CN107926983A - 生防番茄炭疽病的微生态制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生防番茄炭疽病的微生态制剂及其制备方法，属于炭疽病防治技术领域。本发明的微生物制剂包含以下重量份的原料：复合微生物菌剂80‑100份、植物甲醇提取物3‑5份、盐溶液8‑10份、葡萄糖3‑4份、聚天冬氨酸0.2‑0.5份、吲哚乙酸0.1‑0.3份、水果汁10‑15份、水20‑30份。该微生物制剂的制备方法包括复合微生物菌群、植物甲醇提取、盐溶液制备等步骤制成。本发明采用生物防治的方法，利用微生物之间的拮抗、抑制作用，以菌治菌，以菌抑菌，能够维持番茄植株表面的微生物种群的丰富度，可降低化学农药带来的环境污染，提高植株的长势，提高生态效益。

Description

生防番茄炭疽病的微生态制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及生防番茄炭疽病的微生态制剂及其制备方法，属于炭疽病防治技术领域。
背景技术
番茄，又名西红柿，是茄科番茄属一年生或多年生草本植物。番茄的果实营养丰富，含有多种对人体有益的物质。炭疽病，喜高温、高湿条件，分布广泛、种类复杂、寄主范围广、传播能力强，是番茄善常见的病害之一。一般为害成熟的果实，在果实上病斑呈圆形或近圆形，病部初生水渍状透明小斑点，直径5～10mm，稍凹陷，扩大后呈黑色，略具同心轮纹，其上密生小黑点，湿度大时病斑分泌出淡红色黏质物，最终导致果腐或脱落，直接影响番茄的产量和品质。
目前对番茄炭疽病的防治主要采取以下措施：(1)选育抗病性品种，可增强对环境的抵抗力，但选育的方法较繁琐、时间较长久。(2)轮作和嫁接，可减少病原菌，切断其侵染途径，但一般需要同非茄科、非瓜类的蔬菜轮作3-4年以上。(3)化学杀菌消毒，可快速降低病原微生物对番茄的侵染，但在化学防治的过程中，大量的农药施用会增加环境污染，降低环境效益。
发明内容
本发明的目的在于研制一种生防番茄炭疽病的农用微生态制剂，采用生物防治的方法抑制番茄炭疽病，其配方合理，营养协调，可用于克服和防治大棚、田间中由病原微生物引起的番茄炭疽病，制备方法简单易行，产品工艺简易高效，适用于规模生产和推广应用。
本发明是采用以下的技术方案实现的：
一种生防番茄炭疽病的微生态制剂，包含以下重量份的原料：
复合微生物菌剂80-100份、植物甲醇提取物3-5份、盐溶液8-10份、葡萄糖3-4份、聚天冬氨酸0.2-0.5份、吲哚乙酸0.1-0.3份、水果汁10-15份、水20-30份。
上述生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备复合微生物菌群；
(2)制备植物甲醇提取物；
(3)制备盐溶液；
(4)制备水果汁；
(5)将重量比为葡萄糖3-4份、聚天冬氨酸0.2-0.5份、吲哚乙酸0.1-0.3份、溶于20-30份水中，0.22um过滤除菌，备用。
(6)将重量比为复合微生物菌剂80-100份、植物甲醇提取物3-5份、盐溶液8-10份、水果汁10-15份，与(5)中的组份，在无菌条件下分装、包装成品。
步骤(1)中的复合微生物菌群由越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、链霉菌(Streptomyces)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonas palustris)或嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)中的三种及以上种组成。
复合微生物菌群的制备方法如下：将所选取的菌种分别活化后在液体种子培养基中于25℃下培养16-20h，然后分别按照5％的接种量转入到已灭菌的发酵培养基中，在37℃培养2-3d，使得总活菌数≥2*1010cfu/mL。
植物甲醇提取物的提取方法如下：将所选取的植物样品置于电热恒温鼓风干燥箱中，55℃烘干，用粉碎机粉碎并称取一定量的植物干粉，用5倍体积的甲醇避光浸泡提取，3d后滤出提取液，再加入等量的甲醇，2d后滤出浸提液，合并两次滤液，用旋转蒸发仪在50-60℃下浓缩至膏状，刮下提取物，于4度冰箱中保存，备用。
植物甲醇提取物的提取方法中所述的植物干粉为地丁草、一点红、枇杷叶、苦瓜叶、龙舌草、葛、梅叶冬青、黄石斛或鱼腥草中的两种或多种组成。
盐溶液为质量浓度的5％氯化钙、5％过磷酸钙、3％氯化钾、1％硝酸钾、2.5％氯化锰、2％磷酸镁、2％钼酸铵，按体积比1:1:0.5:2:1:1.5:1复配组成，0.22um过滤除菌，取滤液备用。
水果汁为甘蔗、桔子、苹果、菠萝或西瓜中的两种或多种水果，与水按重量比1:5，在常温条件下压榨混合而成，0.22um真空过滤除菌，取滤液备用。
复合微生物菌群所用的液体种子培养基的成分为：蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠、无菌水，按质量比10:5:10:3:800组成，调节ph为7.1-7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用。
发酵培养基的成分为：玉米浆、淀粉、蛋白胨、牛肉膏、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、无菌水，按质量比：350:100:250:50:350:8:8:3000组成，调节调节ph为7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用。
钙盐与钼酸铵具有协同作用；钙元素可增加番茄根、皮层、果实等薄壁细胞层，促进细胞的排列，使得根韧皮部成分增加，减缓木质薄壁细胞的衰老，可有效阻止病原菌的侵入。而钼酸铵中的钼离子是植物生长的必须的微量营养元素之一，是固氮酶和硝酸还原酶的组成元素，可促进钙离子在作物内的吸收并转化为果胶磷酸钙、草酸钙等，提高叶绿素及维生素等含量及稳定性，促进土壤有益微生物活动，推迟炭疽病的发生，并有效缓解炭疽病的蔓延。
本发明的有益效果是：
(1)该生防番茄炭疽病的微生态制剂，采用生物防治的方法，利用微生物之间的拮抗、抑制作用，以菌治菌，以菌抑菌，可降低化学农药带来的环境污染，提高生态效益。
(2)该生防番茄炭疽病的微生态制剂，配方合理，营养协调，原料中加入植物甲醇提取物，可有效抑制病原微生物的繁殖与生长；原料中的葡萄糖、水果汁，可为有益复合微生物及植株的生长、代谢合成提供所必须的碳源、氮源、速效钾、速效磷、辅酶、能源等，提高有益微生物的代谢活力，降低病原微生物的数量。
(3)该生防番茄炭疽病的微生态制剂，盐溶液中的钙离子、钾离子可提高番茄植株病害的抵抗力，减轻番茄炭疽病发病程度，促进番茄果实的发育；钼酸铵与钙盐具有协同作用，可直接抑制炭疽病的作用，推迟炭疽病的发生，并有效缓解炭疽病的蔓延及病情加重；
(4)该生防番茄炭疽病的微生态制剂及其制备方法。对病原微生物有良好的调控作用，能够有效地抑制病原菌的生长与繁殖，能够维持番茄植株表面的微生物种群的丰富度，增强微生物与植株间生态系统的平衡，降低番茄炭疽病的发生，提高植株的长势。
(5)本发明中复合微生物菌群是从自然界中经分离、筛选的有益微生物，能够有效地抑制环境中的病原微生物，减少化学农药的施用量，降低环境污染，增强作物对病原微生物的抵抗性，提高产品的经济效益和生态效益，无二次污染，经济环保可持续发展。
(6)本发明还提供了此种生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，该方法简单易行，产品工艺简易高效，适用于规模生产和推广应用。
具体实施方式
实施例1
一种生防番茄炭疽病的微生态制剂，由下列重量份的原料组成：复合微生物菌剂100份、植物甲醇提取物4份、盐溶液8份、葡萄糖3份、聚天冬氨酸0.3份、吲哚乙酸0.1份、水果汁10份、水20份。
上述生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，它包括以下步骤：
(1)将所选取的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、链霉菌(Streptomyces)四种菌群分别活化后在液体种子培养基中于25℃下培养16h，然后分别按照5％的接种量转入到已灭菌的发酵培养基中，在37℃培养3d，使得总活菌数≥2*1010cfu/mL。
上述所述微生物菌群所用的液体种子培养基的成分为：蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠、无菌水，按质量比10:5:10:3:800组成，调节ph为7.1-7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用；发酵培养基的成分为：玉米浆、淀粉、蛋白胨、牛肉膏、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、无菌水，按质量比：350:100:250:50:350:8:8:3000组成，调节调节ph为7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用。
(2)将所选取的枇杷叶、苦瓜叶、梅叶冬青、黄石斛、鱼腥草5种植物样品置于电热恒温鼓风干燥箱中，55℃烘干，用粉碎机粉碎并称取一定量的植物干粉，用5倍体积的甲醇避光浸泡提取，3d后滤出提取液，再加入等量的甲醇，2d后滤出浸提液，合并两次滤液，用旋转蒸发仪在55±5℃下浓缩至膏状，刮下提取物，于4度冰箱中保存，备用。
(3)将质量浓度的5％氯化钙、5％过磷酸钙、3％氯化钾、1％硝酸钾、2.5％氯化锰、2％磷酸镁、2％钼酸铵，按体积比1:1:0.5:2:1:1.5:1复配组成盐溶液，0.22um过滤除菌，取滤液备用。
(4)将甘蔗、桔子、西瓜等中的三种水果，其中甘蔗、桔子、西瓜质量比为1:1:0.5。取这三种水果的混合物与水按重量比1:5，在常温条件下榨成混合水果汁，0.22um真空过滤除菌，取滤液备用。
(5)将重量比为：葡萄糖3份、聚天冬氨酸0.3份、吲哚乙酸0.1份，溶于20份水中，0.22um过滤除菌，取滤液备用。
(6)将重量比为：复合微生物菌剂100份、植物甲醇提取物4份、盐溶液8份、水果汁10份与(5)中的组份，在无菌条件下分装、包装成品。
将上述工艺条件所获取的微生态制剂与水按1:200-300制成工作液均匀的喷施番茄植株表面，每隔10d喷施一次，可有效防治炭疽病病原菌的侵染，改善产品的外观，提高产品的品质。
于番茄开花坐果期在试验区施用微生态制剂、在对照区施用水做空白对照，并在整个试验阶段对对照区、试验区进行统一观察，记录植株的生长情况并根据评定标准进行统一划分。
在各个采收阶段对整个植株的番茄果进行调查，在实验的过程中拟定的评定标准如下：
极差：有半数以上的番茄果实被炭疽病病原菌感染。
差：整个植株自顶部至底端，有3个以上小于半数的番茄果感染炭疽病。
一般：整个植株自顶部自底端，有1-2个番茄果感染炭疽病。
良好：整个植株自顶部自底端，基本没有炭疽病发生的迹象。
表1.设施番茄不同处理后生长状况评估-实施例1
由上表可知，经不同处理后，试验区与对照区相比番茄未被炭疽病感染的概率提高11.25％。
实施例2
一种生防番茄炭疽病的微生态制剂，由下列重量份的原料组成：复合微生物菌剂90份、植物甲醇提取物3.5份、盐溶液10份、葡萄糖3份、聚天冬氨酸0.2份、吲哚乙酸0.3份、水果汁12份、水25份。
上述生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，它包括以下步骤：
(1)将所选取的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、链霉菌(Streptomyces)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)中的五种有益微生物分别活化后在液体种子培养基中于25℃下培养20h，然后分别按照5％的接种量转入到已灭菌的发酵培养基中，在37℃培养2d，使得总活菌数≥2*1010cfu/mL。
上述所述微生物菌群所用的液体种子培养基的成分为：蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠、无菌水，按质量比10:5:10:3:800组成，调节ph为7.1-7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用；发酵培养基的成分为：玉米浆、淀粉、蛋白胨、牛肉膏、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、无菌水，按质量比：350:100:250:50:350:8:8:3000组成，调节调节ph为7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用。
(2)将所选取的枇杷叶、梅叶冬青、黄石斛、鱼腥草四种植物样品，按质量为0.5:0.5:2:1的比例，置于电热恒温鼓风干燥箱中，55℃烘干，用粉碎机粉碎并称取一定量的植物干粉混合物，用5倍体积的甲醇避光浸泡提取，3d后滤出提取液，再加入等量的甲醇，2d后滤出浸提液，合并两次滤液，用旋转蒸发仪在55±5℃下浓缩至膏状，刮下提取物，于4度冰箱中保存，备用。
(3)将质量浓度的5％氯化钙、5％过磷酸钙、3％氯化钾、1％硝酸钾、2.5％氯化锰、2％磷酸镁、2％钼酸铵，按体积比1:1:0.5:2:1:1.5:1复配组成盐溶液，0.22um微孔滤膜过滤除菌，取滤液备用。
(4)将甘蔗、桔子、菠萝、西瓜等中的四种水果，与水按质量比1:5，在常温条件下榨成混合水果汁。其中甘蔗、桔子、菠萝、西瓜的质量比为1:1:0.5:0.5，0.22um真空过滤除菌，取滤液备用。
(5)将重量比为葡萄糖3份、聚天冬氨酸0.2份、吲哚乙酸0.3份、溶于25份水中，0.22um过滤除菌，取滤液备用。
(6)将重量比为复合微生物菌剂90份、植物甲醇提取物3.5份、盐溶液10份、水果汁12份，与(5)中的组份，在无菌条件下分装、包装成品。
将上述工艺条件所获取的微生态制剂与水按1:200制成工作液均匀的淋施番茄植株根系表面，每隔5d淋施一次，可有效防治土壤中炭疽病病原菌的侵染。
于番茄开花坐果期在试验区施用微生态制剂、在对照区施用水做空白对照，并在整个试验阶段对对照区、试验区进行统一观察，记录未被炭疽病病原菌感染的番茄株数。
表2.设施番茄不同处理后生长状况评估-实施例2
由上表可知，经不同处理后，试验区与对照区相比番茄未被炭疽病感染的概率提高10％。
实施例3
一种生防番茄炭疽病的微生态制剂，由下列重量份的原料组成：复合微生物菌剂95份、植物甲醇提取物4份、盐溶液8份、葡萄糖3份、聚天冬氨酸0.5份、吲哚乙酸0.3份、水果汁15份、水20份。
上述生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备复合微生物菌群：将所选取的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、链霉菌(Streptomyces)四种菌种分别活化后在液体种子培养基中于25℃下培养18h，然后分别按照5％的接种量转入到已灭菌的发酵培养基中，在37℃培养2.5d，使得总活菌数≥2*1010cfu/mL。
上述微生物菌群所用的液体种子培养基的成分为：蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠、无菌水，按质量比10:5:10:3:800组成，调节ph为7.1-7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用；发酵培养基的成分为：玉米浆、淀粉、蛋白胨、牛肉膏、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、无菌水，按质量比：350:100:250:50:350:8:8:3000组成，调节调节ph为7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用。
(2)制备植物甲醇提取物：将所选取的梅叶冬青、黄石斛、鱼腥草三种植物样品，按1:1:0.5的重量比置于电热恒温鼓风干燥箱中，55℃烘干，用粉碎机粉碎并称取一定量的植物干粉，用5倍体积的甲醇避光浸泡提取，3d后滤出提取液，再加入等量的甲醇，2d后滤出浸提液，合并两次滤液，用旋转蒸发仪在55±5℃下浓缩至膏状，刮下提取物，于4度冰箱中保存，备用。
(3)将质量浓度的5％氯化钙、5％过磷酸钙、3％氯化钾、1％硝酸钾、2.5％氯化锰、2％磷酸镁、2％钼酸铵，按体积比1:1:0.5:2:1:1.5:1复配组成盐溶液，0.22um过滤除菌，备用。
(4)将质量比为1:1:2的甘蔗、桔子、西瓜三种水果，与水按重量比1:5，在常温条件下榨成混合水果汁，0.22um真空过滤除菌，取滤液备用。
(5)将质量比为葡萄糖3份、聚天冬氨酸0.5份、吲哚乙酸0.3份、溶于20份水中，0.22um过滤除菌，取滤液备用。
(6)将质量比为复合微生物菌剂95份、植物甲醇提取物4份、盐溶液8份、水果汁15份，与(5)中的组份，在无菌条件下分装、包装成品。
将上述工艺条件所获取的微生态制剂与水按1:200制成工作液，在番茄的4-5叶期至采收阶段，每隔20d淋施一次，均匀地淋施番茄植株根系表面，可有效防治土壤中炭疽病病原菌的侵染。将所获取的微生态制剂与水按1:300制成工作液，在番茄结果初期至番茄采收阶段每隔15天，均匀地喷施番茄植株表面，可有效提高植株的抗病力。
在试验区施用微生态制剂、在对照区施用水做空白对照，并在整个试验阶段对对照区、试验区进行统一观察，记录未被炭疽病病原菌感染的番茄株数。
表3.设施番茄不同处理后生长状况评估-实施例3
由上表可知，经不同处理后，试验区与对照区相比番茄未被炭疽病感染的概率提高15％。
当然，上述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定对本发明的实施例范围。本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的均等变化与改进等，均应归属于本发明的专利涵盖范围内。

Claims (10)

1.一种生防番茄炭疽病的微生态制剂，其特征在于：包含以下重量份的原料：
复合微生物菌剂80-100份、植物甲醇提取物3-5份、盐溶液8-10份、葡萄糖3-4份、聚天冬氨酸0.2-0.5份、吲哚乙酸0.1-0.3份、水果汁10-15份、水20-30份。
2.一种如权利要求1所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)制备复合微生物菌群；
(2)制备植物甲醇提取物；
(3)制备盐溶液；
(4)制备水果汁；
(5)将重量比为葡萄糖3-4份、聚天冬氨酸0.2-0.5份、吲哚乙酸0.1-0.3份、溶于20-30份水中，0.22um过滤除菌，备用。
(6)将重量比为复合微生物菌剂80-100份、植物甲醇提取物3-5份、盐溶液8-10份、水果汁10-15份，与(5)中的组份，在无菌条件下分装、包装成品。
3.根据权利要求2所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的复合微生物菌群由越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、链霉菌(Streptomyces)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonas palustris)或嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)中的三种及以上种组成。
4.根据权利要求3所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述复合微生物菌群的制备方法如下：将所选取的菌种分别活化后在液体种子培养基中于25℃下培养16-20h，然后分别按照5％的接种量转入到已灭菌的发酵培养基中，在37℃培养2-3d，使得总活菌数≥2*1010cfu/mL。
5.根据权利要求2所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述植物甲醇提取物的提取方法如下：
将所选取的植物样品置于电热恒温鼓风干燥箱中，55℃烘干，用粉碎机粉碎并称取一定量的植物干粉，用5倍体积的甲醇避光浸泡提取，3d后滤出提取液，再加入等量的甲醇，2d后滤出浸提液，合并两次滤液，用旋转蒸发仪在50-60℃下浓缩至膏状，刮下提取物，于4度冰箱中保存，备用。
6.根据权利要求5所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述植物甲醇提取物的提取方法中所述的植物干粉为地丁草、一点红、枇杷叶、苦瓜叶、龙舌草、葛、梅叶冬青、黄石斛或鱼腥草中的两种或多种组成。
7.根据权利要求2所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述盐溶液为质量浓度的5％氯化钙、5％过磷酸钙、3％氯化钾、1％硝酸钾、2.5％氯化锰、2％磷酸镁、2％钼酸铵，按体积比1:1:0.5:2:1:1.5:1复配组成，0.22um过滤除菌，取滤液备用。
8.根据权利要求2所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述水果汁为甘蔗、桔子、苹果、菠萝或西瓜中的两种或多种水果，与水按重量比1:5，在常温条件下压榨混合而成，0.22um真空过滤除菌，取滤液备用。
9.根据权利要求4所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述复合微生物菌群所用的液体种子培养基的成分为：蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠、无菌水，按质量比10:5:10:3:800组成，调节ph为7.1-7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用。
10.根据权利要求4所述的生防番茄炭疽病的微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述发酵培养基的成分为：玉米浆、淀粉、蛋白胨、牛肉膏、红糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、无菌水，按质量比：350:100:250:50:350:8:8:3000组成，调节调节ph为7.3，于121℃灭菌30min，冷却备用。
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