CN107802887B - 一种温敏性水凝胶复合物及其促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种温敏性水凝胶复合物及其促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法与应用。该复合物包括：温敏性水凝胶、温敏性水凝胶添加剂和溶剂。由于温敏性水凝胶本身具有一定细胞毒性，随其使用浓度增高，可能造成搭载细胞存活率的降低。本发明通过添加维生素C作为添加剂可以有效促进骨髓间质细胞的贴壁，减少相应细胞凋亡比例，并且对其主要细胞因子的释放不产生显著影响，并在体内试验中发现，添加有维生素C的温敏性水凝胶PF‑127包埋的骨髓间质细胞对损伤大鼠子宫具有更好的修复效果。

Description

一种温敏性水凝胶复合物及其促进被搭载细胞存活和/或组 织修复的方法与应用

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种温敏性水凝胶复合物，特别涉及一种温敏性水凝胶复合物、一种温敏性水凝胶药物制剂、以及一种应用温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法及应用。

背景技术

骨髓间质细胞中含有的间充质干细胞具有良好的自我更新能力和多种分化潜能，因此被广泛应用于多种组织的再生与修复工程，例如肝脏再生、肺损伤修复、皮肤损伤后重建，以及生殖系统的子宫内膜修复。

细胞包埋是组织再生工程中移植细胞时的关键技术之一，通过采用一定的包埋剂(溶剂)将被移植细胞包被其中，使之与目的组织在免疫上相对隔离，并在植入时维持被移植细胞与目的组织接近的浓度，可以有效提高移植细胞的存活率和维持其正常代谢功能，因此在临床上是细胞移植时的常用方法。

温敏性水凝胶能对环境温度产生快速响应并产生可逆转化，在较低温环境(4-8℃)中是可流动的液体，而在生理温度环境(37℃)迅速转变为多孔的三维凝胶。由于其生物相容性好并可降解，因此常作为组织再生工程的细胞基质和药物佐剂在临床和研究中使用，介导被移植细胞的黏附与生长，或者作为缓释药物的佐剂来延长药物的药效持续时间。

聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO)是一种具有温敏性的嵌段聚合物，现已上市的有ICI的泊洛沙姆(poloxamers)和BASF的普郎尼克(pluronics)，它的水溶液可随温度的升高，由胶束聚集而形成凝胶。由于其水凝胶给药体系具有缓释、对水难溶性药物的增溶、稳定等作用，因而现已用于丝裂霉素C、白细胞介素多种药物的缓释给药系统。尽管PEO-PPO-PEO嵌段共聚物在诸多领域得到了应用，然而，由于其水凝胶强度低、体内溶蚀快，因而对药物的缓释时间较短。更为重要的是PEO-PPO-PEO嵌段共聚物为非生物降解性材料，由其制备的水凝胶在使用过程中可能存在安全性问题，例如长期应用PEO-PPO-PEO可引起高胆固醇和高甘油三脂症，在一定程度上限制了它们的广泛应用。

PEO-PPO-PEO嵌段共聚物分子式如(A)式所示。

(A)式：HO(C₂H₄O)_a-(C₃H₆O)_b-(C₂H₄O)_aH，其中a代表环氧乙烷的比例；b为代表环氧丙烷的比例。

温敏性水凝胶PF-127(P407)是由约70％的聚乙烯氧化物(PEO)和30％的聚丙烯氧化物(PPO)组成的嵌段共聚物(PEO-PPO-PEO)，平均分子量约为12600(Sigma)，易溶于水，其成胶浓度为15-20％，是临床上常用的医用温敏性水凝胶。PF-127分子式如(B)式所示。

(B)式：HO(C₂H₄O)₁₀₆-(C₃H₆O)₇₀-(C₂H₄O)₁₀₆H。

然而以前研究在对于其毒性的考察中发现，使用较低浓度(0.1-5％w/v)时，被搭载细胞的生长并未受到显著影响；但在10％w/v浓度时，被搭载细胞的存活率和生长曲线受到明显抑制；成胶浓度(15-20％w/v)时，被搭载细胞在第五天完全死亡。有报道称在温敏性水凝胶中添加某些膜稳定剂，例如氢化可地松、葡萄糖或者甘油，均可以不同程度地提高搭载细胞的存活率。

发明内容

本发明的目的之一在于针对现有技术的不足，提供一种温敏性水凝胶复合物。

本发明的目的之二在于针对现有技术的不足，提供了一种温敏性水凝胶药物制剂。

本发明的目的之三在于针对现有技术的不足，提供一种温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂在促进被搭载细胞存活、组织修复和/或组织再生中的应用。

为实现上述目的之一，本发明采用如下技术方案：

本发明第一方面提供一种温敏性水凝胶复合物，包括以下组份：

温敏性水凝胶、温敏性水凝胶添加剂和溶剂，其中，所述温敏性水凝胶添加剂包括维生素C。

在本发明一实施例中，所述温敏性水凝胶为聚N-异丙烯酰胺嵌段共聚物水凝胶、聚乙烯醚嵌段共聚物水凝胶、聚环氧乙烷-聚环氧丙烯嵌段共聚物水凝胶、聚乙二醇/聚酯嵌段共聚物水凝胶、基于壳聚糖-β-甘油磷酸钠的水凝胶、基于纤维素的水凝胶中的一种或多种。优选地，本发明所述温敏性水凝胶复合物中至少必须含有PEO-PPO-PEO嵌段共聚物。

温敏性水凝胶能在温度升高时转变为多孔的三维凝胶，是组织再生和细胞搭载的良好载体。但由于其本身具有一定细胞毒性，随其使用浓度增高，会造成搭载细胞存活率的降低。本发明发现，在临床使用温敏性水凝胶PF-127常规浓度20％(m/v)搭载骨髓间质细胞进行组织修复时，制胶时添加维生素C可以有效促进骨髓间质细胞的贴壁和7天存活率，减少相应细胞凋亡比例，并且对其主要细胞因子的释放不产生显著影响，并在体内试验中发现，添加维生素C之后采用PF-127包埋的骨髓间质细胞对损伤大鼠子宫具有更好的修复效果。因此，在温敏性搭载细胞进行组织修复时，添加维生素C具有有益的辅助作用。

可以理解的是，如下改进和润饰也应纳入本发明保护范围：针对具体需要，本领域普通技术人员还可加入其他一种或多种本领域常规使用的水凝胶，并与本发明实施例采用的温敏性水凝胶复合，比如对pH或者光敏感的水凝胶，优选地，以上组合均采用药用上或生理上可以接受的水凝胶。

在本发明一优选实施例中，所述温敏性水凝胶为PEO-PPO-PEO嵌段共聚物。

进一步优选地，所述PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的分子量为1100-15000；其中，PEO的重量百分比为10％-80％，PPO的重量百分比为20％-80％。

更进一步优选地，所述PEO-PPO-PEO嵌段共聚物为PF-127。

在本发明一实施例中，所述温敏性水凝胶复合物中，温敏性水凝胶PF-127的质量浓度(W/V)为1-20％，进一步优选为20％。

在本发明一实施例中，所述温敏性水凝胶复合物中，温敏性水凝胶添加剂(优选为维生素C)的浓度为10-100μM，进一步优选为50μM。在本发明一实施例中，所述溶剂选自水、缓冲液、体液、细胞培养液、组织液以及其它水溶液和不以有机溶剂为主体的介质。

在本发明一实施例中，所述温敏性水凝胶复合物还包括其它药物可接受的载体。具体地，所述其它药物可接受的载体为氢化可地松、葡萄糖、甘油。

可以理解的是，针对具体需要，本领域技术人员可加入药用上或生理上可以接受的物质来调节制剂的胶凝温度至临床所需温度，这些物质选自不同分子量大小的PEG等大分子物质，或是氯化钠、葡萄糖等小分子物质。

在本发明一实施例中，所述温敏性水凝胶复合物，包括如本发明第一方面所述的温敏性水凝胶、温敏性水凝胶添加剂和溶剂，还包括细胞，进一步地，细胞浓度为1×10⁵-4×10⁶/mL。

具体地，所述细胞以1×10⁵-4×10⁶/mL密度混合在本发明第一方面提供的温敏性水凝胶复合物中，进一步优选为4×10⁶/mL。

本发明一实施例中，所述细胞以1×10⁵-4×10⁶/mL的浓度与温敏性水凝胶、温敏性水凝胶添加剂和溶剂混合，获得本发明第二方面所提供的温敏性水凝胶复合物。进一步地，将所得温敏性水凝胶复合物置于37℃下培养预设的时间，获得可临床应用温敏性水凝胶细胞混合物。所述预设时间为本领域技术人员常规使用的、可使水凝胶达到临床应用要求的凝胶时间。

本发明一实施例中，温敏性水凝胶复合物包被的细胞为骨髓间质细胞、神经干细胞或脂肪干细胞的一种或多种。优选为动物源或人源的干细胞。

优选地，温敏性水凝胶复合物包被的细胞为骨髓间质细胞。

为实现上述目的之二，本发明采用如下技术方案：

本发明第二方面还提供了一种温敏性水凝胶药物制剂，包括本发明第一方面提供的温敏性水凝胶复合物，还包括药用上或生理上可以接受的药物。

可以理解的是，针对具体需要，本领域技术人员可加入其他药用上或生理上可以接受的药物，比如针对癌症、肿瘤或炎症的药物、提高机体免疫的药物或其他调节因子，以期获得协同的治疗或修复效果。

本发明采用的PEO-PPO-PEO嵌段共聚物的凝胶机理是基于胶束的聚集，而胶束又具有典型的内部疏水和外部亲水的核-壳结构，因而该类水凝胶除了可以荷载亲水性的大分子诸如蛋白多肽类药物于胶束间外，还可以荷载疏水性的小分子药物于胶束内，可用于抗肿瘤药物、抗炎镇痛药、局麻药或其它临床上需要发挥长效的局部治疗或全身作用的药物。因此，本发明的水凝胶药物制剂，其中药物可以选自肿瘤坏死因子-α、神经生长因子、表皮生长因子、骨形态发生蛋白、胰岛素、生长激素释放因子、内啡肽、肝素酶、白细胞介素-2等蛋白多肽类药物，也可以选自紫杉醇、多西紫杉醇、阿霉素、丝裂霉素等小分子药物。

本发明第二方面提供了的水凝胶药物制剂的制备方法，包括将药物以及本发明第一方面提供的温敏性水凝胶复合物混合而成，必要时还可加入其它药物可接受的载体。其中所载药物可以直接溶解或分散在凝胶溶液中，也可以将荷载药物的微球、脂质体、乳滴等粒子分散在其中。

本发明的药物制剂，药物以扩散和/溶蚀方式缓慢释放，其给药途径为注射、经皮、眼部、阴道、尿道、鼻腔、耳道等，可产生局部或全身治疗作用。

本发明第一方面提供的温敏性水凝胶复合物或第二方面提供了的温敏性水凝胶药物制剂通过皮下注射、肌肉注射、腹腔内注射、血管瘤局部注射或血管瘤瘤内注射。

在本发明一实施方式中，注射剂量为临床可接受的剂量，优选地，注射凝胶中包括密度为1×10⁵-4×10⁶/mL的细胞。

为实现上述目的之三，本发明采用如下技术方案：

本发明第三方面提供一种第一方面提供的温敏性水凝胶复合物或第二方面提供的温敏性水凝胶药物制剂在促进被搭载细胞存活、组织修复和/或组织再生药物中的应用；优选为在制备药物载体、制备促进被搭载细胞存活、组织修复和/或组织再生药物中的应用。

优选地，所述温敏性水凝胶复合物中或温敏性水凝胶药物制剂中，所述温敏性水凝胶PF-127的质量体积分数为20％。

优选地，所述温敏性水凝胶复合物中或温敏性水凝胶药物制剂中，所述维生素C的摩尔浓度为50μM，

优选地，所述温敏性水凝胶复合物中或温敏性水凝胶药物制剂中，所述骨髓间质细胞的搭载浓度为4×10^6/mL。

具体地，所述第一方面提供的温敏性水凝胶复合物或第二方面提供的温敏性水凝胶药物制剂在促进被搭载细胞存活、组织修复和/或组织再生中的应用包括但不限于如下应用：促进骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中的七天存活率、增加子宫壁膜厚度、增加腺体数量、降低子宫纤维化程度、降低促炎因子IL-1β的分泌、回复角蛋白keratin的表达水平、血管性血友病因子vWF的表达水平。

本发明第四方面提供一种第一方面提供的温敏性水凝胶复合物或第二方面提供的温敏性水凝胶药物制剂在制备促进骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中的七天存活率、增加子宫壁膜厚度、增加腺体数量、降低子宫纤维化程度、降低促炎因子IL-1β的分泌、回复角蛋白keratin的表达水平、血管性血友病因子vWF的表达水平中的一种或多种药物中的应用。

本发明提供的温敏性水凝胶复合物可用于促进被搭载细胞存活、组织修复和/或组织再生工程。本发明提供的温敏性水凝胶复合物还可用于作为缓释药物的佐剂。本发明与现有技术相比，有益效果在于：

1)本发明提供的一种温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法，其中添加剂维生素C可与温敏性水凝胶PF-127均匀成胶，不影响骨髓间质细胞的搭载和贴壁。

2)本发明提供的一种温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法，可以显著促进骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中的七天存活率。

3)本发明提供的一种温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法，可以减少骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中的凋亡比例。

4)本发明提供的一种温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法，并未显著影响骨髓间质细胞分泌的生长因子和炎症因子。

5)本发明提供的一种温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法,用于修复大鼠子宫损伤部位，8周后可见明显的修复效果，包括子宫壁膜厚度增加、腺体数量增加、子宫纤维化程度降低，并能有效降低促炎因子IL-1β的分泌，以及显著回复角蛋白keratin和血管性血友病因子vWF的表达水平。

6)本发明提供的一种温敏性水凝胶复合物或温敏性水凝胶药物制剂促进被搭载细胞存活和/或组织修复的方法，促进了被搭载细胞存活以及提高了组织修复的效率。

附图说明

图1为从大鼠骨髓获得的骨髓间充质细胞，贴壁后7天的典型光镜形态；

图2为采用流式细胞术分选鉴定分离获得的骨髓间充质细胞里的血细胞所占比例，CD34和CD45为血细胞特有的细胞表面抗原标志物；

图3为分离所获得的骨髓间充质细胞包被于温敏性水凝胶PF-127，分别在包被时添加不同浓度维生素C后3天和7天的细胞贴壁情况；

图4为利用CCK-8染色试剂盒检测，分离所获得的骨髓间充质细胞包被于温敏性水凝胶PF-127，分别在包被时添加不同浓度维生素C后1天和7天的细胞生长情况，其中，左图是细胞相对存活率结果，右图是细胞增殖结果；

图5为采用Annexin V/PI染色试剂盒，通过流式分选检测细胞凋亡情况，骨髓间充质细胞包被于温敏性水凝胶PF-127，分别在包被时添加不同浓度维生素C，其中，从左到右分别为不加凝胶对照组、0μM的维C+凝胶、50μM的维C+凝胶、100μM的维C+凝胶；

图6为采用ELISA试剂盒检测骨髓间充质细胞经水凝胶包被后，添加不同浓度维生素C对细胞释放生长因子和炎症因子的影响；

图7为H&E染色检测采用PF-127并添加维生素C包埋骨髓间质细胞，移植到机械损伤的大鼠子宫损伤处，8周后检测大鼠子宫内膜厚度和腺体数量，并与正常对照组、造模未修复组、细胞修复组和材料修复组进行修复效果比较，其中，左图是子宫内膜厚度的检测结果，右图是腺体数量的检测结果；

图8为Masson染色检测采用PF-127并添加维生素C包埋骨髓间质细胞，移植到机械损伤的大鼠子宫损伤处，8周后检测大鼠子宫内膜纤维化程度，并与正常对照组、造模未修复组、细胞修复组和材料修复组进行修复效果比较；

图9为免疫组化染色检测采用PF-127并添加维生素C包埋骨髓间质细胞，移植到机械损伤的大鼠子宫损伤处，8周后检测大鼠子宫的促炎性因子IL-β、角蛋白keratin和血管性血友病因子vWF的表达水平，并与正常对照组、造模未修复组、细胞修复组和材料修复组进行修复效果比较。

具体实施方式

以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

本发明实施例中无特别说明外，所用试剂及耗材均为市售商品。本发明所采用维生素C(Vitamin C，又称抗坏血酸L-ascorbic acid,)：分子式C₆H₈O₆，分子量176.14，常温为白色晶体粉末，熔点190-192℃，易溶于水。

本发明实施例提供了一种温敏性水凝胶复合物，包括以下组份：温敏性水凝胶、温敏性水凝胶添加剂。其中，温敏性水凝胶PF-127的质量体积分数，维生素C的摩尔浓度如表1所示：

表1

上述温敏性水凝胶复合物各组成以合适的比例搭配，可促进被搭载细胞存活和/或组织修复。上述温敏性水凝胶复合物应用于搭载移植骨髓间质细胞，能促进被搭载细胞存活和/或组织修复，实现组织的再生与修复。

应用实施例1

温敏性水凝胶复合物应用于搭载移植骨髓间质细胞，能促进被搭载细胞存活。

1)不影响骨髓间质细胞的搭载和贴壁：

从骨髓分离获得骨髓间质细胞，以5×10⁴个/ml密度包被在20％(w/v)PF-127温敏性水凝胶，同时分别添加0μM、50μM和100μM维生素C作为辅助。对照实验中发现，如图1所示，添加维生素C后骨髓间质细胞可以正常贴壁生长。

以上分离获得的骨髓间质细胞采用CD34和CD45表面抗原染色，经流式分选后发现绝大部分细胞(CD34：97.39％；CD45：97.57％)不表达血细胞表面抗原，表明分离获得的细胞绝大多数(>95％)细胞都是骨髓间质细胞，如图2所示。

2)显著提高骨髓间质细胞贴壁能力，并维持细胞正常生长：

采用20％(w/v)PF-127搭载分离得到的原代骨髓间质细胞，分别添加0μM、50μM和100μM维生素C，采用CCK法测定其3天和7天后的细胞生长曲线，发现3天时只用PF-127包被的骨髓间质细胞的生长尚未受到显著影响，但高浓度(100μM)维生素C可显著促进间质细胞生长；7天时单纯用PF-127包被的骨髓间质细胞绝大部分不再贴壁，细胞生长受到显著抑制，但添加低浓度(50μM)维生素C显著提高骨髓间质细胞贴壁能力，并维持细胞正常生长，如图3所示。

3)提高细胞存活率：

采用20％(w/v)PF-127搭载分离得到的原代骨髓间质细胞，分别添加0μM、50μM和100μM维生素C，分别在1天、3天、7天后检测细胞的凋亡比例，发现经过PF-127包被，1天后存活的细胞显著增加。7天时绝大多数PF-127包被细胞出现凋亡或早期凋亡，而外加50μM浓度的维生素C可提高细胞存活率，如图4所示。其中，左图是单独添加PF-127，未添加维生素C时细胞的相对存活率检测，此处在于阐述PF-127本身对于细胞具有毒性，如图所示在第三天即开始表现，并持续到第七天。右图是PF-127包埋细胞后添加维生素C的检测结果，此图在于阐述添加维生素C之后对于细胞的存活和增殖具有显著保护作用，可有效提高细胞存活率和帮助增殖。

4)减少骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中的凋亡比例：

采用Annexin V/PI染色试剂盒，通过流式分选检测细胞凋亡情况。骨髓间充质细胞包被于温敏性水凝胶PF-127，分别在包被时添加不同浓度维生素C。外加50μM浓度的维生素C，可减少骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中培养7天的凋亡比例，如图5所示。

5)未显著影响骨髓间质细胞分泌的生长因子和炎症因子：

采用20％(w/v)PF-127搭载分离得到的原代骨髓间质细胞，分别添加0μM、50μM和100μM维生素C，3天后ELISA检测骨髓间质细胞分泌的多种生长因子(HGF、IGF及EGF)和炎症因子(IL-10、IL-6及TNF-α)。添加维生素C后对炎性因子(IL-10和TNF-α)有抑制趋势，并对一些生长因子(EGF)的分泌具有一定促进作用，如图6所示。

综合图3、图4(右)和图5来看。其中图3直观体现的是添加不同浓度维生素C后对细胞贴壁的帮助，图4(右)体现的是添加不同浓度维生素C后对包埋7天后细胞增殖和生长的帮助作用，图5体现的是添加不同浓度维生素C后对细胞凋亡的影响。三个图的结果都反应出添加维生素C的积极效果，尤其说明在我们所选取的两个添加浓度中，较低的50μM维生素C相较于较高的100μM的维生素C，具有更好的保护作用。因此发明人认为，PF-127加维生素C组合可以显著提高包埋细胞在PF-127中的存活率和保持其增殖活性，有效降低包埋剂PF-127的细胞毒性。

应用实施例2

温敏性水凝胶复合物移植到大鼠子宫损伤部位，能促进组织的再生与修复。

1)有效修复受损子宫的内膜厚度和增加腺体数量：

采用20％(w/v)PF-127搭载分离得到的原代骨髓间质细胞并添加50μM维生素C，以3×10⁶/mL浓度注射于大鼠子宫损伤部位，分别以注射同浓度不用水凝胶搭载的细胞(BMSC)，以及不搭载细胞只注射水凝胶(PF-127)作为实验对照，以上两组均同样添加50μM维生素C。两周后处死小鼠取子宫包埋切片，H&E染色发现，PF-127水凝胶搭载并添加50μM维生素C的BMSC可以有效修复受损子宫的内膜厚度和增加腺体数量，如图7所示。

2)有效降低受损子宫的内膜纤维化面积：

将上述子宫样品包埋切片后经过Masson染色，发现PF-127水凝胶搭载并添加50μM维生素C的BMSC可以有效降低受损子宫的内膜纤维化面积，如图8所示。

3)有效降低促炎性因子分泌，促进生长因子表达：

将上述子宫样品包埋切片后进行免疫组化染色分析，发现移植PF-127水凝胶搭载并添加50μM维生素C的BMSC后，可以有效降低损伤子宫内促炎性因子IL-1β的分泌，并促进角蛋白keratin(具有结缔和保护功能)和血管性血友病因子vWF的表达水平，如图9所示。

应用实施例3

为了进一步说明本发明的有益效果，本发明应用实施例还将表1所示的实施例1-3所提供的温敏性水凝胶复合物的配比，参考应用实施例1中步骤3)和步骤4)，并检测温敏性水凝胶复合物的包被时间对细胞存活率和骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中的凋亡比例的影响，结果显示添加了50μM的维生素C的温敏性水凝胶复合物提高了细胞存活率，并且减少骨髓间质细胞在温敏性水凝胶PF-127中培养7天的凋亡比例，如表2所示：

值得说明的是，本实验为细胞(收集1天或7天包埋的细胞)添加不同浓度的维生素C处理后，采用流式细胞标记和分选来检测被包埋细胞的凋亡率。由于此实验在检测方法上具有局限性，只收取了贴壁细胞来进行检测，因为事实上7天之后未添加维生素C的实例1中的大部分细胞已经不再贴壁(如图3)，因此，此比例(实施例1第7天44.8％的比例)显示的是仍然贴壁能够被收取的细胞凋亡比例，显著高于实际存活的细胞比例。

这是由于实验方法所限而造成，因此更准确的检测应该参考图4右图的CCK增殖曲线，来衡量维生素C对PF-127包埋细胞的保护作用。本实施例流式数据的意义在于，可以看到添加100μM的维生素C在7天后，其细胞存活率低于添加50μM的维生素C，说明50μM的维生素C对于细胞具有更好的保护效果。

表2

为了进一步确证添加了维生素C的温敏性水凝胶复合物在搭载骨髓间质细胞中的细胞存活率及凋亡比例的有益作用，本发明实施例还以质量体积分数为15％的温敏性水凝胶PF-127代替质量体积分数为20％的温敏性水凝胶PF-127进行实验，结果进一步确证添加了50μM的维生素C的温敏性水凝胶复合物在搭载骨髓间质细胞中的细胞存活率及凋亡比例的有益作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种可促进被搭载细胞存活的温敏性水凝胶复合物，其特征在于，所述搭载细胞包括骨髓间质细胞、神经干细胞、脂肪干细胞中的一种或多种，所述温敏性水凝胶复合物包括以下组份：温敏性水凝胶、温敏性水凝胶添加剂和溶剂，其中，所述温敏性水凝胶的质量体积分数（W/V）为1-20%，所述温敏性水凝胶添加剂包括浓度范围为10-100 μM的维生素C。

2.如权利要求1所述的温敏性水凝胶复合物，其特征在于，所述温敏性水凝胶为聚N-异丙烯酰胺嵌段共聚物水凝胶、聚乙烯醚嵌段共聚物水凝胶、聚环氧乙烷-聚环氧丙烯嵌段共聚物水凝胶、聚乙二醇/聚酯嵌段共聚物水凝胶、基于壳聚糖-β-甘油磷酸钠的水凝胶、基于纤维素的水凝胶的一种或多种。

3.如权利要求1所述的一种温敏性水凝胶复合物，其特征在于，所述温敏性水凝胶复合物中，所述的溶剂为水、缓冲液、体液、细胞培养液、组织液中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的一种温敏性水凝胶复合物，其特征在于，所述的搭载细胞搭载浓度为1×10⁵-4×10⁶ /mL。

5.一种温敏性水凝胶药物制剂，其特征在于，包括将如权利要求1所述的温敏性水凝胶复合物和细胞混合而成。

6.一种如权利要求1所述的温敏性水凝胶复合物、如权利要求5所述的温敏性水凝胶药物制剂在制备药物载体、制备促进被搭载细胞存活、组织修复和/或组织再生药物中的应用。

7.一种如权利要求1所述的温敏性水凝胶复合物，如权利要求5所述的温敏性水凝胶药物制剂在制备增加小鼠或人子宫壁膜厚度、增加腺体数量、降低子宫纤维化、降低促炎因子IL-1β的分泌、提高角蛋白表达和/或血管性血友病因子vWF表达的药物中的应用。

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