稳定剂终质量百分浓度为0.8%，配制天冬氨酸溶液质量百分浓度为6%，抗凝血酶制剂质量为400g，则称取61.5385g质量百分浓度为8%的天冬氨酸溶液与400g抗凝血酶制剂混合均匀。稳定剂添加后除菌、分装，-40℃至30℃条件冷冻干燥，真空条件压铝塑盖。

3.干热处理

制剂入干热病毒灭活柜后增压升温，待温度升至100℃时开始计时，30min干热处理。

4.干热处理后制剂成形外观观察

干热处理后抗凝血酶制剂成形外观结果见表1。

表1 不同稳定剂抗凝血酶制剂成形外观

由表1可看出，添加稳定剂的制剂，经干热处理后，其成形外观无变化。

5. 干热处理后制剂复溶时间及复溶澄清度观察

室温条件下，注射用水溶解制剂，观察其复溶时间，室温放置30min后观察澄清度，结果见表2。

 

表2 不同稳定剂抗凝血酶制剂复溶时间及复溶后澄清度

由表2可看出，添加稳定剂的制剂，在70秒内均能完全溶解，室温放置30min后，未加稳定剂空白对照有较多颗粒及纤毛，而添加稳定剂的制剂澄清度较好，说明本发明稳定剂能在干热处理过程中有效保护抗凝血酶。

6.干热处理后制剂中抗凝血酶活性收率

检测干热处理前后制剂中抗凝血酶活性。干热处理后抗凝血酶活性收率结果见表3。  

表3不同稳定剂干热处理后抗凝血酶活性收率

由表3可看出，未添加稳定剂的制剂，经干热后抗凝血酶活性收率不超过63%，而添加稳定剂的制剂，抗凝血酶活性收率不低于83%，说明本发明稳定剂能在干热处理过程中有效保护抗凝血酶的活性。

综上所述，本发明为抗凝血酶制剂的100℃，30min干热处理过程提供了有效的稳定剂。

以上结合实施例对本发明进行了描述，但并非是对本发明的限制。任何本技术领域人员在本发明所述的技术范围内，所得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (2)

1. 人抗凝血酶制剂干热处理过程中的稳定剂，其特征为溶质氨基酸或其盐用去离子配制成的溶液，所述的氨基酸或其盐为苯丙氨酸或其盐、赖氨酸或其盐、酪氨酸或其盐、天冬氨酸或其盐，将上述物质中的一种作溶质用去离子水配制成稳定剂溶液，在冷冻干燥前加入人抗凝血酶制剂中。

2.根据权利要求1所述的一种抗凝血酶制剂干热处理过程中的稳定剂，其特征是上述的稳定剂，由苯丙氨酸或其盐中的一种配制的质量百分浓度为1.0-2.0%，由赖氨酸或其盐中的一种配制的质量百分浓度为0.1-0.6%，由酪氨酸或其盐中的一种配制的质量百分浓度为0.6-2.0%、由天冬氨酸或其盐质中的一种配制的质量百分浓度为0.6-2.0%；所述的赖氨酸盐为赖氨酸盐酸盐；上述的质量百分浓度均为加入稳定剂后，各溶质组分分别在制剂中的浓度。