CN107759691A - 一种特异性结合axl的单克隆抗体 - Google Patents

一种特异性结合axl的单克隆抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN107759691A
CN107759691A CN201711261529.9A CN201711261529A CN107759691A CN 107759691 A CN107759691 A CN 107759691A CN 201711261529 A CN201711261529 A CN 201711261529A CN 107759691 A CN107759691 A CN 107759691A
Authority
CN
China
Prior art keywords
monoclonal antibody
seq
acid sequence
amino acid
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711261529.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107759691B (zh
Inventor
高婵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shang Jian monoclonal antibody (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.
Original Assignee
Hangzhou Sumgen Biotech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Sumgen Biotech Co Ltd filed Critical Hangzhou Sumgen Biotech Co Ltd
Priority to CN201711261529.9A priority Critical patent/CN107759691B/zh
Publication of CN107759691A publication Critical patent/CN107759691A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107759691B publication Critical patent/CN107759691B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/08—Hepato-biliairy disorders other than hepatitis
    • G01N2800/085—Liver diseases, e.g. portal hypertension, fibrosis, cirrhosis, bilirubin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种特异性结合AXL蛋白的单克隆抗体或其抗原结合片段，本发明的单克隆抗体能特异性与AXL蛋白结合。本发明的抗体可以用于AXL蛋白过表达诱导的疾病的预防和治疗，在临床上具有广泛的应用前景。

Description

一种特异性结合AXL的单克隆抗体
技术领域
本发明属于细胞免疫学、分子生物学领域，涉及一种特异性结合AXL的单克隆抗体。
背景技术
AXL(Ark，Ufo和Tyro7)属于受体酪氨酸激酶TAM家族，该家族成员还包括Mer和Tyro3。AXL与配体Gas 6结合可激活AXL的酪氨酸激酶活性，从而活化其下游的PI3K/AKT、MAPK/ERK等信号转导通路，参与细胞存活、增殖、迁移和粘附的进程。
AXL在脑、心脏、骨骼肌以及部分单核细胞等多种正常组织中低/弱表达，但是在多种肿瘤中高/超高表达，并与侵入性、转移和不良预后有关，如乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、食管癌、慢性髓细胞白血病(CML)、急性髓细胞白血病(AML)、骨肉瘤、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌等。近期研究还发现，在经过化疗和受体酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗后产生抗药性的癌细胞中，AXL的高表达现象尤为严重，是产生耐药性的重要原因之一。目前已经在许多肿瘤中，如肺癌、乳腺癌、食道癌、胃肠道间质细胞瘤和急性粒细胞白血病等肿瘤中，观察到由于AXL高表达而产生的耐药性。研究还发现，AXL在对PD-1免疫治疗无反应的患者中过表达，与肿瘤免疫治疗不反应相关。
AXL还可以作为生物标志物用于临床诊断。研究显示，肝细胞癌(HCC)、晚期纤维化(F3期)或肝硬化(F4期)血清中可溶性AXL(sAxl)浓度特异性增加；而在慢性病毒性肝炎，自身免疫性肝炎，胆汁淤积性肝病或非酒精性脂肪性肝病等慢性肝病(CLD)患者中没有检测到升高的sAxl水平。
因此，AXL激酶抑制剂是癌症诊断和治疗的一个新策略，多个AXL激酶小分子抑制剂处于临床研究阶段)；抗AXL抗体类药物也是重点研究领域之一，多个抗体类分子在体内外研究中展现了抗肿瘤活性。
因此，鉴于AXL的治疗潜能，存在对有效并且特异性识别AXL、阻断其介导的信号转导并且适合于治疗性处理的单克隆AXL抗体、其抗体片段或衍生物的高度需要。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种特异性结合AXL的单克隆抗体，具有高效和安全的特点。
本发明的目的之二在于提供上述抗体的重链、轻链或其片段。
本发明的目的之三在于提供编码上述单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子或其片段，以及插入这些核酸分子以用于重组表达上述抗体的表达载体和宿主细胞。
本发明的目的之四在于提供上述单克隆抗体的制备方法和用途。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明提供了一种特异性结合AXL蛋白的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR1、轻链CDR2、轻链CDR3、重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3；
重链CDR1具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
重链CDR2具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
重链CDR3具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
轻链CDR1具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
轻链CDR2具有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
轻链CDR3具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
优选地，重链CDR1具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；重链CDR2具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；轻链CDR1具有SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列；轻链CDR2具有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；轻链CDR3具有SEQID NO:6所示的氨基酸序列。
进一步，所述单克隆抗体的重链可变区具有SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
优选地，所述单克隆抗体的重链可变区具有SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
进一步，所述单克隆抗体的重链具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链具有SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
优选地，所述单克隆抗体的重链具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链具有SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
包括优选抗体氨基酸序列的保守序列变体的抗体也包括在本发明的范围之内。保守氨基酸序列变体包括不显著改变本发明的单克隆抗体结合性质的氨基酸序列的修饰，如源于本领域熟知的相似氨基酸替代的变体，氨基酸的缺失、增加导致的变体。
本发明的单克隆抗体还包括人源与非人源抗体，以及具有与上述单克隆抗体相同功能或改造及优化的一切抗体。
进一步，所述单克隆抗体的抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链抗体。
Fab是指含有一条轻链的可变区和恒定区和一条重链的可变区和恒定区经二硫键结合起来的抗体分子的一部分。
Fab’是指包含了部分铰链区的Fab片段。
F(ab’)2指的是Fab’的二聚体。
Fv指的是含有抗体重链可变区、轻链可变区并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。
单链抗体指的是由轻链可变区与重链可变区直接相连或通过一个肽链连接而成的工程抗体。
本发明的公开的单克隆抗体可以在重链和轻链可变区包含一个或多个糖基化位点，如本领域内熟知的，在可变区中存在的一个或多个糖基化位点可以导致增强的抗体免疫原性，或者由于改变了抗原结合而改变抗体的药物动力学。
本发明的单克隆抗体可以被设计为在Fc区域内包含修改，通常是改变抗体的1个或多个功能特性，如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗原依赖的细胞毒性。此外，本发明的抗体可以被化学修饰(如，可以将一个或多个化学基团连接于抗体)，或被修饰以改变其糖基化，从而再改变抗体的一个或多个功能特性。
本发明的单克隆抗体可以被设计的另一个修饰是聚乙二醇化。抗体可被聚乙二醇化，从而，例如，增加抗体的生物(如血清)半衰期。为了使抗体聚乙二醇化，该抗体或其片段通常在适合于一个或多个聚乙二醇(PEG)基团连接到该抗体或抗体片段的条件下，与PEG反应，如聚乙二醇的活性酯或醛衍生物。优选地，该聚乙二醇化是通过与活性的PEG分子(或类似的活性水溶性聚合物)进行酰化反应或烷基化反应而实现。
本发明还提供了编码前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子，所述核酸分子包括编码单克隆抗体轻链可变区的核苷酸序列，编码单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列，编码单克隆抗体重链的核苷酸序列，或编码单克隆抗体轻链的核苷酸序列；其中，编码抗体重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示或与其具有至少80％同源性；编码抗体轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示或与其具有至少80％同源性；编码单克隆抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示或与其具有至少80％同源性，编码单克隆抗体轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示或与其具有至少80％同源性。
优选地，编码抗体重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；编码抗体轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；编码单克隆抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示，编码单克隆抗体轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
本发明的编码前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子包括具有上述优选的核苷酸序列的保守核苷酸序列变体的核酸分子。所谓的保守核苷酸序列变体源于遗传密码简并和沉默的变体，核苷酸的替代、缺失和增加也包含在内。
本发明还提供了一种表达载体，所述表达载体包含前面所述的核酸分子，此外，还包括与所述核酸分子序列操作性相连的表达调控序列。
本发明中“载体”一词指的是，可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。举例来说，载体包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。
本发明还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞内含有前面所述的核酸分子或前面所述的表达载体。
本发明中“宿主细胞”一词指的是导入核酸分子或载体的细胞，包括如下许多细胞类型，如大肠杆菌或枯草菌等原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等昆虫细胞，或者如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa细胞，BHK细胞，HEK293细胞或人细胞的动物细胞。
在本发明的具体实施方案中，所述宿主细胞是CHO细胞。
本发明还提供了一种利用前面所述的宿主细胞产生抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在合适的条件下培养前面所述的宿主细胞并回收所述抗体。
本发明还提供了一种通过上述方法产生的抗体或抗原结合片段。
本发明还提供了一种检测产品或诊断产品，所述检测产品或诊断产品包括本发明前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
所述检测产品或诊断产品包括但不限于检测试剂、试剂盒、芯片或试纸。凡是能够检测出AXL表达量的检测产品或诊断产品均包括在本发明的范围之内。
本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的本发明的前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
进一步，所述药物组合物还包括可药用载体或稀释剂。可以用任何适当的药用载体施用根据本发明的药物组合物用于治疗。
用于肠胃外给药和局部给药时，本发明的药物组合物包括无菌水或非水溶剂、悬液和乳剂。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油、鱼油、和可注射的有机酯。水性载体包括水、水-乙醇溶液，其中包括盐和缓冲的一般肠胃外载体，其包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖溶液、葡萄糖加氯化钠溶液、含有乳糖的林格氏液、或非挥发性油。静脉载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，如那些基于林格氏葡萄糖等的电解质补充剂。组合物可能包括其它赋形剂，如稳定化试剂或防腐剂。实用的稳定赋形剂包括表面活性剂(聚山梨酯20&80、泊咯沙姆407)、聚合物(聚乙二醇，聚乙烯吡咯酮)、糖类(蔗糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖)、醇(山梨醇，甘油丙二醇，乙二醇)、适当的蛋白质(白蛋白)、合适的氨基酸(甘氨酸，谷氨酸)、脂肪酸(乙醇胺)、抗氧化剂(抗坏血酸，半胱氨酸等)、螯合剂(EDTA盐类、组氨酸、天门冬氨酸)或金属离子(钙、镍、镁、锰)。有用的防腐剂有苯甲醇、氯代丁醇、苯扎氯铵，也可使用对羟基苯甲酸酯类。
可以以浓缩的形式或者以粉末的形式以根据需要重构提供根据本发明的药物组合物。这样的粉剂可以使用上述赋形剂。在冷冻干燥的情况下，某些冷冻保护剂是优选的，其包括聚合物(聚乙烯吡咯酮、聚乙二醇、葡聚糖)、糖(蔗糖、葡萄糖、乳糖)、氨基酸(甘氨酸、精氨酸、谷氨酸)和白蛋白。
本发明还提供了一种非诊断目的的检测AXL蛋白表达水平的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)提取含有AXL蛋白的样品；
(2)将步骤(1)获取的样品与前面所述的特异性结合AXL蛋白的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；
(3)检测样品与抗体或其抗原结合片段的免疫反应。
本发明还提供了一种前面所述的单克隆抗体的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)将用哺乳动物细胞-中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1表达的人AXL蛋白，人AXL蛋白为人AXL蛋白胞外段-人IgG1Fc段融合蛋白，命名为AXL-Fc；
(2)常规免疫Balb/c小鼠。在第0、14和28天，在弗氏完全佐剂(第一次注射)或弗氏不完全佐剂(第二和第三次注射)存在下，用可溶性AXL-Fc对Balb/c小鼠进行皮下注射；
(3)使用常规的杂交瘤技术方案，将来自于小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。将细胞在含有HAT培养基的板中培养用于杂交瘤选择。
(4)在12天后，收获上清液，并通过直接酶联免疫吸附测定法筛选AXL结合活性。将阳性克隆通过有限稀释法进行第二轮亚克隆，阳性克隆细胞进行扩增用于抗体的大规模体外生产；条件化的上清液通过蛋白G亲和层析进行纯化获得前面所述的单克隆抗体。
本发明还提供了一种前面所述的单克隆抗体的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)将前面所述的单克隆抗体的可变区基因克隆入含有人IgG恒定区基因的真核表达载体pCMV-163中，构建全抗体表达载体；
(2)将步骤(1)获得的表达载体转染至CHO细胞中进行表达；
(3)收集含有目的蛋白的细胞培养上清，经过ELISA试验检测上清中抗体的含量，利用常规的Protein A亲和纯化目标抗体。
本发明还提供了前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备检测AXL蛋白表达量的产品或诊断以AXL蛋白过表达为表征的疾病的产品中的应用。
进一步，所述以AXL蛋白过表达为表征的疾病包括肿瘤、纤维化或肝硬化。优选地，所述肿瘤是肝细胞癌。
所述检测产品或诊断产品包括但不限于检测试剂、试剂盒、芯片或试纸。
本发明还提供了前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备预防或者治疗由AXL蛋白过表达引起的疾病的药物制剂中的应用。
进一步，所述由AXL蛋白过表达引起的疾病包括肿瘤，或肿瘤耐药性。
更进一步，由AXL蛋白过表达引起的肿瘤包括但不限于乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、食管癌、慢性髓细胞白血病(CML)、急性髓细胞白血病(AML)、骨肉瘤、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌等。
更进一步，由AXL蛋白过表达引起的肿瘤耐药性包括肺癌、乳腺癌、食道癌、胃肠道间质细胞瘤和急性粒细胞白血病等肿瘤的耐药性。
本发明前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段可以以化学方法或者通过基因工程与其他因子缀合。这些因子提供将抗体靶向所需功能位点的作用或者为抗体提高或提供其他性能。
根据本发明的单克隆抗体可以以化学方法或者通过基因工程标记，以提供可检测的抗体。
本发明的“治疗”意在包括为受治疗者施用特异性结合AXL的单克隆抗体，其目的包括改善、治疗AXL过表达导致的疾病。
本发明的“治疗有效量”是指对AXL过表达介导事件的有害影响至少有所改善的水平。本领域技术人员能很容易地确定本发明的单克隆抗体的给药量和方案。
本发明的“AXL”与“AXL蛋白”通用。
本发明的优点和有益效果：
本发明提供了一种新的特异性结合AXL的单克隆抗体，该抗体具有亲和力高，无副作用，成本低廉，成分清晰，实现生产标准化，质量控制简单等竞争优势。
附图说明
图1显示利用ELISA检测3D3抗体与抗原AXL-Fc的结合情况；
图2显示真核表达载体pCMV-163的物理图谱；
图3显示利用ELISA检测C3D3抗体与抗原AXL-Fc的结合情况；
图4显示利用ELISA检测C3D3抗体与抗原AXL的结合情况；
图5显示利用流式分析技术检测C3D3抗体与A549细胞表面AXL的结合情况。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1杂交瘤技术制备特异性结合AXL的单克隆抗体
将用哺乳动物细胞-中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1(CCL-61TM)表达的人AXL蛋白(人AXL蛋白胞外段-人IgG1Fc段融合蛋白，命名为AXL-Fc，其中AXL的序列信息参考NP_068713，人IgG1Fc片段的序列参考AEO21920.1)常规免疫Balb/c小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)。在第0、14和28天，在弗氏完全佐剂(第一次注射)或弗氏不完全佐剂(第二和第三次注射)存在下，用100μg可溶性AXL-Fc对Balb/c小鼠进行皮下注射。使用常规的杂交瘤技术方案(Salhi等，Biochem.J.2004)，将来自于小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0(ATCC)融合。将细胞在含有HAT培养基的板中培养(每个孔105个细胞)用于杂交瘤选择。在12天后，收获上清液，并通过直接酶联免疫吸附测定法(ELISA)筛选AXL结合活性。将阳性克隆通过有限稀释法进行第二轮亚克隆，阳性克隆细胞进行扩增用于抗体的大规模体外生产；条件化的上清液通过蛋白G亲和层析进行纯化，获得的单克隆抗体命名为3D3抗体。
实施例2单克隆抗体识别靶抗原
将靶抗原AXL-Fc包被ELISA板条，1μg/ml，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的3D3抗体，37℃反应1小时；PBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人Fab二抗(GoatAnti-human IgG(Fab')2HRP，Abcam)，37℃反应30分钟；PBST重复洗板5遍，在吸水纸上尽量拍干残留液滴；每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1.5min；每孔加入100μl 2N H2SO4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析抗体与靶抗原AXL-Fc结合能力。3D3抗体能特异性识别靶抗原AXL-Fc；该识别活性呈显著的剂量依赖性，结果如图1所示。
实施例3单克隆抗体基因调取
从实施例1获得的杂交瘤细胞克隆小鼠抗AXL抗体可变结构域。使用RNA提取试剂盒TRIzol Reagent(Life technologies)制备RNA。按照厂商的说明书使用反转录试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)制备编码抗体基因的cDNA。利用表1引物，通过PCR扩增抗体可变区基因，克隆T-easy载体，测序获得抗体可变区基因。所获得的可变区基因经http://www.abysis.org/在线分析，获得的抗体克隆中，重链可变区序列如SEQ ID NO:7所示，其CDR1、CDR2、CDR3区氨基酸序列依次为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；轻链可变区序列为SEQ ID NO:8，其CDR1、CDR2、CDR3区氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6。编码所述重链可变区的核酸序列如SEQ ID NO:9所示；编码轻链可变区的核酸序列如SEQ ID NO:10所示。
表1单克隆抗体基因调取引物
实施例4嵌合抗体制备
将获得的3D3克隆可变区基因克隆入含有人IgG恒定区基因的真核表达载体pCMV-163中，构建全抗体表达载体，其物理图谱如图2所示(真核表达载体pCMV-163的各个组成成分均为本领域已知的成分，按照所示次序重组而成)。全抗体称为C3D3(Chimeric 3D3)抗体(轻链氨基酸序列为SEQ ID NO:11，核苷酸序列为SEQ ID NO:12；重链氨基酸序列为SEQ IDNO:13，核苷酸序列SEQID NO:14)。将获得的C3D3真核表达载体，通过使用ExpiCHOTMExpression System试剂盒(Thermo Fisher Scientific)，转染至CHO-S细胞中进行表达，收集含有目的蛋白的细胞培养上清，经过ELISA试验利用羊抗人IgG(Affinity PurifiedAntibody To Human IgG(H+L)，KPL公司)以及辣根酶标记的羊抗人IgG(Goat AntihumanIgG HRP，Thermo Fisher Scientific)进行双夹心ELISA法检测上清中抗体的含量，利用常规的Protein A亲和纯化目标抗体。
实施例5嵌合抗体结合靶抗原
将靶抗原AXL-Fc包被ELISA板条，1μg/ml，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的C3D3抗体，37℃反应1小时；PBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人Fab二抗(GoatAnti-human IgG(Fab')2HRP，Abcam)，37℃反应30分钟；PBST重复洗板5遍，在吸水纸上尽量拍干残留液滴；每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1.5min；每孔加入100μl 2N H2SO4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析抗体与靶抗原AXL-Fc结合能力。C3D3抗体能特异性识别靶抗原AXL-Fc；该识别活性呈显著的剂量依赖性，结果如图3所示。
实施例6嵌合抗体特异性识别靶抗原
将Milk(牛奶)(北京博迈德生物技术有限公司)、BSA(BOVOGEN)、CD19(北京义翘神州生物技术有限公司)、TROP2(北京义翘神州生物技术有限公司)、BCMA(北京义翘神州生物技术有限公司)、CD47(北京麦格珀尔生物科技有限公司)、CD38(北京义翘神州生物技术有限公司)、Gas6(R&D)等各蛋白以及AXL(ACRO Biosystems)分别包被ELISA板条，1μg/ml，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入C3D3抗体，37℃反应1小时；PBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG二抗(Goat Anti human IgG HRP，Thermo Fisher Scientific)，室温反应30分钟；PBST重复洗板5遍，在吸水纸上尽量拍干残留液滴；每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1.5min；每孔加入100μl 2N H2SO4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析抗体与蛋白结合能力。
结果显示，C3D3抗体均能特异性识别靶抗原AXL，但与Milk(牛奶)、BSA、CD19、TROP2、BCMA、CD47、CD38、Gas6等蛋白均无显著的结合反应；结果如图4所示。
实施例7嵌合抗体特异性识别细胞表面抗原
利用流式分析技术检测A549细胞表面AXL与C3D3的结合。收集对数生长期A549细胞，调整细胞密度到5×106cell/mL，冰上预冷。含2％FBS预冷的生理盐水稀释C3D3抗体至20μg/ml。取100μl细胞，加入等体积前述稀释C3D3抗体，4℃避光反应30min。结束后，用含2％FBS预冷的生理盐水洗两次(6000rpm，45s)。用含2％FBS预冷的生理盐水按1：5稀释PE标记的小鼠抗人IgG二抗(PE Mouse Anti-Human IgG，BD Pharmingen)，取100μL重悬细胞，4℃避光反应30min。反应结束后，用含2％FBS预冷的生理盐水洗两次(6000rpm，45s)。用400μl 1％多聚甲醛重悬细胞。流式细胞仪(BD Calibur)分析抗体与细胞表面抗原的结合能力。
结果显示，C3D3抗体能特异性识别A549细胞表面AXL，结果如图5所示。
虽然以上仅描述了本发明的具体实施方式范例，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，但这些变更或修改均落入本发明的保护范围。
序列表
<110> 杭州尚健生物技术有限公司
<120> 一种特异性结合AXL的单克隆抗体
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Mus musculus)
<400> 1
Arg Tyr Trp Met Ser
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Glu Ile Asn Pro Ala Gly Ser Thr Ile Asn Gln Thr Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Leu Ser Val Val Phe Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Pro Thr
1 5
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Arg Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ala Gly Ser Thr Ile Asn Gln Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Leu Ser Val Val Phe Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Ala Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctgaaggatc cctgaaactc 60
tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagg agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120
ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag ctggcagtac gataaaccaa 180
acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtac 240
ctgcagatga gcaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtgt aagactttcg 300
gtagtcttct attactatgg tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 10
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gagctccaga tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atctcctgca gagccagtga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gaactggttc 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa ccaaggatcc 180
ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240
cctatggagg aggatgatgc tgcaatgtat ttctgtcagc agagtaagga ggttcctccg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 11
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Ala Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 12
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
gagctccaga tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atctcctgca gagccagtga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gaactggttc 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa ccaaggatcc 180
ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240
cctatggagg aggatgatgc tgcaatgtat ttctgtcagc agagtaagga ggttcctccg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657
<210> 13
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Arg Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ala Gly Ser Thr Ile Asn Gln Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Leu Ser Val Val Phe Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 14
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctgaaggatc cctgaaactc 60
tcctgtgtag cctcaggatt cgattttagg agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120
ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag ctggcagtac gataaaccaa 180
acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtac 240
ctgcagatga gcaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtgt aagactttcg 300
gtagtcttct attactatgg tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tcagctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaatga 1356

Claims (10)

1.一种特异性结合AXL蛋白的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR1、轻链CDR2、轻链CDR3、重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3；
重链CDR1具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
重链CDR2具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；
重链CDR3具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
轻链CDR1具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
轻链CDR2具有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；
轻链CDR3具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链可变区具有SEQID NO:8所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体的重链具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链具有SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
4.编码权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括编码单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列，编码单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列，编码单克隆抗体重链的核苷酸序列，或编码单克隆抗体轻链的核苷酸序列；其中，编码抗体重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；编码抗体轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；编码单克隆抗体重链的核苷酸序列如SEQ IDNO:14所示，编码单克隆抗体轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求4或5所述的核酸分子。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求4或5所述的核酸分子或权利要求6所述的表达载体。
8.一种药物组合物、检测产品或诊断产品，其特征在于，所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段；所述检测产品或所述诊断产品包括权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
9.权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备检测AXL蛋白表达量的产品或诊断以AXL蛋白过表达为表征的疾病的产品中的应用；优选地，以AXL蛋白过表达为表征的疾病包括肿瘤、纤维化或肝硬化。
10.权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备预防或者治疗由AXL蛋白过表达引起的疾病的药物制剂中的应用；优选地，所述由AXL蛋白过表达引起的疾病包括肿瘤，或肿瘤耐药性。
CN201711261529.9A 2017-12-04 2017-12-04 一种特异性结合axl的单克隆抗体 Active CN107759691B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711261529.9A CN107759691B (zh) 2017-12-04 2017-12-04 一种特异性结合axl的单克隆抗体

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711261529.9A CN107759691B (zh) 2017-12-04 2017-12-04 一种特异性结合axl的单克隆抗体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107759691A true CN107759691A (zh) 2018-03-06
CN107759691B CN107759691B (zh) 2018-09-25

Family

ID=61276630

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711261529.9A Active CN107759691B (zh) 2017-12-04 2017-12-04 一种特异性结合axl的单克隆抗体

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107759691B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114539403A (zh) * 2020-11-27 2022-05-27 缔码生物科技(武汉)有限公司 靶向人bcma蛋白的兔重组单克隆抗体及应用
WO2022261846A1 (zh) * 2021-06-16 2022-12-22 上海鑫湾生物科技有限公司 靶向axl蛋白的抗体及其抗原结合片段、其制备方法和应用
CN116715774A (zh) * 2023-05-12 2023-09-08 武汉爱博泰克生物科技有限公司 针对人axl的兔单克隆抗体及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101858917A (zh) * 2010-06-02 2010-10-13 成都创宜生物科技有限公司 以Axl为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及制备方法
WO2017180842A1 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Bioatla, Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101858917A (zh) * 2010-06-02 2010-10-13 成都创宜生物科技有限公司 以Axl为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及制备方法
WO2017180842A1 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Bioatla, Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114539403A (zh) * 2020-11-27 2022-05-27 缔码生物科技(武汉)有限公司 靶向人bcma蛋白的兔重组单克隆抗体及应用
CN114539403B (zh) * 2020-11-27 2023-07-14 缔码生物科技(武汉)有限公司 靶向人bcma蛋白的兔重组单克隆抗体及应用
WO2022261846A1 (zh) * 2021-06-16 2022-12-22 上海鑫湾生物科技有限公司 靶向axl蛋白的抗体及其抗原结合片段、其制备方法和应用
CN116715774A (zh) * 2023-05-12 2023-09-08 武汉爱博泰克生物科技有限公司 针对人axl的兔单克隆抗体及其制备方法和应用
CN116715774B (zh) * 2023-05-12 2023-11-24 武汉爱博泰克生物科技有限公司 针对人axl的兔单克隆抗体及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107759691B (zh) 2018-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110891650B (zh) 制导和导航控制蛋白及其制造和使用方法
CN110831973B (zh) 多特异性抗体及其制备和使用方法
TWI374032B (en) Anti-flt3 antibodies
CN108623689B (zh) 新型重组双功能融合蛋白及其制备方法和用途
CN101001873B (zh) Fc区变体
KR101238970B1 (ko) 인간 ｃｄ22 특이성 항체 및 이들의 치료학적, 진단학적 사용
KR20180128028A (ko) 항-il-33 항체, 그의 조성물, 방법 및 용도
CN113939536B (zh) Tigit和pd-1/tigit-结合分子
CN113121698B (zh) 抗pd-l1抗体及其用途
CN107998388A (zh) 抗α4β7抗体的制剂
CN109776683A (zh) 一种双特异性抗体及其制备方法与应用
CN107759691B (zh) 一种特异性结合axl的单克隆抗体
JP2019525768A (ja) Ｂａｆｆ−ｒ抗体及びその使用
CN110746503B (zh) 抗H7N9全人源单克隆抗体hIg311及其制备方法与应用
US8460673B2 (en) Fusion protein inhibiting osteoclast formation, preparation method and medicine compositions thereof
CN111434681B (zh) 抗h7n9全人源单克隆抗体6j15及其制备方法与应用
CN111434685B (zh) 抗h7n9全人源单克隆抗体9i17及其制备方法与应用
CN111434684B (zh) 抗h7n9全人源单克隆抗体5q2及其制备方法与应用
CN111320686B (zh) 抗h7n9全人源单克隆抗体2g3及其制备方法与应用
KR20220032076A (ko) Tnf-알파 및 il-1베타에 대한 이중특이적 항체 및 이의 용도
CN114901698A (zh) 抗肿瘤免疫抑制因子的工程化单克隆抗体的组合物和用途
CN114395046B (zh) 一种抗pd-1的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌株和应用
RU2820350C2 (ru) Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с BCMA, и его применение
RU2798285C2 (ru) Анти-cdh6-антитело и конъюгат анти-cdh6-антитело-лекарственное средство
CN115397854A (zh) 抗NKp30抗体及使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20181019

Address after: 101111 Beijing Beijing economic and Technological Development Zone, Chuang six Street 88 hospital 8 Building 1 unit 702 room.

Patentee after: Shang Jian monoclonal antibody (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.

Address before: 310002 -005, 3 floor, Atlas tower, 1568 South Ring Road, Binjiang District, Hangzhou, Zhejiang.

Patentee before: HANGZHOU SHANGJIAN BIOTECHNOLOGY CO., LTD.