CN108047039B

CN108047039B - 一种从新鲜的红薯叶中提取绿原酸的方法

Info

Publication number: CN108047039B
Application number: CN201810154455.7A
Authority: CN
Inventors: 肖秀丽
Original assignee: Meijianji Beijing Bioengineering Technology Co ltd
Current assignee: Meijianji (Beijing) Bioengineering Technology Co.,Ltd.
Priority date: 2018-02-23
Filing date: 2018-02-23
Publication date: 2021-06-11
Anticipated expiration: 2038-02-23
Also published as: CN108047039A

Abstract

本发明涉及一种从新鲜的红薯叶中提取绿原酸的方法，原料不需干燥直接使用，耗能少，绿原酸得率高，安全隐患低。提取过程中采用超声波提取法、微波辅助乙醇提取法和酶解辅助乙醇提取法，细胞破碎充分，保证了提取效率，为了获得高纯度的绿原酸，将提取物先过树脂柱，再用活性炭吸附进行精制，制得的绿原酸纯度高。

Description

一种从新鲜的红薯叶中提取绿原酸的方法

技术领域

本发明涉及一种提取工艺，特别涉及一种从新鲜的红薯叶中提取绿原酸的方法。

背景技术

绿原酸又名咖啡鞣酸，属酚类化合物，是植物细胞在有氧呼吸过程中经磷酸戊糖途径的中间产物合成的一种苯丙素类物质。20 世纪 50 年代 Hulme 从苹果中提出绿原酸，随着对绿原酸生物活性研究的深入，人们对绿原酸给予了高度的关注。有研究成果表明，绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、抗氧化及兴奋中枢神经系统等多种药理作用。除了药用外，绿原酸可以作为某些高级化妆品的添加剂、植物生长激素及食品中的添加剂等，因此绿原酸是食品、药品、化妆品等工业的重要原料。绿原酸本身有不稳定性，提取时要避免高温、长时间加热和强光照射。

绿原酸的植物来源有多种，主要包括杜仲科植物、忍冬科植物、蔷薇科植物、千屈菜科植物、无患子科植物、水龙骨科植物、马鞭草科植物、十字花科植物等。近年来，人们对于如何提取绿原酸已经做了大量研究。提取绿原酸传统的方法有水煎煮法，水提醇沉法，稀醇回流法，超临界 CO2 萃取法，渗漉法等。超临界 CO2 萃取法溶剂易得，产率高，但成本也高，目前还没有大规模应用于工业化生产。渗漉法提取效率较高，但耗时较长，经济效益不高。传统分离纯化绿原酸的方法主要有萃取法，碱沉淀法，聚酰胺柱层析法，大孔树脂吸附法等，碱沉淀法易使绿原酸水解，萃取法则需要大量有机溶剂，聚酰胺柱层析法和大孔树脂吸附法成本较高，不利于工业化生产。

公开号为 CN1974527 的中国专利介绍了一种从杜仲叶制备高纯度绿原酸和总黄酮的方法，是将干燥后杜仲叶粉碎，用乙醇提取；过大孔树脂柱，再过硅胶柱，减压浓缩，用丙酮或水重结晶，得绿原酸精品。但此方法纯化时间过长，产率低，能耗大，成本高等缺点。

公开号为 CN01144170.4 的中国专利介绍了一种中草药功能性成分的提取纯化方法，采用稀乙醇对金银花进行二次回流提取，浓缩提取物再用絮凝法初步除杂纯化，最后采用大孔树脂法或酸性乙酸乙酯萃取法纯化精制。此方法回流提取操作时间太长，纯度不高。

专利文献 CN101781211A 公开了一种葵花粕中绿原酸提取方法。该方法将葵花粕粉碎，加入浓度为 1％的纤维素酶和浓度为 5％的蛋白酶，纤维素酶与蛋白酶酶液比为 4 ：1，葵花粕与两种酶液比为 1 ：8，调 pH 值为 4，酶解时间 1.2h，酶解温度 49℃；再用 pH值为 3 ～6 的 45％～ 55％乙醇溶液浸提，使葵花粕中的绿原酸充分溶解在浸提液中，并冷却至室温；然后，再用大孔树脂法常规处理，经吸附、洗脱、干燥等工艺制得绿原酸。该方法操作较为简单，反应条件温和，而且提取的绿原酸无污染，更适合工业化生产，在一定的工艺条件下，绿原酸得率可达到 1.91％。

上所述，目前提取绿原酸的原料大多是干燥过后的，都是一些中草药和资源不丰富的材料，提取过程比较复杂。这类方法有以下缺点：在抽提前都要烘干，增加能源成本，绿原酸还会降解一部分，资源不丰富的材料还要增加运输成本。因而现有提取工艺存在不利于工业化以及得率较低的不足。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从新鲜的红薯叶中提取绿原酸的方法，从红薯叶中提取绿原酸可降低成本，该方法工艺简单，不使用有毒有机溶剂，利用大孔树脂提取是一种操作简便、经济实惠、适合于工业化大生产使用的分离技术。

本发明提供一种从鲜红薯叶提取绿原酸的方法，步骤包括：

1）将红薯叶进行破壁浸提，所述破壁浸提是在输出功率为 600 W 的微波条件下处理 1~3 分钟，用乙醇在温度为 70-90℃条件下提取两次，第一次 90 分钟，第二次 30分钟，合并两次提取液；

2）向所述提取液中加入相当于红薯叶重量 0.1%~0.3% 的果胶酶和相当于红薯叶重量 0.9%~1.6% 的半纤维素酶，在25~40℃条件下酶解2.5小时，然后升温至100℃灭酶20min，用抽滤泵进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，所述滤液处理回收利用；

3）将收集的所述滤渣转入到浸提容器中，加入乙醇溶液，搅拌混合均匀，并在超声波功率为100W，超声波频率为100KHz，温度为30℃条件下超声波处理15min，用抽滤机进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，对所述的滤渣再重复上述超声提取操作1～3次，合并滤液并转入离心机中，在离心转速为 3000r/min，压力为0.6MPa条件下进行离心分离3min，然后分别收集离心清液和离心渣；

4）将所述离心清液上大孔树脂柱吸附富集，所用大孔树脂的孔径为100-200埃，比表面积为500～800m²/g，药液流速控制在2～5mL/min ；用1～10 BV量70％ (V/V) 的乙醇洗脱，流速控制在2～5mL/min，洗脱液流出1～2BV后，开始收集洗脱液，将洗脱液过活性炭柱，收集液体，得绿原酸。

优选的，所述红薯叶为含水率在 70-80％的鲜叶，并且不必经任何干燥过程处理。

优选的，所述大孔树脂为KLFC-150 大孔树脂，且在使用之前需要进行预处理。

本发明的优点如下：

1、本发明改变了传统的生产工艺，原料不需干燥直接使用，耗能少，绿原酸得率高，安全隐患低。

2、新鲜红薯叶在农村储备很丰富，原材料成本低，运输成本也低。

3、提取过程中采用超声波提取法、微波辅助乙醇提取法和酶解辅助乙醇提取法，细胞破碎充分，保证了提取效率，为了获得高纯度的绿原酸，将提取物先过树脂柱，再用活性炭吸附进行精制，制得的绿原酸纯度高。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

【实施例1】

1）、将含水80%的红薯叶进行破壁浸提，破壁浸提是在输出功率为 600 W 的微波条件下处理 1 分钟，用乙醇在温度为70℃条件下提取两次，第一次 90 分钟，第二次 30分钟，合并两次提取液；

2）、向提取液中加入相当于红薯叶重量 0.1%的果胶酶和相当于红薯叶重量0.6%的半纤维素酶，在25℃条件下酶解2.5小时，升温至 100℃灭酶 20min，用抽滤泵进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，滤液处理回收利用；

3）、将收集的滤渣转入到浸提容器中，加入乙醇溶液，搅拌混合均匀，并在超声波功率为100W，超声波频率为100KHz，温度为30℃条件下超声波处理15min，用抽滤机进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，对所述的滤渣再重复上述超声提取操作2次，合并滤液并转入离心机中，在离心转速为 3000r/min，压力为0.6MPa条件下进行离心分离3min，然后分别收集离心清液和离心渣；

4）、将离心清液上KLFC-150大孔树脂柱吸附富集，所用大孔树脂的孔径为100埃，比表面积为600m²/g，药液流速控制在3mL/min ；用5 BV量70％ (V/V) 的乙醇洗脱，流速控制在3mL/min，洗脱液流出2BV后，开始收集洗脱液，将洗脱液过活性炭柱，收集液体，得绿原酸。

本实施例中，绿原酸的回收率为 44.5%，纯度为 93.0%。

【实施例2】

1）、将含水率80%的红薯叶进行破壁浸提，破壁浸提是在输出功率为 600 W 的微波条件下处理 2 分钟，用乙醇在温度为 90℃条件下提取两次，第一次 90 分钟，第二次30 分钟，合并两次提取液；

2）、向提取液中加入相当于红薯叶重量 0.3%的果胶酶和相当于红薯叶重量0.6%的半纤维素酶，在25℃条件下酶解2.5小时，升温至 100℃灭酶 20min，用抽滤泵进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，滤液处理回收利用；

4）、将离心清液上KLFC-150大孔树脂柱吸附富集，所用大孔树脂的孔径为100埃，比表面积为600m²/g，药液流速控制在 3mL/min ；用5 BV量70％ (V/V) 的乙醇洗脱，流速控制在 3mL/min，洗脱液流出2BV后，开始收集洗脱液，将洗脱液过活性炭柱，收集液体，得绿原酸。

本实施例中，绿原酸的回收率为 42%，纯度为 91.0%。

【实施例3】

1）、将含水率80%的红薯叶进行破壁浸提，破壁浸提是在输出功率为 600 W 的微波条件下处理5分钟，用乙醇在温度为90℃条件下提取两次，第一次 90 分钟，第二次 30分钟，合并两次提取液；

2）、向提取液中加入相当于红薯叶重量 0.2%的果胶酶和相当于红薯叶重量1.0%的半纤维素酶，在40℃条件下酶解2.5小时，升温至100℃灭酶 20min，用抽滤泵进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，滤液处理回收利用；

3）、将收集的滤渣转入到浸提容器中，加入乙醇溶液，搅拌混合均匀，并在超声波功率为100W，超声波频率为100KHz，温度为30℃条件下超声波处理 15min，用抽滤机进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，对所述的滤渣再重复上述超声提取操作2次，合并滤液并转入离心机中，在离心转速为 3000r/min，压力为0.6MPa条件下进行离心分离3min，然后分别收集离心清液和离心渣；

4）、将离心清液上KLFC-150大孔树脂柱吸附富集，所用大孔树脂的孔径为150埃，比表面积为800m²/g，药液流速控制在5mL/min ；用5 BV量70％ (V/V) 的乙醇洗脱，流速控制在3mL/min，洗脱液流出1BV后，开始收集洗脱液，将洗脱液过活性炭柱，收集液体，得绿原酸。

本实施例中，绿原酸的回收率为46%，纯度为 93.0%。

本发明具有如下有益效果：

上述说明已经充分揭露了本发明的具体实施方式。需要指出的是，熟悉该领域的技术人员对本发明的具体实施方式所做的任何改动均不脱离本发明的权利要求书的范围。相应地，本发明的权利要求的范围也并不仅仅局限于前述具体实施方式。

Claims

1.一种从新鲜的红薯叶中提取绿原酸的方法，其特征在于，其步骤如下：

1）将红薯叶进行破壁浸提，所述破壁浸提是在输出功率为 600 W 的微波条件下处理1~3 分钟，用乙醇在温度为 70-90℃条件下提取两次，第一次 90 分钟，第二次 30 分钟，合并两次提取液；所述红薯叶为含水率在 70-80％的鲜叶，并且不必经任何干燥过程处理；

2）向所述提取液中加入一定质量的复配酶，在温度为25~40℃的条件下酶解2.5小时，然后升温至100℃灭酶20min，用抽滤泵进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，所述滤液处理回收利用；所述一定质量的复配酶为，相当于红薯叶重量 0.1%~0.3% 的果胶酶和相当于红薯叶重量 0.9%~1.6% 的半纤维素酶；

3）将收集的所述滤渣转入到浸提容器中，加入乙醇溶液，搅拌混合均匀，并在超声波功率为100W，超声波频率为 100KHz，温度为 30℃的条件下超声波处理15min，用抽滤机进行抽滤，分别收集滤液和滤渣，对所述的滤渣再重复上述超声提取操作1～3次，合并滤液并转入离心机中，在离心转速为 3000r/min，压力为0.6MPa条件下进行离心分离3min，然后分别收集离心清液和离心渣；

4）将所述离心清液上大孔树脂柱吸附富集，所用大孔树脂的孔径为100-200埃，比表面积为 500～800m²/g，药液流速控制在 2～5mL/min ；用 1～10 BV量70％ (V/V) 的乙醇洗脱，流速控制在 2～5mL/min，洗脱液流出 1～2BV后，开始收集洗脱液，将洗脱液过活性炭柱，收集液体，得绿原酸；

所述大孔树脂为KLFC-150 大孔树脂，且在使用之前需要进行预处理。