CN108012931A - 山苍子的组织培养培养基 - Google Patents

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范辉华
王志洁
张娟
汤行昊
黄宇
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
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    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

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Abstract

本发明涉及山苍子的组织培养培养基，包括无菌培养的壮苗培养基和生根培养基，在MS培养基的基础上，增加了稀土元素，并对营养元素的用量进行了系统改良，本发明的培养基更适合山苍子组织培养试管苗生长。解决了现有技术中，山苍子组织培养容易出现褐变和试管苗生长细弱等不利于组培苗增殖和移栽成活等问题。

Description

山苍子的组织培养培养基
技术领域
本发明属于植物组织培养快繁技术领域，具体涉及山苍子的组织培养培养基。
背景技术
山苍子为樟科木姜子属珍贵芳香油料小乔木，其花、叶、果和树皮可蒸馏提取山苍子油，成熟的果实含油量最高。山苍子油中柠檬醛、高级醇、有机酸，柠檬醛含量高达70%，是配制香精、香料和合成维生素A、E的主要原料，还可直接用于杀虫灭菌，是我国出口创汇最大的天然植物精油。山苍子主要分布于我国浙江、福建、湖南等省，具有生态、经济、社会三大效益高度统一的树种。传统繁殖主要用种子播种育苗，不仅种子发芽率低，优良性状遗传不稳定，严重影响山苍子油的产量质量。植物组织培养无性繁殖是稳定保持遗传母本优良性状的有效育苗方法，目前，已有山苍子组织培养研究报道，如马崇坚等“山苍子不同外植体的组织培养”（广东农业科学，2005）、孙雁霞等“山苍子组织培养快速繁殖技术研究”（四川林业科技，2002）、骆瑞清等“不同因素组织培养对山苍子茎段腋芽生长发育的影响”（山东林业科技，2011）等，成功培育出完整植株。现有技术主要通过部分改变营养元素和植物生长调节剂种类和含量的方法，改善组培苗生长状况，取得了一定效果。我们采用现有技术方法，在研究和生产实践中发现，依然存在组培苗褐变发生率高、组培无菌芽苗生长细弱，有效苗率低等问题，组培整体效率低，使得组织培养技术难以在生产上大规模应用。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种山苍子组织培养培养基，该培养基包括无菌培养的壮苗培养基和生根培养基，其中：
1L壮苗培养基的组份及各组份的含量如下，单位为mg：
（1）大量元素：1100硝酸铵NH4NO3，1267硝酸钾KNO3,136磷酸二氢钾KH2PO4，,264七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，385氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，17.84硫酸锰MnSO4.H2O，4.96硼酸H3BO3，7.5硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O,0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：33.36硫酸亚铁FeSO4.7H2O，44.76乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.125盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.83盐酸多吡醇 C8H11NO3•HCl,2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物：1.55-1.85的6-苄基腺嘌呤6-BA，0.12-0.15萘乙酸NAA，8-10硝酸镧La(NO3)3·6H2O，21.8-23.6柠檬酸C6H8O7；
余量为蒸馏水；
1L生根培养基的组份及各组份的含量如下，单位为mg：
（1）大量元素：550硝酸铵NH4NO3，633硝酸钾KNO3，68磷酸二氢钾KH2PO4，159七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，165氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，8.92硫酸锰MnSO4.H2O，2.48硼酸H3BO3，4.3硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O，0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：36.14硫酸亚铁FeSO4.7H2O，48.49乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.17盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.67盐酸多吡醇 C8H11NO3·HCl，2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物：0.35-0.45吲哚丁酸IBA，0.15-0.25萘乙酸NAA，12-16硝酸镧La(NO3)3·6H2O，25.6-28.6柠檬酸C6H8O7；；
余量为蒸馏水。
有益效果：本发明技术系统研究植物营养对组培苗生长的影响，全面改进组培培养基组份和含量，解决现有技术不足，为山苍子规模化生产提供技术支撑。本发明的培养基更适合山苍子组织培养试管苗生长，解决了现有技术中，山苍子组织培养容易出现褐变和试管苗生长细弱等不利于组培苗增殖和移栽成活等问题。
具体实施方式
实施例一：
1L壮苗培养基的组份及各组份的含量如下，单位为mg：
（1）大量元素：1100硝酸铵NH4NO3，1267硝酸钾KNO3，136磷酸二氢钾KH2PO4，264七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，385氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，17.84硫酸锰MnSO4.H2O，4.96硼酸H3BO3，7.5硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O,0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：33.36硫酸亚铁FeSO4.7H2O，44.76乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.125盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.83盐酸多吡醇 C8H11NO3•HCl,2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物：1.55的6-苄基腺嘌呤6-BA，0.12萘乙酸NAA，8硝酸镧La(NO3)3·6H2O，21.8柠檬酸C6H8O7；
余量为蒸馏水。
1L生根培养基的组份及各组份的含量如下，单位为mg：
（1）大量元素：550硝酸铵NH4NO3，633硝酸钾KNO3，68磷酸二氢钾KH2PO4，159七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，165氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，8.92硫酸锰MnSO4.H2O，2.48硼酸H3BO3，4.3硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O，0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：36.14硫酸亚铁FeSO4.7H2O，48.49乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.17盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.67盐酸多吡醇 C8H11NO3·HCl，2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物：0.35吲哚丁酸IBA，0.25萘乙酸NAA，16硝酸镧La(NO3)3·6H2O，28.6柠檬酸C6H8O7；
余量为蒸馏水。
本实施例培养的试管苗95.8%达到移栽苗标准（无菌试管芽苗高2-3cm，粗度0.35cm以上），褐变率4.5%，生根率98.2%
实施例二：
1L壮苗培养基的组份及各组份的含量如下：
（1）大量元素：1100硝酸铵NH4NO3，1267硝酸钾KNO3，136磷酸二氢钾KH2PO4，264七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，385氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，17.84硫酸锰MnSO4.H2O，4.96硼酸H3BO3，7.5硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O，0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：33.36硫酸亚铁FeSO4.7H2O，44.76乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.125盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.83盐酸多吡醇 C8H11NO3•HCl,2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物： 1.85的6-苄基腺嘌呤6-BA, 0.15萘乙酸NAA, 10硝酸镧La(NO3)3·6H2O, 23.6柠檬酸C6H8O7；
余量为蒸馏水。
1L生恨培养基的组份及各组份的含量如下：
（1）大量元素：550硝酸铵NH4NO3，633硝酸钾KNO3，68磷酸二氢钾KH2PO4，159七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，165氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，8.92硫酸锰MnSO4.H2O，2.48硼酸H3BO3，4.3硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O，0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：36.14硫酸亚铁FeSO4.7H2O，48.49乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.17盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.67盐酸多吡醇 C8H11NO3·HCl，2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物：0.45吲哚丁酸IBA，0.15萘乙酸NAA，12硝酸镧La(NO3)3·6H2O，28.6柠檬酸C6H8O7；
余量为蒸馏水。
本实施例培养的试管苗96.2%达到移栽苗标准（无菌试管芽苗高2-3cm，粗度0.35cm以上），褐变率4.2%，生根率98.5%
以上述依据本发明理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。

Claims (1)

1.山苍子的组织培养培养基，包括无菌培养的壮苗培养基和生根培养基，其特征在于：
1L壮苗培养基的组份及各组份的含量如下，单位为mg：
（1）大量元素：1100硝酸铵NH4NO3，1267硝酸钾KNO3,136磷酸二氢钾KH2PO4，264七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，385氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，17.84硫酸锰MnSO4.H2O，4.96硼酸H3BO3，7.5硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O；0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：33.36硫酸亚铁FeSO4.7H2O，44.76乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.125盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.83盐酸多吡醇 C8H11NO3•HCl,2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物：1.55-1.85的6-苄基腺嘌呤6-BA，0.12-0.15萘乙酸NAA，8-10硝酸镧La(NO3)3·6H2O，21.8-23.6柠檬酸C6H8O7；
余量为蒸馏水；
1L生根培养基的组份及各组份的含量如下，单位为mg：
（1）大量元素：550硝酸铵NH4NO3，633硝酸钾KNO3，68磷酸二氢钾KH2PO4，159七水合硫酸镁MgSO4.7H2O，165氯化钙无水CaCl2；
（2）微量元素:0.42碘化钾KI，8.92硫酸锰MnSO4.H2O，2.48硼酸H3BO3，4.3硫酸锌ZnSO4.7H2O，0.25钼酸钠Na2MoO4.2H2O，0.025硫酸铜CuSO4.5H2O，0.025氯化钴CoCl2.6H2O；
（3）铁盐：36.14硫酸亚铁FeSO4.7H2O，48.49乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA；
（4）有机附加物：100肌醇C6H12O6，0.5烟酸C6H5NO2，0.17盐酸硫胺素C12H17ClN4OS·HCl，0.67盐酸多吡醇 C8H11NO3·HCl，2甘氨酸C2H5NO2；
（5）植物生长调节剂及其它添加物：0.35-0.45吲哚丁酸IBA，0.15-0.25萘乙酸NAA，12-16硝酸镧La(NO3)3·6H2O，25.6-28.6柠檬酸C6H8O7；
余量为蒸馏水。
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