CN107811300A - 一种牛肉多肽的制备方法 - Google Patents

一种牛肉多肽的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107811300A
CN107811300A CN201711242659.8A CN201711242659A CN107811300A CN 107811300 A CN107811300 A CN 107811300A CN 201711242659 A CN201711242659 A CN 201711242659A CN 107811300 A CN107811300 A CN 107811300A
Authority
CN
China
Prior art keywords
beef
polypeptide
peptide fragment
valve
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711242659.8A
Other languages
English (en)
Inventor
郝学财
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Chunfa Bio Technology Group Co Ltd
Original Assignee
Tianjin Chunfa Bio Technology Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Chunfa Bio Technology Group Co Ltd filed Critical Tianjin Chunfa Bio Technology Group Co Ltd
Priority to CN201711242659.8A priority Critical patent/CN107811300A/zh
Publication of CN107811300A publication Critical patent/CN107811300A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18Peptides; Protein hydrolysates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种牛肉多肽的制备方法,该方法包括以下步骤:(1)牛肉酶解物的制备;(2)牛肉多肽的超滤分离;(3)牛肉多肽的凝胶分离;(4)牛肉多肽的反相纯化。本发明以牛肉为原料,通过酶解、超滤、凝胶、反相纯化等工艺步骤,对牛肉风味多肽进行分离、富集和纯化,每一步骤通过风味感官评价分离纯化片段风味特性均比原酶解物质有所提升,通过该方法所得多肽片段风味较好,鲜度、厚味、强度等评价指标均有较大提升,可作为高端多肽原料进一步开发高端香精、调味料产品。

Description

一种牛肉多肽的制备方法
技术领域
本发明涉及一种牛肉多肽的制备方法。
背景技术
牛肉营养成分丰富,富含蛋白质,是一种优质的动物蛋白原料。蛋白质经水解后得到的多肽,比原蛋白质有更好的营养特性。目前,产品传统深加工方式形式单一,因此,对牛肉多肽制品的进一步深加工以提高其附加值的研究亟待加强。研究表明,多肽呈味物质通常分子质量<5000Da,却对食品风味具有贡献的寡肽类物质。水解多肽分子量分布较宽,有必要对其呈味物质进行富集纯化,以提升多肽呈味特性,提高其附加值。
本发明以牛肉为原料,通过酶解、超滤、凝胶、反相纯化等工艺步骤,对牛肉风味多肽进行分离、富集和纯化,所得多肽片段风味较原来酶解物有较大提升,为牛肉多肽类高端产品的开发夯实了基础。
发明内容
本发明涉及一种牛肉多肽的制备方法。
本发明采用的技术方案为:
一种牛肉多肽制备方法,该方法包括以下步骤:
(1)牛肉酶解物的制备:将新鲜牛肉使用绞肉机进行搅碎,而后置于反应器中,加入蒸馏水搅拌混匀,在温度50℃、pH8.5条件下,采用胰蛋白酶进行酶解,酶解后灭酶、过筛分离得到牛肉酶解物;
(2)牛肉多肽的超滤分离:将牛肉酶解物通过陶瓷膜设备过滤后,分别经过截留分子量5KD、2.5KD和1KD超滤膜超滤进行分级制备,收集1KD-2.5KD分子量的肽段(通过感官评价发现,该肽段最具牛肉风味,醇厚饱满),低温冻干;得超滤肽段;
(3)牛肉多肽的凝胶分离:将步骤(2)得到的超滤肽段用去离子水进行复溶,超声处理,离心,取上清液,经过Sephadex G10凝胶分离,自动馏分收集器收集,每管收集4mL,收集管15~25的合并液;低温冻干,即得凝胶分离肽段;
(4)牛肉多肽的反相纯化:将步骤(3)得到的凝胶分离肽段,经过反相色谱纯化收集洗脱峰,分别收集保留时间为2.58min、2.72min洗脱液,多次进样,合并,然后冷冻干燥,得到肽段A和肽段B,肽段A、肽段B即为本发明的牛肉多肽。
优选地,所述牛肉酶解物的制备:将新鲜牛肉使用绞肉机进行搅碎,称取搅碎后牛肉100g,放入500mL三口烧瓶中,加入100g水,加入胰蛋白酶,温度50℃、调节pH8.5、1.0‰添加量进行酶解,酶解2h后,于90℃灭酶15min,过80目筛网去除残渣,得到牛肉酶解液。
优选地,所述步骤(2)为:
陶瓷膜过滤:将牛肉酶解液加入罐中,打开泵进口阀、膜组件进出口阀门、回罐管路的阀门,启动循环泵,分批加入原料液,确保料罐内的液位正常,保证离心泵的稳定运行,打开组件渗透侧出口收集清液,操作压力控制为0.1-0.2Mpa;
超滤膜过滤:陶瓷膜预处理后的牛肉酶解液,由辅泵吸入,经主泵提高压力后送入膜组件,顺序为5KD、2.5KD和1KD超滤膜组件;
操作压力:5000分子量有机膜10~15bar、2500分子量有机膜12~16bar、1000分子量有机膜15~18bar;料液流速:20~60L/h,物料温度30~50℃;
首先打开5000Da超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭2500Da和1000Da超滤膜组件进出口阀,收集一级透过液和截留液;一级透过液送入膜组件,打开2500ka超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭5000Da和1000Da超滤膜组件进出口阀,收集二级透过液和截留液;二级透过液送入膜组件,打开1000Da超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭5000Da和2500Da超滤膜组件进出口阀,收集三级透过液和截留液;
收集分离后的大于5KD、2.5-5KD、1-2.5KD和小于1KD这四段,-40℃进行冷冻干燥;选择1-2.5KD肽段进行凝胶分离。
优选地,所述步骤(3)为:牛肉多肽的凝胶分离
将步骤(2)得到的1-2.5KD样品用去离子水进行复溶(样品与去离子水质量比例为1:19),超声处理,离心,取上清液,过0.2μm微孔滤膜得滤液,取0.5mL滤液过SephadexG-10(60cm×1cm)玻璃柱,以去离子为洗脱液,自动收集器收集,每管收集4mL,收集管号15~25的收集液,合并,-40℃进行冷冻干燥后,进行反相纯化。
优选地,所述步骤(4)为:牛肉多肽的反相纯化
将步骤(3)低温冻干的样品用0.02%TFA的水复溶,超声,离心,取上清液;
反相纯化条件:Agilent1200HPLC;选用ZorbaxXDB-C18(4.6×250,5um);柱温为30℃;流动相A为0.02%TFA,B为0.02%TFA的乙腈;流速为1.0mL/min;进样量为20μL;检测波长为220nm,分别收集保留时间为2.58min、2.72min洗脱液,多次进样,合并,然后冷冻干燥,得到肽段A和肽段B,肽段A、肽段B即为本发明的牛肉多肽。
本发明所具有的有益效果:
本发明以牛肉为原料,通过酶解、超滤、凝胶、反相纯化等工艺步骤,对牛肉风味多肽进行分离、富集和纯化,每一步骤通过风味感官评价分离纯化片段风味特性均比原酶解物质有所提升,通过该方法所得多肽片段风味较好,鲜度、厚味、强度等评价指标均有较大提升,可作为高端多肽原料进一步开发高端香精、调味料产品。
附图说明
图1为实施例的反相分离纯化色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明,但不限定本发明的保护范围。
一种牛肉多肽制备方法,包括以下步骤:
(1)牛肉酶解物的制备:
将新鲜牛肉使用绞肉机进行搅碎,称取搅碎后牛肉100g(精确至0.01g),放入500mL三口烧瓶中,加入100g水,加入胰蛋白酶,温度50℃、调节pH8.5、1.0‰添加量进行酶解,酶解2h后,于90℃灭酶15min,过80目筛网去除残渣,得到牛肉酶解液。
(2)牛肉多肽的超滤分离
陶瓷膜过滤:将牛肉酶解液加入罐中,打开泵进口阀、膜组件进出口阀门、回罐管路的阀门,启动循环泵。分批加入原料液,确保料罐内的液位正常,保证离心泵的稳定运行,打开组件渗透侧出口收集清液,操作压力控制为0.1-0.2Mpa。
超滤膜过滤:陶瓷膜预处理后的牛肉酶解液,由辅泵吸入,经主泵提高压力后送入膜组件,顺序为5KD、2.5KD和1KD超滤膜组件,从膜组件流出的透过液经流量计后收集,浓液从组件循环侧流出,循环液经流量计后回流到原料罐,如此不断循环实现料液的分离;
操作压力:5000分子量有机膜10~15bar、2500分子量有机膜12~16bar、1000分子量有机膜15~18bar;料液流速:20~60L/h,物料温度30~50℃;
首先打开5000Da超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭2500Da和1000Da超滤膜组件进出口阀,收集一级透过液和截留液;一级透过液送入膜组件,打开2500ka超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭5000Da和1000Da超滤膜组件进出口阀,收集二级透过液和截留液;二级透过液送入膜组件,打开1000Da超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭5000Da和2500Da超滤膜组件进出口阀,收集三级透过液和截留液;
收集分离后的大于5KD、2.5-5KD、1-2.5KD和小于1KD这四段,-40℃进行冷冻干燥后进行感官评价。
采用清水评价方式,样品浓度2%,评价员10名,6男4女,评价结果分别用1-9的数字表示,9为最高分,1为最低分。
表1评价结果
1-2.5KD风味较好,保留进行后期实验。
(3)、牛肉多肽的凝胶分离
将步骤(2)得到的1-2.5KD样品用去离子水进行复溶(样品与去离子水质量比例为1:19),超声处理,离心,取上清液,过0.2μm微孔滤膜得滤液,取0.5mL滤液过SephadexG-10(60cm×1cm)玻璃柱,以去离子为洗脱液,自动收集器收集,每管收集4mL,(加水稀释10倍后紫外分光光度计在220nm处监测)适时合并收集液,共得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ共5个片段,-40℃进行冷冻干燥后进行感官评价,保留风味较好的片段Ⅱ进行下一步纯化实验。
片段Ⅰ:即收集管号12~14的收集液,合并
片段Ⅱ:即收集管号15~25的收集液,合并
片段Ⅲ:即收集管号26~27的收集液,合并
片段Ⅳ:即收集管号28~32的收集液,合并
片段Ⅴ:即收集管号33~37的收集液,合并。
采用清水评价方式,样品浓度2%,评价员10名,6男4女,评价结果分别用1-9的数字表示,9为最高分,1为最低分。
表2评价结果
4、牛肉多肽的反相纯化
将步骤(3)低温冻干的样品用0.02%TFA的水复溶(样品与0.02%TFA质量比例为1:19),超声,离心,取上清液。
反相纯化条件:Agilent1200HPLC;选用ZorbaxXDB-C18(4.6×250,5um);柱温为30℃;流动相A为0.02%TFA,B为0.02%TFA的乙腈;流速为1.0mL/min;进样量为20μL;检测波长为220nm,共测定出12个峰。馏分收集器按照表3测定保留时间进行设置,12个色谱峰都是多次进样收集合并后,得到12个片段,-40℃进行冷冻干燥,进行感官评价,得到纯化后的风味较好的牛肉多肽片段5、6。即为本发明要制备的牛肉多肽。
表3反相分离纯化色谱保留时间
采用清水评价方式,样品浓度2%,评价员10名,6男4女,评价结果分别用1-9的数字表示,9为最高分,1为最低分。
表4评价结果

Claims (5)

1.一种牛肉多肽制备方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
(1)牛肉酶解物的制备:将新鲜牛肉使用绞肉机进行搅碎,而后置于反应器中,加入蒸馏水搅拌混匀,在温度50℃、pH8.5条件下,采用胰蛋白酶进行酶解,酶解后灭酶、过筛分离得到牛肉酶解物;
(2)牛肉多肽的超滤分离:将牛肉酶解物通过陶瓷膜设备过滤后,分别经过截留分子量5KD、2.5KD和1KD超滤膜超滤进行分级制备,收集1KD-2.5KD分子量的肽段(通过感官评价发现,该肽段最具牛肉风味,醇厚饱满),低温冻干;得超滤肽段;
(3)牛肉多肽的凝胶分离:将步骤(2)得到的超滤肽段用去离子水进行复溶,超声处理,离心,取上清液,经过Sephadex G10凝胶分离,自动馏分收集器收集,每管收集4mL,收集管15~25的合并液;低温冻干,即得凝胶分离肽段;
(4)牛肉多肽的反相纯化:将步骤(3)得到的凝胶分离肽段,经过反相色谱纯化收集洗脱峰,分别收集保留时间为2.58min、2.72min洗脱液,多次进样,合并,然后冷冻干燥,得到肽段A和肽段B,肽段A、肽段B即为本发明的牛肉多肽。
2.根据权利要求1所述的一种牛肉多肽制备方法,其特征在于:所述牛肉酶解物的制备为:将新鲜牛肉使用绞肉机进行搅碎,称取搅碎后牛肉100g,放入500mL三口烧瓶中,加入100g水,加入胰蛋白酶,温度50℃、调节pH8.5、1.0‰添加量进行酶解,酶解2h后,于90℃灭酶15min,过80目筛网去除残渣,得到牛肉酶解液。
3.根据权利要求1所述的一种牛肉多肽制备方法,其特征在于:所述步骤(2)为:
陶瓷膜过滤:将牛肉酶解液加入罐中,打开泵进口阀、膜组件进出口阀门、回罐管路的阀门,启动循环泵,分批加入原料液,确保料罐内的液位正常,保证离心泵的稳定运行,打开组件渗透侧出口收集清液,操作压力控制为0.1-0.2Mpa;
超滤膜过滤:陶瓷膜预处理后的牛肉酶解液,由辅泵吸入,经主泵提高压力后送入膜组件,顺序为5KD、2.5KD和1KD超滤膜组件;
操作压力:5000分子量有机膜10~15bar、2500分子量有机膜12~16bar、1000分子量有机膜15~18bar;料液流速:20~60L/h,物料温度30~50℃;
首先打开5000Da超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭2500Da和1000Da超滤膜组件进出口阀,收集一级透过液和截留液;一级透过液送入膜组件,打开2500ka超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭5000Da和1000Da超滤膜组件进出口阀,收集二级透过液和截留液;二级透过液送入膜组件,打开1000Da超滤膜组件进口阀和出口阀,关闭5000Da和2500Da超滤膜组件进出口阀,收集三级透过液和截留液;
收集分离后的大于5KD、2.5-5KD、1-2.5KD和小于1KD这四段,-40℃进行冷冻干燥;选择1-2.5KD肽段进行凝胶分离。
4.根据权利要求1所述的一种牛肉多肽制备方法,其特征在于:所述步骤(3)为:
将步骤(2)得到的1-2.5KD样品用去离子水进行复溶(样品与去离子水质量比例为1:19),超声处理,离心,取上清液,过0.2μm微孔滤膜得滤液,取0.5mL滤液过SephadexG-10(60cm×1cm)玻璃柱,以去离子为洗脱液,自动收集器收集,每管收集4mL,收集管号15~25的收集液,合并,-40℃进行冷冻干燥后,进行反相纯化。
5.根据权利要求1所述的一种牛肉多肽制备方法,其特征在于:所述步骤(4)为:
将步骤(3)低温冻干的样品用0.02%TFA的水复溶,超声,离心,取上清液;
反相纯化条件:Agilent1200HPLC;选用ZorbaxXDB-C18(4.6×250,5um);柱温为30℃;流动相A为0.02%TFA,B为0.02%TFA的乙腈;流速为1.0mL/min;进样量为20μL;检测波长为220nm,分别收集保留时间为2.58min、2.72min洗脱液,多次进样,合并,然后冷冻干燥,得到肽段A和肽段B,肽段A、肽段B即为本发明的牛肉多肽。
CN201711242659.8A 2017-11-30 2017-11-30 一种牛肉多肽的制备方法 Pending CN107811300A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711242659.8A CN107811300A (zh) 2017-11-30 2017-11-30 一种牛肉多肽的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711242659.8A CN107811300A (zh) 2017-11-30 2017-11-30 一种牛肉多肽的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107811300A true CN107811300A (zh) 2018-03-20

Family

ID=61605583

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711242659.8A Pending CN107811300A (zh) 2017-11-30 2017-11-30 一种牛肉多肽的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107811300A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109329860A (zh) * 2018-11-30 2019-02-15 衡阳师范学院 一种鲜味肽和鲜味肽调味料以及它们的制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102396688A (zh) * 2011-11-02 2012-04-04 华南理工大学 呈味活性肽及其制备方法与应用
CN103980347A (zh) * 2014-05-22 2014-08-13 浙江海洋学院 一种大黄鱼鱼鳔降压肽及其制备方法和用途
CN104177477A (zh) * 2014-08-28 2014-12-03 滨州万嘉生物科技有限公司 一种鱼肉抗氧化活性肽及其制备方法
CN105707405A (zh) * 2016-03-15 2016-06-29 广东厨邦食品有限公司 鸡肉鲜味肽及其制备方法与应用
CN107190040A (zh) * 2017-06-05 2017-09-22 浙江国际海运职业技术学院 一种竹节虾抗氧化肽及其制备方法
CN107245094A (zh) * 2017-06-23 2017-10-13 广东华肽生物科技有限公司 一种抗氧化肽及其分离制备方法和用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102396688A (zh) * 2011-11-02 2012-04-04 华南理工大学 呈味活性肽及其制备方法与应用
CN103980347A (zh) * 2014-05-22 2014-08-13 浙江海洋学院 一种大黄鱼鱼鳔降压肽及其制备方法和用途
CN104177477A (zh) * 2014-08-28 2014-12-03 滨州万嘉生物科技有限公司 一种鱼肉抗氧化活性肽及其制备方法
CN105707405A (zh) * 2016-03-15 2016-06-29 广东厨邦食品有限公司 鸡肉鲜味肽及其制备方法与应用
CN107190040A (zh) * 2017-06-05 2017-09-22 浙江国际海运职业技术学院 一种竹节虾抗氧化肽及其制备方法
CN107245094A (zh) * 2017-06-23 2017-10-13 广东华肽生物科技有限公司 一种抗氧化肽及其分离制备方法和用途

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109329860A (zh) * 2018-11-30 2019-02-15 衡阳师范学院 一种鲜味肽和鲜味肽调味料以及它们的制备方法
CN109329860B (zh) * 2018-11-30 2021-11-23 衡阳师范学院 一种鲜味肽和鲜味肽调味料以及它们的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102584934B (zh) 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺
CN109021096A (zh) 一种螺旋藻多糖和藻蓝蛋白的分离提取纯化工艺
TWM554269U (zh) 分離純化雞骨架中2型膠原蛋白之裝置
CN103204904B (zh) 一种抗前列腺癌赤魟软骨蛋白多肽及其制备方法和用途
CN104610430B (zh) 利用灵芝蛋白制备的抗氧化多肽及其制备方法
CN1204148C (zh) 香菇菌多糖的分离纯化工艺
CN107811300A (zh) 一种牛肉多肽的制备方法
CN102961740B (zh) 一种白喉类毒素疫苗的制备方法
CN102627679A (zh) 一种从广金钱草中制备夏佛塔苷的方法
CN101611131B (zh) 用于处理物质料流的方法
CN114349842A (zh) 一种β-乳球蛋白的浓缩分离方法
CN106119328A (zh) 一种适合工业化生产的优质虾低聚肽粉制备方法
CN110256597B (zh) 一种膜法降低灵芝多糖中重金属残留的方法
CN104906144B (zh) 生物活性物质分离纯化过程控制系统及方法
CN110105445A (zh) 一种牛肉中肌红蛋白的提取方法
CN100382868C (zh) 集成酶膜循环提取工艺及其装置
CN212102647U (zh) 一种籽瓜中l-瓜氨酸提取装置
CN104876986A (zh) 一种提取紫甘薯中花色苷的方法
CN2792589Y (zh) 集成膜循环提取装置
CN110964127A (zh) 一种基于超滤膜技术分离纯化燕麦麸皮中β-葡聚糖的生产工艺
CN104045733A (zh) 一种以金福菇为原料提取分离金福菇多糖tlh-3的方法
CN109320603A (zh) 一种连续化提纯抗体的系统及方法
CN219804616U (zh) 一种天然生物活性肽的连续分级提取系统
CN219848984U (zh) 一种中药提取液多功能处理系统
CN214552573U (zh) 一种酶液的超滤膜浓缩装置

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180320

RJ01 Rejection of invention patent application after publication