CN108004146A - 一种底栖硅藻培养方法 - Google Patents

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张壮志
孙娟
李霞
刘学迁
潘金华
赵楠
王青岩
李晓捷
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明属于水产养殖行业，具体是为了培养养殖饲料所使用的一种底栖硅藻培养方法。其特征是：将分离纯化所得的舟形藻及谷皮菱形藻以一定的细胞密度接种至液体F培养基中，将循环泵放于其中，进行间歇性循环，即间隔2小时循环10分钟，改良后的F培养基配方如下：NaNO3：149.6mg；NaH2PO4：8.8mg；FeC6H5O7·5H2O：3.9mg；微量元素溶液母液：1mL；维生素溶液母液：1mL；纯水：1000mL。维生素母液：维生素B1：100mg；维生素B12：0.5mg；纯水：500mL。底栖硅藻培养在5000mL的三角烧瓶中，均采用改良后的F培养基，正常煮沸海水，盐度31，光照强度50μmolE·m‑ 2s‑1，光照周期为16L：8D，温度为20℃。本发明操作简单方便快捷，成本低廉，适于推广应用。

Description

一种底栖硅藻培养方法
技术领域
本发明属于水产养殖行业，具体是为了培养养殖饲料所使用的一种底栖硅藻培养方法。
背景技术
海洋底栖硅藻是鲍鱼、海参及海胆等名贵水产动物苗种生产中的重要饵料，培养充足的优质底栖硅藻是人工育苗生产成功的重要环节之一。由于底栖硅藻生活方式的特异性，无法与浮游微藻一样进行悬浮静置培养。目前，生产上所使用底栖硅藻饵料一般都是从当地海域大型海藻上采集的天然混合底栖硅藻，直接投在有附着基的养殖池中进行继代培养，从而导致了杂质多，密度有限且容易带入敌害生物或其他竞争藻类甚至是有毒微藻。因此，有必要在将底栖硅藻藻种投入到育苗池中之前，采用适当的培养方法将已经筛选出的优良底栖硅藻藻种培养到一定密度，这样既保证了藻种的生长优势，又能预防杂藻污染。本方法操作简单，培养周期短，节约成本和劳动力。
发明内容
本发明就是为了解决上述问题而发明的一种底栖硅藻培养方法。
为达到以上目的，本发明一种底栖硅藻培养方法，其特征是：将分离纯化所得的舟形藻及谷皮菱形藻以一定的细胞密度接种至液体F培养基中，将循环泵放于其中，进行间歇性循环，即间隔2小时循环10分钟，这样即可保证底栖硅藻以单细胞状态存在，又可保证底栖硅藻在培养基中均匀分布，悬浮生长。
本发明一种底栖硅藻培养方法，其特征是：改良后的F培养基配方如下：NaNO3：149.6mg；NaH2PO4：8.8mg；FeC6H5O7·5H2O：3.9mg；
微量元素溶液母液：1mL；维生素溶液母液：1mL；纯水：1000mL
注：微量元素母液：ZnSO4·4H2O：23mg；Na2MoO4·2H2O：7.3mg；MnCl2·4H2O：178mg；CoCl2·6H2O：12mg；CuSO4·5H2O：10mg；Na2EDTA：4.35g；纯水：500mL
维生素母液：维生素B1：100mg；维生素B12：0.5mg；纯水：500mL
本发明一种底栖硅藻培养方法，其特征是：底栖硅藻培养条件如下：在5000mL的三角烧瓶中，均采用改良后的F培养基，正常煮沸海水，盐度31，光照强度50μ molE·m-2s-1，光照周期为16L：8D，温度为20℃。
本发明创造的有点：
本发明操作简单，在短时间内可培养大量的底栖硅藻用于生产育苗，不受外界温度等环境的影响，可以用于底栖硅藻的长期培养，且与传统方法相比，生长速率提高43％，生物活性物质如胞外多糖含量提高24％，胞内多糖含量提高36％，胞内蛋白含量提高23％。本方法方便快捷，成本低廉，适于推广应用。
附图说明
图1藻种分离纯化流程图片及藻种镜检图片(A、B)。
图2底栖硅藻扩大培养流程图。
图3循环泵装置图(A：循环泵10V；B：变压器；C：时控开关)。
图4发明方法与传统方法培养结果比较(A、B、C、D本发明方法培养；E、F、G、H：传统方法培养)。
具体实施方式
1、藻种分离纯化及培养：
从山东东方海洋云溪基地海区获得底栖硅藻的混合藻种，多次离心去除细菌等杂质生物，在培养皿中采用改良后的F培养基进行静置富集培养。7-10天后，底栖硅藻附着于培养皿底部的载玻片上，于显微镜下观察生长情况，采用微吸管法或固体平板法分离得到底栖硅藻的单克隆细胞。
经分离纯化所得的底栖硅藻藻种，分别放于500mL的三角烧瓶中，采用改良后的F培养基，正常煮沸海水，盐度31，光照强度50μ molE·m-2s-1，光照周期为16L：8D。温度为20℃。(见附图1)
2、扩大培养：
(1)改良后F培养基的配制：
NaNO3：149.6mg；NaH2PO4：8.8mg；FeC6H5O7·5H2O：3.9mg；
微量元素溶液母液：1mL；维生素溶液母液：1mL；纯水：1000mL。注：微量元素母液：ZnSO4·4H2O：23mg；Na2MoO4·2H2O：7.3mg；MnCl2·4H2O：178mg；CoCl2·6H2O：12mg；CuSO4·5H2O：10mg；Na2EDTA：4.35g；纯水：500mL。
维生素母液：维生素B1：100mg；维生素B12：0.5mg；纯水：500mL。
(2)器皿及海水的处理：5000mL三角瓶中5000mL海水煮沸，18.9L矿泉水桶采用漂白液消毒，其他小型器皿等进行高压灭菌。
(3)底栖硅藻藻种预培养：将500mL三角瓶中保存的谷皮菱形藻和舟形藻扩培到5000mL改良后的F培养基中，用循环泵装置(见附图3)放于其中，进行间歇性循环，即间隔2h循环10min，进行悬浮培养3-5天，底栖硅藻处于指数生长期后，进行第二次扩培。
(4)第二次扩培：将预培养的底栖硅藻藻液以1：4的体积比接种于改良后的F培养基中，利用循环泵装置(见附图3)进行培养(见附图2)。
(5)数据测定及分析：在培养过程中每天采用血球计数板法测定细胞密度，指数生长末期测定多糖、蛋白及叶绿素含量，与传统方法相比较，发现此发明本发明操作简单，可以保证底栖硅藻在培养基中均匀分布，悬浮生长(见附图4)，在短时间内可培养大量的底栖硅藻用于生产育苗，不受外界温度等环境的影响，可以用于底栖硅藻的长期培养。且与传统方法相比，生长速率提高43.76％，生物活性物质如胞外多糖含量提高24.37％，胞内多糖含量提高36.05％，胞内蛋白含量提高23.29％。
综上所述，本发明操作简单方便快捷，成本低廉，在短时间内可培养大量的底栖硅藻用于生产育苗，不受外界温度等环境的影响，适于推广应用。

Claims (4)

1.一种底栖硅藻培养方法，其特征是：将分离纯化所得的舟形藻及谷皮菱形藻以一定的细胞密度接种至液体F培养基中，将循环泵放于其中，进行间歇性循环，即间隔2小时循环10分钟，这样即可保证底栖硅藻以单细胞状态存在，又可保证底栖硅藻在培养基中均匀分布，悬浮生长。
2.根据权利要求1所述的一种底栖硅藻培养方法，其特征是：改良后的F培养基配方如下：NaNO3：149.6mg；NaH2PO4：8.8mg；FeC6H5O7·5H2O：3.9mg；微量元素溶液母液：1mL；维生素溶液母液：1mL；纯水：1000mL。
3.根据权利要求2所述的一种底栖硅藻培养方法，其特征是：微量元素母液：ZnSO4·4H2O：23mg；Na2MoO4·2H2O：7.3mg；MnCl2·4H2O：178mg；CoCl2·6H2O：12mg；CuSO4·5H2O：10mg；Na2EDTA：4.35g；纯水：500mL，维生素母液：维生素B1：100mg；维生素B12：0.5mg；纯水：500mL
4.根据权利要求1所述的一种底栖硅藻培养方法，其特征是：底栖硅藻培养条件在5000mL的三角烧瓶中，均采用改良后的F培养基，正常煮沸海水，盐度31，光照强度50μmolE·m-2s-1，光照周期为16L：8D，温度为20℃。
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