CN107711518B

CN107711518B - 大叶榕组织培养快速繁殖的培养基及快速繁殖方法

Info

Publication number: CN107711518B
Application number: CN201711252752.7A
Authority: CN
Inventors: 黎东均; 詹启成; 蒋雄辉; 左文军; 陈小鹏
Original assignee: Guangzhou Budup Horticulture Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Budup Horticulture Co Ltd
Priority date: 2017-12-01
Filing date: 2017-12-01
Publication date: 2018-12-11
Anticipated expiration: 2037-12-01
Also published as: CN107711518A

Abstract

本发明公开了一种大叶榕组织培养快速繁殖的培养基及快速繁殖方法，以大叶榕的茎尖为组织培养的外植体，经过外植体消毒处理、诱导出芽、继代培养、生根培养、驯化移栽，可以获得大量的保持母本优良性状的大叶榕幼苗。本发明的有益果是能够不受季节影响一次性繁殖大量大叶榕幼苗，满足市场对大叶榕的旺盛需求。

Description

大叶榕组织培养快速繁殖的培养基及快速繁殖方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体地涉及大叶榕组织培养，更具体涉及大叶榕组织培养快速繁殖的培养基及快速繁殖方法。

背景技术

桑科榕属植物是相当古老的一属，依据分子钟推测其至少存在60-80万年，现存主要物种的辐射适应已经发生在最近的20到40万年。本属约1000种，主要分布在热带、亚热带地区，中国约有98种。

榕属植物常被统称为榕树，包括乔木、灌木和藤本。其中，榕属乔木，多喜阳和温热气候，为强阳性树种，根系庞大，耐热、怕旱、耐湿、耐瘠、耐酸、耐阴、抗污染、耐修剪、易移植、寿命长。本属植物多为常绿树，叶色苍翠，郁郁葱葱，遮阴效果好。树性强健，绿荫蔽天，为低维护性景观植物，可作行道树、园景树、防火树、防风树、绿篱树或修剪造型，应用于庭园、公园、游乐区、庙宇等，可单植、列植、群植。部分品种叶片艳丽奇特，具有很高的观赏价值。

当前大叶榕属植物的繁殖方式主要是扦插法，但是，扦插繁殖慢，受外界环境影响大，且成功率低。

例如，陈广平对同是桑科大叶榕属的黄葛树(Ficusvirens)进行了不同季节、不同扦插规格、不同生根剂处理、不同光照等对生根率影响的对比扦插实验，发现空气、温度、光照及扦插基质对生根率有较大影响，通过实验，陈广平获得的生根率最高为86.2％。

再例如，广西农科院生物技术研究所研究了黄葛树的非试管快速繁殖技术，通过智能化控制苗床温度和湿度，消除了外界环境对扦插植株生根的影响，但是扦插生根率最高也只是达到了56.7％。

又例如，中国专利公布CN104206146A针对大叶榕扦插繁殖发明了一种大叶榕轴向推进式扦插法：将待扦插的大叶榕枝下端削成30-45°的锥尖，在大叶榕巨枝上端带上钢帽，将大叶榕巨枝下端的锥尖置于杆插点，锤击钢帽的上顶，使大叶榕巨枝插入土中。其虽然提供一种适用于扦插繁殖的快速扦插法，但是依旧无法克服扦插繁殖法单代繁殖数量少、受外界环境影响大、扦插成功率低的问题。

本发明的大叶榕Ficusumbellata别名爱心榕、伞榕，为桑科榕属乔木，高可达10米，树皮光滑呈浅灰色，枝干有较强的直立单干性，少分枝，且枝条有一定的柔韧性，单叶互生，薄纸质，叶片巨大呈心形，叶径可达30厘米，叶脉清晰，叶缘微波浪。因此，大叶榕是优良的园林绿化树种，同时可开发成常绿室内观叶植物中大型盆栽。虽然市场需求量大，然而目前国内并未见大批量繁殖生产大叶榕Ficusumbellata。。

一方面，现有技术中未见有专门针对大叶榕Ficusumbellata这一种的快速大规模繁殖培养方法；另一方面，针对大叶榕树其它种(例如Ficusvirens、Ficusaltissima等)的培养繁殖方式用于大叶榕Ficusumbellata的培养繁殖时其成功率过低。

植物组织培养是近十年来发展起来的一项无性繁殖新技术，该技术主要利用了植物细胞的全能性。广义的植物组织培养是指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。

中国专利公布CN103518625A对同属大叶榕属的琴叶榕(Ficuslyrata)进行了组织培养，经过愈伤组织诱导、愈伤组织增殖、不定芽分化、生根培养、试管苗移栽获得了生根率为95％，移栽成活率为97％的实验效果。但是其针对的并非本发明的大叶榕Ficusumbellata，将其技术用于本发明的大叶榕Ficusumbellata时，生根率和移栽成活率均不足70％，并不能达到其声称的对琴叶榕Ficuslyrata的同等繁殖效果。同时其经过诱导愈伤组织获得幼苗的方法，在实验过程中容易产生变异，不利于保持母本的优良性状。

因此，需要开发出一种能够快速大规模生产繁殖大叶榕Ficusumbellata的技术方法。

发明内容

本发明提供了一种适合大叶榕的一次性繁殖数量多、变异性小、受环境影响小、生根率高的组织培养快速繁殖的培养基及快速繁殖方法，以期待充分满足市场需求，并获得良好的经济效益和社会效益。

解释说明：

1、本发明中出现在培养基之后的“+”(例如MS培养基+6-BA)表示该培养基(例如上述MS培养基)包含、包括或含有该“+”之后所列举的一种或多种物质(例如上述6-BA)；例如“MS培养基+6-BA”指该MS培养基包含、包括或含有6-BA。本领域技术人员应当理解的是，本发明中的“MS培养基+6-BA+蔗糖+卡拉胶”指该MS培养基包含、包括或含有6-BA、蔗糖和卡拉胶。

2、在本发明中，6-BA是细胞分裂素6-卞氨基腺嘌呤的简称。

3、在本发明中，NAA是生长素类似物萘乙酸的简称。

4、在本发明中，“0.1％的HgCl₂”中的0.1％是指质量体积百分比。

本发明提供如下技术方案：

本发明公开了一种大叶榕Ficusumbellata组织培养快速繁殖的培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，所述的诱导培养基为：MS培养基+0.1-2.0mg/L的6-BA；所述的增殖培养基为：MS培养基+0.5-6.0mg/L的6-BA+20-40g/L的蔗糖+4.5-7.5g/L的卡拉胶，所述的增殖培养基的pH为5.5-6.8；所述的生根培养基为：MS培养基+0-1.0mg/L的NAA。

具体地：

所述的诱导培养基中，6-BA的浓度优选为0.1-0.5mg/L，更优选为0.3-0.5mg/L。

所述的增殖培养基中，6-BA的浓度优选为2.0-5.5mg/L，更优选为4.0-5.0mg/L。

所述的增殖培养基中，蔗糖的浓度优选为25-35g/L，更优选为28-32g/L。

所述的增殖培养基中，卡拉胶的浓度优选为5.0-7.0g/L，更优选为5.3-6.0g/L。

所述的生根培养基中，NAA的浓度优选为0-0.3mg/L，更优选为0-0.1mg/L。

本发明另外公开了大叶榕组织培养快速繁殖方法，该方法以户外大叶榕乔木的茎尖为外植体，进行大叶榕组织培养快速繁殖，具体包括以下步骤：

(1)外植体消毒处理；

(2)诱导出芽：将经过消毒处理的外植体，接种到诱导培养基上进行出芽诱导，无菌外植体长出侧芽后，将侧芽切下接种到诱导培养进行丛芽诱导，得到丛芽；

(3)继代培养：将步骤(2)培养得到的丛芽切成小芽，接种到增殖培养基上进行继代扩繁培养得到增殖苗；

(4)生根培养：将步骤(3)得到的增殖苗切成小株接种到生根培养基上进行生根培养，得到生根幼苗；

(5)驯化移栽：将步骤(4)得到的生根幼苗移出组培室进行驯化移栽，即得。

优选的，所述步骤(1)中外植体消毒处理的方法为：摘取户外大叶榕的茎尖，置于干净的碟子中晾放至茎尖和茎段稍微变软，用酒精消毒过的手术刀环割掉茎尖上的苞叶，再用酒精棉轻轻擦拭外植体表面的灰尘，再置于无菌玻璃瓶中，在超净工作台上用75％酒精和0.1％HgCl₂消毒。酒精消毒20-50s，0.1％HgCl₂消毒20-40min，无菌水冲洗4～5次，切成带1～2个节的小段。

优选的，所述步骤(2)中，待诱导的侧芽长到2cm-6cm后，切下接种到诱导培养基上进行丛芽诱导。

优选的，所述诱导出芽、继代培养和生根培养的培养条件均为：培养温度23-27℃，光照时间12h/d，光照强度1000～3000lx。

优选的，所述步骤(5)生根幼苗的驯化移栽：将生根幼苗取出放于平筛中，在清水下冲洗干净附着在根上的培养基，将洗净的幼苗浸泡于600-1400倍的甲基托布津药液10-50s，之后将幼苗移栽至拌有600-1400倍甲基托布津药液的基质中，移栽完成后将生根幼苗置于具有水帘风机温室中养护。

优选的，所述步骤(5)中，待生根苗生根率达到95％以上、根长到1cm以上、形态健壮时，再进行驯化移栽。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)在植物品种选择上，虽然现有技术中有关于黄葛树、琴叶榕等桑科榕属植物繁殖的记载，但是鲜有关于大叶榕Ficusumbellata人工繁殖的相关记录。本发明记载的方法，实现了大叶榕Ficusumbellata的快速大量繁殖，能够满足市场对大叶榕的大量需求。

(2)在快速繁殖的方法上，桑科榕属植物常采用扦插法进行繁殖，但是，扦插法繁殖速度慢，受外界环境影响大，生根成活率低。

本发明通过对大叶榕Ficusumbellata进行组织培养，经过继代培养一次性获得了大量的植株幼苗，提高了大叶榕的繁殖效率。

本发明采用的植物组织培养便于人为控制培养条件，避免了环境对培养生根率的影响。

在本发明的实验条件下，经过15d的生根培养，生根率即可达到100％。

(3)在外植体选择上，本发明采用大叶榕Ficusumbellata的茎尖直接诱导侧芽进而诱导丛芽，无愈伤组织诱导及愈伤组织分化诱导，可极大减少植物组织培养过程中后代变异的概率，有利于保持母体的优良形状。

(4)在培养基选择上，在增殖培养基中加入蔗糖，有利于提高增殖培养的增殖倍数和生根培养的生根率；选用无添加的MS培养基进行生根培养，有利于提高生根培养的生根速度和生根率。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图说明：

图1大叶榕组织培养快速繁殖的不同阶段，其中，A是诱导出芽阶段，B是继代培养阶段，C是生根培养阶段，D是驯化炼苗阶段，E是移栽后；

图2不同培养基上大叶榕生根培养的结果，其中，从左到右依次为实施例25到实施例30的生根状况；

图3不同生根培养基下大叶榕在不同时间的生根率，处理1

到处6依次对应实施例25到实施例30。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例和对比例所采用的大叶榕茎尖外植体取自种植于佛山市三水阳特园艺有限公司的大叶榕乔木Ficusumbellata。

本发明中，AC是活性炭的简称。

本发明中，CPPU是氯吡苯脲的简称。

本发明中，IBA是人工合成生长素乙哚丁酸的简称。

本发明中，1/2 MS培养基是指将MS培养基中硝酸钾和硝酸铵的量减半。

本发明中用到的MS培养基的配方为：

基础实施例

一种大叶榕组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：

(1)外植体消毒：摘取户外乔木大叶榕的茎尖，置于干净的碟子中晾放至茎尖和茎段稍微变软，用酒精消毒过的手术刀环割掉茎尖上的苞叶，再用酒精棉轻轻擦拭外植体表面的灰尘，再置于无菌玻璃瓶中，在超净工作台上用75％酒精和0.1％HgCl₂消毒。用75％酒精消毒20-50s，再用0.1％HgCl₂消毒20-40min，之后无菌水冲洗4～5次，最后切成带1～2个节的小段；

(2)诱导出芽：将消毒后的外植体接种至诱导培养基上进行出芽诱导，无菌外植体长出侧芽，将长到2-6cm的侧芽切下接种于新鲜的诱导培养基中继续诱导出丛芽，如图1中的A所示。培养温度23-27℃，光照时间12h/d，光照强度1000～3000lx；

(3)继代培养：将1～2代的丛生芽切成一个个小芽，接种于增殖培养基上进行扩繁，如图1中的B所示。每种培养基配制15瓶，每瓶接种8个单芽增殖，培养温度23-27℃，光照时间12h/d，光照强度1000～3000lx；

(4)生根培养：将步骤(3)得到的增殖苗切成小株接种到生根培养基上进行生根培养，得到生根幼苗，如图1中的C所示，每种培养基处理5瓶，每瓶接种12株，培养温度23-27℃，光照时间12h/d，光照强度1000～3000lx。

(5)驯化移栽：将步骤(4)得到的生根率达到95％以上、根长1cm以上、形态健壮的生根幼苗进行驯化炼苗，如图1中的D所示。将炼苗后的幼苗取出放于平筛中，在清水下冲洗干净附着在根上的培养基，将洗净的幼苗浸泡于600-1400倍的甲基托布津药液10-50s，之后将幼苗移栽至拌有600-1400倍甲基托布津药液的基质中，移栽完成后将生根幼苗置于具有水帘风机温室中养护，如图1中的E所示。

具体通过调整基础实施例中的具体实验参数，得到具体实施例1-37，并检验其效果，具体如表1-9所示。

以下表格中的“Y”指使用此培养基，“N”指未使用此培养基。

根据消毒时间的不同，设置了表1和表2中的实施例1-8，表2中的实施例显示：0.1％HgCl₂消毒时间同为30min的情况下，实施例5和实施例7相比较，75％酒精消毒时间为30s时，外植体污染率相对比较低，但这种情况下相对较低的污染率仍然高达75％；实施例6和实施例8比较，75％酒精消毒时间同为40s的情况下，0.1％HgCl₂消毒时间为35min时，外植体的污染率较低，此较低污染率数值为66.67％。综上可知，实施例8中先用75％酒精消毒40s，再用0.1％HgCl₂消毒35min的消毒时间安排对大叶榕的消毒效果最佳。

表1

表2

根据增殖培养基和添加的激素不同，设置了表3-5中的实施例9-20。实验数据显示：芽继代培养的增殖倍数均随着6-BA的浓度和CPPU的浓度提高而稍微增加，6-BA处理的增殖倍数比CPPU处理的增殖倍数稍微大点，而经方差分析的多重比较可知，实施例13-20的增殖倍数没有显著差异。将实施例13、实施例14、实施例15和实施例16分别与实施例17、实施例18、实施例19和实施例20进行对比，发现：在MS基本培养基和1/2MS基本培养基上，当激素浓度、种类相同时，芽继代培养的增殖倍数和芽生长情况基本相同，说明MS基本培养基和1/2MS基本培养基对大叶榕增殖的影响没有差异。实施例13和实施例14中，增殖激素为6-BA，芽正常、但成苗小且少，相比于6-BA浓度为5mg/L时(实施例14)，6-BA浓度为3mg/L时(实施例13)，大叶榕增殖苗芽更小、粉末的无效愈伤更多。实施例15和实施例16中，增殖激素为CPPU，芽体呈现扭曲状态、成苗叶片畸形，且浓度越大(≧0.1mg/L)苗畸形越严重。综合来说，实施例13所用的MS培养基+5mg/L的6-BA+30g/L的蔗糖+5.5g/L的卡拉胶较适合大叶榕的芽继代培养的增殖。

表3

表4

表5

根据生根培养中激素的不同，设置了表6和表7中的实施例21-30。由表7可知，增殖苗生根培养30天后，实施例25中MS无添加时，增殖苗的生根率达到100％；添加NAA的实施例28-30中，增殖苗的生根率也均达到100％；而添加AC的实施例26-27中，增殖苗的生根率均低于100％,其中，实施例27中增殖苗生的根率仅为58％。当生根培养基中添加物为AC时，根尖及基部变黑，不利于移栽，且随着AC浓度的提高，根尖和基部变黑的程度越严重；当添加物为NAA时，根多短粗、基部膨大呈团块、苗呈玻璃化，不利于移栽，且随着NAA浓度提高情况越严重。

表6

表7

在增殖苗生根培养的过程中，实验进一步统计了不同培养基对其生根速度的影响，通过统计发现不同培养基上增殖苗生根速度的关系如下：实施例25>实施例28>实施例29>实施例30>实施例26>实施例27。从图3可以看出实施例25的生根速度最快，培养到第7天时，生根率达到63.3％，进一步培养到第15天时，生根率达到100％；其次是实施例28，第7天的生根率为50％，第15天的生根率为100％；再其次是实施例29，第7天的生根率为33.3％,第15的天生根率为100％；生根速度最慢的是实施例27，第7天的生根率为8.3％，即使培养到第15天，生根率也仅为40％。所以，不同的处理随着NAA和AC浓度的升高，生根速度越来越慢、生根周期越来越长，且用AC处理后的生根速度低于用NAA处理后的生根速度，用NAA处理后的生根速度低于不处理的生根速度。

综上可知：从生根率和生根速度两方面比较，添加AC的处理效果比添加NAA的处理效果差，MS培养基无任何添加物时，处理效果最佳。以无添加的MS作为生根培养基，大叶榕增殖苗培养到第7天的生根率为63.3％,培养到第15天的生根率为100％,进一步培养到第30天时，每株幼苗的生根数为11.4条，根长度为4.51cm。

根据增殖培养基中添加蔗糖浓度的不同设置了表8中的实施例31-34。由表8可以看出，不添加蔗糖的实施例31中，组织培养的增殖倍数和生根率均最低，添加蔗糖的实施例32-34均获得了比无添加的实施例31高的增殖倍数和生根率，这说明在增殖培养基中，添加蔗糖有利于提高组织培养的增值倍数和生根率。随着蔗糖浓度的升高，组织培养的增殖倍数和生根率呈现先上升后下降的趋势，当蔗糖浓度为30g/L时，获得最高的增殖倍数和生根率。

表8

根据培养温度的不同，设置了表9中的实施例35-37。由表9可以看出随着温度的升高，生根培养的生根率、每株的生根条数和平均根长均呈上升趋势。但是当培养温度达到25℃时，随着温度的升高植株的生根培养的生根率、每株的生根条数和平均根长均不再明显发生变化，所以选择25℃时作为实验的最佳培养温度。

表9

在上述实施例8、实施例14、实施例25、实施例33和实施例35中，大叶榕生根后移栽生活率均达到95％以上。

对比例1

于5月下旬截取和实施例8相同大叶榕植株上的健壮枝条作为扦插条，其中，选用扦插枝条的直径为10-15mm，长度为180-250mm。将扦插枝条两端锯平，然后用枝剪将其上所有的侧枝、树叶都剪去，再用自来水冲洗去插条上的污垢和灰土。将插条用1000ppm的NAA浸泡20min。以佛山市三水阳特园艺有限公司的园区天然田园沙壤土为插床，将浸泡过的插条扦插到插床上进行扦插培养，扦插期间注意水分的管理，保持土壤湿润，下雨时防止积水。处理扦插条数为100条，经过20天的培养，发现扦插枝条的生根率最高为48％，远低于实施例8中100％的生根率。

对比例2

建立智能化非试管快繁育苗苗床：在钢架拱棚内建立4个高30cm、长10m、内空宽1.2m的苗床，苗床底部整平，上面铺10cm厚的粗石作为排水层，上面再铺15cm粗砂育苗栽培基质，苗床上方安排止滴式微喷头、湿度控制仪，通过温、湿度检测头对苗床表面基质温、湿度进行检测，控制输出信号，启动或停止水泵工作，控制苗床温度在22～30℃、湿度在70％～90％范围内。

于5月下旬，在实施例8相同植株上剪取带有一叶一芽的新抽半木质化长枝进行非试管快繁技术研究。将剪取的长枝基部斜剪，顶端离芽2-3cm，将所留的叶片剪去一半。剪好的长枝在100mg/L的IBA生根液中浸泡2小时，扦插进智能化非试管快繁育苗苗床进行生根培养。

通过培养，发现对比例2中大叶榕培养的生根率仅为50％,明显低于实施例8中100％的生根率。

对比例3

选取实施例25中所用大叶榕植株上健壮带有叶柄的大叶榕叶片作为外植体。培养步骤如下：

(1)愈伤组织诱导：用流水冲洗10-15min后用洗衣粉浸泡3-4min，再用清水冲洗，取出放在超净工作台上先用75％乙醇表面消毒30s,0.1％的HgCl₂的消毒3 5min，最后用无菌水冲洗5次；将叶片切成15mm×15mm的方块，在每小块的叶片上划几个伤口，将叶片背面朝下接种到愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养。所用愈伤组织诱导培养基是MS培养基+2.0mg/L的6-BA+O.lmg/L的NAA+30g/L的蔗糖+3.2g/L的琼脂，pH调至5.8-6.0。每瓶接种4块叶片，每处理4瓶，重复3次。

(2)愈伤组织增殖：将愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基中进行增殖培养。所用愈伤组织增殖培养基为MS培养基+1.Omg/L的6-BA+O.lmg/L的NAA。

(3)不定芽分化：将愈伤组织接种于不定芽分化培养基中进行不定芽分化培养。所用培养基为：MS培养基+1.Omg/L的6-BA+O.lmg/L的NAA。

(4)生根培养：将不定芽的小苗接种到生根培养基中进行生根培养。所用培养基为：1/2MS培养基+O.lmg/L的IBA+300mg/L的AC+6.0g/L的卡拉胶+30g/L的蔗糖。该步骤的生根率为70％。

(5)试管苗移栽：炼苗1用，然后将所得试管苗取出，将培养基洗干净，栽于草炭士和珍珠岩(8:2)混合的基质中，并保持85％的湿度。移栽2周后开始长新叶，成活率仅为63％。

培养条件为接种后在25℃下，暗培养2周后在光照强度为1500～2000lx条件下培养。

该对比例3获得的生根率和移栽成活率均不足70％,远低于实施例25中100％的生根率和95％的移栽成活率。

Claims

1.一种大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖的培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其特征在于：

所述的诱导培养基为MS培养基+0.1-2.0mg/L的6-BA；

所述的增殖培养基为 MS培养基+0.5-6.0mg/L的6-BA+20-40g/L的蔗糖+4.5-7.5g/L的卡拉胶，且增殖培养基的pH值在5.5-6.8之间；

所述生根培养基为MS培养基+ 0-1.0mg/L的NAA。

2.根据权利要求1所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖的培养基，其特征在于：所述诱导培养基中6-BA的浓度为0.1-0.5mg/L。

3.根据权利要求1所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖的培养基，其特征在于：所述增殖培养基中6-BA的含量为2.0-5.5 mg/L。

4.根据权利要求1所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖的培养基，其特征在于：所述生根培养基中NAA的含量为0-0.3 mg/L。

5.一种大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖方法，其特征在于：以大叶榕的茎尖为外植体，进行大叶榕组织培养快速繁殖，具体步骤如下，

（1）外植体消毒处理；

（2）诱导出芽：将经过消毒处理的外植体，接种到诱导培养基上进行出芽诱导，无菌外植体长出侧芽后，将侧芽切下接种到诱导培养基进行丛芽诱导，得到丛芽；

（3）继代培养：将步骤（2）培养得到的丛芽切成小芽，接种到增殖培养基上进行继代扩繁培养得到增殖苗；

（4）生根培养：将步骤（3）得到的增殖苗切成小株接种到生根培养基上进行生根培养，得到生根幼苗；

（5）驯化移栽：将步骤（4）得到的生根幼苗移出组培室进行驯化移栽；

所述的诱导培养基为MS培养基+0.1-2.0mg/L的6-BA；

所述生根培养基为MS培养基+ 0-1.0mg/L的NAA。

6.根据权利要求5所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（1）中，摘取户外大叶榕的茎尖，置于干净的碟子中晾放至茎尖和茎段稍微变软，用酒精消毒过的手术刀环割掉茎尖上的苞叶，再用酒精棉轻轻擦拭外植体表面的灰尘，再置于无菌玻璃瓶中，在超净工作台上用75%酒精和0.1% HgCl₂消毒；用75%酒精消毒20-50s，再用0.1% HgCl₂消毒20-40min，之后无菌水冲洗4～5次，最后切成带1～2个节的小段。

7.根据权利要求5所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（2）中，待诱导的外植体侧芽长到2cm-6cm后，切下接种到诱导培养基上进行丛芽诱导。

8.根据权利要求5所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述诱导出芽、继代培养和生根培养的培养温度均为23-27℃，光照时间均为12h/d，光照强度均为1000～3000lx。

9.根据权利要求5所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（5）中，将生根幼苗取出放于平筛中，在清水下冲洗干净附着在根上的培养基，将洗净的生根幼苗浸泡于600-1400倍的甲基托布津药液10-50s，之后将生根幼苗移栽至拌有600-1400倍甲基托布津药液的基质中，移栽完成后将生根幼苗置于具有水帘风机的温室中养护。

10.根据权利要求5所述的大叶榕Ficus umbellata组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（5）中，待生根苗生根率达到95%以上、根长到1cm以上、形态健壮时，再进行驯化移栽。