CN107937289B - 一株盔状毕赤酵母by27菌株在水果采后病害防治中的应用 - Google Patents

一株盔状毕赤酵母by27菌株在水果采后病害防治中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107937289B
CN107937289B CN201711373886.4A CN201711373886A CN107937289B CN 107937289 B CN107937289 B CN 107937289B CN 201711373886 A CN201711373886 A CN 201711373886A CN 107937289 B CN107937289 B CN 107937289B
Authority
CN
China
Prior art keywords
strain
pichia pastoris
fruits
gray mold
pichia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201711373886.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107937289A (zh
Inventor
王友升
黄津津
王颖
任向峰
姚婷
李丽萍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Kaipu fite Biotechnology Co.,Ltd.
Original Assignee
Beijing Technology and Business University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Technology and Business University filed Critical Beijing Technology and Business University
Priority to CN201711373886.4A priority Critical patent/CN107937289B/zh
Publication of CN107937289A publication Critical patent/CN107937289A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107937289B publication Critical patent/CN107937289B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/84—Pichia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/165—Yeast isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一株用于果蔬采后病害防治的抑菌谱广、效果稳定的毕赤酵母Pichia galeiformis菌株BY27及其制备与使用方法。该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCC No.14907。该毕赤酵母的使用方法：将菌株活化，用YPD发酵培养，离心，菌体用无菌水配成1×108细胞/mL的菌悬液；将苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘或圣女果等果蔬放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，常温贮藏。该毕赤酵母菌株可同时控制苹果青霉病、灰霉病和黑斑病，梨果实青霉病和灰霉病，葡萄灰霉病、曲霉病、黑斑病、镰孢霉病和红粉病，草莓灰霉病和曲霉病，柑橘青霉病，以及圣女果灰霉病和曲霉病，减少采后病害造成的损失，具有很好的应用前景。

Description

一株盔状毕赤酵母BY27菌株在水果采后病害防治中的应用
技术领域
本发明涉及水果采后病害生物防治领域，尤其涉及一株盔状毕赤酵母BY27菌株在水果采后病害防治中的应用，该菌株对苹果、梨、葡萄、草莓、柑桔、圣女果的主要采后病害均具有显著的防治效果。
背景技术
虽然新鲜水果品质劣变受诸多因素的影响，但病害是最主要的原因。其中，真菌性病害引起的腐烂变质是果实采后损失中最严重的因素。虽然可以通过农业防治、物理防治、化学防治和生物防治等很多途径进行防治水果采后病害，但目前的主要措施是化学防治(Eckert&Ogawa，1985，1988)。然而，长期使用化学农药不但导致病原菌产生耐药性而降低杀菌效果(Prusky et al.，1985；Viňas et al.，1991；Holmes&Eckert，1999)，而且频繁地使用高浓度的化学药剂也增加了果实上的农药残留量，严重威胁人们的健康，并造成环境污染(Gullion&Kuijipers，1994)。因此，开发安全、高效、无毒、低抗性的果实采后病害控制新技术成为当前世界各国的研究重点(Falik et al.，1995；Tian et al.，2001；Kulakiotuet al.，2004)，其中利用生物拮抗菌防治是目前被证明安全有效的新方法(Wilson&Wisniewski，1989；Janisiewicz&Koersten，2002)。
迄今为止，国内外已经筛选出了许多对水果采后病原真菌具有明显抑菌效果的细菌、酵母菌和小型丝状真菌，其中利用拮抗酵母菌防治果实采后病害是当前已被证明的安全、高效的新技术，这主要由于大多数病原菌通过伤口入侵果实，而酵母菌主要通过与病原菌进行营养和空间竞争来防治病害，而且拮抗酵母菌能够适应低温、低氧、高二氧化碳等果实采后贮藏条件(王友升，2012)。
然而，虽然目前国内外报道的拮抗酵母菌有近百种，但大多数拮抗酵母菌的生防效果仅在少数果实上得到验证。而由于同一酵母菌的不同菌株之间的生防效果有很大差异(Filonowet al.，1996)，因此，大多数拮抗酵母菌的缺乏抑菌谱广、效果稳定的菌株。
发明内容
针对上述技术难题，本发明的目的在于提供一株盔状毕赤酵母(Pichiagaleiformis)BY27菌株在水果采后病害防治中的应用，所述BY27菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提交保藏，保藏菌株编号为CGMCC No.14907；将所述BY27菌株活化，用YPD液体培养基发酵培养，离心得到菌体，将菌体用无菌水配制成浓度为1×108个/mL的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，密封后，放入常温贮藏。
优选地，所述水果为苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘和圣女果。
优选地，将菌株从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min收集菌体，用无菌水洗3遍。
优选地，所述YPDA培养基是：酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min。
优选地，它用于同时控制苹果青霉病、灰霉病和黑斑病，梨果实青霉病和灰霉病，葡萄灰霉病、曲霉病、黑斑病、镰孢霉病和红粉病，草莓灰霉病和曲霉病，柑橘青霉病，以及圣女果灰霉病和曲霉病。
本发明的优点：(1)本发明所提供的毕赤酵母BY27为本实验室从葡萄酒发酵醪液中筛选得到，其对人体无害，安全性高。(2)本发明所使用的毕赤酵母BY27抑菌谱广，可以同时控制苹果青霉病、灰霉病和黑斑病，梨果实青霉病和灰霉病葡萄灰霉病、曲霉病、黑斑病、镰孢霉病和红粉病，草莓灰霉病和曲霉病，柑橘青霉病，以及圣女果灰霉病和曲霉病。(3)本发明所提供的毕赤酵母BY27在YPD培养基中生长良好，易于培养，性状稳定，且单独使用一定浓度该菌悬液就能有效防治多种水果采后病害，使用成本低，市场前景广阔。(4)本发明所提供的毕赤酵母BY27可以代替化学杀菌剂防治水果采后病害，避免使用化学杀菌剂对人的危害，且不污染环境，社会和生态效益显著。
通过以下实施例更加详细的说明本发明。以下实施例仅是说明性的，本发明并不受这些实施例的限制。
附图说明
图1为本发明盔状毕赤酵母(Pichia galeiformis)BY27菌株的26S rDNA D1/D2区核酸序列进化关系图。
图2为盔状毕赤酵母BY27菌株对苹果青霉病、灰霉病和黑斑病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；P.g：1×108个/mL的毕赤酵母Pichia galeiformis BY27菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图3为盔状毕赤酵母BY27菌株对毕赤酵母对梨果实青霉病和灰霉病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；P.g：1×108个/mL的毕赤酵母BY27菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图4为盔状毕赤酵母BY27菌株对葡萄葡萄灰霉病、曲霉病、黑斑病、镰孢霉病和红粉病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；P.g：1×108个/mL的毕赤酵母BY27菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图5为盔状毕赤酵母BY27菌株对草莓灰霉病和曲霉病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；P.g：1×108个/mL的毕赤酵母菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图6为盔状毕赤酵母BY27菌株对柑橘青霉病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；P.g：1×108个/mL的毕赤酵母菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
图7为盔状毕赤酵母BY27菌株对圣女果灰霉病和曲霉病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；P.g：1×108个/mL的毕赤酵母菌悬液。不同字母代表差异显著(P<0.05)。
具体实施方式
实施例1：盔状毕赤酵母Pichia galeiformis菌株BY27的生物学特性
1.形态学特征
(1)YPDA培养基(酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂1.8％，121℃灭菌20min)上26℃培养48h，菌落呈圆形、白色，菌落边缘光滑圆润。细胞形态呈椭球型。
(2)在YPDA液体培养基中培养24h后，不形成醭，菌液浑浊，有沉淀，镜检酵母细胞呈椭圆形，芽殖。
2.分子生物学鉴定
以通用正向引物NL-1(5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’)和反向引物NL-4(5’-GGTCCGTGT TTCAAGACGG-3’)进行PCR扩增酵母26S rDNA D1/D2区核酸序列，将PCR产物的测序结果输入网站www.NCBI.nlm.nih.gov进行BLAST，从GenBank数据库中下载同源序列，通过MEGA6软件构建进化树如图1，确定筛选到的菌株为毕赤酵母(Pichia galeiformis)。
本发明的盔状毕赤酵母BY27已保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院微生物研究所的中国微生物菌株保藏委员会普通微生物中心，保藏时间为2017年11月15日，保藏编号为CGMCC No.14907，建议的分类命名为毕赤酵母Pichia galeiformis。
实施例2盔状毕赤酵母BY27对苹果青霉病、灰霉病和黑斑病的抑制效果
1.实验方案
将盔状毕赤酵母BY27从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108个/mL的盔状毕赤酵母BY27菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium expansum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)或链格孢菌(Alternaria tenuissima)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104个/mL的青霉病菌、灰霉病菌或链格孢菌孢子悬浮液。
将健康无损的苹果果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打5个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108个/mL的毕赤酵母BY27菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌、灰霉病菌或链格孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价毕赤酵母BY27的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计苹果的发病率结果如下：
(1)盔状毕赤酵母BY27对苹果青霉病的抑制效果
如图2所示，对照组苹果青霉病发病率为100％，经过毕赤酵母BY27处理的苹果青霉病发病率为0，因此毕赤酵母BY27能够有效控制苹果青霉病病害。
(2)盔状毕赤酵母BY27对苹果灰霉病的抑制效果
如图2所示，对照组苹果灰霉病的发病率为100％，经过毕赤酵母BY27处理的苹果灰霉病发病率为0，因此毕赤酵BY27能够有效控制苹果灰霉病病害。
(3)盔状毕赤酵母BY27对苹果黑斑病的抑制效果
如图2所示，对照组苹果黑斑病发病率为100％，经过毕赤酵母BY27处理的苹果黑斑病发病率为66％，因此毕赤酵母BY27能够有效控制苹果黑斑病病害。
实施例3盔状毕赤酵母BY27对梨果实青霉病和黑斑病的抑制效果
1.实验方案
将盔状毕赤酵母BY27从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108个/mL的盔状毕赤酵母BY27菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium expansum)或灰霉病菌(Botrytis cinerea)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104个/mL的青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。
将健康无损的梨果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打5个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108个/mL的毕赤酵母BY27菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价盔状毕赤酵母BY27的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验,统计梨果实的发病率结果如下：
(1)盔状毕赤酵母BY27对梨果实青霉病的抑制效果
如图3所示，对照组梨果实青霉病发病率为100％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的果实青霉病发病率为53％，因此盔状毕赤酵母BY27能够有效控制梨果实青霉病病害。
(2)盔状毕赤酵母BY27对梨果实灰霉病的抑制效果
如图3所示，对照组梨果实灰霉病的发病率为100％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的梨果实灰霉病发病率为73％，因此盔状毕赤酵母BY27能够有效控制梨果实灰霉病病害。
实施例4盔状毕赤酵母BY27对葡萄采后病害的抑制效果
1.实验方案
将盔状毕赤酵母BY27从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108个/mL的毕赤酵母BY27菌悬液。
将灰霉病的致病菌大蒜盲种葡萄孢(Botrytis porri)、刺孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、链格孢菌(Alternaria eichhorniae)、芬芳镰孢菌(Fusarium redolens)或粉红单端孢(Trichothecium roseum)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104个/mL的灰霉菌、刺孢曲霉、链格孢菌、芬芳镰孢菌或粉红单端孢孢子悬浮液。
将健康无损的葡萄果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔，表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108个/mL的盔状毕赤酵母BY27菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL灰霉菌、刺孢曲霉、链格孢菌、粉红单端孢或茎点霉菌孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价盔状毕赤酵母BY27的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计葡萄果实的发病率结果如下：
(1)盔状毕赤酵母BY27菌株对葡萄果实灰霉病的抑制效果
如图4所示，对照组葡萄果实灰霉病发病率为100％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的葡萄果实灰霉病发病率为0，因此盔状毕赤酵母BY27能够有效控制葡萄果实灰霉病病害。
(2)盔状毕赤酵母BY27菌株对葡萄果实曲霉病的抑制效果
如图4所示，对照组葡萄果实曲霉病的发病率为100％，经过毕赤酵母BY27处理的葡萄果实曲霉病发病率为33％，因此毕赤酵母BY27能够有效控制由造成的葡萄果实曲霉病病害。
(3)盔状毕赤酵母BY27菌株对葡萄果实黑斑病的抑制效果
如图4所示，对照组葡萄果实黑斑病的发病率为100％，经过盔状毕赤酵母BY27的葡萄果实黑斑病发病率为53％，因此毕赤酵母BY27能够控制葡萄果实黑斑病病害。
(4)盔状毕赤酵母BY27菌株对葡萄果实镰孢霉病的抑制效果
如图4所示，对照组葡萄镰孢霉病的发病率为100％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的葡萄镰孢霉病发病率为60％，因此盔状毕赤酵母BY27能够有效控制葡萄镰孢霉病病害。
(5)毕赤酵母BY27菌株对葡萄红粉病的抑制效果
如图4所示，对照组葡萄镰孢霉病的发病率为100％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的葡萄镰孢霉病发病率为80％，因此盔状毕赤酵母BY27能够有效控制葡萄镰孢霉病病害。
实施例5盔状毕赤酵母BY27菌株对草莓果实灰霉病和曲霉病的抑制效果
1.实验方案
将盔状毕赤酵母BY27菌株从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108个/mL的盔状毕赤酵母BY27菌悬液。
将灰霉病致病菌大蒜盲种葡萄孢(Botrytis porri)或刺孢曲霉(Aspergillusaculeatus)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104个/mL的灰霉病菌或刺孢曲霉孢子悬浮液。
将健康无损的草莓果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108个/mL的毕赤酵母BY27菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL灰霉病菌或刺孢曲霉孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％,置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价盔状毕赤酵母BY27的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计草莓果实的发病率结果如下：
(1)盔状毕赤酵母BY27菌株对草莓果实灰霉病的抑制效果
如图5所示，对照组草莓果实灰霉病发病率为80％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的草莓果实灰霉病发病率为40％，因此毕赤酵母能够有效控制草莓果实灰霉病病害。
(2)盔状毕赤酵母BY27菌株对草莓果实曲霉病的抑制效果
如图5所示，对照组草莓果实曲霉病的发病率为60％，经过盔状毕赤酵母BY27菌株处理的草莓果实曲霉病发病率为0，因此毕赤酵母能够有效控制草莓果实曲霉病病害。
实施例6盔状毕赤酵母BY27对柑橘青霉病的抑制效果
1.实验方案
将盔状毕赤酵母BY27从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108个/mL的毕赤酵母BY27菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium italicum)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104个/mL的青霉病菌(孢子悬浮液。
将健康无损的柑橘果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔，表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108个/mL的盔状毕赤酵母BY27菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价盔状毕赤酵母BY27的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计柑橘果实的发病率结果如图6所示，对照组柑橘果实青霉病发病率为73％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的柑橘果实青霉病发病率为25％，因此盔状毕赤酵母BY27能够有效控制柑橘果实青霉病病害。
实施例7盔状毕赤酵母BY27菌株对圣女果灰霉病和曲霉病的抑制效果
1.实验方案
将盔状毕赤酵母BY27从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108个/mL的盔状毕赤酵母BY27菌悬液。
将灰霉病致病菌大蒜盲种葡萄孢(Botrytis porri)或刺孢曲霉(Aspergillusaculeatus)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104个/mL的灰霉病菌或刺孢曲霉孢子悬浮液。
将健康无损的圣女果用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔,表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108个/mL的盔状毕赤酵母BY27菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL灰霉病菌(Botrytis porri)或刺孢曲霉(Aspergillus aculeatus)孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价毕赤酵母菌株BY27的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计圣女果发病率结果如下：
(1)盔状毕赤酵母BY27菌株对圣女果灰霉病的抑制效果
如图7所示，对照组圣女果灰霉病发病率为100％，经过盔状毕赤酵母BY27处理的圣女果灰霉病发病率为0％，因此盔状毕赤酵母BY27能够有效控制由灰霉病菌造成的圣女果灰霉病病害。
(2)盔状毕赤酵母BY27菌株对圣女果曲霉病的抑制效果
如图7所示，对照组圣女果曲霉病的发病率为90％，经过盔状毕赤酵母BY27菌株处理的圣女果曲霉病发病率为0％，因此盔状毕赤酵母BY27菌株能够有效控制圣女果曲霉病病害。

Claims (4)

1.一株用于水果采后病害防治的盔状毕赤酵母(Pichia galeiformis)BY27菌株，其特征在于，所述BY27菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提交保藏，菌株保藏编号为CGMCC No.14907；所述BY27菌株从自然发酵的酿酒葡萄醪液中筛选分离获得。
2.如权利要求1所述的BY27菌株在水果采后病害防治中的应用，其特征在于：将所述BY27菌株活化，用YPD液体培养基发酵培养，离心得到菌体，将菌体用无菌水配制成浓度为1×108个/mL的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，密封后，放入常温贮藏；所述水果选自苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘和圣女果；
所述BY27菌株用于控制苹果的扩展青霉病菌(Penicillium expansum)、灰霉菌(Botrytis cinerea)或细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)，梨果实的扩展青霉病菌(Penicillium expansum)或灰霉菌(Botrytis cinerea)，葡萄的大蒜盲种葡萄孢(Botrytis porri)、刺孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、水葫芦链格孢(Alternaria eichhorniae)、芬芳镰孢菌(Fusarium redolens)或粉红单端孢(Trichothecium roseum)，草莓的大蒜盲种葡萄孢(Botrytis porri)或刺孢曲霉（Aspergillus aculeatus)，柑橘的意大利青霉病菌(Penicillium italicum)，以及圣女果的大蒜盲种葡萄孢(Botrytis porri)或刺孢曲霉(Aspergillus aculeatus)。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，将菌株从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min收集菌体，用无菌水洗3遍。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述YPDA培养基是：酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min。
CN201711373886.4A 2017-12-15 2017-12-15 一株盔状毕赤酵母by27菌株在水果采后病害防治中的应用 Active CN107937289B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711373886.4A CN107937289B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一株盔状毕赤酵母by27菌株在水果采后病害防治中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711373886.4A CN107937289B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一株盔状毕赤酵母by27菌株在水果采后病害防治中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107937289A CN107937289A (zh) 2018-04-20
CN107937289B true CN107937289B (zh) 2021-06-25

Family

ID=61942373

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711373886.4A Active CN107937289B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一株盔状毕赤酵母by27菌株在水果采后病害防治中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107937289B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107881122B (zh) * 2017-12-15 2021-05-28 北京工商大学 一株用于水果采后病害防治的葡萄酒酿酒酵母及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1302546A (zh) * 2001-03-01 2001-07-11 中国科学院植物研究所 一种防治果蔬采后软腐病的生物防治拮抗菌(bay－1)及技术使用方法
CN1332967A (zh) * 2001-06-06 2002-01-30 中国科学院植物研究所 一种防治果蔬采后青霉和灰霉等主要病害的生物防治拮抗菌(bay－2)及技术使用方法
CN101899400A (zh) * 2010-06-10 2010-12-01 江苏大学 卡利比克毕赤酵母、在水果贮藏保鲜中的应用及使用方法
CN103988896A (zh) * 2014-05-29 2014-08-20 江苏大学 甜菜碱诱导培养卡利比克毕赤酵母对水果采后病害的防治
CN105861340A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 江苏大学 一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形毕赤酵母
CN107460134A (zh) * 2017-06-29 2017-12-12 江苏大学 一株控制梨果采后病害的季也蒙毕赤酵母

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0610951A2 (pt) * 2005-06-02 2010-08-03 Cargill Inc levedura geneticamente modificada da espécie issatchenkia orientalis e espécies estreitamente relacionadas e processos de fermentação utilizando as mesmas
CN101029300B (zh) * 2007-02-06 2010-08-25 韶关学院 一种降酸酵母及其在杨梅果酒酿造中的应用
CN101401597A (zh) * 2008-11-12 2009-04-08 北京工商大学 一种树莓的保鲜方法及采前保鲜剂
CN102010833B (zh) * 2010-06-21 2012-08-15 唐传生物科技（厦门）有限公司 毕赤酵母菌株及其混合培养用于半纤维素水解物生物脱毒的方法
EP2714889A1 (en) * 2011-05-27 2014-04-09 Novozymes A/S MICROORGANISMS FOR n-PROPANOL PRODUCTION
EP2744904B1 (en) * 2011-08-19 2016-04-13 Novozymes, Inc. Recombinant microorganisms for production c4-dicarboxylic acids
US10066246B2 (en) * 2012-07-25 2018-09-04 Cargill, Incorporated Yeast cells having NADP(H)-dependent reductive TCA pathway from pyruvate to succinate
EP3234165A1 (en) * 2014-12-19 2017-10-25 Novozymes A/S Recombinant host cells for the production of 3-hydroxypropionic acid
WO2016100910A1 (en) * 2014-12-19 2016-06-23 Novozymes A/S Recombinant host cells for the production of 3-hydroxypropionic acid
DK3262161T3 (da) * 2015-02-27 2021-09-13 Novozymes As Rekombinante værtsceller til fremstilling af 3-hydroxypropionsyre
KR20180043242A (ko) * 2015-06-04 2018-04-27 바이오엠버 인코퍼레이티드 작용화된 알파-치환된 아크릴레이트 및 c4-다이카복실산의 생체-기반 생성
CN105524921B (zh) * 2016-02-02 2018-08-28 江南大学 一种快速鉴定产氨基甲酸乙酯酵母的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1302546A (zh) * 2001-03-01 2001-07-11 中国科学院植物研究所 一种防治果蔬采后软腐病的生物防治拮抗菌(bay－1)及技术使用方法
CN1332967A (zh) * 2001-06-06 2002-01-30 中国科学院植物研究所 一种防治果蔬采后青霉和灰霉等主要病害的生物防治拮抗菌(bay－2)及技术使用方法
CN101899400A (zh) * 2010-06-10 2010-12-01 江苏大学 卡利比克毕赤酵母、在水果贮藏保鲜中的应用及使用方法
CN103988896A (zh) * 2014-05-29 2014-08-20 江苏大学 甜菜碱诱导培养卡利比克毕赤酵母对水果采后病害的防治
CN105861340A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 江苏大学 一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形毕赤酵母
CN107460134A (zh) * 2017-06-29 2017-12-12 江苏大学 一株控制梨果采后病害的季也蒙毕赤酵母

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"拮抗酵母菌对沙糖桔采后绿霉病的抑制作用";黄雪梅等;《南方果树》;20110120;第40卷(第1期);第4-8,12页 *
"毕赤酵母Pichia anomala SRF对苹果采后青霉病的生防机制研究";李慧玲;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20150115;第1-40页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107937289A (zh) 2018-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107868759B (zh) 一株葡萄酒有孢汉生酵母在水果采后病害防治的应用
CN107881121B (zh) 一株控制水果采后病害的酿酒酵母by23及其制备与使用方法
CN107881122B (zh) 一株用于水果采后病害防治的葡萄酒酿酒酵母及其应用
CN110699275B (zh) 一株拮抗果蔬采后灰霉病原菌的细菌菌株及其应用
CN107904181B (zh) 一株用于果蔬采后病害防治的酿酒酵母by21及其制备与使用方法
CN100496260C (zh) 一种水果蔬菜的生物保鲜剂及其制备方法
CN113528370B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌菌株及其用途
CN103740604B (zh) 一种葡萄有孢汉逊酵母菌及其应用
CN108611287B (zh) 一株控制桃果采后病害的膜醭毕赤酵母
CN103642705A (zh) 一株抑制真菌的梅奇酵母菌及其应用
CN108118004B (zh) 一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用
Ruocco et al. New tools to improve the shelf life of chestnut fruit during storage
CN107446831B (zh) 一种生防酵母ga8及其应用
CN105861340B (zh) 一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形毕赤酵母
CN106119134B (zh) 黄色蠕形霉y28及其在防治果树腐烂病中的应用
CN107937289B (zh) 一株盔状毕赤酵母by27菌株在水果采后病害防治中的应用
CN107988088B (zh) 一株沙漠毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用
CN110527639B (zh) 一种美极梅奇酵母及其应用
CN107937290B (zh) 一株用于水果采后病害防治的拜耳接合酵母及其制备方法与用途
CN113273604A (zh) 异常威克汉姆酵母用于番茄采后病害防治及贮藏保鲜的用途
CN107937287B (zh) 一株假丝酵母在水果采后病害防治的应用
CN107904180A (zh) 一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法
CN107937288B (zh) 一株假丝酵母在水果采后病害防治的应用
CN113528377B (zh) 一种具有促生长及防腐作用的枯草芽孢杆菌及其应用
CN111887293B (zh) 一种酿酒酵母用于娃娃菜采后病害控制及贮藏保鲜的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210812

Address after: 276800 1st floor, building 2, new generation information technology industrial park, Rizhao hi tech Zone, Rizhao City, Shandong Province

Patentee after: Rizhao Huada Health Industry Research Institute

Address before: 100048, Fu Cheng Road, Beijing, Haidian District, No. 33

Patentee before: BEIJING TECHNOLOGY AND BUSINESS University

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210902

Address after: Room 1401, building D, 606 ningliu Road, Changlu street, Jiangbei new district, Nanjing, Jiangsu Province 210000

Patentee after: Nanjing Wantuo Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 276800 1st floor, building 2, new generation information technology industrial park, Rizhao hi tech Zone, Rizhao City, Shandong Province

Patentee before: Rizhao Huada Health Industry Research Institute

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210923

Address after: 276800 1st floor, building 2, new generation information technology industrial park, Rizhao hi tech Zone, Rizhao City, Shandong Province

Patentee after: Shandong Kaipu fite Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: Room 1401, building D, 606 ningliu Road, Changlu street, Jiangbei new district, Nanjing, Jiangsu Province 210000

Patentee before: Nanjing Wantuo Biotechnology Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right