CN107980005B - 抗fgfr4抗体和胆汁酸螯合剂的组合 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及由针对FGFR4抑制的疗法引起的毒性作用的改善。具体而言，本发明涉及FGFR4抑制剂与能够降低胆汁酸水平的药剂的组合，及其在疾病治疗中的用途。

Description

抗FGFR4抗体和胆汁酸螯合剂的组合
描述
本发明涉及由针对FGFR4抑制的疗法引起的毒性作用的改善。具体而言，本发明涉及FGFR4抑制剂与能够降低胆汁酸水平的药剂的组合，并涉及其在治疗疾病中的用途。
可溶性成纤维细胞生长因子(FGF)及其跨膜受体涉及广泛的细胞功能，包括增殖、迁移、分化和存活。四种受体FGF1-4具有酪氨酸激酶结构域，并且通过一种18分泌糖蛋白FGF与其细胞外免疫球蛋白结构域的结合而被激活。配体结合导致FGFR二聚化，细胞内裂解酪氨酸激酶结构域的自身磷酸化和下游信号传导途径(诸如RAS依赖性促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径、AKT依赖性抗凋亡途径以及转录信号转导蛋白和激活物(STAT)信号传导)的激活。
已发现FGFR4在许多肿瘤类型中是重要的，在前列腺、乳腺、胰腺、垂体、肝细胞和妇科肿瘤中发生过表达。FGFR4已被认为是乳腺癌细胞系中的癌基因。在其它肿瘤类型中，FGFR4突变罕见，但单核苷酸多态性FGFR4G388R增加稳定性，延长受体的活化并且与黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌和头颈癌中的不良预后相关。考虑到FGFR4在多种肿瘤疾病中的作用，目前将FGFR4的抑制作为治疗过度增殖性病症的可能策略正在进行广泛测试。
此外，预期对FGFR4的抑制可成功治疗其它疾病，特别是心血管疾病，诸如高血压、左心室肥大(Faul等，J ClinUnvest,2011；121(11):4393-4408)、慢性肾病(Jimbo和Shimosawa，Int.J Hypertension,2014)、肌营养不良(Zhao等，2006，2006,The Journal ofBiological Chemistry,281,429-438)和代谢疾病，特别是肥胖或糖尿病(Yu等；2013,PLosONE,8(7):e66923)。
FGFR4除了参与肿瘤和其它疾病的发展外，还在胆汁酸稳态的调节中起着重要的稳态生理作用。通过FGFR4的FGF15/19信号传导抑制了肝脏中的从头胆汁酸生成，将这些去垢剂样分子的肝脏和全身水平紧紧地维持在生理学阈值处。这可预防胆汁酸水平升高的病理性并发症诸如胆汁淤积性肝损伤和胆汁酸腹泻。
迄今为止未在人中测试过特定的FGFR4定向疗法，并且没有关于猴中的直接FGFR4抑制及其副作用的可用数据。从小鼠实验可知，通过其配体之一FGF19在肝中激活FGFR4导致催化肝细胞中胆汁酸合成的限速步骤的酶-Cyp7A1的表达降低(Inagaki等(2005),CellMetab.2,217–225)。因此这继而导致胆汁酸合成的抑制。与野生型动物相比，FGFR4基因敲除小鼠的特征在于小的耗竭胆囊和分泌胆汁酸增加2-3倍(Yu,C.，等(2000),J.Biol.Chem.275,15482-9)，然而没有明显的毒性作用。在食蟹猴中，测试了抗FGF19的抗体，发现其引起由胆汁酸水平升高引起的重度腹泻和体重减轻。所有被给予超过3mg/kg抗体的动物必须被处死(Pai等，2012,Toxicol.Sci.126,446–456)。抗体介导的对成纤维细胞生长因子19的抑制导致食蟹猴胆汁酸合成增加和胆汁酸回肠吸收不良。胆汁酸是致癌物(Jansen PL,J Hepatol2007；47；434-5)，并且已知胆汁酸失调会促进肝细胞癌的发展。
在最近的一篇综述文章(Mellor H.R.2014,Liver Int.,2014,1-9)中，论述了肝细胞癌患者中FGF19-FGFR4阻断的可能的病理生理学后果。作者的结论是，不可能在肝细胞癌患者的肝中充分抑制FGF19-FGFR14轴以积极地影响恶性肿瘤，而不会引起在用抗FGF19治疗的灵长类动物中观察到的剂量限制性毒性。为了减轻在胆汁酸吸收不良患者中观察到的腹泻症状，提及了胆汁酸螯合剂的施用。由于预期的副作用，诸如胆汁酸螯合剂共同给药对胃肠道吸收的不利影响和口服施用的靶向FGF19-FGFR4的小分子亲脂性化合物的全身性暴露，作者对这种方法持批评态度。现有技术未能提供如何减轻由于高胆汁酸水平所观察到的毒性作用，同时有效地抑制FGFR4信号传导途径的一般适用性策略。
在本发明中令人惊讶地发现，如果将FGFR4抑制剂与能够降低胆汁酸水平的另一种活性剂组合，则通过FGFR4抑制剂对成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)的抑制提供的毒副作用可被预防或治疗。据观察，由于FGFR4在降低胆汁酸水平中的生物学功能，对该受体的抑制导致升高的胆汁酸水平，然后这导致对肠和肝的毒性作用。因此，根据本发明，通过胆汁酸螯合剂在肠中结合胆汁酸可防止胆汁酸水平的积累，所述胆汁酸螯合剂随后与结合的胆汁酸一起被排泄。同时，共同加药的FGFR4抑制剂的期望活性不受损害。这种方法使得使用FGFR4导向疗法成为可能，而没有观察到可能阻碍患者成功治疗的过度毒副作用。
本发明的第一方面涉及FGFR4抑制剂与能够降低胆汁酸水平的药剂的组合用于预防、缓解或/和治疗疾病，特别是与FGFR4表达、过表达和/或活性过度相关的疾病。
待治疗的疾病特别地是过度增殖性病症、心血管疾病，特别是高血压、左心室肥大、心脏肥大、慢性肾病、肌营养不良和代谢疾病，特别是肥胖和糖尿病。
如本文中所用，“过度增殖性病症”或“过度增殖性病症”包括任何瘤形成，即动物中组织的任何异常新生长，这可取决于生长调节的功能障碍或/和丧失。过度增殖性病症包括肿瘤疾病和/或癌症，例如，实体瘤诸如癌、腺瘤和肉瘤，或非实体瘤诸如白血病。过度增殖性病症优选以FGFR4过表达(即与正常组织相比增加的FGFR4表达)为特征。
在本发明中，过度增殖性病症优选为癌症，更优选过度增殖性病症选自肝细胞癌、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤、头颈部鳞癌、肺腺癌、肾癌、膀胱癌、脑癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、小肠癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、脾癌、甲状腺癌、垂体癌、肾上腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、睾丸癌、前列腺癌、神经胶质瘤、黑素瘤或/和白血病，特别是肝细胞癌。
在一个优选实施方案中，癌症是非转移性癌症，特别是具有FGFR4-388Gly等位基因或/和FGFR4 388Arg等位基因的患者中的非转移性癌症。在一个进一步的实施方案中，癌症是转移性癌症，特别是具有FGFR4-388Arg等位基因的患者中的转移性癌症。
在转移性癌症的情况下，本发明适合于治疗转移、转移形成或/和转移进展，特别是在微转移中，优选在如上定义的过度增殖性病症中。转移，特别是微转移，通常不能通过手术达到，而需要药物治疗或/和放射治疗。
根据另一个实施方案，与FGFR4表达、过表达和/或活性过度相关的疾病是代谢疾病，特别是代谢综合征或肥胖症。
根据本发明的另一个实施方案，与FGFR4表达、过表达和/或活性过度相关的疾病是心室肥大、心脏肥大或慢性肾病。
与本发明的FGFR4抑制剂组合的、能够降低胆汁酸水平的药剂优选为胆汁酸螯合剂，诸如考来烯胺、考来替泊和/或考来维仑。出乎意料地发现能够促进胆汁酸清除的药物诸如熊去氧胆酸，不太适合本发明的目的。根据本发明的一个特别优选的方面，能够降低胆汁酸水平的药剂是胆汁酸螯合剂，特别是考来烯胺。令人惊讶地发现，考来烯胺优于其它胆汁酸螯合剂和能够促进胆汁酸清除的药剂。其特别适合触发由FGFR4抑制剂引起的毒性，同时其不会不利地影响抑制FGFR4信号传导途径的期望活性。
本发明还设想了施用至少两种如上定义的能够降低胆汁酸水平的药剂。特别地，两种、三种、四种或五种能够降低胆汁酸水平的药剂。具体而言，可以组合两种或更多种胆汁酸螯合剂。
使用考来烯胺作为能够降低胆汁酸水平的药剂时，发现当与FGFR4的抑制剂组合时，每天每千克体重0.1至1.0g的量是特别合适的剂量。优选地，每天每千克体重0.2至0.6g，特别地每天每千克体重0.3至0.4g，例如每天每千克体重约0.35g是合适的。
如本文中所用，共施用(也称为联合治疗或联合疗法)是指施用本发明的FGFR4抑制剂和能够降低胆汁酸水平的药剂，使得它们同时具有活性。
共施用包括以单一组合物的形式或以不同组合物(优选至少两种不同的组合物，更优选两种不同的组合物)的形式施用FGFR4抑制剂和能够降低胆汁酸水平的药剂(例如一种或多种胆汁酸螯合剂)。共施用包括同时(即在相同时间)或相继(即间隔地)施用能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)和FGFR4抑制剂。
“间隔地”共施用包括在最大1小时，最大6小时，最大12小时，最大一天或最大一个月的间隔内施用能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)和FGFR4抑制剂。间隔地共施用还包括按以每日、每周或每月为基础的相同或不同的时间安排施用能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)和FGFR4抑制剂，这还取决于能够降低胆汁酸水平的药剂和FGFR4抑制剂的剂型，所述剂型可以是相同的或不同的，例如快速释放剂型、控释剂型或/和储库形式。例如，共施用包括用于施用能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)和FGFR4抑制剂的不同时间安排。
可将能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)和FGFR4抑制剂一起施用或分开施用。特别优选将FGFR4抑制剂和能够降低酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)分开作为两种不同的组合物施用。
可能以单剂施用FGFR4抑制剂和能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)，或者分成每天两剂或更多剂，特别是两剂或三剂分开施用。对于FGFR4抑制剂，优选每天施用单剂。对于能够降低胆汁酸水平的药剂，每天两剂或三剂是特别优选的。
在本发明的一个实施方案中，FGFR4抑制是特异性抑制。“特异性抑制”是FGFR4活性的选择性抑制。在对FGFR4的特异性抑制中，其它细胞组分，特别是受体(例如FGFR1、FGFR2或/和FGFR3)的活性不被显着抑制，即特异性FGFR4抑制剂对其它细胞组分的IC50值是针对FGFR4的IC50值的至少10倍，优选100倍，更优选1000倍。根据本发明，优选使用特异性FGFR4抑制剂。FGFR4的非特异性抑制是可能的，但不太优选。
本发明的FGFR4抑制剂优选为与FGFR4的胞外结构域特异性结合的分子。
本发明的FGFR4抑制剂可以是直接抑制剂或间接抑制剂。FGFR4的直接抑制剂直接抑制FGFR4、FGFR4转录物或/和FGFR4基因，从而降低FGFR4活性。
间接FGFR4抑制剂不是如上所述直接抑制FGFR4，而是作用于与FGFR4相互作用的靶，例如FGFR4配体，诸如FGF1、-2、-4、-6、-8、-16、-17、-18或-19、下游靶标诸如BclXL或MAP激酶级联中的蛋白质，诸如Erk1或/和Erk2。此外，FGFR4的间接抑制可通过转录或翻译抑制剂或者运输途径或脂筏的抑制剂来实现。
如本文中所用，“FGFR4活性”包括FGFR4多肽产生生理学或病理生理学作用，特别是细胞对凋亡的抗性的能力。
在本发明中，可在核酸水平上，例如在基因水平上或在转录水平上抑制FGFR4的活性。对基因水平的抑制可以包括部分或完全的基因失活，例如通过基因破坏。也可在转录水平上发生抑制，例如，通过施用可被导向针对FGFR4mRNA、FGFR4配体mRNA和/或下游靶标的mRNA的反义分子、核酶、siRNA分子。合适的反义分子可选自DNA分子、RNA分子和核酸类似物。核酶可选自RNA分子和核酸类似物。能够RNA干扰的小的双链RNA分子(siRNA分子)可选自RNA分子和核酸类似物。优选的双链siRNA分子具有19-25个核苷酸的链长和任选地至少一个3'-悬突。合适的siRNA分子可以例如根据Elbashir等(Nature 411(2001),494-498),Elbashir等(Genes&Dev.15(2001),188-200)或Elbashir等(EMBO J.20(2001),6877-6898)获得。这些文献的内容通过引用并入本文。
另外，可在蛋白质水平上抑制FGFR4活性，例如，通过施用导致特异性FGFR4抑制的化合物。在蛋白质水平上的抑制可包括例如抗体或抗体片段的应用。具体而言，这些抗体或抗体片段特异性地针对FGFR4，优选针对FGFR4的胞外结构域，或针对FGFR4配体或/和针对下游靶标。抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体、重组抗体例如单链抗体，或者此类抗体的片段(其含有至少一个抗原结合位点)，例如蛋白水解抗体片段诸如Fab、Fab'或F(ab')2片段或重组抗体片段诸如scFv片段。为了治疗目的，特别是对于人的治疗，嵌合抗体、人源化抗体或人抗体的施用是特别优选的。
可以根据本发明使用的示例性抗FGFR4抗体描述于例如WO 2014/105849、WO2012/138975和WO 2010/004204中。
根据本发明的一个特别优选的实施方案，FGFR4抑制剂是人抗FGFR4抗体。术语“人抗体”涵盖完全人抗体或人源化抗体，其中完全人抗体是优选的。人抗体可以按照已知的技术从遗传工程改造的动物，例如包含异种免疫系统的动物或从抗体展示文库来制备。人抗体通常描述于van Dijk和van de Winkel(Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001))和Lonberg(Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008))中。人抗体可通过向转基因动物施用免疫原来制备，所述转基因动物已被修饰成响应于抗原性攻击而产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。这样的动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源性免疫球蛋白基因座，或者在染色体外存在或随机整合至动物染色体中。在这样的转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被失活。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见例如Lonberg，Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。可以例如通过与不同的人恒定区组合来进一步修饰由这样的动物产生的来自完整抗体的人可变区。
人抗体还可通过基于杂交瘤的方法来制备。已经描述了用于生产人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系(参见例如Kozbor J.Immunol.133:3001(1984)；Brodeur等，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页)。通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体也描述于Li等，Proc.Natl.Acad.Sci.,USA103:3557-3562(2006)中。
人抗体还可通过噬菌体展示方法产生(参见例如US 6,248,516、US 5,403,484、US5,969,108、US 5,885,793、US 6,696,248、US 5,849,500)。用于从抗体文库选择人抗体的技术是本领域已知的。(参见例如Carmen,S.等，Briefings in Functional Genomics andProteomics(2002),1(2)，第189-203页；和Siriwardena,D.等，Ophthalmology(2002)109(3)，第427-431页)。例如，可使用噬菌体展示法，其涉及使人抗体可变区在噬菌体表面上作为单链抗体(scFv)表达，并选择与抗原结合的噬菌体(Nature(1991),352,(6336)，第624-628页，Journal of Molecular Biology(1992),227,(2)，第381-388页和NatureBiotechnology(2005),23,(9)，第1105-1116页)。同样地，也可使用另一种噬菌体展示方法，其涉及使人抗体Fab(抗原结合片段)在噬菌体表面上表达并选择与抗原结合的噬菌体(WO 97/08320和WO 01/05950)。可以分析基于抗原结合选择的噬菌体的基因，从而确定编码与抗原结合的人抗体可变区的DNA序列。当与抗原结合的scFv或Fab的DNA序列已清楚时，从其中提取CDR序列，可以制备具有该序列的表达载体并将其导入合适的宿主中，随后进行基因表达以获得人抗体(WO 92/01047、WO 92/20791、WO 93/06213、WO 93/11236、WO 93/19172、WO 95/01438、WO 95/15388,Annu.Rev.Immunol(1994)12，第433-455页，和NatureBiotechnology(2005)23(9)，第1105-1116页)。
人抗体还可通过分离选自人衍生的噬菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列来产生。然后可将这样的可变域序列与期望的人恒定域组合。从抗体文库选择人抗体的技术是本领域已知的。
可通过根据已知技术使单克隆抗体人源化来制备人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。人源化抗体及其制备方法综述于例如Alamagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中。还可能使用人抗体的片段，例如包含至少一个抗原结合位点的上述抗体的部分。抗体片段的实例包括Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、双抗体或单链抗体分子以及其它片段，只要它们表现出与人FGFR4结合的所需能力即可。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等，Nat.Met.9:129-134(2003)。
双抗体是具有可以是二价或双特异性的两个抗原结合位点的抗体片段。参见例如Hudson等，(2003)。单链抗体是包含抗体的全部或部分重链可变域或者全部或部分轻链可变域的抗体片段。可通过各种技术制备抗体片段，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化，以及由如本文所述的重组宿主(例如大肠杆菌或噬菌体)产生。
在某些实施方案中，根据本发明使用的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同部位具有结合特异性的单克隆抗体。
在某些实施方案中，结合特异性之一针对FGFR4，另一结合特异性针对任何其它抗原。
在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合FGFR4的两个不同表位。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂定位于表达FGFR4的细胞。双特异性抗体可被制备为全长抗体或抗体片段。
用于制造多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两种免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达和“旋钮孔(knob in hole)”工程化。多特异性抗体也可通过以下过程来制备：工程化用于制备抗体Fc-异二聚体分子的静电转向效应；交联两种或更多种抗体或片段；使用亮氨酸拉链产生双特异性抗体；使用制备双特异性抗体的“双抗体”技术以及使用单链Fv并如所述制备三特异性抗体。本文还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化抗体，包括“章鱼抗体”。
特别优选用于本发明的是针对人FGFR4的氨基酸119至284之间的表位的抗体或其功能片段或功能性衍生物，其对于治疗和诊断应用是特别有用的。特别优选的是针对人FGFR4的氨基酸152至240之间，更优选地在氨基酸230至240之间的表位的人抗体。根据一个特别优选的实施方案，本发明的抗体针对包含氨基酸序列RYNY、基本上由其组成或由其组成的表位。
本发明的人抗体所识别的表位优选位于人FGFR4的Ig样结构域2中。
本发明的抗体可以是各种免疫球蛋白(Ig)类型，例如IgA型、IgD型、IgE型、IgG型或IgM型，优选IgG型或IgM型，包括但不限于IgG1型、IgG2型、IgG3型、IgG4型、IgM1型和IgM2-型。在一个优选实施方案中，抗体是IgG1型。
在本发明的某些实施方案中，抗体可包含如下文所述的特异性重链互补决定区CDRH1、CDRH2和/或CDRH3。
在一个实施方案中，人抗体包含具有如SEQ ID NO:1-6中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDRH1)。
在进一步的实施方案中，抗体包含具有如SEQ ID NO:7-12中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列的重链互补决定区2(CDRH2)。
在另一个实施方案中，抗体包含具有如SEQ ID NO:13-20中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列的重链互补决定区3(CDRH3)。
根据本发明使用的抗体还可包含特异性轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和/或CDRL3。
因此，在一个实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO:21-23和68中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列的轻链互补决定区1(CDRL1)。
在另一个实施方案中，抗体包含具有如SEQ ID NO:24-27中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列的轻链互补决定区2(CDRL2)。
在另外的实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO:28-35中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列的轻链互补决定区3(CDRL3)。
用于本发明的抗体可优选在一条重链内包含CDR的(即CDRH1、CDRH2和CDRH3的)特定组合。
因此，在一个优选实施方案中，抗体包含含有互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链，其中CDRH1选自SEQ ID NO:1-6所示的序列，或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列，CDRH2选自SEQ ID NO:7-12所示的序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列，并且CDRH3选自SEQ ID NO:13-20所示的序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列。
最优选地，用于本发明的抗体包含含有三个CDR的重链，其中CDRH1、CDRH2和CDRH3的组合选自表1中所示的那些组合。应当理解，该表的每一行代表CDRH1、CDRH2和CDRH3的一个特定组合。
表1
Figure BDA0001531478300000111
根据本发明，进一步优选的是抗体在一条轻链内包含CDR的(即CDRL1、CDRL2和CDRL3的)特定组合。
因此，在一个优选实施方案中，抗体包含含有互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链，其中CDRL1具有如SEQ ID NO:21-23和68中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO:24-27中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列，并且CDRL3具有如SEQ ID NO:28-35中任一个所示的氨基酸序列或与其有1或2个氨基酸的差异的氨基酸序列。
最优选地，本发明的抗体包含含有三个CDR的轻链，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3的组合选自表2中所示的那些组合。应当理解，该表的每一行代表CDRL1、CDRL2和CDRL3的一个特定组合。
表2
Figure BDA0001531478300000121
Figure BDA0001531478300000131
如上所述，抗体的互补决定区(CDR)可在侧翼连接框架区。含有三个CDR的抗体的重链或轻链包含例如四个框架区。
另外，本发明还包括识别人FGFR4上与特征在于上述重和/或轻链CDR的特定抗体相同的表位的那些抗体。这些抗体的功能片段和功能衍生物也在本发明的范围内。为了确定由抗体识别的FGFR4上的表位，可使用由人FGFR4的胞外结构域的氨基酸序列衍生的蛋白质序列衍生的短肽的化学制备的阵列来定位和鉴定抗体表位(Reinicke W.,MethodsMol.Biol.2004,248:443-63)。对被本发明的抗体结合的FGFR4胞外结构域中表位进行作图的另一方法包括Snaps/SELDI(Wang等，Int.J.Cancer,2001,June 15；92(6):871-6)，或可以进行常规交叉阻断测定，诸如Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory,Ed Harlow and David Lane(1988)中所述的。
根据一个特别优选的实施方案，根据本发明使用的人抗体包含含有选自以下的至少一个CDR的重链：
(a)如SEQ ID NO:1-6所示的CDRH1或与其有1或2个氨基酸的差异的CDRH1序列，
(b)如SEQ ID NO:7-12所示的CDRH2或与其有1或2个氨基酸的差异的CDRH2序列，以及
(c)如SEQ ID NO:13-20所示的CDRH3或与其有1或2个氨基酸的差异的CDRH3序列，
和/或包含选自以下的至少一个CDR的轻链：
(d)如SEQ ID NO:21-23或68所示的CDRL1或与其有1或2个氨基酸的差异的CDRL1序列，
(e)如SEQ ID NO:24-27所示的CDRL2或与其有1或2个氨基酸的差异的CDRL2序列，和
(f)SEQ ID NO:28-35所示的CDRL3或与其有1或2个氨基酸的差异的CDRL3序列。
在本发明的一个优选实施方案中，人抗体包含如SEQ ID NO.52-59中任一项所示的重链可变区(VH)或与其有1或2个氨基酸的差异的序列。此外，本发明的人抗体优选包含如SEQ ID NO.60-67中任一项所示的轻链可变区(VL)或与其有1或2个氨基酸的差异的序列。特别优选的是包含如SEQ ID NO.52-59中任一项所示的重链可变区和如SEQ ID NO:60-67中任一项所示的轻链可变区的人抗体。具体而言，优选使用以下公开的抗体U4-1至U4-9中的任一种。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:1所示的CDRH1、如SEQ ID NO:7所示的CDRH2和如SEQ ID NO:13所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:21所示的CDRL1、如SEQ IDNO:24所示的CDRL2和如SEQ ID NO:28所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-1)。也合适的是人抗体(其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异)或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:52的重链可变区和根据SEQ ID NO:60的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQ IDNO:52和60所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:2所示的CDRH1、如SEQ ID NO:7所示的CDRH2和如SEQ ID NO:14所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:22所示的CDRL1、如SEQ IDNO:24所示的CDRL2和如SEQ ID NO:29所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-2)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:53的重链可变区和根据SEQ ID NO:61的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQID NO:53和61所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:3所示的CDRH1、如SEQ ID NO:8所示的CDRH2和如SEQ ID NO:15所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:23所示的CDRL1、如SEQ IDNO:25所示的CDRL2和如SEQ ID NO:30所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-3)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:54的重链可变区和根据SEQ ID NO:62的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQID NO:54和62所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:4所示的CDRH1、如SEQ ID NO:9所示的CDRH2和如SEQ ID NO:16所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:22所示的CDRL1、如SEQ IDNO:24所示的CDRL2和如SEQ ID NO:31所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-4)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:55的重链可变区和根据SEQ ID NO:63的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQID NO:55和63所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:5所示的CDRH1、如SEQ ID NO:10所示的CDRH2和如SEQ ID NO:17所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:22所示的CDRL1、如SEQID NO:24所示的CDRL2和如SEQ ID NO:32所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-5)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:56的重链可变区和根据SEQ ID NO:64的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQ ID NO:56和64所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:6所示的CDRH1、如SEQ ID NO:12所示的CDRH2和如SEQ ID NO:19所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:22所示的CDRL1、如SEQID NO:26所示的CDRL2和如SEQ ID NO:34所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-6)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:58的重链可变区和根据SEQ ID NO:66的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQ ID NO:58和66所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:3所示的CDRH1、如SEQ ID NO:7所示的CDRH2和如SEQ ID NO:20所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:68所示的CDRL1、如SEQ IDNO:27所示的CDRL2和如SEQ ID NO:35所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-7)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:59的重链可变区和根据SEQ ID NO:67的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQID NO:59和67所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:4所示的CDRH1、如SEQ ID NO:11所示的CDRH2和如SEQ ID NO:18所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:22所示的CDRL1、如SEQID NO:24所示的CDRL2和如SEQ ID NO:33所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-8)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，所述人抗体包含根据SEQ ID NO:57的重链可变区和根据SEQ ID NO:65的轻链可变区。也合适的是其中重链和/或轻链可变区的序列与SEQ ID NO:57和65所示的那些序列有1或2个氨基酸的差异的人抗体。
特别优选的是包含含有如SEQ ID NO:3所示的CDRH1、如SEQ ID NO:8所示的CDRH2和如SEQ ID NO:15所示的CDRH3的重链以及含有如SEQ ID NO:68所示的CDRL1、如SEQ IDNO:27所示的CDRL2和如SEQ ID NO:35所示的CDRL3的轻链的人抗体(U4-9)。也合适的是这样的人抗体，其中CDR中的一个或多个有1或2个氨基酸的差异，或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，人抗体包含根据SEQ ID NO:54的重链可变区和根据SEQ ID NO:67的轻链可变区。抗体U4-9优选包含如针对抗体U4-3所指示的重链和如针对抗体U4-7所指示的轻链。
此外，可溶性FGFR4受体，例如不具有膜锚定结构域的受体片段、拮抗性FGFR4配体突变蛋白(诸如FGF1、FGF2、FGF4、FGF6、FGF8、FGF9、FGF16、FGF17、FGF18或FGF19的突变蛋白)、肽或低分子量FGFR4抑制剂可用于本发明。FGFR4的低分子量抑制剂的实例是吲哚酮类(Mohammadi等(1997),Science 276:955-960)、SU5402、SU4984和PD17304(Koziczak等(2004),Biol.Chem.279,50004-50011)。
本发明还设想施用至少两种如上定义的FGFR4抑制剂，特别是2、3、4或5种FGFR4抑制剂。
本发明的另一方面涉及包含FGFR4抑制剂和如上所述能够降低胆汁酸水平的药剂的药物组合物或试剂盒。另外，所述药物组合物或试剂盒可以任选地包含一种或多种生理上可接受的载体、稀释剂和/或佐剂。
适合用于本发明的药物组合物或试剂盒包括其中以实现其期望目的的有效量包含活性成分的组合物或试剂盒。治疗有效剂量是指导致患有如上定义的过度增殖性病症的患者的症状改善或存活延长的化合物量。
FGFR4抑制剂和能够降低胆汁酸水平的药剂的毒性和治疗功效可以通过在细胞培养物或实验动物中进行标准药物操作(例如，测定LD50(对50％的群体致死的剂量)和ED50(在50％的群体中具有治疗有效性的剂量))来测定。对于本发明中使用的任何化合物，最初可从细胞培养测定来估计治疗有效剂量。例如，可在动物模型中配制剂量以达到循环浓度范围，所述循环浓度范围包括如在细胞培养物中测定的IC50(即达到生长因子受体活性的半数最大抑制的测试化合物浓度)。此类信息可用来更准确地确定在人中有用的剂量。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，其可以表示为LD50与ED50之间的比率。表现出高治疗指数的化合物是优选的。确切的制剂、施用途径和剂量可由医师个人根据患者的状况进行选择(参见例如Fingl等，1975，于"The Pharmacological Basis of Therapeutics"，第1章，第1页中)。可以单独调整剂量和间隔以提供足以维持受体调节作用或最小有效浓度(MEC)的活性部分的血浆水平。对于每种化合物，MEC会有所不同，但可以从体外数据(例如，使用本文所述的测定来达到受体的50-90％抑制所必需的浓度)估算。化合物应当使用在10-90％，优选30-90％，最优选50-90％的时间维持血浆水平高于MEC的方案来施用。实现MEC所需的剂量取决于个体特征和给药途径。在局部施用或选择性摄入的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
本发明的药物组合物或试剂盒适用于治疗本文所述的疾病。具体而言，所述药物组合物或试剂盒适用于预防、缓解和/或治疗与FGFR4表达、过表达或活性过度相关的疾病。可使用本发明的药物组合物或试剂盒治疗的疾病包括过度增生性疾病、心血管疾病，特别是高血压、左心室肥大、心脏肥大、慢性肾病、肌营养不良和代谢疾病，特别是肥胖症和糖尿病。最优选地，本发明的药物组合物或试剂盒适用于治疗上文定义的过度增殖性病症。
所施用的药物组合物或试剂盒的实际量取决于所治疗的受试者、受试者的体重、痛苦的严重程度、施用途径和处方医师的判断。对于抗体或治疗活性核酸分子以及其它化合物，例如每天0.001至100mg/kg，特别是0.01至10mg/kg的日剂量是合适的。
合适的施用途径包括例如口服，直肠、经粘膜或肠施用；肠胃外施用，包括肌内、皮下、髓内注射以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。对于能够降低胆汁酸水平的药剂，特别是胆汁酸螯合剂(例如考来烯胺)，口服施用是优选的。对于FGFR4抑制剂，特别是抗FGFR4抗体(例如U4-3)，静脉内施用是优选的。
或者，可以以局部而非全身性的方式施用本发明的药物组合物或试剂盒，例如通过将化合物直接注射(通常以储库或持续释放制剂形式)至实体肿瘤中。
此外，可在靶向药物递送系统中，例如在用肿瘤特异性抗体包被的脂质体中，施用本发明的药物组合物或试剂盒。脂质体将被靶向到肿瘤并被肿瘤选择性吸收。
在本发明的药物组合物或试剂盒中，FGFR4抑制剂和能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)可以以一种药物组合物(单一剂型)提供，或者可以以不同的组合物(分开的剂型)，优选至少两种不同的组合物，更优选两种不同的组合物提供。特别地，本发明的药物组合物或试剂盒的不同组成可以通过相同的途径或通过不同的途径施用。
本发明的另一方面是用于预防、缓解或/和治疗疾病的方法，其包括向有此需要的受试者与能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是一种或多种胆汁酸螯合剂)共施用有效量的FGFR4抑制剂。特别地，所述疾病可以是过度增殖性病症、心血管疾病，特别是高血压、左心室肥大和心脏肥大、慢性肾病、肌营养不良和代谢疾病，特别是肥胖症和糖尿病。本发明的一个优选方面是用于预防、缓解或/和治疗如上文所述的过度增殖性病症的方法。
需要预防、缓解或/和治疗的受试者可以是可能患有过度增殖性病症、心血管疾病，特别是高血压或慢性肾病的任何动物，特别是哺乳动物，更特别是人类。
根据本发明的另一个方面，可将FGFR4抑制剂与能够降低胆汁酸水平的药剂的组合与进一步的治疗方法组合。
与FGFR4抑制剂和能够降低胆汁酸水平的药剂组合的治疗方法包括适用于预防、缓解或/和治疗过度增殖性病症，特别地适用于诱导过度增殖性细胞/癌细胞的凋亡的任何合适的治疗方法。因此，治疗方法可包括利用用于预防、缓解或/和治疗过度增殖性病症的药剂(利用抗癌药物，特别是用凋亡诱导剂)或/和辐照进行的治疗。在一个优选实施方案中，用于预防、缓解或/和治疗过度增殖性病症的治疗方法是放射疗法、更优选γ放射疗法。放射治疗方案是本领域技术人员已知的。当与FGFR4抑制剂和能够降低胆汁酸水平的药剂的施用结合时，现有技术水平的癌症治疗方法的剂量可以降低。
根据本发明，优选用FGFR4抑制剂(特别是抗FGFR4抗体)与能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是胆汁酸螯合剂)的组合、维生素(特别是脂溶性维生素)的施用补充上述治疗。发现胆汁酸螯合剂与脂溶性维生素诸如维生素A、维生素D、维生素E和维生素K结合。由于这种效应可导致维生素缺乏症，因此发现补充这些维生素是有益的。应该注意维生素与胆汁酸螯合剂的给药之间的适当间隔。
将通过下面的附图和实施例进一步说明本发明。
附图
图1：胆红素、γ-谷氨酰转移酶和碱性磷酸酶的血清水平。显示了施用单独的U4-3(●)、U4-3与UrsofalkTM的组合(■)以及U4-3与QuantalanTM的组合(▲)的结果。垂直虚线：U4-3施用，第0天开始用U4-3进行姑息治疗，在第1天进行施用后的第一次测量。
图2：食蟹猴血清中的丙氨酰氨基转移酶(ALAT)。正常上限(ULN)：81UI/I。在图2a中显示了雄性猴子的结果，在图2b中显示了雌性猴子的结果。显示为●的值表示单独施用U4-3，■表示U4-3与UrsofalkTM的组合，▲表示U4-3与QuantalanTM的组合。虚线显示U4-3施用的时间。
图3：作为肝功能指标的丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的水平。显示了施用单独U4-3(●)、U4-3与UrsofalkTM的组合(■)以及U4-3与QuantalanTM的组合(▲)的结果。垂直虚线表示U4-3施用的时间。
图4：食蟹猴血清中的总胆汁酸水平。ULN：雄性中为13.91，雌性中为7.85。在图4a中显示了雄性动物的结果，图4b中显示了雌性动物的结果。●代表针对单独的U4-3获得的值，■代表U4-3与UrsofalkTM的组合，▲代表U4-3与QuantalanTM的组合。虚线表示U4-3施用的时间。
图5：食蟹猴血清中的FGF19。图5a中显示了雄性动物的结果，图3b中显示了雌性动物的结果，组合结果示于图5c中。以●表示的值代表单独U4-3的施用，■代表U4-3与UrsofalkTM的组合，▲代表U4-3与QuantalanTM的组合。虚线表示U4-3施用的时间。
图6：猴血清中的人IgG。所显示的结果是针对雄性和雌性动物的组合获得的。以●显示的值代表单独U4-3的施用，■代表U4-3与UrsofalkTM的组合，▲代表U4-3与QuantalanTM的组合。虚线表示U4-3给药的时间。
图7：研究结束时肝脏Cyp7A的基因表达。显示了与未处理的对照组(▼)相比，单独U4-3(●)、U4-3与UrsofalkTM的组合(■)以及U4-3与QuantalanTM的组合(▲)的施用的结果。
图8：研究结束时回肠FGF19基因表达。显示了与未处理的对照组(▼)相比，单独U4-3(●)、U4-3与UrsofalkTM的组合(■)以及U4-3与QuantalanTM的组合(▲)的施用的结果。
实施例
FGFR4抑制剂在能够降低胆汁酸水平的药剂存在和不存在的情况下的毒性。
为了了解FGFR4抑制的任何毒性副作用是否是由升高的胆汁酸水平引起的，检查了干扰胆汁酸水平的共同给药的药剂的作用。将抗FGFR4抗体U4-3用作FGFR4活性的抑制剂(测试项目：TI)。为了降低胆汁酸水平，使用胆汁酸螯合剂考来烯胺(QuantalanTM)。将熊去氧胆酸(UrsofalkTM)用作第二种化合物来增加胆汁酸从肝脏运出。熊去氧胆酸是亲水性胆汁酸，其可增加肝中胆汁酸转运蛋白的表达和质膜转位位(姑息化合物1和2)。
研究设计包括每组四只食蟹猴(两只雄性，两只雌性)。将动物分配至以下组：
Figure BDA0001531478300000221
a：以8小时±1小时的间隔给予日剂量水平两次，即姑息化合物1的剂量水平20mg/kg/日，姑息化合物2的剂量水平350mg/kg/日。
adm：施用；TI：测试项目(U4-3)；PC1：姑息化合物1(QuantalanTM)；PC2：姑息化合物2(UrsofalkTM)
施用
测试项目(U4-3)
途径：静脉输注，缓慢推注。
持续时间和频率：以7天的间隔(即第0天、第7天和第14天)进行三次施用。给药的第一天指定为第0天。在最后一次施用后，将动物保持至少28天的无治疗期。
方法：静脉内注射(缓慢推注)，使用泵系统和用乙醇水溶液局部消毒后引入静脉的microflex输注装置。注射后，静脉用无菌生理盐水冲洗。
三条静脉轮流使用：
-右外部隐静脉：部位1。
-左外部隐静脉：部位2。
-右头静脉：部位3。
施用体积：9.52mL/kg/日。使用最近的体重计算各剂量体积。
给药持续时间：约15分钟。
选择施用途径的理由：选择静脉内途径，因为这是人中的一种潜在施用途径。
姑息化合物和媒介物
途径：口服。
频率：每天两次，间隔8小时±1小时。
持续时间：从第0天至无治疗期的最后一天之间的每一天，即至少41天的施用。
方法：鼻饲插管术(动物在开始治疗前五天接受这种施用途径的训练)。
在每日施用之前给予水果或蔬菜；每日施用后给予粒状饮食。将姑息化合物从给药之前15分钟和给药期间维持在磁力搅拌下。
施用体积：2.5mL/kg/adm。使用最近的体重计算个体剂量体积。
选择施用途径的理由：选择口服途径，因为这是人中的施用途径。
观察
检查试验动物的临床症状、肝酶、胆汁酸水平和FGF19。根据制造商的说明使用来自RND的Quantiquine人FGF19ELISA测定FGF19血清水平。使用High-Capacity RNA-to-cDNA试剂盒(Applied Biosystems/Life Technologies)测定食蟹猴肝脏和回肠样品的Cyp7A1(肝)和FGF19(回肠)的RNA表达，随后进行定量实时PCR。结果示于图1-8和下面的表1中。
测定食蟹猴血清中的肝酶水平，显示胆红素、γ-谷氨酰基转移酶和碱性磷酸酶的酶水平不受施用FGFR4抑制剂(与或不与胆汁酸改性剂一起)的影响。(图1)U4-3给药后在食蟹猴血清中发现肝酶(ALAT)、胆汁酸和FGF19水平升高，与推测的FGFR4在胆汁酸水平调节中的生物功能一致。一些动物在肝组织病理学检查后也显示出极小的胆管增生。所有这些增加和变化都被QuantalanTM(考来烯胺)的共施用所消除。对于UrsofalkTM，效果不太明显(图2至5)。血清中的人IgG水平在所有治疗组中均相等，这表明QuantalanTM和UrsofalkTM不能通过只降低血清抗体水平而起作用(图6)，正如通过其中所述共施用起作用的不同器官区室所预期的那样(血液可及器官如肝中的FGFR4，而QuantalanTM和UrsofalkTM是口服化合物，并且QuantalanTM被直接排泄而不进入血流)。在研究结束时，升高的肝Cyp7A基因表达表明FGFR4抗体抑制所有治疗组中的肝FGFR4，直至研究结束，这进一步支持了抗体的FGFR4抑制剂功能不被共施用的化合物改变(图7)。与单独FGFR4抗体相比，QuantalanTM(考来烯胺)与FGFR4抗体的共施用也阻止了回肠中FGF19表达水平的升高。这再次说明了胆汁酸在肠道中上调FGF19(图8)。
表1：
食蟹猴研究中改变的血液临床化学值的概述(100mg/kg/周x 3+28天恢复)
Figure BDA0001531478300000241
Figure BDA0001531478300000242
结论
在所确定的实验条件下，间隔7天，以100mg/kg的剂量水平单独地或与两种不同姑息性化合物(20mg/kg/日的UrsofalkTM或350mg/kg/日的QuantalanTM；每日以8小时的间隔口服两次)联合地进行的U4-3三次静脉内施用在临床上耐受性良好，没有临床症状、局部反应，对食物消耗或体重也没有影响。在仅接受FGFR4抑制剂或与姑息性化合物1UrsofalkTM一起接受FGFR4抑制剂的动物中观察到升高的血清胆汁酸和肝酶(天冬氨酸转氨酶和丙氨酸氨基转移酶)水平。
与姑息化合物2(QuantalanTM)相关的测试项目的治疗仅诱导短暂的天冬氨酸转氨酶活性。该效果在4周的无治疗期结束时是可逆的。QuantalanTM的添加允许将胆汁酸浓度(图2)和丙氨酸转氨酶活性维持在正常范围内(图3)，并且没有组织病理学变化。
组织病理学检查没有发现任何与项目相关的发现。
UrsofalkTM或QuantalanTM作为辅助治疗的施用对U4-3的全身暴露没有影响。
基于这些发现，当将其与姑息化合物2QuantalanTM联合施用时，100mg/kg剂量水平的测试项目U4-3被认为具有更好的耐受性。
因此，研究证实，通过额外施用能够降低胆汁酸水平的药剂(特别是考来烯胺)，可显著降低施用FGFR4抑制剂(U4-3)的副作用。U4-3和考来烯胺的联合疗法没有导致毒理学效果(临床症状、血液学、血液化学和组织病理学)，然而在用U4-3单独治疗后发现这些参数已经升高。
序列表
<110> U3 Pharma GmbH
<120> Combination of FGFR4抑制剂和胆汁酸螯合剂的组合
<130> 59300P EP
<160> 68
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VH CDRH1
<400> 1
Arg Asn Tyr Met Ser
1               5
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-2-VH CDRH1
<400> 2
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1               5
<210> 3
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VH, U4-7-VH和U4-9-VH CDRH1
<400> 3
Asp Tyr Tyr Met Ser
1               5
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-4-VH和U4-8-VH CDRH1
<400> 4
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1               5
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VH CDRH1
<400> 5
Ser Asn Tyr Met Asn
1               5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VH CDRH1
<400> 6
Asp Tyr Tyr Met Asn
1               5
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VH, U4-2-VH和U4-7-VH CDRH2
<400> 7
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VH和U4-9-VH CDRH2
<400> 8
Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 9
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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1               5                   10                  15
Gly
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VH CDRH2
<400> 10
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1               5                   10                  15
Gly
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-8-VH CDRH2
<400> 11
Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 12
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VH CDRH2
<400> 12
Ala Ile Gly Gly Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 13
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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1               5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-2-VH CDRH3
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Leu Tyr Ser Tyr Gly Asp Phe Asp His
1               5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VH和U4-9-VH CDRH3
<400> 15
Leu Thr Ala Tyr Gly His Val Asp Ser
1               5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-4-VH CDRH3
<400> 16
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1               5                   10
<210> 17
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VH CDRH3
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Lys Ser Arg Asp Phe Trp Arg Gly Pro Phe Asp Tyr
1               5                   10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-8-VH CDRH3
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Met Thr Val Phe Gly Ala Ala Thr Leu
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VH CDRH3
<400> 19
Gly Gly Ser Tyr Phe Gly Tyr
1               5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7-VH CDRH3
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Leu Ala Thr Tyr Gly Pro Phe Asp Asp
1               5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VL CDRL1
<400> 21
Ser Gly Gly Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn Thr Val Asn
1               5                   10
<210> 22
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-2-VL, U4-4-VL, U4-5-VL, U4-6-VL和U4-8-VL CDRL1
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Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
1               5                   10
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<220>
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Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Asn Thr Val Asn
1               5                   10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VL, U4-2-VL, U4-4-VL, U4-5-VL和U4-8-VL CDRL2
<400> 24
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1               5
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VL CDRL2
<400> 25
Arg Asn Tyr Gln Arg Pro Ser
1               5
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VL CDRL2
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Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser
1               5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7-VL和U4-9-VL CDRL2
<400> 27
Arg Asn Asn Arg Arg Pro Ser
1               5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VL CDRL3
<400> 28
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Tyr Val Val
1               5                   10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-2-VL CDRL3
<400> 29
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Ala Val Val
1               5                   10
<210> 30
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VL CDRL3
<400> 30
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro His Val Val
1               5                   10
<210> 31
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-4-VL CDRL3
<400> 31
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Leu Val Val
1               5                   10
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VL CDRL3
<400> 32
Ser Thr Trp Asp Asp Ser Leu Arg Gly Trp Val
1               5                   10
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<212> PRT
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<220>
<223> U4-8-VL CDRL3
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Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Tyr Trp Val
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<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VL CDRL3
<400> 34
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val
1               5                   10
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7-VL和U4-9-VL CDRL3
<400> 35
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Asn Val Val
1               5                   10
<210> 36
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VH
<400> 36
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gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagagttacc 300
tcaccagggg cttttgatat ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctca 354
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<212> DNA
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<220>
<223> U4-2-VH
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ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagattatac 300
agctatggtg actttgacca ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctcagcctcc 360
accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399
<210> 38
<211> 399
<212> DNA
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<220>
<223> U4-3-VH和U4-9-VH
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accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399
<210> 39
<211> 402
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-4-VH
<400> 39
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
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gcagactccg tgcagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagaaatacg 300
gctggttttg ggtacttcga tctctggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctcagcc 360
tccaccaagg gcccaagcgt cttccccctg gcaccctcct cc 402
<210> 40
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VH
<400> 40
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gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgt gacaaagtct 300
cgagattttt ggcggggtcc ctttgactac tggggccaag gtaccctggt caccgtgagc 360
tcagcctcca ccaagggccc aagcgtcttc cccctggcac cctcctcc 408
<210> 41
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-8-VH
<400> 41
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtggta gtggtggtcg cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagaatgacg 300
gtctttggag cggcaacgct ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctcagcctcc 360
accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399
<210> 42
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VH
<400> 42
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtctcagct attggtggta gtggtgatag aacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc tctcggtggg 300
agctacttcg gctactgggg ccaaggtacc ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360
ggcccaagcg tcttccccct ggcaccctcc tcc 393
<210> 43
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7-VH
<400> 43
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctgggt ccgccaggct 120
cccgggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gaccctggcc 300
acctacggac catttgacga ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctcagcctcc 360
accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399
<210> 44
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VL
<400> 44
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaggcacctc caacatcgga actaatactg taaactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcatcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccctat 300
gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345
<210> 45
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-2-VL
<400> 45
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat cggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtcccgct 300
gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345
<210> 46
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VL
<400> 46
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga actaatactg tgaactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaattatc agagaccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg atagcctgag tggtccacat 300
gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345
<210> 47
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-4-VL
<400> 47
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccccta 300
gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345
<210> 48
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VL
<400> 48
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgttca acgtgggatg acagcctgag aggttgggtg 300
ttcggcggag gaaccaagct gacggtccta ggtcagcct 339
<210> 49
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-8-VL
<400> 49
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagca tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccctat 300
tgggtgttcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345
<210> 50
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VL
<400> 50
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat tatgatgatc tgctgccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccggtg 300
ttcggcggag gaaccaagct gacggtccta ggtcagcct 339
<210> 51
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7-VL和U4-9-VL
<400> 51
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg tacactggta tcagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agaaataatc ggcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggtccgaat 300
gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345
<210> 52
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VH
<400> 52
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Val Thr Ser Pro Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 53
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-2-VH
<400> 53
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Leu Tyr Ser Tyr Gly Asp Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser
    130
<210> 54
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VH和U4-9-VH
<400> 54
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Leu Thr Ala Tyr Gly His Val Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser
    130
<210> 55
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-4-VH
<400> 55
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asn Thr Ala Gly Phe Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser
    130
<210> 56
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VH
<400> 56
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
            20                  25                  30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Val Thr Lys Ser Arg Asp Phe Trp Arg Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
    130                 135
<210> 57
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-8-VH
<400> 57
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Met Thr Val Phe Gly Ala Ala Thr Leu Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser
    130
<210> 58
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VH
<400> 58
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Leu Gly Gly Ser Tyr Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
        115                 120                 125
Pro Ser Ser
    130
<210> 59
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7-VH
<400> 59
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Leu Ala Thr Tyr Gly Pro Phe Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Ser Ser
    130
<210> 60
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-1-VL
<400> 60
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn
            20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ser Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Pro Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
Gly Gln Pro
        115
<210> 61
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-2-VL
<400> 61
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Pro Ala Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
Gly Gln Pro
        115
<210> 62
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-3-VL
<400> 62
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Asn
            20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Tyr Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Ser Gly Pro His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
Gly Gln Pro
        115
<210> 63
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-4-VL
<400> 63
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Pro Leu Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
Gly Gln Pro
        115
<210> 64
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-5-VL
<400> 64
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
            100                 105                 110
Pro
<210> 65
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-8-VL
<400> 65
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Pro Tyr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
Gly Gln Pro
        115
<210> 66
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-6-VL
<400> 66
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
            100                 105                 110
Pro
<210> 67
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7-VL和U4-9-VL
<400> 67
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
            20                  25                  30
Thr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Arg Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                85                  90                  95
Ser Gly Pro Asn Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
Gly Gln Pro
        115
<210> 68
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> U4-7和U4-9 CDRL1
<400> 68
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val His
1               5                   10

Claims (17)

1.胆汁酸螯合剂在制备用于降低抗体的毒副作用的制剂中的用途，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:3所示的CDRH1、SEQ ID NO:8所示CDRH2和如SEQ ID NO:15所示的CDRH3的重链，以及含有SEQ ID NO:23所示的CDRL1、SEQ ID NO:25所示的CDRL2和SEQ ID NO:30所示的CDRL3的轻链。
2.权利要求1的用途，其中所述抗体包含根据SEQ ID NO:54的重链可变区，以及根据SEQ ID NO:62的轻链可变区。
3.权利要求1的用途，其中所述抗体针对的是包含人FGFR4的氨基酸序列RYNY的表位。
4.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述胆汁酸螯合剂选自考来烯胺、考来替泊和考来维仑。
5.权利要求4所述的用途，其中所述胆汁酸螯合剂是考来烯胺。
6.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中以每天每kg体重0.1-1.0g的量使用所述胆汁酸螯合剂。
7.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中以每天每kg体重0.2-0.6g的量使用所述胆汁酸螯合剂。
8.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中以每天每kg体重0.3至0.4g的量使用所述胆汁酸螯合剂。
9.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中以每天每kg体重0.35g的量使用所述胆汁酸螯合剂。
10.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗体和所述胆汁酸螯合剂一起或分开施用。
11.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中通过静脉内施用所述抗体，并且通过口服施用所述胆汁酸螯合剂。
12.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗体和/或所述胆汁酸螯合剂以单剂施用或每天分成两剂或三剂施用。
13.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗体和所述胆汁酸螯合剂分开施用，并且其中所述抗体以单剂施用，所述胆汁酸螯合剂以每天两剂或三剂施用。
14.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗体和/或所述胆汁酸螯合剂与另外的治疗方法或/和另外的药剂相组合施用。
15.权利要求14所述的用途，其中所述另外的药剂是一种或多种维生素。
16.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述抗体和/或所述胆汁酸螯合剂与一种或多种脂溶性维生素相组合施用。
17.权利要求16所述的用途，其中所述一种或多种脂溶性维生素是维生素A、D、E和/或K。
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