CN107969552A - 一种油橄榄叶提取物饲料添加剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种油橄榄叶提取物饲料添加剂及其应用。本发明的油橄榄叶提取物饲料添加剂是通过以下方法制备的：以自然阴干的油橄榄叶为原料，用一定浓度的乙醇‑水绿色有机混合体系为提取溶剂，在室温下，使用超声波辅助进行快速提取，经过滤、干燥后获得富含活性成分的油橄榄叶提取物，该方法制备的油橄榄叶提取物作为饲料添加剂，具有促进动物生长、提高抗氧化应激能力、增强免疫的功效，可用于无抗动物饲料添加剂领域。

Description

一种油橄榄叶提取物饲料添加剂及其应用

技术领域

本发明涉及天然物中有效成分提取、动物饲料添加剂领域，具体涉及的是一种油橄榄叶提取物饲料添加剂及其在动物促生长、抗氧化应激和增免疫的应用。

背景技术

随着全球对营养健康的高度关注，人们对肉蛋奶等优质高蛋白食品以及畜产品的需求总量不断增加，将促进我国养殖业的发展。但我国养殖业较发达国家整体发展水平偏低，根本原因是我国的饲料行业发展水平较低，尤其饲料添加剂，不仅饲料品质较低而且产量也不能满足养殖业发展的需求。饲料添加剂的发展的瓶颈之一即为缺乏新型的天然绿色添加剂去替代抗生素。基于上述原因，饲料添加剂的价格一直居高，增加了农户的养殖成本。因此，从天然的植物王国筛选出高活性物质应用于饲料添加剂，扩大高品质饲料添加剂来源，控制生产成本，为农户创收，促进我国养殖业发展具有重要意义。

天然植物提取物添加剂因其具有绿色、无公害与环保等特点被国内外企业所关注，并成为发展绿色饲料添加剂的主要趋势之一。尤其是随着欧盟、韩国及美国等国限用或禁用抗生素法规的出台，天然植物提取物已作为饲料添加剂中促生长、提高免疫的首选替代品，并成为人们重点开发研究的方向。天然植物提取物添加剂是以植物为原料，经过一系列物理、化学提取过程，得到的由一种或多种天然活性成分组成的植物产品。

油橄榄（Olea europaea）为木犀科木樨榄属的常绿乔木，主要分布在地中海国家（希腊、西班牙与意大利等），因其果实油橄榄果榨取食用营养丰富的橄榄油而闻名。目前，全球有超过40个国家以油橄榄为经济作物为种植对象，面积高达13.2亿亩，其中地中海国家就已占95%。我国于20世纪60年代开始大面积引种油橄榄树，主要分布在我国的中西部如甘肃、四川等地，种植面积达45万亩，我国每年因对油橄榄树进行维护剪枝产生的叶子多达60万吨。但起初由于缺乏对油橄榄叶利用价值发现，和相关产品开发缺乏理论指导和实践依据，而使油橄榄叶被丢弃或焚烧，造成资源的浪费及生态环境的破坏。实际上，油橄榄叶含有丰富的活性物质如，裂环烯醚萜类化合物（橄榄苦苷等）、多酚（羟基酪醇等）、三萜酸（山楂酸等和黄酮类），可使其免遭病菌和昆虫的侵害，并能广泛应用于功能食品、饲料添加剂和医药等领域。尤其是，一些研究已经证实油橄榄叶中的橄榄苦苷具有对人健康有益的药理活性，如抗氧化性，抗菌，抗癌和抑制糖尿病。此外，油橄榄叶中橄榄苦苷的含量高于其存在于橄榄油中，并且也高于同一棵油橄榄树其他部位（油橄榄果、树芽和树皮）里橄榄苦苷的含量。

唐中海等发现用油橄榄叶直接喂食獭兔仔兔能显著增加其体重，且有助于提升仔兔的抵抗力和成活率。研究表明，油橄榄叶直接喂食反刍动物，可使瘤胃细菌合成蛋白质量增加，提高动物消化吸收率，使泌乳期奶牛产的牛奶中不饱和乳脂含量增加，改善了牛乳的品质。对于喂养兔子的效果而言，能促进兔肉品质提升，抗应激能力和免疫增强。

当前，国内外用于家禽的植物提取物饲料添加剂包括好力高（牛至提取物）（显著增加17.6%、改善饲料报酬14.8%、降低黄羽肉鸡死亡率40%）、止痢草/牛至的提取物（OEO）刺激胆汁分泌，改善料肉比、维护肠道健康，降低肠炎及球虫病的发病率。功效概况为：抑制动物肠道有害微生物生长，维持肠道菌群平衡，防治腹泻。延长营养物质在消化道的停留时间，增强抗应激能力和提高动物机体免疫力，提高消化道消化酶活性，改善饲料养分的消化率。含蒲公英提取物的饲料添加剂，能抗病原微生物和改善肠道微生态平衡，提高肉鸡小肠消化酶活力，促进饲料中有效成分吸收。Teruel等人喂养不同剂量的膳食迷迭香（3g/kg、6g/kg、9g/kg）可改善蛋鸡体内抗氧化能力，它们呈浓度-效应关系，提高超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽含量，降低体内丙二醛含量，其中6g/kg的迷迭香添加量可以使蛋鸡体内抗氧化能力最强。牛至中含有14种具有抗氧化能力的活性物质，牛至提取物在饲料添加剂应用方面较为广泛。史东辉等人将分别将0g/t、100g/t、150g/t、200g/t、250g/t的牛至提取物添加的肉鸡的日常饲料中，在21天时，测量血清总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性、血清丙二醛含量，结果表明，喂养200g/t的止痢草提取物的肉鸡总抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性最高，血清丙二醛含量最低。在42天时，喂养150g/t止痢草的总抗氧化能力最好。Sadek等人的研究表明补充百里香的肉鸡肝脏和胰腺的的氧化状态明显改善，与对照组相比，肉鸡的血红蛋白浓度，总白细胞血清抗体滴度明显升高。因此，天然植物提取物应用于动物饲料添加剂具有可行性。关于木本或草本叶提取物的应用，近几年的国内申请的专利发现，一种杨树皮提取物饲料添加剂及其制备方法（CN201610423777.8），益母草、鱼腥草、干草提取物饲料添加剂（CN201310728613.2）等，一种樟树枝叶提取物饲料添加剂及其制备方法（CN201210159677.0），一种番泻叶提取物饲料添加剂及其制备方法（CN201010106901.0），一种杜仲提取物饲料添加剂及其制备方法（CN201010106782.9），一种蒲公英提取物饲料添加剂及其制备方法（CN201010106830.4），一种枇杷叶提取物饲料添加剂及其制备方法（CN201019063068.3），一种泡桐叶提取物饲料添加剂（CN201110391765.9）。一种复合植物提取物饲料添加剂及其应用（CN201310191918.4）。一种橄榄提取物制备的牙膏及其制备方法（CN201510225644.5），一种提高雄性媒鸭生殖性能的饲料添加剂（CN201710365462.7），而利用油橄榄叶提取物作为饲料添加剂却鲜有报道。

发明内容

本发明提供了一种油橄榄叶提取物饲料添加剂的制备方法，绿色安全，操作简单。

本发明还提供了油橄榄叶提取物饲料添加剂在促进动物生长，抗氧化应激，增强免疫方面的应用，为饲料添加剂的开发提供新的物质基础。

本发明所述的一种油橄榄叶提取物饲料添加剂及其应用，包括如下技术方案：以自然阴干的油橄榄叶为原料，用绿色有机混合体系为提取溶剂，在超声波辅助下进行快速提取，提取液经过滤、干燥后获得富含活性成分的油橄榄叶提取物，将此方法制备的油橄榄叶提取物作为动物饲料添加剂应用于动物日粮中，具有能够促进动物生长，抗氧化应激，提高动物免疫力的功效。

所述的油橄榄叶原料为为采自陇南地区鄂植8号、九峰6号、城固32号、佛奥、莱星、皮削利、阿斯和配多灵中的一种或多种混合，自然阴干。

所述的绿色有机混合体系，是乙醇-水混合体系，乙醇所占体积比例为1~99%。

所述的超声波辅助提取中，超声功率为100~2000W，超声时间为1~45 min，料液比（g/mL）1:5~1:40。

所述的干燥包括鼓风干燥、减压浓缩干燥或冷冻干燥。

所述的富含活性成分的油橄榄叶提取物，其有效成分橄榄苦苷的含量0.5~10%，总多酚1~15%。

所述的添加在动物日粮中的油橄榄叶提取物饲料添加剂的状态为固体或液体，且所占质量比例为0.1~10%。

有益效果

本发明提供的油橄榄叶提取物饲料添加剂制备方法简单，绿色安全，将此方法制备的饲料添加剂应用于动物日粮中，不仅能够促进动物生长，提高体内抗氧化应激能力，而且可提高新城疫免疫能力，可用于制备具有促生长、增免疫的动物饲料添加剂。

附图说明

图1为95%乙醇-水提取得到的油橄榄叶提取物的HPLC图谱。

图2为45%乙醇-水提取得到的油橄榄叶提取物的HPLC图谱。

图3为水提取得到的油橄榄叶提取物的HPLC图谱。

图4油橄榄叶提取物不同添加量随喂养周期对肉鸡体重增加的影响。

注明：图1～图3中HPLC保留时间10.1min对应的物质为橄榄苦苷。

具体实施方式：

以下通过具体实施案例来对本发明进一步说明，但并非限制本发明。

一种油橄榄叶提取物作饲料添加剂及其应用，包括以下步骤：

以11月份采摘，自然阴干的油橄榄叶为原料，用绿色有机乙醇-水混合体系（乙醇所占体积比例为1~99%）为提取溶剂，在超声功率为200~1200W，超声时间为1~45 min，料液比（g/mL）1:5~1:40的超声波辅助下进行提取，提取液经过滤，鼓风干燥、减压浓缩干燥或冷冻干燥后获得富含活性成分的油橄榄叶提取物。检测有效含量的橄榄苦甘和多酚活性成分。将油橄榄叶提取物作为动物饲料添加剂，按照质量比0.1~10%添加到动物的日粮中，评价其性能。

本发明所采用的检测:

对橄榄苦苷的HPLC色谱检测条件：以甲醇:水（v/v，0.31: 0.69）为流动相，液相色谱的紫外检测波长、流速及柱温箱温度分别为1 mL/min、230 nm和30℃。所使用的色谱分离柱（大连伊利特产）为C₁₈ODS，其规格为Φ4.6 mm×150 mm、填料粒径为10 μm。

总多酚含量检测：通过Folin-Ciocalteu（FC）色差及方法对其总多酚含量进行测定，以各0.5 mL的提取物溶液和FC混合，反应5 min后，再添加20%饱和Na₂CO₃溶液1.5 mL，充分摇匀，并于黑暗处反应1 h，测定其在760 nm下的吸光值。通过没食子酸标准品溶液（2×10^-3~1.2×10^-2 mg/mL）绘制标准曲线，用每克油橄榄叶提取物中没食子酸含量（mg）表示其总多酚含量。

实施例1

本实施例以一种油橄榄叶提取物作为饲料添加剂添加到肉鸡日粮饲料中的应用为例。

①油橄榄叶提取物的制备：

取11月份采摘的自然阴干的佛奥油橄榄叶1 kg粉碎，加入10 L体积分数50%的乙醇-水于提取釜中，在室温下，超声功率800 W，提取20min，趁热抽滤，收集液在50℃下再旋蒸浓缩，浓缩液通过真空冷冻干燥，获得固体含量0.35 kg油橄榄叶提取物（橄榄苦苷含量7.23%，总多酚含量9.58%）。

②油橄榄叶提取物的肉鸡喂养实验：

将制备的油橄榄叶提取物中，与肉鸡日粮进行预混料，按照0.1%、0.5%、1%和2%油橄榄叶提取物添加量的浓度梯度，对肉鸡进行28天喂养实验，以全价肉鸡日粮作为阳性对照。测定肉鸡体重增加，血清生化参数和新城疫免疫抗体数。将15日龄艾维白羽雏鸡，共105只随机分成5组（每组21只，再随机分成3小组，每小组7只，相当于重复3次实验）。F1（全饲料喂养）、F2（0.1%油橄榄叶提取物）、F3（0.5%油橄榄叶提取物）、F4（1%油橄榄叶提取物）和F5（2%油橄榄叶提取物）。所有雏鸡均由商品饲料（南京金象特种饲料有限公司）与油橄榄提取物作为饲料添加剂以不同比例混合喂养，日常配方饲料购的配方为：玉米粉55.75%、黄豆粉35.17%、次粉（中等小麦粉）4.00%、CaHPO₄ 1.75%、猪油1.2%、石灰 1.10%、NaCl 0.28%、氯化胆碱0.1%、赖氨酸0.08%和蛋氨酸0.17%，预混比为0.5%），按照日常饲料配方的要求，每1 kg饲料中预混前需包括以下营养物质如氯化胆碱 24 mg、维生素D3 6 mg、维生素K 1.3 mg、维生素B1 2.2 mg、微生物B2· HCl 4 mg、生物素0.04 mg、叶酸 1.0 mg、维生素B12 0.013mg、Fe（来自硫酸亚铁）80 mg、Cu（来自硫酸铜）7.5 mg、Mn（来自硫酸锰）110 mg、Zn（来自氧化锌）65 mg、I（来自碘酸钙）1.1 mg、Se（来自亚硒酸钠）0.3 mg和杆菌肽锌30 mg。油橄榄叶提取物将其以一定量与商业饲料混合喂养肉鸡，评价其饲料添加剂性能。分别以F1、F2、F3、F4和F5进行肉鸡的喂养实验。以无添加油橄榄叶提取物的全商业饲料进行喂养实验作为对照。在肉鸡喂养过程中每隔7天测其体重，喂养至20日时，每组随机选4只肉鸡按常规方法注射免疫新城疫疫苗，并于免疫后21日分别采取各组试验鸡血清进行新城疫抗体（HI）测定。在喂养至28日接近实验结束时，每组肉鸡随机选取7只，进行采血，并立即将其在4℃，3500rpm下离心10 min，以获得足量的血清液，并对血清进行生化检测，检测参数包括：超氧化物歧化酶（SOD）、甘油三酸酯（TG）、胆固醇（Chol）、丙二醛（MDA）、总血清蛋白（TSP）、血清球蛋白（SG）和血清白蛋白（SA）。

通过图4、表1和表2可知，本发明的油橄榄叶提取物饲料添加剂不仅具有促进肉鸡生长，增强超氧化物歧化酶(SOD)和降低MDA含量，即抗氧化应激能力提高，还能显著提高免疫能力(肉鸡血清抗体滴度的减小，反映了新城疫抗体数量的增加)。

表1油橄榄叶提取物不同添加量喂养肉鸡的血清生化指标测定

缩写Abbr.：超氧化物歧化酶(SOD)，甘油三酯(TG)，胆固醇(Chol)，丙二醛(MDA)，总血清蛋白 (TSP)，血清球蛋白(SG)，血清白蛋白(SA)。

表2接种新城疫疫苗后肉鸡血清抗体滴度的免疫结果(单位：log2)

注明：抗体滴度越小，免疫作用更强。

Claims (7)

1.一种油橄榄叶提取物饲料添加剂及其应用，其特征在于，以油橄榄树剪枝残余的油橄榄叶为原料，用绿色有机混合体系为提取溶剂，在超声波辅助下快速提取，经过滤、干燥后得到富含活性成分的油橄榄叶提取物，其有效成分为橄榄苦苷和总多酚，将此方法制备的油橄榄叶提取物作为饲料添加剂添加到动物日粮中，能够促进动物生长，提高其抗氧化应激和新城疫免疫能力。

2.根据权利要求1所述，其特征在于，所述的油橄榄叶原料为采自陇南地区鄂植8号、九峰6号、城固32号、佛奥、莱星、皮削利、阿斯和配多灵中的一种或多种，采摘4月或11月且自然阴干的油橄榄叶。

3.根据权利要求1所述，其特征在于，所述的绿色有机混合体系，为乙醇-水混合溶剂体系，且混合溶剂中乙醇的比例为（1~99%，v/v）。

4.根据权利要求1所述，其特征在于，所述的干燥包括鼓风干燥、减压浓缩干燥或冷冻干燥中的一种。

5.根据权利要求1所述，其特征在于，超声波辅助下快速提取的功率参数为100~2000W，提取时间为0.5~100 min，乙醇浓度1~99%，料液比（g/mL）1:5~1:40。

6.根据权利要求1所述，其特征在于，富含活性成分的油橄榄叶提取物中有效成分橄榄苦苷的含量0.5~10%，总多酚1~15%。

7.根据权利要求1所述，其特征在于，添加在动物日粮中的油橄榄叶提取物饲料添加剂的状态为固体或液体，且所占质量比例为0.1~10%。