CN107822147A - 一种海地瓜降压肽及其制备的冲剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种海地瓜降压肽及其制备的冲剂，采用海地瓜作为原料制备海地瓜降压肽，再将海地瓜降压肽作为有效成分，制备冲剂，具有辅助降血压的功效。本发明采用海地瓜为原材料，能够从海地瓜中制备海地瓜活性多肽，原材料安全环保，口服海地瓜活性多肽能够辅助降低血压，具有多种生理活性，可以将海地瓜降压肽作为有效成分，制备冲剂，市场前景良好。本发明一种海地瓜降压肽冲剂的制备方法，制备简单，可控性好，易于操作和实施，易于工业化大规模生产，具有广阔的应用前景和良好的经济效益。
Description
技术领域
本发明属于保健食品的制备领域，具体涉及一种海地瓜降压肽及其制备的冲剂。
背景技术
高血压对人类健康造成极大威胁，潜伏期长。高血压的早期阶段，一般没有明显的不适症，直至发生临床迹象—心脏病发作、脑血管破裂而导致死亡。随着人们生活的逐渐改善，平均寿命不断延长，社会逐步步入老年化，另外由于饮食等生活习惯较差，高血压患病率逐年上升。因此，预防和治疗高血压显得至关重要。
海地瓜盛产于亚热带沙质海区，日本、菲律宾、印度尼西亚及我国山东到海南岛的海域均有分布，资源丰富。其营养成分和口感与刺参相差不大，但价格低廉，因而常作为刺参的替代品。海地瓜含有很丰富的氨基酸和有益于人体的多种微量元素及维生素。目前海地瓜的开发都是简单的作为食品，缺少深加工。因此，以海地瓜为原料，利用现代分离技术分离制备海地瓜活性肽，进而研发以此为原料的健康产品，充分利用这一海洋资源，具有重要的意义。
发明内容
本发明提供了一种海地瓜降压肽及其制备的冲剂，采用海地瓜作为原料制备海地瓜降压肽，再将海地瓜降压肽作为有效成分，制备冲剂，具有辅助降血压的功效。
本发明首先提供一种从海地瓜制备的，具有降血压效果的多肽，其制备方法如下：
1)将干海地瓜粉碎后，加水制成悬浊液；
作为实施例的优选，其中海地瓜与水的质量比为1:4-8；
2)在步骤1)的悬浊液中加入蛋白酶进行酶解，酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，离心取上清，得到总海地瓜多肽溶液；
其中蛋白酶为胰蛋白酶和菠萝蛋白酶的复合酶，
酶解条件为：时间1-5h，温度50℃，pH值6-8；
所述的离心条件如下：8000-12000rpm，离心10-30min；
3)使用膜过滤仪器分离步骤2)中得到的总海地瓜多肽溶液，分离后得到海地瓜活性多肽溶液；所述的分离条件为：先利用分子量3500Da的膜分离，再利用分子量1000Da的膜进行分离，得到1000-3500Da范围的多肽；
4)将步骤3)中的海地瓜活性多肽溶液经后处理脱色、脱腥以及干燥后得到海地瓜活性多肽；
本发明的活性肽用于制备降血压的制品；
所述的制品，作为实施例的具体记载为冲剂。
本发明采用海地瓜为原材料，能够从海地瓜中制备海地瓜活性多肽，原材料安全环保，口服海地瓜活性多肽能够辅助降低血压，具有多种生理活性，可以将海地瓜降压肽作为有效成分，制备冲剂，市场前景良好。本发明一种海地瓜降压肽冲剂的制备方法，制备简单，可控性好，易于操作和实施，易于工业化大规模生产，具有广阔的应用前景和良好的经济效益。
具体实施方式
通过以下具体实施例对本发明做进一步的具体说明，但应该理解本发明并不受这些内容所限制。
实施例1：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入碱性蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值11；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到38.21g海地瓜多肽。
实施例2：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入木瓜蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到31.22g海地瓜多肽。
实施例3：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入菠萝蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到37.32g海地瓜多肽。
实施例4：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入胰蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到47.07g海地瓜多肽。
实施例5：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入中性蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到51.34g海地瓜多肽。
实施例6：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入糜蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到20.13g海地瓜多肽。
实施例7：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入胃蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度37℃，pH值2；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到24.34g海地瓜多肽。
实施例8：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入无花果蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到30.26g海地瓜多肽。
实施例9：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入米曲霉蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到45.61g海地瓜多肽。
实施例10：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到42.1g海地瓜多肽。
实施例11：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到35.2g海地瓜多肽。
实施例12：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入胰蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到47.6g海地瓜多肽。
实施例13：
将1kg干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入胰蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经3500Da、2500Da、1000Da和160Da膜过滤，收集＞3500Da分子量、2500Da-3500Da分子量、1000Da-2500Da分子量、160Da-1000Da分子量之间的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后分别得到126g、25.5g、66.5g、109.1g海地瓜多肽。
实施例14：
将1kg干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入胰蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经3500Da和1000Da膜过滤，收集1000Da-3500Da分子量之间的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后分别得到106.2g海地瓜多肽。
实施例12中得到的海地瓜多肽溶液经体外ACE抑制剂筛选方法确认其具有潜在降血压活性，对血管紧张素转换酶(ACE)的IC50值为1mg/mL。另外，通过检测细胞内内皮素-1的含量可知，100μg/mL的海地瓜多肽可使血管内皮细胞的内皮素-1释放量减少，与空白组相比差异极显著(P＜0.01)，结果表明，海地瓜多肽能够降低血管内皮细胞释放ET-1，具有降血压功效。
实施例13中得到的0.5mg/mL的＞3500Da分子量、2500Da-3500Da分子量、1000Da-2500Da分子量之间的海地瓜多肽对ACE的抑制率分别为0.4％、17.3％、13.4％，说明2500Da-3500Da分子量、1000Da-2500Da分子量之间的海地瓜多肽具有一定的降血压活性。
实施例14中得到的0.5mg/mL的1000Da-3500Da分子量之间的海地瓜多肽对ACE的抑制率为56.3％，因此，1000Da-3500Da分子量范围之间的海地瓜多肽具有较强的降血压活性，其降压活性优于实施例4中得到的海地瓜活性多肽。另外，参照保健食品检验与评价技术规范(2003版)描述的方法测定采用本发明技术制备的海地瓜活性多肽辅助降血压功效。实验动物：自发型高血压大鼠(SHR)，10-12周龄，体重180-220克，雄性，每组8-12只。实验设3个剂量组(5、10、20mg/kg体重)和一个阴性对照组，给予海地瓜活性多肽30天。实验前一周对受试动物进行多次血压测量，使其适应测压环境。依据测压仪器的要求进行动物清醒、安静状态下的血压、心率的测定。实验开始后每周测压1-2次。停止给予受试样品之后，一般继续观察直至血压恢复至对照组水平或继续观察7-14天。结果表明，10mg/kg体重剂量组动物血压明显低于对照组，差异具有显著性，且对实验组动物心率和正常动物的血压及心率无影响。
实施例15：
将1kg干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:8；然后加入胰蛋白酶酶解，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心15min后取上清，上清液经3500Da和1000Da膜过滤，收集1000Da-3500Da分子量之间的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后分别得到124.6g海地瓜降压肽。以海地瓜降压肽为主要原料，添加低聚异麦芽糖、三氯蔗糖等制备海地瓜降压肽冲剂。
一、分子量范围测定
采用高效液相色谱仪测定法，以分子量＜3500Da的多肽为指标，分析酶解产物中多肽的比例，具体方法见GB/T22729-2008。
根据色谱图可知，通过与蛋白质标准分子量对比，可到本发明实施例1-3得到的海地瓜降压肽在1000Da-2500Da。
Claims (8)
1.一种从海地瓜制备的多肽，其特征在于，所述的多肽的制备方法如下：
1)将干海地瓜粉碎后，加水制成悬浊液；
2)在步骤1)的悬浊液中加入蛋白酶进行酶解，酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，离心取上清，得到总海地瓜多肽溶液；
3)使用膜过滤仪器分离步骤2)中得到的总海地瓜多肽溶液，分离后得到海地瓜活性多肽溶液；所述的分离条件为：先利用分子量3500Da的膜分离，再利用分子量1000Da的膜进行分离，得到1000-3500Da范围的多肽；
4)将步骤3)中的海地瓜活性多肽溶液经后处理脱色、脱腥以及干燥后得到海地瓜活性多肽。
2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的步骤1)中的海地瓜与水的质量比为1:4-8。
3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的步骤1)中的蛋白酶为胰蛋白酶和菠萝蛋白酶的复合酶。
4.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的步骤1)中的酶解条件如下：时间1-5h，温度50℃，pH值6-8。
5.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的步骤1)中的的离心条件如下：8000-12000rpm，离心10-30min。
6.权利要求1所述的多肽再制备降血压的制品中的应用。
7.一种具有降血压功效的制品，其特征在于，所述的制品中包含有药理有效浓度的权利要求1所述的多肽。
8.如权利要求7所述的制品，其特征在于，所述的制品为冲剂。
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