CN107843672B - 高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法 - Google Patents

高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种高效液相色谱‑串联质谱检测血清中氨基酸的方法，属于蛋白质分析技术领域，其先向血清样品加入同位素氨基酸作为内标，再通过液‑液萃取法提取样品混合物中的氨基酸，使用HILIC色谱将氨基酸分离后，采用内标标准曲线法进行串联质谱分析，具有选择性好、灵敏度高、分析时间短等优点。

Description

高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法
技术领域
本发明属于蛋白质分析技术领域，尤其涉及一种高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法。
背景技术
氨基酸是指含有氨基的羧酸，基本氨基酸及其类似物是生命的物质基础和必需的营养成分。氨基酸具有广泛的生物学功能，作为蛋白质的基本组成单位和细胞信号分子，在基因表达和蛋白质磷酸化中起到重要调节作用。
目前采用非衍生化LC-MS方法对氨基酸进行定量分析常用的策略是在反相色谱分离的流动相中添加离子对试剂(七氟丁酸、十三氟庚酸、和全氟辛酸等)，以达到氨基酸在反相色谱柱有效保留和分离，这种方法虽然解决了氨基酸在色谱柱上的保留和分离问题，但是离子对试剂严重抑制质谱响应信号，大大影响了ESI源对待测物的离子化效率，导致低丰度氨基酸难以检测。
发明内容
基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其先向血清样品加入同位素氨基酸作为内标，再通过液-液萃取法提取样品混合物中的氨基酸，使用HILIC色谱将氨基酸分离后，采用内标标准曲线法进行串联质谱分析，具有选择性好、灵敏度高、分析时间短等优点。
本发明通过以下详细技术方案达到目的：
高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其取10μL血清样本，加入10μL2mM混合内标溶液，涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取160μL上清液进行真空干燥，再使用200μL50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行HILIC-MS/MS分析；所述的HILIC色谱中的洗脱方式为：
Figure GDA0002487929150000021
流动相A是25mM甲酸铵+0.08％甲酸水溶液；流动相B是0.1％甲酸的乙腈溶液；
所述的混合内标溶液包括同位素内标氨基酸L-Glutamate-D5、L-Lysine-D4、Arginine-13C6、L-Glutamine-D5、L-Serine-13C3,15N、L-Methionine-13C5,15N、L-Phenyalanine(ring-D5)、L-Tyrosine-13C9、L-Leucine-13C9、L-Histidine-13C6、DL-Proline-D7、DL-Valine-D8、L-Threonine-D5,15N、L-Aspartate-13C4,15N、L-Cysteine-13C3,15N、DL-cystine-D4、L-Alanine-D4、L-Tryptophan-13C11和L-Ornithine-D6；
待检测氨基酸包括Tryptophan、Spermidine、4-hydroxyproline、Ornithine、Taurine、Creatinine、creatine、Alanine、Asparagine、Citrulline、Glycine、Serine、Proline、Valine、Threonine、Leucine、Isoleucine、Lysine、Glutamate、Glutamine、Methionine、Histidine、Phenylalanine、Arginine、Tyrosine、Cystine和Cysteine。
其中检测方法包括以下详细步骤：
步骤S10配制内标溶液，分别称取同位素内标氨基酸，加入盐酸水溶液溶解制成50mM的溶液，再从同位素内标氨基酸溶液中各取40μL混合均匀并用水稀释定容至1ml，制成2mM混合内标溶液，备用；
步骤S20配制标准品溶液，分别称取标准品氨基酸，加入盐酸水溶液溶解制成50mM的标准品氨基酸母液，再从标准品氨基酸母液中各取40μL混合均匀并用水稀释定容至2ml，得到1mM标准品氨基酸溶液，备用；所述的标准品氨基酸包括Tryptophan、Spermidine、4-hydroxyproline、Ornithine、Taurine、Creatinine、creatine、Alanine、Asparagine、Citrulline、Glycine、Serine、Proline、Valine、Threonine、Leucine、Isoleucine、Lysine、Glutamate、Glutamine、Methionine、Histidine、Phenylalanine、Arginine、Tyrosine、Cystine、Cysteine；
步骤S30构建标准曲线，使用50％乙腈水溶液将步骤S20得到的标准品氨基酸溶液分梯度稀释至5nM，再向每梯度浓度标准品氨基酸溶液加入10μL浓度为200μM的步骤S10所得的混合内标溶液，分别涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液，再涡旋30秒，再使用真空干燥，最后用200μL50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行LC-MS/MS分析，得到标准曲线；
步骤S40样品分析，取10μL血清样本，加入10μL 2mM步骤S10所得的混合内标溶液，涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取160μL上清液进行真空干燥，再使用200μL 50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行LC-MS/MS分析，将分析结果使用步骤30构建的标准曲线换算出对应氨基酸浓度；
所述的步骤S30和步骤S40中使用的LC-MS/MS分析中的质谱条件设置如下：
采用电喷雾电离正离子(ESI+)检测模式和多反应监测(MRM)的质谱扫描模式对；离子源温度500℃，ion Source Gas1：40，ion Source Gas2：40，Curtain gas(CUR)：30，ionSapary Voltage Floating(ISVF)5500V。
其中，所述的盐酸水溶液的浓度为0.1％盐酸水溶液。
其中，所述的步骤S40中的甲醇/乙腈混合液的混合比例是体积比1:1。
其中，所述的步骤S30中标准品氨基酸溶液分6-10个梯度。
其中，所述的步骤S40中的血清样本是人或者动物的血清样本。
本发明具有的有益效果：本发明方法灵敏度高、特异性强、准确且前处理方法简单。只需要简单的液液萃取就可以完成样本的预处理步骤，使用HILIC色谱柱能够有效分离27种氨基酸，通过19种同位素内标进行定量，能够准确检测血浆中的重要氨基酸类物质，方法精密度和准确度较高，可用于临床血清样本的定量分析，而且实验操作简单、实验周期短，为临床上氨基酸水平的健康评估提供了一种可靠的检测方法，为科研提供了一种有效的研究手段。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
一种高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其包括以下步骤：
步骤S10配制内标溶液，分别称取同位素内标氨基酸，加入0.1％盐酸水溶液溶解制成50mM的溶液，再从同位素内标氨基酸溶液中各取40μL混合均匀并用水稀释定容至1ml，制成2mM混合内标溶液，备用；所述的同位素内标氨基酸包括L-Glutamate-D5、L-Lysine-D4、Arginine-13C6、L-Glutamine-D5、L-Serine-13C3,15N、L-Methionine-13C5,15N、L-Phenyalanine(ring-D5)、L-Tyrosine-13C9、L-Leucine-13C9、L-Histidine-13C6、DL-Proline-D7、DL-Valine-D8、L-Threonine-D5,15N、L-Aspartate-13C4,15N、L-Cysteine-13C3,15N、DL-cystine-D4、L-Alanine-D4、L-Tryptophan-13C11、L-Ornithine-D6；
步骤S20配制标准品溶液，分别称取标准品氨基酸，加入0.1％盐酸水溶液溶解制成50mM的标准品氨基酸母液，再从标准品氨基酸母液中各取40μL混合均匀并用水稀释定容至2ml，得到1mM标准品氨基酸溶液，备用；所述的标准品氨基酸包括Tryptophan、Spermidine、4-hydroxyproline、Ornithine、Taurine、Creatinine、creatine、Alanine、Asparagine、Citrulline、Glycine、Serine、Proline、Valine、Threonine、Leucine、Isoleucine、Lysine、Glutamate、Glutamine、Methionine、Histidine、Phenylalanine、Arginine、Tyrosine、Cystine、Cysteine；
步骤S30构建标准曲线，使用50％乙腈水溶液将步骤S20得到的1mM标准品溶液分8个梯度稀释至5nM，再向每梯度浓度标准品氨基酸溶液加入10μL浓度为200μM的步骤S10所得的混合内标溶液，分别涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液(1:1，v/v)，再涡旋30秒，再使用真空干燥，最后用200μL50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行LC-MS/MS分析，得到标准曲线；
步骤S40样品分析，取10μL血清样本，加入10μL 2mM步骤S10所得的混合内标溶液，涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液(1:1，v/v)，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取160μL上清液进行真空干燥，再使用200μL 50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行LC-MS/MS分析，将分析结果使用步骤30构建的标准曲线换算出对应氨基酸浓度；
所述的步骤S30和步骤S40中使用的LC-MS/MS分析中的高效液相色谱条件如下：
流动相A：25mM甲酸铵+0.08％甲酸水溶液；
流动相B:0.1％甲酸的乙腈溶液；
色谱柱型号：Zic HILIC 3.5μm,2.0mm×150mm；
流速为250μL/min，柱温为40℃，进样量为4μL；
采用梯度洗脱的方式，具体如下：
Figure GDA0002487929150000051
质谱条件设置如下：
采用电喷雾电离正离子(ESI+)检测模式和多反应监测(MRM)的质谱扫描模式对；离子源温度500℃，ion Source Gas1：40，ion Source Gas2：40，Curtain gas(CUR)：30，ionSapary Voltage Floating(ISVF)5500V。同时检测目标氨基酸离子对以及同位素内标氨基酸离子对，各离子对及其对应的去簇电压、碰撞电压和碰撞池出口电压参数如下：
Figure GDA0002487929150000061
下面对本实施例的检测结果作进一步的分析，以验证本发明专利提供的方法可行性：采用同位素内标定量法，以氨基酸标准品浓度为x轴，氨基酸标准品峰面积与内标物峰面积比为y轴，建立标准曲线。根据该曲线计算血清中氨基酸的浓度。依据特征离子MRM色谱峰的信噪比大于3为检测限(LOD)，信噪比大于10为定量限(LOQ)，结果如下：
Figure GDA0002487929150000071
Figure GDA0002487929150000081
27种氨基酸在各自浓度线性范围内呈良好的线性关系，满足定量要求，且能快速、方便、稳定和准确地定量检测血清中的氨基酸。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其特征在于，其取10μL血清样本，加入10μL 2mM混合内标溶液，涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取160μL上清液进行真空干燥，再使用200μL 50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行HILIC-MS/MS分析；所述的HILIC色谱中的洗脱方式为：
Figure FDA0002487929140000011
流动相A是25mM甲酸铵+0.08％甲酸水溶液；流动相B是0.1％甲酸的乙腈溶液；
所述的混合内标溶液包括同位素内标氨基酸L-Glutamate-D5、L-Lysine-D4、Arginine-13C6、L-Glutamine-D5、L-Serine-13C3,15N、L-Methionine-13C5,15N、L-Phenyalanine(ring-D5)、L-Tyrosine-13C9、L-Leucine-13C9、L-Histidine-13C6、DL-Proline-D7、DL-Valine-D8、L-Threonine-D5,15N、L-Aspartate-13C4,15N、L-Cysteine-13C3,15N、DL-cystine-D4、L-Alanine-D4、L-Tryptophan-13C11和L-Ornithine-D6；
待检测氨基酸包括Tryptophan、Spermidine、4-hydroxyproline、Ornithine、Taurine、Creatinine、creatine、Alanine、Asparagine、Citrulline、Glycine、Serine、Proline、Valine、Threonine、Leucine、Isoleucine、Lysine、Glutamate、Glutamine、Methionine、Histidine、Phenylalanine、Arginine、Tyrosine、Cystine和Cysteine。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其特征在于，其包括以下详细步骤：
步骤S10配制内标溶液，分别称取同位素内标氨基酸，加入盐酸水溶液溶解制成50mM的溶液，再从同位素内标氨基酸溶液中各取40μL混合均匀并用水稀释定容至1ml，制成2mM混合内标溶液，备用；
步骤S20配制标准品溶液，分别称取标准品氨基酸，加入盐酸水溶液溶解制成50mM的标准品氨基酸母液，再从标准品氨基酸母液中各取40μL混合均匀并用水稀释定容至2ml，得到1mM标准品氨基酸溶液，备用；所述的标准品氨基酸包括Tryptophan、Spermidine、4-hydroxyproline、Ornithine、Taurine、Creatinine、creatine、Alanine、Asparagine、Citrulline、Glycine、Serine、Proline、Valine、Threonine、Leucine、Isoleucine、Lysine、Glutamate、Glutamine、Methionine、Histidine、Phenylalanine、Arginine、Tyrosine、Cystine、Cysteine；
步骤S30构建标准曲线，使用50％乙腈水溶液将步骤S20得到的标准品氨基酸溶液分梯度稀释至5nM，再向每梯度浓度标准品氨基酸溶液加入10μL浓度为200μM的步骤S10所得的混合内标溶液，分别涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液，再涡旋30秒，再使用真空干燥，最后用200μL50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行LC-MS/MS分析，得到标准曲线；
步骤S40样品分析，取10μL血清样本，加入10μL 2mM步骤S10所得的混合内标溶液，涡旋混合，再加入180μL甲醇/乙腈混合液，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取160μL上清液进行真空干燥，再使用200μL 50％乙腈溶液复溶，使用14000rcf、4℃离心15分钟，取上清液进行LC-MS/MS分析，将分析结果使用步骤30构建的标准曲线换算出对应氨基酸浓度；
所述的步骤S30和步骤S40中使用的LC-MS/MS分析中的质谱条件设置如下：
采用电喷雾电离正离子(ESI+)检测模式和多反应监测(MRM)的质谱扫描模式对；离子源温度500℃，ion Source Gas1：40，ion Source Gas2：40，Curtain gas(CUR)：30，ionSapary Voltage Floating(ISVF)：5500V。
3.根据权利要求2所述的高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其特征在于，所述的盐酸水溶液的浓度为0.1％盐酸水溶液。
4.根据权利要求2所述的高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其特征在于，所述的步骤S40中的甲醇/乙腈混合液的混合比例是体积比1:1。
5.根据权利要求2所述的高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其特征在于，所述的步骤S30中标准品氨基酸溶液分6-10个梯度。
6.根据权利要求2所述的高效液相色谱-串联质谱检测血清中氨基酸的方法，其特征在于，所述的步骤S40中的血清样本是人或者动物的血清样本。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109633011A (zh) * 2018-12-29 2019-04-16 中山百灵生物技术有限公司 一种新的甘氨酸含量的检测方法
CN109856258A (zh) * 2018-12-29 2019-06-07 中山百灵生物技术有限公司 一种新的牛磺酸含量的检测方法
CN110018266B (zh) * 2019-02-15 2022-03-04 广州市妇女儿童医疗中心 一种快速定量分析48种氨基酸的方法
IT202100016364A1 (it) * 2021-06-22 2022-12-22 Crescendo Care S R L Metodo multiresiduale per rilevare e/o quantificare aminoacidi, acidi organici e/o nucleotidi modificati mediante separazione cromatografica hilic e ms/ms
CN114137098A (zh) * 2021-10-28 2022-03-04 中科新生命(浙江)生物科技有限公司 一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101354385A (zh) * 2008-04-25 2009-01-28 广东中烟工业有限责任公司 同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法
CN106226527A (zh) * 2011-07-21 2016-12-14 和光纯药工业株式会社 血浆中氨基酸分析用内标液、内标物质及血浆中氨基酸的定量方法
CN107300594A (zh) * 2017-07-31 2017-10-27 中国中医科学院医学实验中心 液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101354385A (zh) * 2008-04-25 2009-01-28 广东中烟工业有限责任公司 同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法
CN106226527A (zh) * 2011-07-21 2016-12-14 和光纯药工业株式会社 血浆中氨基酸分析用内标液、内标物质及血浆中氨基酸的定量方法
CN107300594A (zh) * 2017-07-31 2017-10-27 中国中医科学院医学实验中心 液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Amino acid analysis using chromatography–mass spectrometry: An inter platform comparison study;P. Krumpochova等;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20150605;第114卷;第398-407页,补充资料第1-2页 *
基于LC-MS的胰腺癌血清代谢组学研究;史秀云;《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》;20160415(第4期);E072-467 *
应用LC-MS/MS检测2型糖尿病患者血清氨基酸水平并研究其与胰岛素抵抗的关系;高贝贝;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20150315(第3期);第E065-185页 *

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