CN108029554A

CN108029554A - 一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法

Info

Publication number: CN108029554A
Application number: CN201711255330.5A
Authority: CN
Inventors: 刘�英; 曾炳山; 姜清彬
Original assignee: Research Institute of Tropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Current assignee: Research Institute of Tropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Priority date: 2017-12-04
Filing date: 2017-12-04
Publication date: 2018-05-15

Abstract

本发明涉及一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，包括如下步骤：S1选取外植体采集的时间；S2选择外植体的采集长度；S3外植体的初步清洗；S4外植体消毒的合适长度选取；S5外植体的消毒；S6顶芽包片的剥离；S7接种外植体的剪取。本发明适用于郁闭林中火力楠的外植体消毒，对火力楠无性系选育研究和优良无性系的组培快繁及规模化生产具有重大的现实意义。

Description

一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法

技术领域

本发明涉及热带林木的良种选育及苗木繁殖技术领域，，涉及一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法。

背景技术

火力楠(Michelia macclurei Dandy)为木兰科(Dagnoliaceae)含笑属常绿阔叶乔木，分布于我国广东、海南和广西以及越南北部，生长速度快，适应性强，是世界珍稀优良树种，也是我国南方主要用材造林树种和优良的改土树种。其树干通直，木材切面装饰光滑美观，硬度较高且耐腐，易干燥，有香气，少开裂，不反翘，是优良的家具和建筑用材。其花朵艳丽、树型美观、林分燃烧性差，是优良的木本花卉、园林风景树和行道树，同时也是营建防火林带的主要树种，火力楠为乡土珍稀多用途造林树种。

近年来，火力楠作为速生珍贵乡土阔叶用材树种受到广泛的关注。很多省份及研究部门开展了火力楠种源区域化筛选、优良种源筛选、优树筛选、组培快繁技术等研究，目的是加快火力楠生产的良种化进程，提高火力楠林的单位面积产量。要实现以上目标必须具备以下两个条件：1、优良母株，即从1/3轮伐期以上的火力楠林中选择出优良个体。2、快繁技术，即突破火力楠优良无性系的快繁技术体系。组培是突破火力楠优良无性系快繁技术、规模化生产的最有效的技术体系，其外植体的消毒成功与否是组培快繁技术研究能否开展的先决条件，因此，发明郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，对开展火力楠良种选育研究及规模化生产火力楠优良无性系研究具有重要的现实意义。

火力楠的枝条被满密密的绒毛，杂菌深藏其中，且受伤后极易褐化，消毒难度大。采用常规方法消毒，即使延长消毒时间至外植体被杀死，杂菌常常还依然能生长，很难消毒成功，无法开展后续的组培快繁研究。郁闭林中火力楠优树的外植体，长期生长在森林中，尘土和杂菌更多，消毒难度更大。针对火力楠的外植体特点，开展多项系统探索试验，确定了外植体采集时间与方法、外植体处理方法，超声波清洗机清洗方式、升汞杀菌方法及时间，实现最高消毒成功率达到90％以上，可高效获得无菌外植体，且操作简单。本发明适用于郁闭林中火力楠优树的外植体消毒，对火力楠无性系选育、优良无性系的组培快繁及规模化生产具有重大的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单，生产成本低、高效率、应用价值高、便于开展火力楠组培快繁研究及优良无性系选育研究的郁闭林中火力楠优树的外植体消毒方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，包括如下步骤：

S1选取外植体采集时间：在夏、秋两季顶芽抽包，苞芽长到3～5cm，苞片未打开前采集枝条做外植体；

S2选择外植体的采集长度：选择外植体含抽苞顶芽的茎段10～15cm；

S3外植体的初步清洗：置于洗盘中，打开流动的自来水，一边用手轻抹外植体上的绒毛，一边清洗，直到看不见绒毛为度，然后干毛巾吸去外植体上的水分，备修剪消毒用；

S4外植体消毒的合适长度选取：取步骤S3清洗出来的外植体，筛选修剪外植体，具体包括如下步骤：

A1.去除有病虫伤害或运输受伤的外植体；

A2.苞芽长度超过4cm，从顶向下剪除过高部分，保留苞芽顶部4cm以下，苞芽基部2～3cm；

A3.除去外植体枝条的基部老化部分，仅保留新抽的茎段；

A4.外植体上下修剪后长度为6～7cm的带顶芽莖段待消毒；

S5外植体的消毒方法，具体包括如下步骤：

B1.步骤S4修剪好的外植体，放入200ml的果酱瓶中，外植体基部朝下，顶芽朝上；

B2.将0.1％的升汞倒入果酱瓶，浸没过外植体，再将果酱瓶移进超声波清洗机，超声波清洗机水槽中的自来水线，浸没过果酱瓶内的升汞线，开动超声波清洗机，记时开始；

B3.在SONICS状态下3～8min，在DEGAS状态下3～8min清洗消毒外植体；

S6顶芽包片的剥离：在超净工作台上，用无菌刀片，从顶芽包片基部向上慢慢削剥苞片，直到可以完全打开苞片，去除苞片，并去除已经长大的叶片，轻刮苞片下面的茎毛；

S7接种外植体的剪取：在超净工作台上，将经过S6处理的外植体，以苞芽基部为中心，苞芽长1.5～2.0cm，基部长0.8～1.5cm，总长为2.5～3.0cm为标准，剪取接种外植体。

进一步地，在步骤S1和S2中，在夏、秋两季顶芽开始抽包，苞芽长到3～5cm，苞片未打开前采取10～15cm外植体。

进一步地，在步骤S3和S4中，在流水中用手轻抹外植体绒毛至净，并剪去外植体苞芽过长部分，保留苞芽顶部4cm以下，苞芽基部2～3cm；外植体总长为6～7cm的消毒顶芽莖段。

进一步地，在步骤S5中，将外植体放入果酱瓶，再倒入0.1％的升汞，浸没过外植体，水槽中的自来水线，浸没过果酱瓶内的升汞线，在SONICS状态下3～8min，在DEGAS状态下3～8min清洗消毒外植体。

进一步地，在步骤S7中，并将外植体剪取为苞芽长1.5～2.0cm，基部长0.8～1.5cm，总长为2.5～3.0cm接种茎段。

本发明具有如下有益效果：

1、本发明确定夏、秋两季顶芽抽包，苞芽长到3～5cm，包片未打开前的时间段为采条时间，有效地降低了郁闭林中火力楠外植体的带菌量，并通过外植体处理方法，超声波清洗机清洗方式、升汞杀菌方法及时间等有机结合，实现最高消毒成功率达到90％以上，平均消毒成功率达60％以上，高效获得无菌外植体。

2、本发明适用于郁闭林中火力楠的外植体消毒，对火力楠无性系选育研究和优良无性系的组培快繁及规模化生产具有重大的现实意义。

3、本发明采用郁闭林中火力楠外植体为切入点，与1/3轮伐期的林分外植体具有很高的相似性，对今后林地选出的优树具有很高的应用价值。

4、本发明操作简单、效率高，便于应用。

具体实施方式

下面通过实施例来对本发明的技术方案作进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。

实例一

外植体采条地点：广东省新兴县

无性系号:18、23、41、63、68、109、143、169、

一种郁闭林中火力楠的外植体消毒方法，包括如下步骤：

S1外植体采集时间：于2016.12.1日从广东省新兴县采取顶端苞芽长到3～5cm，苞片未打开的41、63、18、109、23、68号的优树外植体；

S2外植体的采集长度：含抽苞顶芽的茎段10～15cm。

S3外植体的初步清洗：置于洗盘中，打开流动的自来水，一边用手轻抹外植体上的绒毛，一边清洗，直到看不见绒毛为度，然后干毛巾吸去外植体上的水分，备修剪消毒用。

S4外植体消毒长度：取步骤S3清洗出来的外植体，筛选修剪外植体：具体的步骤如下：

A1.去除有病虫伤害或运输受伤的外植体；

A3.除去外植体枝条的基部老化部分，仅保留新抽的茎段；

A4.外植体上下修剪后长度为6～7cm的带顶芽莖段待消毒；

S5外植体的消毒方法，具体包括如下步骤：

B1.修剪好的外植体，放入200ml的果酱瓶中，外植体基部朝下，顶芽朝上；

S6顶芽包片的剥离：在超净工作台上，用无菌刀片，从顶芽包片基部向上慢慢削剥苞片，直到可以完全打开苞片，去除苞片，并去除已经长大的叶片，轻刮苞片下面的茎毛。

培养30天后，消毒效果如下：18号消毒成功率98％，23号消毒成功率66.7％，41号消毒成功率45.1％，63号消毒成功率57.1％，68号消毒成功率63.5％，109号消毒成功率71.4％，143号成功率达到54.3％，169消毒成功率61.5％、平均消毒成功率达64.25％，最高消毒成功达到98％。

实例二

外植体采条地点：广东省新兴县

无性系号:28、47、91、111、141、128

一种郁闭林中火力楠优树的外植体消毒方法，包括如下步骤：

S1外植体采集时间：于2017.06.15日从广东省新兴县采取顶端苞芽长到3～5cm，苞片未打开的28、47、91、111、141、128号的优树外植体。

S2外植体的采取长度：去除叶片保留叶柄及苞片，顶芽茎段长度为8～12cm，用报纸及塑料袋包好保鲜，便于运输。

S3外植体的初步清洗：当天采集外植体，当天清洗及消毒处理。置于洗盘中，打开流动的自来水，一边用手轻抹外植体上的绒毛，一边清洗，直到看不见绒毛为度，然后干毛巾吸去外植体上的水分，备修剪消毒用。

S4外植体消毒长度：取S3清洗出来的外植体，筛选修剪外植体，具体的步骤如下：

A1.去除有病虫伤害或运输受伤的外植体。

A2.苞芽长达4～5cm的，从顶向下剪去2～3cm，保留2～3.0cm的包片。

A3.外植体基部保留新抽的一个茎段，去除全部老枝。

A4.外植体修剪为长度5～8cm的顶芽莖段。

S5外植体的消毒方法，具体的步骤如下：

B1.修剪好的外植体，放入200ml的果酱瓶中，外植体基部朝下，顶芽朝上。

B3.在SONICS状态下3～8min，在DEGAS状态下3～8min清洗消毒外植体。

S6顶芽包片的剥离：在超净工作台上，用无菌刀片，从顶芽包片基部向上慢慢削剥苞片，直到可以完全打开包片，去除苞片，并去除已经长大的叶片，轻刮苞片下面的茎毛。

S7接种外植体的剪取：在超净工作台上，将经过S6处理的外植体，以苞芽基部为中心，苞芽长1.5～2.0cm，基部长1.0～2.0cm，总长为2.5～3.0cm为标准，剪取接种外植体。

培养30天后，消毒效果如下：28号消毒成功率95％，47号消毒成功率46.0％，91号消毒成功率80.0％，111号消毒成功率54.5％，128号消毒成功率80.00％，141号消毒成功率44.00％，平均消毒成功率达66.58％，最高达到95％。

实例三

外植体采条地点：广东省新兴县

无性系号:41、63、68、90、91、111、128、147

环境变化：周边开山建高速路，尘土多。

参考实例1～2具操作方法，于2017.11.2采取41、63、68、90、91、111、128、147号外植体消毒，培养20天后，消毒效果如下：41号消毒成功率20.00％，63号消毒成功率57.00％，68号消毒成功率33.30％，90号消毒成功率70.8％，91号消毒成功率42.80％，111号消毒成功率54.00％，128号消毒成功率66.00％，147号消毒成功率42.80％，平均消毒成功率达49.13％，最高达到70.8％。

实例四

外植体采条地点：广东省新兴县

无性系号:18、23、28、47、143、169

环境变化：周边开山建高速路，尘土多。

参考实例1～2具操作方法，于2017.11.4采取18、23、28、47、143、169号外植体消毒，培养20天后，消毒效果如下：18号消毒成功率90.00％，23号消毒成功率50.00％，28号消毒成功率60.30％，47号消毒成功率55.8％，143号消毒成功率45.60％，169号消毒成功率63.00％，平均消毒成功率达60.78％，最高达到90.0％。

参照实施例1至实施例4；表1为常规消毒方法及本发明消毒方法对火力楠外植体消毒成功率的影响。

表1为常规消毒方法及本发明消毒方法对火力楠外植体消毒成功率的影响。

参照表1，在本发明中，按照本发明的操作步骤，其消毒成功率提升明显，较常规的消毒方式，具有明显稳定性及进步性。

以上为本发明的较佳实施方式，但实施方式并不是用来限定本发明，在不脱离本发明之精神和范围内，所做的任何等效变化或润饰，同样属于本发明之保护范围，因此本发明的保护范围应当以本申请的权利要求所界定的内容为标准。

Claims

1.一种郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，其特征在于，包括如下步骤：

A1.去除有病虫伤害或运输受伤的外植体；

A3.除去外植体枝条的基部老化部分，仅保留新抽的茎段；

A4.外植体上下修剪后长度为6～7cm的带顶芽莖段待消毒；

S5外植体的消毒，其方法具体包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，其特征在于，在步骤S1和S2中，在夏、秋两季顶芽开始抽包，苞芽长到3～5cm，苞片未打开前采取10～15cm外植体。

3.根据权利要求1所述郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，其特征在于，在步骤S3中，在流水中用手轻抹外植体绒毛至净，并剪去外植体苞芽过长部分。

4.根据权利要求1所述郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，其特征在于，在步骤S4中，保留苞芽顶部4cm以下，苞芽基部2～3cm；外植体总长为6～7cm的消毒顶芽莖段。

5.根据权利要求1所述郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，其特征在于，在步骤S5中，将外植体放入果酱瓶，再倒入0.1％的升汞，浸没过外植体，水槽中的自来水线，浸没过果酱瓶内的升汞线，在SONICS状态下3～8min，在DEGAS状态下3～8min清洗消毒外植体。

6.根据权利要求1所述郁闭林中火力楠外植体的消毒方法，其特征在于，在步骤S7中，并将外植体剪取为苞芽长1.5～2.0cm，基部长0.8～1.5cm，总长为2.5～3.0cm接种茎段。