CN108013475B - 一种多肽-多糖复合乳液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种多肽‑多糖复合乳液的制备方法,属于食品乳液技术领域,本发明将多肽、果胶与磷酸缓冲液混合后得到混合液,所述多肽由6个重复系列的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成且所述多肽中不含胃蛋白酶切点的氨基酸,所述磷酸缓冲液的pH值为7;将混合液与油相乳化得到初始乳化液;将初始乳化液超声处理得到多肽‑多糖复合乳液。本发明在中性环境下形成稳定乳液,且选用的多肽在酸性条件下稳定并且它的序列中没有被胃蛋白酶酶切的氨基酸位点,其与多糖形成的乳液在营养递送中应用更广泛。
Description
技术领域
本发明涉及食品乳液技术领域,特别涉及一种多肽-多糖复合乳液及其制备方法。
背景技术
乳液是一种或多种液体以液滴的形式分散在另一种互不相溶的液体中的分散体系,粒径在几十纳米到几十微米。在食品中,水包油(O/W)乳液在食品中有广泛的应用,如牛奶、冰淇淋等。常见的乳液由水相、油相、乳化剂等组成。由于油相的存在,乳液常被应用于疏水性营养素(如:β-胡萝卜素、番茄红素、核黄素等)的营养递送体系来提高营养素的溶解性并运输其到靶点释放。
普通的高酯果胶和低酯果胶的乳化性很差,很少直接用于食品乳液体系中。大多数研究是通过蛋白与果胶的静电吸附从而改善果胶的乳化性使其应用于食品乳液体系中,如华南理工大学侯俊杰在pH=3条件下制备出稳定的大豆蛋白-甜菜果胶静电吸附乳液;华中农业大学喻靖在pH=2和3条件下制备出稳定的大豆蛋白-柑橘果胶静电吸附水包油乳液,并研究其界面性质;华南理工大学刘丽娅研究了酪蛋白酸钠与黄原胶和羟甲基纤维素钠在玉米油-水的界面吸附行为,并在酸性条件下制备稳定的水包油乳液。大多数的研究是在酸性条件下制备的蛋白-多糖静电吸附乳液,但是目前蛋白-多糖静电吸附乳液在营养递送中有一定的限制,由于胃的强酸性环境(pH=0.9~1.5)和胃蛋白酶的存在,导致蛋白-多糖复合乳液容易在胃中结构破坏、营养物质损失。
发明内容
有鉴于此,本发明目的在于提供一种多肽-多糖复合乳液及其制备方法,本发明提供的制备方法在中性环境下形成稳定乳液,且选用的多肽在酸性条件下稳定,并且序列中没有被胃蛋白酶酶切的氨基酸位点,与果胶形成的乳液在营养递送中应用更广泛。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种多肽-多糖复合乳液的制备方法,包括以下步骤:
将多肽、果胶与磷酸缓冲液混合,得到混合液,所述多肽由6个重复排列的相同的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成,所述磷酸缓冲液的pH值为7;
将混合液与油相乳化,得到初始乳化液;
将初始乳化液超声处理,得到多肽-多糖复合乳液。
优选地,所述多肽为Ac-A6K2-NH2、Ac-G6K2-NH2或Ac-V6R2-NH2,所述A代表丙氨酸、所述K代表赖氨酸,所述G代表甘氨酸,所述V代表缬氨酸,所述R代表精氨酸。
优选地,所述果胶为柑橘低酯果胶、柑橘高酯果胶、苹果高脂果胶或苹果低酯果胶。
优选地,所述油相包括单链甘油三酯、玉米油、橄榄油、大豆油或鱼油。
优选地,所述多肽、果胶与缓冲液和油相的用量比为1~3mg:1~3mg:1~1.5mL:100~150μL。
优选地,所述乳化的时间为25s~35s。
优选地,所述超声处理的频率为20KHz,超声处理的超声强度为30%,超声处理的时间为5~60s。
本发明还提供了由上述技术方案所述制备方法制的多肽-多糖复合乳液,由包括多肽、果胶、磷酸缓冲液和油相的原料经乳化和超声处理制备得到,所述多肽由6个重复排列的相同的的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成且所述多肽中不含胃蛋白酶切点的氨基酸,所述磷酸缓冲液的pH值为7。
本发明还提供了所述的多肽-多糖复合乳液在食品添加剂中的应用。
有益技术效果:本发明将多肽、果胶与磷酸缓冲液混合,得到混合液,所述多肽由6个重复排列的相同的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成,所述磷酸缓冲液的pH值为7;将混合液与油相乳化得到初始乳化液;将初始乳化液超声处理得到多肽-多糖复合乳液。本发明提供的制备方法所用的多肽在中性条件下由于序列中含有带正电的氨基酸,能与果胶产生静电吸附形成稳定乳液,且选用的多肽在酸性条件下稳定,序列中不存在被胃蛋白酶酶切的氨基酸位点,其与果胶形成的乳液在营养递送中应用更广泛。
附图说明
图1为不同乳液贮藏过程中粒径大小变化图。
具体实施方式
本发明提供了一种多肽-多糖复合乳液的制备方法,包括以下步骤:
将多肽、果胶与磷酸缓冲液混合,得到混合液,所述多肽由6个重复排列的相同的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成且所述多肽中不含胃蛋白酶切点的氨基酸,所述磷酸缓冲液的pH值为7;
将混合液与油相乳化,得到初始乳化液;
将初始乳化液超声处理,得到多肽-多糖复合乳液。
本发明将多肽、果胶与磷酸缓冲液混合,得到混合液,所述多肽是由6个重复排列的相同的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成且所述多肽中不含胃蛋白酶切点的氨基酸,所述磷酸缓冲液的pH值为7。
在本发明中,所述重复排列的相同的疏水性氨基酸优选为疏水性氨基酸包括丙氨酸A、缬氨酸V、异亮氨酸I、脯氨酸P、甲硫氨酸M或甘氨酸G,更优选为丙氨酸A、缬氨酸V或甘氨酸G。所述多肽优选为Ac-A6K2-NH2、Ac-G6K2-NH2或Ac-V6R2-NH2,所述A代表丙氨酸,所述G代表甘氨酸,所述V代表缬氨酸,所述K代表赖氨酸,所述R代表精氨酸。更优选为Ac-A6K2-NH2或Ac-G6K2-NH2。本发明对所述多肽的来源没有特殊的限定,采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。
在本发明中,所述果胶优选为柑橘低酯果胶、柑橘高酯果胶、苹果高酯果胶或苹果低酯果胶,更优选为柑橘低酯果胶。本发明对果胶的来源没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。
在本发明中对磷酸缓冲液的来源没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。
在本发明中,所述混合的方法优选采用涡旋搅拌,所述涡旋搅拌的时间优选为3~10min,更优选为5~7min,所述涡旋搅拌的搅拌速度优选为200~400转/分钟,更优选为250~300转/分钟。本发明对涡旋搅拌的装置没有特殊要求,选用本领域技术人员熟知的装置即可,在本发明中优选为涡旋搅拌器。
限定多肽、果胶和磷酸缓冲液的用量比优选为1~3mg:1~3mg:1~1.5mL,更优选为1~3mg:1~3mg:1.2~1.4mL。
得到混合液后,本发明将混合液与油相乳化,得到初始乳化液。
本发明优选将混合液在室温下静置后加入油相进行乳化。在本发明中,所述油相优选包括单链甘油三酯、玉米油、橄榄油、大豆油或鱼油,更优选为单链甘油三酯、玉米油或橄榄油。
在本发明中,所述静置的时间优选为8~15min,更优选为10~13min;所述乳化的时间优选为25~35s,更优选为28~32s,最优选为30s。
在本发明中,所述多肽和油相的用量比优选为1~3mg:100~150μL,更优选为1~3mg:110~130μL。
本发明对乳化的方法没有特殊限定,选用本领域技术人员熟知的乳化方法即可,在本发明中,优选采用涡旋乳化。本发明对乳化的程度没有特殊限定,选用本领域技术人员熟知的乳化程度即可,如使油滴分散均匀即可。
得到初始乳化液后,本发明将初始乳化液超声处理,得到多肽-多糖复合乳液。
在本发明中,所述超声处理的频率优选为20KHz,超声处理的超声强度为优选为20~40%,更优选为25~35%,更优选为30%。超声处理的时间优选为5~60s,更优选为10~30s。
在本发明中,所述超声处理优选在冰水浴中进行。本发明对所述冰水浴的温度没有特殊的限定,采用本领域技术人员熟知的冰水浴温度即可。
在本发明中,所述超声处理的仪器优选为小探头高场强超声设备,所述超声设备的探头优选插入初始乳化液液面以下5mm。
本发明还提供了由上述技术方案所述制备方法制的多肽-多糖复合乳液,由包括多肽、果胶、磷酸缓冲液和油相的原料经乳化和超声处理制备得到,所述多肽由6个重复排列的相同的的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成且所述多肽中不含胃蛋白酶切点的氨基酸,所述磷酸缓冲液的pH值为7。
在本发明中,所述多肽、果胶、油相的种类独立地选自上述方案所述的多肽、果胶和油相的方案,在此不再赘述。
下面结合实施例对本发明提供的多肽-多糖复合乳液及其制备方法进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
称取2mgAc-A6K2-NH2与2mg柑橘低酯果胶于1.5mL离心管中,在该离心管中加入1mL的pH=7的磷酸缓冲液,将上述混合物在涡旋搅拌器上涡旋5min得到混合液;
将混合液在室温下静置10min,加入100μL油相(单链甘油三酯MCT),涡旋30s初乳化得到初始乳化液。
使用小探头高场强超声设备(探头型号:直径3mm;超声频率20KHz;超声强度30%)处理初始乳化液,将探头插入离心管液面下5mm,固定离心管,并保持冰水浴,开始超声,超声时间设置为10s,得到Ac-A6K2-NH2与柑橘低酯果胶复合乳液。
对比例1
将实施例1中的2mg多肽和2mg柑橘低酯果胶替换为4mg多肽Ac-A6K2-NH2,其它条件与实施例1相同,得到多肽Ac-A6K2-NH2乳液。
对比例2
将实施例1中的2mg多肽和2mg低酯果胶替换为4mg柑橘低酯果胶,其它条件与实施例1相同,得到低酯果胶乳液。
乳液制备完成后,采用Mastersizer2000激光粒度分布仪来测量实施例1~实施例3中乳液粒度的大小,由体积-平均直径(D43)表示。测量参数如下:折射指数:1.450,吸收参数:0.010,转速:2000r/min。粒度是3次读数的平均值。
表1实施例与对比例中不同乳液粒径大小比较
样品名称 | Ac-A<sub>6</sub>K<sub>2</sub>-NH<sub>2</sub> | 柑橘低酯果胶 | Ac-A<sub>6</sub>K<sub>2</sub>-NH<sub>2</sub>与柑橘低酯果胶静电吸附 |
粒径大小(μm) | 4.128±0.325 | 3.851±0.217 | 1.056±0.114 |
由表1可知以多肽(Ac-A6K2-NH2)与柑橘低酯果胶静电吸附后乳液粒径最低,乳化效果最好,乳液最稳定。
将实施例1及对比例1~2中制备得到的乳液室温下放置一个月观察并记录分层情况,结果如表2所示。
每间隔七天测量粒径变化,粒径测量方法采用Mastersizer 2000激光粒度分布仪来测量粒度的大小,由体积-平均直径(D43)表示。测量参数如下:折射指数:1.450,吸收参数:0.010,转速:2000r/min。粒度是3次读数的平均值。结果如图1所示。
表2不同乳液贮藏过程现象描述
由表2和图1可知Ac-A6K2-NH2与柑橘低酯果胶静电吸附乳液贮藏时间最长,乳液粒径变化最小,乳化效果最好,乳液最稳定。
对比例3
将实施例1中的2mg多肽替换为2mg大豆分离蛋白,其它条件与实施例1相同,得到大豆蛋白-柑橘低酯果胶复合乳液。
构建体外模拟胃消化模型(1L消化液中中含有1000mL蒸馏水,2gNaCl,3.2g胃蛋白酶,37℃下以100转/分钟搅拌),将实施例1中和对比例3中制备完成的乳液在上述消化液中反应1h。
消化完成后,采用Mastersizer2000激光粒度分布仪来测量粒度的大小,由体积-平均直径(D43)表示。测量参数如下:折射指数:1.450,吸收参数,0.010,转速:2000r/min。粒度是3次读数的平均值。测量结果图表3所示。
表3不同乳液经模拟胃液消化前后粒径大小比较
由表3可知大豆蛋白-柑橘果胶静电吸附乳液在经过模拟消化后粒径增大明显,乳液结构破坏。而多肽Ac-A6K2-NH2与柑橘低酯果胶静电吸附乳液经过模拟消化后粒径无明显增大,乳液结构未被破坏,乳液稳定。
实施例2
分别称取总量为4mg比例为1:3,1:2,1:1,2:1,3:1的Ac-A6K2-NH2和柑橘低酯果胶于1.5mL离心管中,在该离心管中加入1mL的pH=7的磷酸缓冲液,将上述混合物在涡旋搅拌器上涡旋5min溶解得到混合溶液。
将混合溶液室温下静置10min。加入100μL油相(单链甘油三酯MCT),涡旋30S初乳化得到初始乳化液。
使用小探头高场强超声设备(探头型号:直径3mm;超声频率20KHz;超声强度30%)处理上述初始乳化液,将探头插入离心管液面下5mm,固定离心管,并保持冰水浴,开始超声,超声时间为10S,得到不同比例的多肽-多糖复合乳化液。
乳液制备完成后,采用Mastersizer 2000激光粒度分布仪来测量粒度的大小,由体积-平均直径(D43)表示。测量参数如下:折射指数:1.450,吸收参数:0.010,转速:2000r/min。粒度是3次读数的平均值。测量结果如表4所示:
表4:实施例4中不同比例多肽与柑橘低酯果胶静电吸附乳液粒径大小比较
多肽-多糖比例 | 1:3 | 1:2 | 1:1 | 2:1 | 3:1 |
粒径大小(μm) | 5.368±0.687 | 4.325±0.299 | 1.056±0.114 | 3.156±0.558 | 4.295±0.221 |
由表4的数据可知,多肽Ac-A6K2-NH2与柑橘低酯果胶静电吸附乳液在比例为1:1时乳液粒径最小,乳化效果最好,乳液最稳定。
实施例3
分别称取2mgAc-A6K2-NH2与2mg柑橘低酯果胶于4支1.5mL离心管中,在各离心管中加入1mL的pH=7的磷酸缓冲液,将上述混合物在涡旋搅拌器上涡旋5min溶解得到混合溶液。
将混合溶液室温下静置10min,加入100μL油相(单链甘油三酯MCT)。涡旋30S初乳化得到初始乳化液。
使用小探头高场强超声设备(探头型号:直径3mm;超声频率20KHz;超声强度30%)处理上述初始乳化液,将探头插入离心管液面下5mm,固定离心管,并保持冰水浴,开始超声,超声时间为5,10,30,60S。
乳液制备完成后,采用Mastersizer 2000激光粒度分布仪来测量粒度的大小,由体积-平均直径(D43)表示。测量参数如下:折射指数:1.450,吸收参数,0.010,转速:2000r/min。粒度是3次读数的平均值。测量结果如表5所示:
表5:超声时间对乳液粒径的影响
超声时间(S) | 5 | 10 | 30 | 60 |
粒径大小(μm) | 2.385±0.157 | 1.056±0.114 | 2.012±0.023 | 4.118±0.322 |
由表1数据可知,多肽Ac-A6K2-NH2与柑橘低酯果胶静电吸附乳液超声时间为10s时乳液粒径最小,乳化效果最好,乳液最稳定。
实施例4
称取2mg多肽Ac-A6K2-NH2与2mg柑橘低酯果胶于1.5mL离心管中,在该离心管中加入1mL的pH=7的磷酸缓冲液,将上述混合物在涡旋搅拌器上涡旋10min得到混合液;
将混合液在室温下静置8min,加入150uL油相(玉米油),涡旋25S初乳化得到初始乳化液。
使用小探头高场强超声设备(探头型号:直径3mm;超声频率20KHz;超声强度30%)处理初始乳化液,将探头插入离心管液面下5mm,固定离心管,并保持冰水浴,开始超声,超声时间设置为10s,得到多肽-多糖复合乳液。
实施例5
称取2mg多肽Ac-V6R2-NH2与2mg柑橘高酯果胶于1.5mL离心管中,在该离心管中加入1mL的pH=7的磷酸缓冲液,将上述混合物在涡旋搅拌器上涡旋3min得到混合液;
将混合液在室温下静置8min,加入130uL油相(玉米油),涡旋35s初乳化得到初始乳化液。
使用小探头高场强超声设备(探头型号:直径3mm;超声频率20KHz;超声强度30%)处理初始乳化液,将探头插入离心管液面下5mm,固定离心管,并保持冰水浴,开始超声,超声时间设置为10s,得到多肽-多糖复合乳液。
本发明以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种多肽-多糖复合乳液的制备方法,由以下步骤组成:
将多肽、果胶与磷酸缓冲液混合,得到混合液,所述多肽由6个重复排列的相同的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成且所述多肽中不含胃蛋白酶切点的氨基酸,所述磷酸缓冲液的pH值为7;
将所述混合液与油相乳化,得到初始乳化液;
将所述初始乳化液超声处理,得到多肽-多糖复合乳液;
所述超声处理的时间为5~60s;
所述多肽为Ac-A6K2-NH2、Ac-G6K2-NH2或Ac-V6R2-NH2;所述A代表丙氨酸,所述K代表赖氨酸,所述G代表甘氨酸,所述V代表缬氨酸,所述R代表精氨酸;
所述多肽、果胶与磷酸缓冲液和油相的用量比为1~3mg:1~3mg:1~1.5mL:100~150μL。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述果胶为柑橘低酯果胶、柑橘高酯果胶、苹果高脂果胶或苹果低酯果胶。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述油相包括单链甘油三酯、玉米油、橄榄油、大豆油或鱼油。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述乳化的时间为25s~35s。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述超声处理的频率为20KHz,超声处理的超声强度为30%。
6.权利要求1~5任意一项所述的制备方法制备得到的多肽-多糖复合乳液,由包括多肽、果胶、磷酸缓冲液和油相的原料经乳化和超声处理制备得到,所述多肽由6个重复排列的相同的的疏水性氨基酸和两个带正电氨基酸组成且所述多肽中不含胃蛋白酶切点的氨基酸,所述磷酸缓冲液的pH值为7。
7.权利要求6所述的多肽-多糖复合乳液在食品添加剂中的应用。
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