CN107951894A

CN107951894A - 一种降低雷公藤毒性的药物组合物及其制备方法

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Publication number: CN107951894A
Application number: CN201810042409.8A
Authority: CN
Inventors: 管咏梅; 陶玲; 肖芳; 朱卫丰; 陈丽华; 杨明; 金晨; 臧振中
Original assignee: Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2018-01-17
Filing date: 2018-01-17
Publication date: 2018-04-24

Abstract

本发明属于药物领域，公开了一种降低雷公藤毒性的药物组合物，及其制备方法和用途。该药物组合物中雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸的配伍其重量份比为雷公藤甲素:芍药苷:阿魏酸＝1:25:25～1:2000:2000的比例。该药物组合物在治疗类风湿性关节炎时效果不仅优于雷公藤制剂单用效果，同时可以大大减轻或避免雷公藤制剂单用引起的毒副作用。

Description

一种降低雷公藤毒性的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于药学领域，特别涉及雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸配伍的药物组合物及其制备和用途。

技术背景

雷公藤甲素(Triptolide)是从中药雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)中分离出的环氧二萜内酯化合物，是雷公藤的主要有效成分之一。雷公藤甲素的药理活性强，具有抗炎、镇痛、抗肿瘤及免疫调节等作用，在临床主要用于治疗免疫性疾病、肾脏性疾病、皮肤性疾病等。但同时它又是主要的毒性成分，小鼠腹腔注射甲素LD₅₀为1.407mg/kg，另有报道，小鼠静注甲素LD₅₀为0.8mg/kg,腹腔注射LD₅₀为0.9mg/kg，严重的毒副作用，尤其是肝肾毒性，限制了其临床应用。本研究开发减少雷公藤甲素的毒性，同时保持和增强其药理活性的方法，对于提高雷公藤甲素临床应用的安全性具有十分重要的意义。

芍药苷是中药芍药的主要有效成分，是一种单萜类糖苷化合物，具有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗之功效，且毒副作用小。对类风湿性关节炎、系统性红斑狼疫等自身免疫性疾病有确切疗效

阿魏酸包括正阿魏酸和异阿魏酸以及他们的同分异构体，化学名称为4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸，分子量194.18。阿魏酸有抗血小板聚集、抗炎、抗氧化等药理作用，同时对神经、心血管、肾脏、肝脏皆有保护作用，临床常用于治疗高血压、冠心病、脑动脉硬化和血管闭塞性脉管炎等病症。

发明内容

本为了减少雷公藤甲素的毒性，同时保持和增强其药理活性的方法，提高雷公藤甲素临床应用的安全性，本发明提供了一种雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸配伍的药物组合物，及其制备方法和用途。

一种降低雷公藤毒性的药物组合物，包括活性成分雷公藤甲素，还包括活性成分芍药苷、阿魏酸中的一种或两种。

较佳的技术方案，包括雷公藤甲素、阿魏酸，雷公藤甲素与阿魏酸的质量比为1:25-1:2000。

较佳的技术方案，包括雷公藤甲素、芍药苷，雷公藤甲素、芍药苷的质量比为1:25-1:2000。

较佳的技术方案，包括雷公藤甲素、芍药苷、阿魏酸，所述雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸配伍重量份比为：雷公藤甲素:芍药苷:阿魏酸＝1:25:25～1:2000:2000。

本发明的药物组合物由雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸按照重量份比为雷公藤甲素:芍药苷:阿魏酸＝1:25:25～1:2000:2000的比例，也可以是雷公藤甲素和芍药苷配伍，或者是雷公藤甲素和阿魏酸配伍，发挥治疗类风湿性关节炎的作用并解毒。

本发明中，活性成分雷公藤甲素以含雷公藤甲素的卫矛科雷公藤属植物植物、雷公藤属植物提取物、雷公藤属植物加工成的药材和炮制品中的任意一种或多种引入。活性成分阿魏酸以含阿魏酸的伞形科植物当归、川芎等，及其提取物和相关炮制品中的任意一种或几种引入。活性成分芍药苷以毛茛科植物芍药属植物加工而成的药材和炮制品中的任意一种或几种引入。

本发明的组合物可制成药剂学上的各种制剂，如片剂、胶囊剂、栓剂、颗粒剂、口服液、糖浆、合剂、口服悬浮液、丸剂、酊剂、膜剂、散剂、乳膏剂、注射剂、微乳凝胶及醇质体等，也可和其他药物组成组合物制剂。

本发明的药物组合物在制备治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药物中的应用。

本发明公开了雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸配伍的药物组合物及其制备和用途，该药物组合物与雷公藤甲素比较，具有治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎活性相当，毒性小的优点，可大大提高雷公藤甲素的临床应用安全性。该药物组合可作为治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药使用。

附图说明

图1雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶对大鼠体重的影响。

图2是雷公藤与白芍配伍大鼠皮肤刺激性试验结果。

图3是雷公藤与白芍配伍各组大鼠体重变化。

图4是雷公藤与白芍配伍各组大鼠肝脏系数的比较。

具体实施方式

降低雷公藤毒性的药物组合物，由雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸按照重量份比为雷公藤甲素:芍药苷:阿魏酸＝1:25:25～1:2000:2000的比例，也可以是雷公藤甲素和芍药苷配伍，或者是雷公藤甲素和阿魏酸配伍，发挥治疗类风湿性关节炎的作用并解毒。活性成分雷公藤甲素以含雷公藤甲素的卫矛科雷公藤属植物植物、雷公藤属植物提取物、雷公藤属植物加工成的药材和炮制品中的任意一种或多种引入。活性成分阿魏酸以含阿魏酸的伞形科植物当归、川芎等，及其提取物和相关炮制品中的任意一种或几种引入。活性成分芍药苷以毛茛科植物芍药属植物加工而成的药材和炮制品中的任意一种或几种引入。

1、雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸配伍对于MDCK细胞的活性影响

表1不同浓度雷公藤甲素对MDCK细胞的毒性影响

表2不同浓度阿魏酸对MDCK细胞的毒性影响

表3雷公藤甲素-阿魏酸(1:50)对MDCK细胞的毒性

表4雷公藤甲素-阿魏酸(1:100)对MDCK细胞的毒性

表5雷公藤甲素-阿魏酸(1:200)对MDCK细胞的毒性

表6雷公藤甲素-阿魏酸(1:500)对MDCK细胞的毒性

表7雷公藤甲素-阿魏酸(1:1000)对MDCK细胞的毒性

表8雷公藤甲素-阿魏酸(1:2000)对MDCK细胞的毒性

采用MTT法比较雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸不同配伍比例对MDCK的毒性试验，汇总结果见表9、表10，结果表明药物组合物能显著降低雷公藤甲素的毒性。

表9雷公藤甲素和阿魏酸配伍对MDCK细胞的影响

表10雷公藤甲素配伍芍药苷对L-02细胞毒性的影响

2、雷公藤甲素阿魏酸醇质体的制备

称取处方量卵磷脂、雷公藤甲素、阿魏酸，加入适量乙醇于西林瓶中溶解得醇相，将水相密封于西林瓶中，注射器与水相西林瓶密封连接，置于磁力搅拌器上(35℃，700r/min)，缓慢地将醇相加入水相中，滴加完全后继续水合30min，探头式超声(200w，90s)，冷却至常温，然后用0.22um微孔滤膜过滤即得醇质体，密封4℃保存，备用。

3、雷公藤甲素阿魏酸乳膏的制备

将司盘60、单硬脂酸甘油酯、肉豆蔻酸异丙酯、雷公藤甲素、阿魏酸合为油相，另将吐温80、嘉兰丹、超纯水为水相，油相水相分别加热至(80±1)℃，在浴锅中恒温混合30分钟后将水相缓慢加入油相中，10000r.min-1高速剪切1min后，迅速放置于冰水浴中缓慢搅拌至冷却，即得雷公藤甲素阿魏酸乳膏。

4、雷公藤甲素阿魏酸普通凝胶的制备

将卡波姆980与聚山梨酯80及3mL水混合使溶胀,阿魏酸、雷公藤甲素、卡波姆980加入甘油与1mL水的复合溶剂中,微热,使溶后加入上液中搅匀,滴加三乙醇胺,加水至10g,搅匀,即得雷公藤甲素阿魏酸配伍凝胶。

5、雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶的制备

称取处方量卵磷脂、雷公藤甲素、阿魏酸，加入适量乙醇于西林瓶中溶解得醇相，将水相密封于西林瓶中，注射器与水相西林瓶密封连接，置于磁力搅拌器上(35℃，700r/min)，缓慢地将醇相加入水相中，滴加完全后继续水合30min，探头式超声(200w，90s)，冷却至常温，然后用0.22um微孔滤膜过滤即得醇质体，密封4℃保存，备用。称取处方量卡波姆940均匀洒在20％乙醇水溶液中，磁力搅拌(35℃，700r·min-1)1h使其充分溶胀，后加三乙醇胺调节至PH＝7左右，得空白凝胶。取适量醇质体与空白凝胶混合均匀后，得雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶。

6、雷公藤白芍乳膏的制备

A(油相)单硬脂酸甘油酯；肉豆蔻酸异丙酯；司盘60，B雷公藤提取物2％；无水乙醇3％，C(水相)吐温80 2％；白芍4％；嘉兰丹0.2％,水62.8％

将油相和水相置于80℃水浴锅中预热30分钟，将B置于超声仪中超声20分钟使药物溶解完全后倒于油相中搅拌均匀，迅速将水相搅拌均匀后倒于油相中，10000r.min-1高速剪切1min，置于冰水浴中搅拌冷却，即得雷公藤白芍乳膏。

7.雷公藤甲素阿魏酸制剂经皮渗透性研究

雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶、雷公藤甲素阿魏酸乳膏、雷公藤甲素阿魏酸普通凝胶的经皮渗透性研究结果表明，表明醇质体凝胶能使阿魏酸缓慢渗透、持续释放，延长作用时间，减小由于药物透过量过大而引起的皮肤刺激，使其更适于局部用药，达到一种长效缓释的效果，对于雷公藤甲素也具有较好的渗透性，具体见表11-12。

表11阿魏酸和雷公藤甲素的累积透过量(n＝6)

表12醇质体凝胶、普通凝胶、乳膏中阿魏酸和雷公藤甲素的皮肤滞留量(n＝6)

8、雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶的皮肤刺激性实验结果表明：单次试验结果表明醇质体凝胶对完整皮肤组无刺激性，对破损皮肤组有轻度刺激，且给药组与对照组无差异，说明并不是药物造成的刺激。多次试验结果表明，醇质体凝胶对完整皮肤未显示刺激性，对于破损皮肤，给药组和对照组在给药第二天均显示轻度刺激性，之后刺激性消失，在给药第三天开始破损皮肤开始恢复，在第四天以后基本恢复完全，与完整皮肤无差异，可能的原因是阿魏酸局部给药具有促进创面愈合的作，故醇质体凝胶适用于局部给药，也保证了给药的安全性，但在临床用药时仍需考虑其对皮肤的刺激性反应，特别是对于皮肤破损的患者，且类风湿关节炎的治疗一般需长期给药，仍需谨慎使用。

9、雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶的长期毒性实验：

大鼠适应性饲养一个星期后，选用大鼠64只，雌、雄各半，随机分为8组，分别为①完整皮肤空白醇质体凝胶对照组②完整皮肤醇质体凝胶低剂量组③完整皮肤醇质体凝胶中剂量组④完整皮肤醇质体凝胶高剂量组⑤破损皮肤空白醇质体凝胶对照组⑥破损皮肤醇质体凝胶低剂量组⑦破损皮肤醇质体凝胶中剂量组,⑧破损皮肤醇质体凝胶高剂量组。给药24h前用Na₂S将大鼠背部毛脱掉,脱毛面积约3×3cm²，其中完整皮肤对照组、低、中、高剂量给药组皮肤完整，皮肤破损对照组、低、中、高剂量给药组实验时用薄刀片作“#”划破表皮，以轻度渗血为度。根据动物皮毛恢复情况不定期进行脱毛，约两周一次，脱毛当天不给药；破损皮肤组动物每脱毛时划伤一次，保持皮肤的破损状态。实验时按分组给药,1g/只，用二层纱布覆盖后,再用无刺激性胶布固定,以保证药物与皮肤接触至少6h，给药时间为12周。每日记录动物状态，末次给药后禁食不禁水，24h后10％的水合氯醛麻醉大鼠，腹股动脉取血于10ml非抗凝管中，在室温下静置2小时之后，分离出液态血液于4℃冷冻离心(3500r/min,10min)取上清液，使用全自动生化分析仪对下列各项血牛化指标进行检测：碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)，肌酐(Cre)，尿素(Urea)。对体重的影响见图1(图中：注：x：雄性；c:雌性，w：完整皮肤,p:破损皮肤,k:空白醇质体凝胶,d:低剂量醇质体凝胶,z:中剂量醇质体凝胶,g：高剂量醇质体凝胶)，血液生化指标的影响见表13-14，对脏器系数的影响见表15-16，各组数据均未见明显毒性，说明药物组合物可基本保障临床安全应用。

表13雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶对雄性大鼠血液指标的影响

注：x：雄性；c:雌性，w：完整皮肤,p:破损皮肤,k:空白醇质体凝胶,d:低剂量醇质体凝胶,z:中剂量醇质体凝胶,g：高剂量醇质体凝胶

表14雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶对雌性大鼠血液指标的影响

注：x：雄性；c:雌性，w：完整皮肤,p:破损皮肤,k:空白醇质体凝胶,d:低剂量醇质体凝胶，z:中剂量醇质体凝胶,g：高剂量醇质体凝胶

表15雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶对雄鼠器官的影响(X±SD g/100g)

表16雷公藤甲素阿魏酸醇质体凝胶对雌鼠器官的影响(X±SD g/100g)

注：(*p<0.05)x：雄性；c:雌性，w：完整皮肤,p:破损皮肤,k:空白醇质体凝胶,d:低剂量醇质体凝胶,z:中剂量醇质体凝胶,g：高剂量醇质体凝胶

10、雷公藤配伍白芍对大鼠肝毒性的影响

1.动物：SD大鼠，体重180±20g,雄雌各半

2.分组与给药：实验前饲养一星期，随机分为5组，A组为空白基质组，B组雷公藤乳膏组，C组雷公藤白芍1:1组，D组雷公藤白芍1:2组，F组雷公藤白芍1:3组。给药组及空白对照组分别给以等体积的含药乳膏和空白乳膏，其余各组连续14天给予雷白乳膏，每天给药一次，最后一天给药后禁食12h(不禁水)，以5％雷公藤乳膏按2g/kg剂量经皮给药14天进行肝毒性造模。

3.观察检测指标：皮肤刺激红肿状态，体重变化、肝脏系数，血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)指标的变化。

4.实验结果

4.1皮肤刺激性

空白组大鼠给药14天后背部皮肤基本完好，未出现结痂红斑的现象，说明空白机制乳膏对大鼠皮肤无刺激性。雷公藤组给药后背部皮肤出现红肿溃烂，结痂的情况，表明雷公藤提取物对皮肤刺激性比较大。雷白配伍组相对于雷公藤组而言皮肤的刺激性程度均有所减轻，且有差异。与空白组相比仍有红斑，但有好转迹象。表明白芍与雷公藤配伍之后外用能减轻雷公藤的皮肤刺激性。结果见图2。

4.2体重变化

给药前各组大鼠体重均无明显差异，给药一周后各组大鼠体重均有一定程度的上升，给药14天后，与空白组相比，各给药组体重均有下降的趋势且具有显著性差异，其中单独雷公藤组大鼠体重下降的最快，其次是雷白1:1组，雷白1:2组和雷白1:3组。各组大鼠体重变化见表17和图3。

表17各组大鼠体重变化(x±s)

给药组与空白组相比，*P<0.05，**P<0.01

4.3肝脏系数

各给药组与空白组比较均有差异，较空白组B,C,E组肝脏系数有一定程度的升高，D组与B,C组相比有差异，具有统计学意义，说明雷白1:2能够降低大鼠肝脏系数。

表18各组大鼠肝脏系数的比较(x±s，n＝10)

4.5血浆指标的变化

与正常组相比，雷公藤组的AST,ALP,ALT含量均有明显的升高，配伍组

AST,ALP,ALT含量均有所下降，其中1:2,1:3组有明显降低，且具有统计学意义，说明白芍配伍雷公藤能降低血液中AST,ALP,ALT含量。

表19各组大鼠血浆指标变化

注：给药组与空白组相比，*P<0.05，**P<0.01

与B组比较，#P<0.05，##P<0.01

上述实验可以清楚表明，与雷公藤组相比，白芍与雷公藤配伍后不仅能降低雷公藤对大鼠皮肤的刺激性，而且能降低雷公藤的肝毒性。说明本发明中的配伍组合具有降低雷公藤毒性的作用。

本发明的分析结果表明，芍药苷、阿魏酸具有降低雷公藤甲素毒性的作用，可以是雷公藤甲素和芍药苷配伍，或者是雷公藤甲素和阿魏酸配伍，或者芍药苷、阿魏酸与雷公藤甲素三者配伍。

本发明的药物组合物可制成药剂学上的各种制剂，如片剂、胶囊剂、栓剂、颗粒剂、口服液、糖浆、合剂、口服悬浮液、丸剂、酊剂、膜剂、散剂、乳膏剂、注射剂、微乳凝胶及醇质体等，也可和其他药物组成组合物制剂。

本发明的药物组合物可用于制备治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药物中的应用。

Claims

1.一种降低雷公藤毒性的药物组合物，其特征是：包括活性成分雷公藤甲素，还包括活性成分芍药苷、阿魏酸中的一种或两种。

2.根据权利要求1所述的降低雷公藤毒性的药物组合物，其特征是：包括雷公藤甲素、阿魏酸，雷公藤甲素与阿魏酸的质量比为1:25-1:2000。

3.根据权利要求1所述的降低雷公藤毒性的药物组合物，其特征是：包括雷公藤甲素、芍药苷，雷公藤甲素、芍药苷的质量比为1:25-1:2000。

4.根据权利要求1所述的降低雷公藤毒性的药物组合物，其特征是：包括雷公藤甲素、芍药苷、阿魏酸，所述雷公藤甲素与芍药苷、阿魏酸配伍重量份比为：雷公藤甲素:芍药苷:阿魏酸＝1:25:25～1:2000:2000。

5.根据权利要求1所述的降低雷公藤毒性的药物组合物，其特征是：活性成分雷公藤甲素以含雷公藤甲素的卫矛科雷公藤属植物植物、雷公藤属植物提取物、雷公藤属植物加工成的药材和炮制品中的任意一种或多种引入；活性成分阿魏酸以含阿魏酸的伞形科植物当归、川芎等，及其提取物和相关炮制品中的任意一种或几种引入；活性成分芍药苷以毛茛科植物芍药属植物加工而成的药材和炮制品中的任意一种或几种引入。

6.权利要求1-5任意一项所述的降低雷公藤毒性的药物组合物的制备方法，其特征是：所述药物组合物制成药剂学上的各种制剂：片剂、胶囊剂、栓剂、颗粒剂、口服液、糖浆、合剂、口服悬浮液、丸剂、酊剂、膜剂、散剂、乳膏剂、注射剂、微乳凝胶及醇质体，或和其他药物组成组合物制剂。

7.权利要求1-5任意一项所述的降低雷公藤毒性的药物组合物的应用，其特征是，所述药物组合物在制备治疗类风湿性关节炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗炎药物中的应用。

8.一种雷公藤甲素阿魏酸醇质体的制备方法，其特征是：称取处方量卵磷脂、雷公藤甲素、阿魏酸，其中雷公藤甲素与阿魏酸的质量比为1:25-1:2000，加入适量乙醇于西林瓶中溶解得醇相，将水相密封于西林瓶中，注射器与水相西林瓶密封连接，置于磁力搅拌器上，缓慢地将醇相加入水相中，滴加完全后继续水合，探头式超声，冷却至常温，然后用微孔滤膜过滤即得醇质体，密封保存，备用。

9.一种雷公藤甲素阿魏酸乳膏的制备方法，其特征是：

将司盘60、单硬脂酸甘油酯、肉豆蔻酸异丙酯、雷公藤甲素、阿魏酸合为油相，其中雷公藤甲素与阿魏酸的质量比为1:25-1:2000，另将吐温80、嘉兰丹、超纯水为水相，油相水相分别加热至80±1℃，在浴锅中恒温混合30分钟后将水相缓慢加入油相中，10000r.min-1高速剪切1min后，迅速放置于冰水浴中缓慢搅拌至冷却，即得雷公藤甲素阿魏酸乳膏。

10.一种雷公藤白芍乳膏的制备方法，其特征是：

A:单硬脂酸甘油酯；肉豆蔻酸异丙酯,司盘60,

B:雷公藤提取物2％；无水乙醇3％，

C:吐温80 2％；白芍4％；嘉兰丹0.2％,水62.8％,

将油相A和水相C置于80℃水浴锅中预热30分钟，将B置于超声仪中超声20分钟使药物溶解完全后倒于油相中搅拌均匀，迅速将水相搅拌均匀后倒于油相中，10000r.min-1高速剪切1min，置于冰水浴中搅拌冷却，即得雷公藤白芍乳膏。