CN107823247A - 豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用 - Google Patents
豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用：用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的药物、保健食品。该豆芋块茎乙醇提取物的制备方法，包括以下步骤：将豆芋块茎和含0.1mol/L盐酸的95％乙醇混合后打浆，超声浸提，离心，得上清液；将上清液浓缩，所得的浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.2％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；将洗脱液浓缩，所得的浆状浓缩液先于‑70～‑90℃预冻，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋块茎乙醇提取物。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及豆芋块茎乙醇提取物的制备及其在制备预防和治疗非酒精性脂肪肝保健食品和药物中的应用；同时涉及降低油酸诱导的LO2细胞脂质沉积在防治非酒精性脂肪肝中的应用。
背景技术
豆芋(Apios americana Medikus)原产于北美洲东部的加拿大至美国佛罗里达州的南部地区，属多年生豆科植物(蝶形花科亚科)。其可食用部分为地下块茎，且其蛋白质含量高于其他植物块茎，是一种既营养又有经济价值的作物，因而常被印第安人作为主食。豆芋自2009年国内引种成功，并被逐渐在富阳、金华、龙游、温州等地推广种植。研究表明豆芋不同部位(花、藤、叶、块茎)均含有丰富的游离氨基酸、可溶性蛋白、多糖、皂苷、黄酮、异黄酮、维生素C、维生素E和矿物质等成分。
美国豆芋对高血压、糖尿病和高血脂症等现代生活习惯病具有明显的改善效果。
随着现代社会经济的高速发展，人民的生活水平显著提高，肥胖(obesity)及其并发症的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，一般来说脂肪肝会伴随着肥胖发生。据世界卫生组织在2011年3月报道表明，2008年全球有超过15亿成年人处于超重水平，其中至少5亿是肥胖和脂肪肝或者。预计到2030年，美国42％的人口将存在肥胖和脂肪肝问题。将超出美国现在人口3000万。与此相关的医疗成本增加将达近5500亿美元。而在国内据2010年发表的研究报告称，中国目前肥胖和脂肪肝人口达3.25亿人，增幅超过美国、英国和澳大利亚，这个数字在未来20年还可能增加一倍。脂肪肝和肥胖引起的常见并发症有高血压、糖尿病、冠心病、脑卒中等。由此可见，肥胖和脂肪肝已成为全球普遍的健康问题，预防和治疗肥胖症、脂肪肝已经成为21世纪的首要健康问题。
当前预防和治疗脂肪肝的手段主要包括：⑴控制总热能摄入量；⑵运动法；⑶手术疗法；⑷药物疗法；⑸非药物疗法：针刺疗法、耳穴贴压法、针灸疗法、指针减肥法、推拿按摩法。其中以药物治疗为主要有效的治疗手段。目前临床上应用的众多降脂药物都存有明显的心血管系统方面的副作用。迄今为止，人类还没有开发出一种十分满意的减肥降脂药品。其它减肥降脂方法也大都存在降低机体免疫力、易反弹等缺点。面对全球愈发严重的肥胖症和脂肪肝及其由引起的代谢性疾病的发病率的升高，探寻安全、有效的新的预防和治疗策略具有极其重要的意义。
《美国豆芋不同部位生化特征成分分析》一文告知了：
测量游离氨基酸、可溶性蛋白和总糖时：粉碎后过0.42mm筛，采用3:500(m/v)加入100℃的蒸馏水，于100℃进行恒温水浴提取。
测量总皂苷、总黄酮和异黄酮含量时：采用1:100(m/v)加入无水乙醇，于60℃恒温水浴3h。
测量VC时：取样品1g，用40ml 0.01mol/L的HCL浸泡于60℃超声40min。
测量VE时，取样品3g，用加入20ml无水乙醇，50℃恒温震荡50min。
CN201210574017.9的发明《大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法及其用途》告知了以下内容：制备方法按以下步骤：1)采摘大越豆芋花，清洗，干燥，粉碎，过40目筛，得到大越豆芋花粉末；2)大越豆芋花粉末，按照料液比1:10～1:20，加入浓度为70％～90％乙醇，在50～80℃回流提取1～3次，每次时间1～3小时，过滤，得上清液和滤渣；3)上清液，挥干后用水溶解，石油醚脱脂，正丁醇萃取，取正丁醇部分经大孔吸附树脂吸附洗脱后，浓缩，干燥得到豆芋花皂苷粉；4)滤渣，挥干溶媒，用其重量10～20倍的蒸馏水，于70～90℃回流提取1～3次，每次时间2～3小时，过滤，收集合并滤过液；5)滤过液脱色、脱蛋白，浓缩，加入乙醇，静置过夜进行醇沉，收集沉淀，透析后，用DEAE～纤维素柱层析，分别用蒸馏水、0.1M，0.3M，0.5M～NaCl溶液洗脱液，收集0.3M～0.5M～NaCl洗脱液，透析，浓缩，干燥，得豆芋花多糖。本发明从大越豆芋花中同时制备得到的总皂苷和多糖，纯度高，活性强，可以在制备具有抗氧化、血糖调节作用的药物或功能食品中得到广泛应用。
201310414063.7的《一种魔芋多肽提取物、制备方法及其用途》告知了以下内容：将魔芋飞粉加入纯水调节pH值至9.0进行浸提，然后经过2次酶解反应，再经超滤纯化，得魔芋多肽。该魔芋多肽能用于治疗糖尿病和糖尿病并发症，糖尿病并发症包括糖尿病并发症动脉粥样硬化、糖尿病视网膜病变、非酒精性脂肪肝和糖尿病肾病等。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种特定方法制备而得的豆芋块茎乙醇提取物在制备预防和治疗非酒精性脂肪肝保健食品和药物中的应用；同时涉及降低油酸诱导的LO2细胞脂质沉积在防治非酒精性脂肪肝中的应用。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用。
作为本发明的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用的改进：用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的药物、保健食品。
作为本发明的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用的进一步改进：豆芋块茎乙醇提取物的制备方法为包括以下步骤：
1)、按照1g:3～7ml(较佳为1g:5ml)的料液比将豆芋块茎和含0.1mol/L盐酸的95％乙醇混合后打浆，所得浆液于45±5℃超声浸提240±10min后，提取液离心(4000转/min离心30分钟)，得上清液；
2)、将上清液在旋转蒸发仪进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的5～10％；
3)、将步骤2)所得的浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.2％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；
所述含有0.2％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度85％甲醇水溶液中加入0.2ml的甲酸；
4)、将步骤3)所得的洗脱液旋转蒸发浓缩成至为原体积的5～10％，得浆状浓缩液；
5)、将步骤4)所得的浆状浓缩液先于-70～-90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋块茎乙醇提取物。
作为本发明的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用的进一步改进：步骤3)为：
首先用两倍柱体积的甲醇活化大孔树脂，三倍柱体积的双蒸水进行平衡；然后以0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)的流速上样，待提取液被充分吸附后，用体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂进行淋洗(淋洗的目的是为了除去蛋白质、糖、酸等物质)，所述淋洗剂的用量为两倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)；最后用含有0.2％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂进行洗脱，所述洗脱剂的用量三倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)；收集洗脱液。
作为本发明的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用的进一步改进：所述步骤3)中的大孔树脂为大孔树脂D-101(天津兴南允能高分子技术有限公司)。
作为本发明的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用的进一步改进：将步骤1)离心所得的滤渣替代步骤1)中的豆芋块茎重复进行步骤1)的打浆、超声浸提和离心；重复次数为2～3次；
将所有离心所得的上清液合并后进行步骤2)。
在本发明中：
步骤2)和步骤4)的旋转蒸发均在38±2℃，-0.09MPa的真空度下进行。
步骤5)的真空冷冻干燥为在-40±2℃，1.2Pa的真空度下进行，直至所得的豆芋块茎乙醇提取物含水率≤0.1％。
本发明采用LO2细胞(人细胞)进行实验，通过噻唑蓝(MTT)法测定豆芋块茎乙醇提取物处理对LO2细胞增殖活性的影响，并采用油酸(OA)诱导24h构建细胞脂质沉积模型同时加以豆芋块茎乙醇提取物干预24h，通过油红O染色、测定LO2细胞内甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)含量进一步验证豆芋块茎乙醇提取物降脂护肝作用。结果表明，豆芋块茎乙醇提取物能够显著降低LO2细胞内甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)含量，缓解油酸诱导的LO2细胞脂质沉积。
本发明用豆芋块茎乙醇提取物进行关于对油酸(OA)诱导的LO2细胞脂质沉积缓解作用的实验研究，说明其能用于制备预防和治疗非酒精性脂肪肝保健食品和药物。
本发明公开了豆芋块茎乙醇提取物在治疗或预防非酒精性脂肪肝中的应用，拓展了豆芋块茎的应用领域。该豆芋块茎乙醇提取物能够降低油酸诱导的LO2细胞脂质沉积，能制备预防和治疗非酒精性脂肪肝保健食品和药物。本发明的豆芋块茎乙醇提取物可开发为天然的治疗和预防非酒精性脂肪肝药品和食品，代替人工合成的药物治疗疾病。
本发明的豆芋块茎乙醇提取物的用法为口服，用量以片剂为例，每次约150～250mg，每日三次。
本发明同现有技术相比，具有以下技术优势：
1.本发明首次发现豆芋块茎乙醇提取物能够有效降低油酸诱导的LO2细胞脂质沉积，具有良好的开发前景。
2.本发明为豆芋块茎乙醇提取物提供了新的医疗用途，拓展了一个新的应用领域。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1为不同浓度豆芋块茎乙醇提取物作用LO2细胞24h后细胞活力比较图。
图2为不同浓度豆芋块茎乙醇提取物作用24h后对油酸(OA)诱导的LO2细胞内脂滴的影响对比图(100μm)。
a代表对照组(DMEM高糖培养基常规培养细胞)；
b代表模型组(油酸终浓度0.5mM)；
c代表阳性对照组(油酸终浓度0.5mM+10uM苯扎贝特)；
d代表低浓度豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度100ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)；
e代表中浓度豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度200ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)；
f代表高浓度豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度300ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)。
图3为不同浓度豆芋块茎乙醇提取物作用24h后对油酸(OA)诱导的LO2细胞内脂肪沉积的影响对比图。
图4为不同浓度豆芋块茎乙醇提取物作用24h后对油酸(OA)诱导的LO2细胞内甘油三酯(TG)含量的影响对比图。
图5为不同浓度豆芋块茎乙醇提取物作用24h后对油酸(OA)诱导的LO2细胞内总胆固醇(TC)含量的影响对比图。
图3～图5中：
C代表对照组(DMEM高糖培养基常规培养细胞)；
OA代表模型组(油酸终浓度0.5mM)；
B代表阳性对照组(油酸终浓度0.5mM+10uM苯扎贝特)；
L代表低浓度豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度100ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)；
M代表中浓度豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度200ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)；
H代表高浓度豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度300ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1、一种豆芋块茎乙醇提取物的制备方法，依次进行以下步骤：
1)、以1g:5ml的比例将豆芋块茎和含0.1mol/L盐酸的95％乙醇混合，利用榨汁机进行打浆；所得浆液在45℃条件下，超声(40,000Hz的超声波频率)浸提240±10min后，提取液离心(4000转/min离心30分钟)，离心所得的滤渣替代上述步骤中的豆芋块茎重复进行上述步骤的打浆、超声浸提和离心；重复次数为3次；
将上述3次离心所得的上清液合并后进行下述步骤2)。
2)、将所得的上清液在旋转蒸发仪(旋转蒸发设定的工艺参数为温度38℃，真空度-0.09MPa)进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的10％；
3)、将旋蒸所得浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化，所采用的大孔树脂为大孔树脂D-101(天津兴南允能高分子技术有限公司)，依次进行以下步骤：
首先用两倍柱体积的甲醇活化大孔树脂，三倍柱体积双蒸水进行平衡；
然后以0.5mL/min的流速上样，上样量为200ml(为柱体积的10％)；提取液充分吸附后，1％甲酸(即，体积浓度1％甲酸水溶液)淋洗除去蛋白质、糖、酸等物质，该淋洗剂的用量为两倍柱体积，流速为0.5mL/min；最后用含有0.2％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂充分洗脱，该洗脱剂的用量三倍柱体积，流速为0.5mL/min；收集洗脱液。
所述含有0.2％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度85％甲醇水溶液中加入0.2ml的甲酸；
4)、将大孔树脂分离纯化所得洗脱液旋转蒸发(旋转蒸发设定的工艺参数为温度38℃，真空度-0.09MPa)进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的10％，得浆状浓缩液；
5)、将浓缩液在-80℃预冻6h，然后用真空冷冻干燥机48h(真空冷冻干燥机设定的工艺参数为-40℃，1.2Pa)将其干燥成粉末状(含水率≤0.1％)，得到豆芋块茎乙醇提取物。
实验一、豆芋块茎乙醇提取物对LO2细胞的作用
将培养的LO2细胞接种于96孔板，每孔5000个细胞，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育24h后随机分组，即空白对照组、5、10、20、40、80、160、320、640、1280ug/mL豆芋块茎乙醇提取物组，每组重复8孔，置于37℃、5％CO2培养箱中共同孵育24h后，吸出孔中残余液体，用磷酸盐缓冲液(PBS)溶液漂洗两次。然后每孔加入100ul的MTT(0.5mg/mL溶于不含血清培养基)，于37℃、5％CO2培养箱中继续培养4小时。随后，去除每孔液体，每孔加入100ul二甲基亚砜(DMSO)，在水平摇床上震荡10分钟，酶标仪于570nm处测定其吸光值。
细胞增殖活性(％)＝实验孔OD值/对照孔OD值*100％
根据图1所示，MTT实验结果显示，当豆芋块茎乙醇提取物浓度在0-1280ug/mL内，处理24小时后，细胞活力同对照组相比无明显差异，表明在0-1280ug/mL内为豆芋块茎乙醇提取物安全浓度。
实验二、豆芋块茎乙醇提取物作用24h后对油酸(OA)诱导的LO2细胞内脂肪沉积的影响
将培养的LO2细胞接种于6孔板，每孔4*105个细胞，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育24h后随机分组，即对照组(DMEM高糖培养基常规培养细胞)、模型组(油酸终浓度0.5mM)、阳性对照组(油酸终浓度0.5mM+10uM苯扎贝特)、豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度100ug/mL、200ug/mL、300ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)，每组重复三次，各组细胞继续培养24h后吸除培养液，PBS轻柔洗涤3次，每孔分别加入500ul 4％的多聚甲醛固定细胞，静置20min。PBS轻柔洗涤细胞3次，每孔加入0.5％油红O染色30min。PBS洗涤细胞3次，在倒置显微镜下观察拍照，每孔加入500ul异丙醇，室温摇床抽提15分钟后抽取200ul抽提液于510nm处测定吸光值。
根据图2可知，同对照组相比，油酸处理使得细胞内脂滴数量和大小明显增加，加入苯扎贝特和不同浓度的豆芋块茎乙醇提取物作用24h后同油酸诱导组相比，各处理组均能显著降低细胞内脂滴数量和大小含量。定量结果如图3所示，定量分析结果同样表明豆芋块茎乙醇提取物表现出显著降低肝细胞脂肪沉积效果。
实验三、豆芋块茎乙醇提取物对油酸诱导的LO2细胞内甘油三酯(TG)含量的影响
将培养的LO2细胞接种于6孔板，每孔4*105个细胞，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育24h后随机分组，即对照组(DMEM高糖培养基常规培养细胞)、模型组(油酸终浓度0.5mM)、阳性对照组(油酸终浓度0.5mM+10uM苯扎贝特)、豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度100ug/mL，200ug/mL,300ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)，每组重复三次，各组细胞继续培养24h后收获细胞，超声破碎后取细胞裂解液，按照甘油三酯(TG酶法)测试盒(南京建成生物工程研究所)方法测定细胞内甘油三酯含量。
根据图4可知，同对照组相比，油酸处理使得细胞内甘油三酯含量显著升高，加入苯扎贝特和不同浓度的豆芋块茎乙醇提取物作用24h后同油酸诱导组相比，各处理组均能显著降低细胞内甘油三酯(TG)含量，豆芋块茎乙醇提取物表现出显著降低肝细胞脂质沉积作用。
实验四、豆芋块茎乙醇提取物对油酸诱导的LO2细胞内总胆固醇(TC)含量的影响
将培养的LO2细胞接种于6孔板，每孔4*105个细胞，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育24h后随机分组，即对照组(DMEM高糖培养基常规培养细胞)、模型组(油酸终浓度0.5mM)、阳性对照组(油酸终浓度0.5mM+10uM苯扎贝特)、豆芋块茎乙醇提取物处理组(油酸终浓度0.5mM+终浓度100ug/mL，200ug/mL,300ug/mL豆芋块茎乙醇提取物)，每组重复三次，各组细胞继续培养24h后收获细胞，超声破碎后取细胞裂解液，按照总胆固醇(TCH酶法)测试盒(南京建成生物工程研究所)方法测定细胞内总胆固醇含量。
根据图5可知，同对照组相比，油酸处理使得细胞内总胆固醇含量显著升高，加入苯扎贝特和不同浓度的豆芋块茎乙醇提取物作用24h后同油酸诱导组相比，各处理组均能显著降低细胞内总胆固醇(TC)含量，豆芋块茎乙醇提取物表现出显著降低肝细胞脂质沉积作用。
对比例1-1、将实施例1步骤1)中的“95％乙醇”改成“90％乙醇”，其余等同于实施例1。
对比例1-2、将实施例1步骤1)中的“95％乙醇”改成“纯乙醇”，其余等同于实施例1。
对比例2-1、将实施例1步骤3)中的洗脱剂由“含有0.2％甲酸的甲醇水溶液”改成“含有0.1％甲酸的甲醇水溶液(体积浓度85％甲醇水溶液)”；其余等同于实施例1。
对比例2-2、将实施例1步骤3)中的洗脱剂由“含有0.2％甲酸的甲醇水溶液”改成“含有0.3％甲酸的甲醇水溶液(体积浓度85％甲醇水溶液)”；其余等同于实施例1。
对比例3-1、实施例1步骤3)中的作为洗脱剂的“含有0.2％甲酸的甲醇水溶液”，将甲醇水溶液的体积浓度由85％改成70％；其余等同于实施例1。
对比例3-2、实施例1步骤3)中的作为洗脱剂的“含有0.2％甲酸的甲醇水溶液”，将甲醇水溶液的体积浓度由85％改成100％(即，纯甲醇)；其余等同于实施例1。
对比例4、将大孔树脂由大孔树脂D-101改成大孔吸附树脂X-5，其余等同于实施例1。
将上述所有对比例所得的豆芋块茎乙醇提取物按照上述实验一～实验四所述方法进行检查，所得结果如下表1所示。
表1
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (6)
1.豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用。
2.根据权利要求1所述的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用，其特征是：用于制备治疗或预防非酒精性脂肪肝的药物、保健食品。
3.根据权利要求1或2所述的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用，其特征是：豆芋块茎乙醇提取物的制备方法为包括以下步骤：
1)、按照1g:3～7ml的料液比将豆芋块茎和含0.1mol/L盐酸的95％乙醇混合后打浆，所得浆液于45±5℃超声浸提240±10min后，提取液离心，得上清液；
2)、将上清液在旋转蒸发仪进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的5～10％；
3)、将步骤2)所得的浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.2％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；
所述含有0.2％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度85％甲醇水溶液中加入0.2ml的甲酸；
4)、将步骤3)所得的洗脱液旋转蒸发浓缩成至为原体积的5～10％，得浆状浓缩液；
5)、将步骤4)所得的浆状浓缩液先于-70～-90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋块茎乙醇提取物。
4.根据权利要求3所述的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用，其特征是：步骤3)为：
首先用两倍柱体积的甲醇活化大孔树脂，三倍柱体积的双蒸水进行平衡；然后以0.4～0.6mL/min的流速上样，待提取液被充分吸附后，用体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂进行淋洗，所述淋洗剂的用量为两倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min；最后用含有0.2％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂进行洗脱，所述洗脱剂的用量三倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min；收集洗脱液。
5.根据权利要求4所述的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用，其特征是：所述步骤3)中的大孔树脂为大孔树脂D-101。
6.根据权利要求3～5任一所述的豆芋块茎乙醇提取物在降低肝细胞脂质沉积中的应用，其特征是：
将步骤1)离心所得的滤渣替代步骤1)中的豆芋块茎重复进行步骤1)的打浆、超声浸提和离心；重复次数为2～3次；
将所有离心所得的上清液合并后进行步骤2)。
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