CN108066217B - 一种抗氧化组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种抗氧化组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及化妆品技术领域，特别涉及一种抗氧化组合物及其制备方法和应用。该组合物将五味子和大豆进行复配，实验表明，本发明提供的组合物对DPPH自由基具有显著地清除作用，能够显著降低由t‑Bhp刺激引起的细胞氧化损伤，有效地保护皮肤角质形成细胞的生长，产生了明显的协同增效的抗氧化功效。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，特别涉及一种抗氧化组合物及其制备方法和应用。
背景技术
氧化应激(oxidative stress,OS))是指在有害刺激因素作用下，活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生过多或发生代谢障碍并超过内源性抗氧化防御系统对其的清除能力时，ROS在体内增多并参与氧化生物大分子的形成，直接或间接氧化或损伤DNA、蛋白质和脂质，最终导致细胞的氧化损伤。
皮肤一方面作为机体系统的组成部分，系统环境失衡所引起的氧化应激可影响到皮肤；另一方面作为人体与外界的防御屏障，皮肤较之机体其它器官，可更多更直接地受到外界各种刺激(特别是日光中的紫外线)形成的氧化应激，从而引起多种皮肤疾病。
皮肤微环境中氧化应激和抗氧化的平衡失调是皮肤疾病发生、发展的重要基础，紫外线已成为引起皮肤氧化应激损伤的越来越主要的原因。科学和全面地认识氧化应激，并维护皮肤的氧化/抗氧化平衡，对于预防皮肤疾病、增进皮肤健康具有重要的意义。因此，对于抗氧化功效的护肤品研究具有重要的意义。
目前已知的外源性抗氧化剂主要有：维生素E、维生素C、葡萄胺、β-胡萝卜素、聚苯酚、儿童酚、异黄酮素、茄红素、虾红素、芝麻酚等等。通常，在保健品和护肤品中，多采用这些单一组分的抗氧化剂，但抗氧化效果并不甚显著。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗氧化组合物及其制备方法和应用，该抗氧化组合物具有显著的抗氧化功效。
本发明提供了一种抗氧化组合物，由包括五味子和大豆的原料制成。
五味子，为常用的滋补固涩类中药，性味温和，主产于东北和华北地区，神农本草经列为上品，具有补益强壮之功、奏固涩生津之效，能对人体五脏-心、肝、脾、肺、肾发挥平衡作用。现代研究表明，五味子的主要药用成分是木脂素，其中五味子乙素的五味子木脂素的主要活性成分之一。五味子乙素不仅具有增强细胞抗氧化状态的能力，还具有防止线粒体结构和功能退化的作用。
大豆中富含植物甾醇、维生素E、大豆异黄酮等，能稳定细胞膜的蛋白活性结构，促进肌肉的正常发育及保持肌肤的弹性，令肌肤和身体保持活性；进入皮肤细胞更能直接帮助肌肤对抗自由基、紫外线和污染物的侵害，防止肌肤因一些慢性或隐性的伤害而失去弹性直至老化。
本发明组合物将五味子和大豆配合使用，在明显减少有效成分用量的情况下，对DPPH自由基具有显著地清除作用，显著降低了由t-Bhp刺激引起的细胞氧化损伤，能够有效地保护皮肤角质形成细胞的生长，产生了明显的协同增效的抗氧化功效。
作为优选，五味子和大豆的质量比为(5～15)：(0.1～5)。
在本发明提供的一些具体实施例中，五味子和大豆的质量比为15：5。
在本发明提供的另一些具体实施例中，五味子和大豆的质量比为5：0.1。
在本发明提供的另一些具体实施例中，五味子和大豆的质量比为10：1。
本发明还提供了所述的抗氧化组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：取五味子，加入10～20倍重量的水，50～80℃加热溶解4～10小时，过滤，收集滤渣；
步骤2：取步骤1的滤渣，加入4～8倍重量的60-80vol％的乙醇，50～80℃恒温搅拌30～60min，热过滤，收集醇提液，加入絮凝剂，过滤、浓缩，得到五味子浸膏；
步骤3：将步骤2得到的五味子浸膏与粉碎后的大豆混合均匀，制得所述抗氧化组合物。
在本发明提供的一些具体实施例中，步骤2具体为：取步骤1的滤渣，加入6倍重量的75vol％的乙醇，60℃恒温搅拌45min，热过滤，收集醇提液，加入絮凝剂，过滤、浓缩，得到五味子浸膏。
作为优选，所述絮凝剂为壳聚糖、明胶、蛋清中的一种或两种以上。
在本发明提供的一些具体实施例中，所述絮凝剂为壳聚糖、明胶、蛋清中的一种。
本发明还提供了上述抗氧化组合物在制备具有抗氧化功效的保健食品或护肤品中的应用；该组合物由包括五味子和大豆的原料制成；作为优选，五味子和大豆的质量比为(5～15)：(0.1～5)。在本发明提供的一些具体实施例中，五味子和大豆的质量比为15：5。在本发明提供的另一些具体实施例中，五味子和大豆的质量比为5：0.1。在本发明提供的另一些具体实施例中，五味子和大豆的质量比为10：1。
作为优选，所述组合物由如方法制备得到：
步骤1：取五味子，加入10～20倍重量的水，50～80℃加热溶解4～10小时，过滤，收集滤渣；
步骤2：取步骤1的滤渣，加入4～8倍重量的60-80vol％的乙醇，50～80℃恒温搅拌30～60min，热过滤，收集醇提液，加入絮凝剂，过滤、浓缩，得到五味子浸膏；
步骤3：将步骤2得到的五味子浸膏溶解，过滤，得滤液；
步骤4：将大豆与步骤3的滤液混合均匀，制得所述抗氧化组合物。
本发明还提供了一种抗氧化保健品，包括本发明上述抗氧化组合物以及保健品中可接受的辅料。
作为优选，保健品的剂型为片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、搽剂或涂剂。但本发明并非限定于此，本领域技术人员认为可行的剂型均在本发明的保护范围之内。
本发明提供的抗氧化保健品的制备方法为将本发明的组合物用保健品中可接受的辅料溶解制得，所述保健品中可接受的辅料为辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、药用凡士林、液体石蜡中的一种或两种以上。但本发明并非限定于此，本领域技术人员认为可行的辅料种类均在本发明的保护范围之内。
作为优选，所述溶解的条件为：50-80℃恒温搅拌30-60min。在本发明提供的一些具体实施例中，优选50℃恒温搅拌30min进行溶解。
本发明提供了一种抗氧化组合物及其制备方法和应用。该组合物由包括五味子和大豆的原料制成。本发明将五味子和大豆进行复配，实验表明，该组合物对DPPH自由基具有显著地清除作用，显著降低了由t-Bhp刺激引起的细胞氧化损伤，能够有效地保护皮肤角质形成细胞的生长，产生了明显的协同增效的抗氧化功效。
具体实施方式
本发明公开了一种抗氧化组合物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的抗氧化组合物及其制备方法和应用中，所用原料或辅料均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1本发明抗氧化组合物
1、原料
五味子15份、大豆5份。
2、制备方法
(1)将五味子药材15份用15倍重量的去离子水加热60℃溶解5h，过滤，得滤渣；
(2)将步骤(1)过滤的滤渣用6倍重量的75vol％乙醇60℃恒温搅拌30min，热过滤，得滤液；
(3)将步骤(2)的滤液中加入壳聚糖，过滤，得滤液；
(4)将步骤(3)的滤液浓缩至无水，获得五味子浸膏；
(5)将五味子浸膏与5份粉碎后的大豆混合均匀，制得所述抗氧化组合物。
实施例2本发明抗氧化组合物
1、原料
五味子5份、大豆0.1份。
2、制备方法
1)将五味子药材5份用15倍重量的去离子水加热60℃溶解10h，过滤得滤渣；
(2)将步骤(1)过滤的滤渣用6倍重量的75vol％乙醇60℃恒温搅拌30min，热过滤，得滤液；
(3)将步骤(2)的滤液中加入明胶，过滤，得滤液；
(4)将步骤(3)的滤液浓缩至无水，获得五味子浸膏；
(5)将五味子浸膏与0.1份粉碎后的大豆混合均匀，制得所述抗氧化组合物。
实施例3本发明抗氧化组合物
五味子15份、大豆0.1份。制备方法同实施例1。
实施例4本发明抗氧化组合物
五味子5份、大豆5份。制备方法同实施例1。
对比例1
五味子5份、大豆6份。制备方法同实施例1。
对比例2
五味子16份、大豆0.1份。制备方法同实施例1。
实施例5抗氧化搽剂的制备
取实施例1的抗氧化组合物20份，用80份药用凡士林进行溶解，60℃恒温搅拌60min，过滤，制成抗氧化搽剂。
实施例6抗氧化擦剂的制备
取实施例2的抗氧化组合物15份，用85份液体石蜡进行溶解，50℃恒温搅拌60min，过滤，制成抗氧化擦剂。
实施例7抗氧化搽剂的制备
取实施例3的抗氧化组合物5.1份，用94.9份液体石蜡进行溶解，50℃恒温搅拌60min，过滤，制成搽剂。
实施例8抗氧化搽剂的制备
取实施例3的抗氧化组合物11份，用89份液体石蜡进行溶解，50℃恒温搅拌60min，过滤，制成搽剂。
实施例9抗氧化功效试验
(一)DPPH清除率的测定
准确称量19.7mg DPPH·，乙醇定容至500mL容量瓶中，终浓度为2×10-4mol/L。将实施例1、2和3以及对比例1、2的组合物用无水乙醇稀释成一系列浓度，制成样品溶液，用于DPPH清除率的测定。同时，设置正常对照组、五味子对照组和大豆对照组，其中五味子对照组按照实施例1的方法制备。
用移液器取50μL不同浓度的样品溶液加入到96孔板中，每个浓度设置三个平行；再分别加入50μL2×10-4mol/LDPPH或乙醇，按照下表1加入反应液：室温避光反应30min，反应后迅速在MD酶标仪517nm下测定吸光度。
表1DPPH·试验加样
| A0 | 50μLDPPH·溶液+50μL无水乙醇 |
| Ai | 50μL DPPH·溶液+50μL样品溶液 |
| Aj | 50μL样品溶液+50μL无水乙醇 |
按下列公式(1)计算结果：
S＝[1-(Ai-Aj)/A0]×100％………………………………………(1)
式中：
S——样品对DPPH·自由基的清除率；
A0——未加入提取液的DPPH·溶液的吸光度；
Ai——加入提取液后的DPPH·溶液的吸光度；
Aj——无水乙醇与提取液混合后的吸光度。
表2实施例1组合物在不同浓度下对DPPH自由基的清除率
| 浓度(mg/mL) | DPPH清除率(％) |
| 1.00 | 96.43 |
| 0.50 | 90.25 |
| 0.25 | 80.59 |
| 0.12 | 65.40 |
| 0.06 | 50.12 |
| 0.03 | 36.20 |
| 0.02 | 28.89 |
表3不同样品对DPPH自由基的清除率
结果显示，与正常对照组相比，五味子对照组、大豆对照组、实施例组合物组的三个剂量的DPPH清除率都有所提高，较正常对照组均具有显著差异(P＜0.0001)。在剂量相同的情况下，本发明组合物对DPPH的清除率显著高于对比例1组合物组、对比例2组合物组、五味子对照组、大豆对照组(P<0.05)，表明本发明组合物具有显著的抗氧化活性。
(二)本发明组合物对细胞氧化应激性损伤的保护作用研究
实验设置对照组和试验组，其中对照组分为空白对照组(只加培养基，不加细胞)和模型对照组。
试验组分为：
第一试验组：给予实施例1的组合物。
第二试验组：给予五味子浸膏，制备方法同实施例1。
第三试验组：给予大豆粉。
第四试验组：给予实施例2的组合物。
第五试验组：给予实施例3的组合物。
第六试验组：给予对比例1的组合物。
第七试验组：给予对比例2的组合物。
将第一试验组～第三试验组的样品分别用DMSO溶解，分别制成浓度为0.50、0.30、0.10、0.05、0.03、0.01mg/mL的样品溶液。
将HaCaT细胞(购自中科院上海生化所细胞库)接种在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5％CO2的细胞培养箱内进行培养，当细胞生长至80％密度时，以含EDTA的0.25％的胰酶消化细胞，于1000r/min离心5min，弃去上清液，加入新的培养基配成浓度为1.5×105cells/ml的细胞悬液，接种到96孔培养板，每孔100μl，细胞培养箱内培养24h，弃去旧培养基，分别加入样品溶液，每组设6个复孔，作用6h后，模型对照组和实验组加入400μMt-Bhp，实验组分别加入实施例1的组合物、大豆粉、五味子浸膏，模型对照组加入等体积的PBS。在CO2培养箱中继续培养5h后，弃去培养液，加入无血清培养基稀释的CCK-8溶液，继续培养1h，450nm波长下检测OD值，计算细胞存活率，结果见表4。
表4细胞毒性实验结果
结果显示，在样品浓度相同的情况下进行比较，第一试验组的皮肤角质形成细胞的存活率显著高于第二、三试验组(P<0.01)，显著降低了由t-Bhp刺激引起角质形成细胞的细胞毒性，有效保护了皮肤角质形成细胞的生长。
取实施例4的组合物进行上述试验，抗氧化功效与实施例1的组合物相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种抗氧化组合物，其特征在于，由五味子和大豆制成；所述五味子和大豆的质量比为(5～15)：(0.1～5)；
所述组合物的制备方法为：
步骤1：取五味子，加入10～20倍重量的水，50～80℃加热溶解4～10小时，过滤，收集滤渣；
步骤2：取步骤1的滤渣，加入4～8倍重量的60-80vol％的乙醇，50～80℃恒温搅拌30～60min，热过滤，收集醇提液，加入絮凝剂，过滤、浓缩，得到五味子浸膏；
步骤3：将步骤2得到的五味子浸膏与粉碎后的大豆混合均匀，制得所述抗氧化组合物。
2.根据权利要求1所述的抗氧化组合物，其特征在于，五味子和大豆的质量比为15：5。
3.权利要求1或2所述的抗氧化组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：取五味子，加入10～20倍重量的水，50～80℃加热溶解4～10小时，过滤，收集滤渣；
步骤2：取步骤1的滤渣，加入4～8倍重量的60-80vol％的乙醇，50～80℃恒温搅拌30～60min，热过滤，收集醇提液，加入絮凝剂，过滤、浓缩，得到五味子浸膏；
步骤3：将步骤2得到的五味子浸膏与粉碎后的大豆混合均匀，制得所述抗氧化组合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2具体为：
取步骤1的滤渣，加入6倍重量的75vol％的乙醇，60℃恒温搅拌45min，热过滤，收集醇提液，加入絮凝剂，过滤、浓缩，得到五味子浸膏。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述絮凝剂为壳聚糖、明胶、蛋清中的一种或两种以上。
6.权利要求1或2所述的抗氧化组合物或权利要求3～5任一项所述的制备方法制得的抗氧化组合物在制备具有抗氧化功效的保健食品或护肤品中的应用。
7.一种抗氧化保健品，包括权利要求1或2所述的抗氧化组合物或权利要求3～5任一项所述的制备方法制得的抗氧化组合物以及保健品中可接受的辅料。
8.根据权利要求7所述的抗氧化保健品，其特征在于，其剂型为片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、搽剂或涂剂。
9.权利要求7或8所述的抗氧化保健品的制备方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的组合物用保健品中可接受的辅料溶解制得，所述保健品中可接受的辅料为辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、药用凡士林、液体石蜡中的一种或两种以上。
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