CN107709352A - 环肽以及含有该环肽的药物、外用剂和化妆品 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于，提供药效、效能强的新型肽，含有其的药物、外用剂，特别是对于皮炎、鼻炎、秃发症的预防或治疗剂、生发剂、育发剂、止痒剂、护肤用品等。本发明通过提供具有式I所示的氨基酸序列，该氨基酸序列不具有构成该氨基酸序列的氨基酸之间以外的肽键的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐来达成上述目的。

Description

环肽以及含有该环肽的药物、外用剂和化妆品

技术领域

本发明涉及环肽以及含有该环肽的药物、外用剂和化妆品。

背景技术

BNP(脑钠素：brain natriuretic peptide)为在心脏(主要是心室)合成、分泌的激素。BNP在1988年由猪的脑分离、鉴定，然后已知由人等的心室肌分泌。若心脏的负荷增加或者产生心肌肥大则BNP被分泌、其血药浓度增加。通常认为，BNP具有利尿作用、血管扩张作用、抑制肾素-醛固酮分泌、抑制交感神经、抑制肥大等作用，认为为发挥作用以保护心肌不受到由于对心脏的负担所导致的损伤的激素

BNP根据所产生的个体种类而构成BNP的氨基酸有一些不同，但是判明其结构具有环状部分和尾部作为共通结构(非专利文献1～2)。例如已知野生型人BNP由32个氨基酸残基形成，进而还提出了其片段、衍生物等(专利文献1～6)。

现在，BNP在日本并非治疗药，作为心力衰竭的生物化学上的标记物被广泛用于临床现场，但是在美国，也作为用于心力衰竭的症状缓和的药剂(商品名：natrecor(商标))使用。另外，最近，也提出了含有BNP的外用剂对皮炎、鼻炎、秃发症等的治疗，肌肤质量改善剂的利用等(专利文献7～9)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2007-525213号公报

专利文献2：日本特表2008-509746号公报

专利文献3：国际公开第2008/032450号

专利文献4：美国专利第6028055号说明书

专利文献5：美国专利第5114923号说明书

专利文献6：美国专利第6818619号说明书

专利文献7：国际公开第2011/010732号

专利文献8：国际公开第2011/024973号

专利文献9：国际公开第2012/099258号

非专利文献

非专利文献1：N.Akizukia,K.Kangawaa,N.Minaminob,H.Matsou,FEBS Letters1991280(2):357-362.

非专利文献2：Takei Y,Fukuzawa A,Itahara Y,Watanabe TX,Yoshizawa KumagayeK,Nakajima K,Yasuda A,Smith MP,Duff DW,Olson KR.FEBS Lett.1997Sep 8；414(2):377-80.

发明内容

发明要解决的问题

如上所述认为BNP为对于各种疾病的治疗等有用的物质。但是，为了得到进一步高的治疗、处置效果，要求开发药效、效能进一步强的物质，进而速效性、持续性优异的物质。

另外，进一步提高药效、效能的持续性、速效性，从减少必要的处置次数·频度，缓和患者、使用者的痛苦，改善使用者的生活质量、日常中的精神上·身体上·社会上·理智上的满意度(QOL：quality of life)的观点考虑是非常有意义的。例如皮炎，大多在患部伴随有发痒、浸润、发热等症状，若可以迅速地缓和这些症状则患者的痛苦得到减轻。另外，使用秃发症治疗剂、育发剂、生发剂的情况下，若迅速地表现出治疗、生发、育发效果则能够提高使用者的QOL。

本发明人等着眼于这些方面，以BNP的结构为参考尝试探索新型的物质。

因此，本发明的目的在于，提供药效、效能强的新型肽，含有其的药物、外用剂，特别是对于皮炎、鼻炎、秃发症的预防或治疗剂、生发剂、育发剂、止痒剂、化妆品、护肤用品等。

用于解决问题的方案

认为在以往野生型BNP对受体的结合和选择性中，由环状部和尾部形成的BNP的肽结构中的尾部至少实现一定的重要作用，而本发明人等特意着眼于前述结构中的环部，对于尾部缺失得到的环肽进行深入研究中，可以得到下述全新发现：利用上述环肽的效能、药效高，表现出效果快、效果的持续性升高等，进一步继续研究，结果完成了本发明。

即，本发明涉及以下。

[1]一种环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其具有式I所示的氨基酸序列，

该氨基酸序列不具有构成该氨基酸序列的氨基酸之间以外的肽键，

[化学式1]

式中，

X¹表示Gly、Val、Ala、Ser或Thr，

X²表示Arg、Gln或His，

X³表示Lys或Arg，

X⁴表示Met、Leu或Ile，

X⁵表示Ile或Val，

X⁶表示Ser或Gly，

X⁷表示Ser或Ala，

X⁸表示Ser、Gln、Val、Ala、Thr、Leu、Ile或Met，

X⁹表示Ser、Val、Ala或Thr，

X¹⁰表示Gly或Arg，

X¹¹表示Leu、Met、Ile、Val或Ala，

X¹²表示Gly、Ser或Ala，

连接2个Cys的线表示二硫键。

[2]根据[1]所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其中，

X²表示Arg，

X⁴表示Met，

X⁶表示Ser，

X⁷表示Ser，并且

X¹⁰表示Gly。

[3]根据[1]所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其中，前述氨基酸序列选自式(I-a)～式(I-e)所示的氨基酸序列中，

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

式中，连接2个Cys的线表示二硫键。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其中，衍生物为对于环肽中的氢原子、羟基、羧基、氨基、亚氨基用能够取代的取代基取代而成的。

[5]通过使[3]所述的式(I-a)～(I-e)中任一项所示的环肽中的氨基酸1个以上且4个以下缺失或者用其它氨基酸置换或附加而形成，并且具有与前述各式所示的环肽同等的功能的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐。

[6]一种外用剂，其含有[1]～[5]中任一项所述的环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐一种以上。

[7]根据[6]所述的外用剂，其为皮炎治疗剂、皮炎预防剂、止痒剂、消炎剂、表皮再生促进剂、伤上皮化促进剂或护肤用品的材料。

[8]根据[7]所述的外用剂，其中，护肤用品为保湿用和/或防止·改善皮肤粗糙用和/或皮脂护理·痤疮护理用和/或缓和刺激·抗炎用和/或美白用和/或防止衰老用和/或预防·缓和紫外线伤害用和/或瘦身用和/或皮肤洁净用。

[9]根据[6]所述的外用剂，其为入浴剂、身体洗涤剂或头发用洗涤剂。

[10]根据[6]所述的外用剂，其为秃发症治疗剂、秃发症预防剂、育发剂和/或生发剂。

[11]根据[6]所述的外用剂，其为鼻炎治疗剂和/或鼻炎预防剂。

[12]根据[6]所述的外用剂，其为化妆品。

[13]根据[6]～[12]中任一项所述的外用剂，其中，剂型为固体剂、半固体剂、粉末剂、液体制剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、乳液剂、凝胶剂或贴剂。

[14]根据[6]～[13]中任一项所述的外用剂，其用作药物、准药物或化妆品。

[15][1]～[4]中任一项所述的环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐在制造外用剂中的应用。

[16]一种外用剂的使用方法，其包括将[6]～[14]中任一项所述的外用剂适用于对象的皮肤和/或粘膜。

[17]根据[16]所述的外用剂的使用方法，其中，粘膜为口唇、口腔、鼻腔、眼或阴道。

[18]根据[16]所述的外用剂的使用方法，其为皮炎的治疗和/或预防方法、发痒的减轻或消失方法、湿疹等所导致的糜烂、溃疡的治疗方法或护肤方法。

[19]根据[16]所述的外用剂的使用方法，其为秃发症的治疗和/或预防方法以及/或生发方法以及/或育发方法。

[20]根据[16]所述的外用剂的使用方法，其为鼻炎的治疗和/或预防方法。

[21]一种药物，其含有[1]～[5]中任一项所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐一种以上。

[22]根据[21]所述的药物，其为高血压症、不稳定型心绞痛、急性心肌梗塞、浮肿性疾病、肾功能衰竭、心力衰竭、免疫疾病、肥胖、代谢综合征的治疗药。

在此所称的环肽(以下有时称为“BNP环肽”、“B环”或“B环化合物”)如前文所述为由野生型BNP衍生得到的，而作为野生型BNP，不仅包括源自人的野生型BNP，还包括源自猴、猪、鸟、大鼠的野生型BNP。因此，作为B环化合物，也不仅包括源自人的B环化合物，还包括源自猴、猪、鸟、大鼠的B环化合物。

发明的效果

通过本发明，可以提供新型的环肽、含有其的组合物。上述组合物适用于对于皮炎、鼻炎、秃发症的预防或治疗用的外用剂、进而生发剂、育发剂、止痒剂等，都作为药物、准药物、护肤用品、化妆品等提供。需要说明的是，本发明中仅称为“外用剂”的情况下，不限于药物、准药物、护肤用品、化妆品等用途，指的是适用于皮肤、粘膜的药剂。

本发明的外用剂，对于皮炎的有效性通常比以往的甾类化合物外用剂显著，并且，具有症状通常在3分钟以内开始改善等优异的速效性，其效果也大并且具有持续性、缓解期长。

另外，本发明的外用剂，适用于患有皮炎的对象的皮肤或粘膜上的情况下，可以使由于皮炎而产生或有可能产生的搔痒感、痛(疼痛)、热的感觉、胀痛感、浸润、红斑等能够知觉的各种症状、状态迅速地减轻或消失的同时，改善皮炎的症状。

进而，本发明的外用剂，在适用部位发挥保湿效果的同时，在适用部位存在角质层的情况下发挥调整适用部位的肌理的效果，其结果可以发挥下述效果：肌理整齐、干燥肌肤、皮肤粗糙得到改善、肌肤质量柔软、湿润、皱纹变浅而不明显、进而改善唇的粗糙等。

另外，本发明的外用剂，在适用于秃发部位或生发部位等部位的情况下，具有防止适用部位中的秃发的同时促进生发或育发的效果。这种情况下，存在生发的毛发容易形成终毛、容易形成并非白发的头发的倾向。另外，这些效果，与以往在秃发症治疗剂中使用的其它活性成分、例如BNP相比比较早期地表现出来，所得到的效果也显著。

进而，另外，本发明的外用剂对于鼻炎也具有速效性，其效果也大并且具有持续性、缓解期长。

需要说明的是，本发明的环肽为与作为本来体内所具备的激素的BNP在其结构具有共通部分的肽，因此副作用的担心小，另外认为只要为适当的用量或者外用于皮肤等时对于血液动力学的影响轻微，因此即使对于需要长期给药的患者、例如慢性的皮炎患者也能够长期给药。进而，本发明的外用剂在外用时没有刺激感，除了皮肤敏感的患者之外，对于幼儿、女性也可以放心适用于面部、头部等。

另外，本发明的环肽与野生型BNP相比具有优异的药效、效能的理由未必明确，但是根据本发明人等的生物信息学(in silico)解析暗示了，本发明的环肽，对于NPR-A受体(GC-A)，与野生型BNP相比，容易结合、牢固结合，因而由此推测环肽在药效和效能、特别是它们的速效性方面优异。另外，如上所述，B环化合物，不仅存在源自人的B环，还存在源自异种动物例如源自猴、猪、鸟、大鼠的B环，确认了它们具有相同的结构，因而对于任意一种B环，由后述的结构解析的结果看，强烈推测发挥与源自人的B环化合物相同的效果。

附图说明

图1为表示对于面部具有深纹的受试者左右分别涂布BNP环肽(A)和凝胶制剂(B)的结果的图。

图2为表示对于女性型秃发症和糠秕性秃发症患者的B环凝胶制剂和BNP凝胶制剂的涂布前和涂布后的效果的图。

具体实施方式

以下对于本发明基于优选的实施方式进行详细说明。

1.环肽、其衍生物和它们的可药用盐

首先对于本发明的环肽、其衍生物和它们的可药用盐进行说明。

本发明的环肽，为具有式I所示的氨基酸序列，

该氨基酸序列不具有构成该氨基酸序列的氨基酸之间以外的肽键的环肽，

[化学式7]

(序列号1)

式中，

X¹表示Gly、Val、Ala、Ser或Thr，

X²表示Arg、Gln或His，

X³表示Lys或Arg，

X⁴表示Met、Leu或Ile，

X⁵表示Ile或Val，

X⁶表示Ser或Gly，

X⁷表示Ser或Ala，

X⁸表示Ser、Gln、Val、Ala、Thr、Leu、Ile或Met，

X⁹表示Ser、Val、Ala或Thr，

X¹⁰表示Gly或Arg，

X¹¹表示Leu、Met、Ile、Val或Ala，

X¹²表示Gly、Ser或Ala，

连接2个Cys的线表示二硫键。

认为这种环肽与以往已知的BNP同样地，与具有鸟苷酸环化酶结构域的受体NPR-A(别名GC-A)结合而促进环鸟苷一磷酸(Cyclic guanosine monophosphate、cGMP)的产生，例如具有利尿作用、血管扩张作用、抑制肾素-醛固酮分泌、抑制交感神经、抑制肥大等作用，但是与BNP相比，具有优异的药效、效能、特别是优异的速效性。

从而如后文所述，上述环肽可以用作皮炎治疗/预防剂、鼻炎治疗/预防剂、秃发症治疗/预防剂、育发剂、生发剂、止痒剂等外用剂的成分，另外可以用作护肤用品、准药物、化妆品的材料。进而在利用上述BNP的活性的药物，例如用于高血压症、不稳定型心绞痛、急性心肌梗塞、浮肿性疾病、肾功能衰竭、心力衰竭、免疫疾病、肥胖、代谢综合征的药物中，能够使用上述环肽作为BNP的替代。

另外，本发明的另外的方式中，本发明的环肽，在上述式(I)中，上述X¹～X¹²可以为选自由以下的(1)～(12)组成的组中的一种或两种以上：

(1)X¹表示Gly、Val、Ala、Ser或Thr，

(2)X²表示Arg、Gln或His，

(3)X³表示Lys或Arg，

(4)X⁴表示Met、Leu或Ile，

(5)X⁵表示Ile或Val，

(6)X⁶表示Ser或Gly，

(7)X⁷表示Ser或Ala，

(8)X⁸表示Ser、Gln、Val、Ala、Thr、Leu、Ile或Met，

(9)X⁹表示Ser、Val、Ala或Thr，

(10)X¹⁰表示Gly或Arg，

(11)X¹¹表示Leu、Met、Ile、Val或Ala，以及

(12)X¹²表示Gly、Ser或Ala。

另外，本发明的环肽优选在上述式(I)中，X²表示Arg、X⁴表示Met、X⁶表示Ser、X⁷表示Ser、和/或X¹⁰表示Gly的环肽(序列号2)。

进而，本发明的另外的方式中，本发明的环肽，式(I)所示的氨基酸序列可以由序列号3～8和序列号16～75选择。

进而，本发明的环肽，优选式(I)所示的氨基酸序列选自式(I-a)～式(I-e)所示的氨基酸序列中，

[化学式8]

(序列号3)

[化学式9]

(序列号4)

[化学式10]

(序列号5)

[化学式11]

(序列号6)

[化学式12]

(序列号7)

式中，连接2个Cys的线表示二硫键。

这些式(I-a)～(I-e)所示的氨基酸序列分别为人BNP(式(I-a))、猪BNP(式(I-b))、大鼠BNP(式(I-c))、兔BNP(式(I-d))和小鼠BNP(式(I-e))的环状部分。因此，具有这种氨基酸序列的环肽更切实地发挥上述效果。需要说明的是，猪的BNP环肽、由于鸟(序列号8、Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Met-Gly-Cys、式中、第1个Cys与第17个Cys形成二硫键)、牛(序列号9、Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys、式中、第1个Cys与第17个Cys形成二硫键)、猫(序列号10、Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys、式中、第1个Cys与第17个Cys形成二硫键)、狗(序列号11、Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys、式中、第1个Cys与第17个Cys形成二硫键)、绵羊(序列号12、Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys、式中、第1个Cys与第17个Cys形成二硫键)一致，这些源自生物的BNP环肽也具有与本发明相同的效果。尤其是上述之中，特别是式(I)所示的氨基酸序列优选为式(I-a)所示的氨基酸序列。另外，本发明的另外的方式中，也可以为序列号16～75所示的环肽。

本发明的环肽包括将前述环肽进行衍生物化而成的物质。这种衍生物，除了可以直接用作活性物质之外，还可以用作前药。

另外，本发明的衍生物，可以通过对于环肽中的氨基酸的特定基团、例如氢原子、羟基、羧基、氨基、亚氨基等用公知的取代基附加(修饰)或用能够取代的公知的取代基取代来得到。修饰可列举出对环肽内的氨基酸例如糖基化、乙酰基化、磷酸化、脂质附加等化学修饰，但是不限于它们。

另外，对环肽中的氨基酸的基团的附加(修饰)或取代，可以对于1个或2个以上基团同时产生或对于更多基团产生。需要说明的是，作为这种取代基，若对于上述基团能够取代则没有特别限定，可以使用公知的取代基，例如当然也包括BOC等保护基团是不言而喻的。

进而，本发明的环肽也包括使前述环肽突变而成的物质。即，本发明的突变体可以通过使环肽中的氨基酸缺失或者用其它氨基酸置换或附加来得到。另外，缺失或者用其它氨基酸置换或附加的氨基酸数为4以下、更优选3以下、进一步优选2以下、特别优选1以下。另外，环肽中的氨基酸的缺失、用其它氨基酸置换或附加可以各自独立地同时产生是不言而喻的。

另外，能够用其它氨基酸置换的氨基酸，对于人BNP(式(I-a))而言，可以如下所述例示，但是不限于它们。作为从左第3个氨基酸的Gly可以置换为Val、Ala、Ser或Thr中的任意一种。作为从左第4个氨基酸的Arg可以置换为Gln或His中的任意一种。作为从左第5个氨基酸的Lys可以置换为Arg。作为从左第6个氨基酸的Met可以置换为Leu或Ile中的任意一种。作为从左第9个氨基酸的Ile可以置换为Val。作为从左第12个氨基酸的Ser可以置换为Gln、Val、Ala、Thr、Leu、Ile或Met中的任意一种。作为从左第13个氨基酸的Ser可以置换为Val、Ala或Thr中的任意一种。作为从左第14个氨基酸的Gly可以置换为Arg中的任意一种。作为从左第15个氨基酸的Leu可以置换为Met、Ile、Val或Ala中的任意一种。作为从左第16个氨基酸的Gly可以置换为Ser或Ala中的任意一种。需要说明的是，本发明的环肽中的能够置换的氨基酸的一例汇总于表32，但是不限于它们。

需要说明的是，1个氨基酸被置换的环肽可列举出例如序列号16～44等，但是不限于它们。另外，2个氨基酸被置换的环肽可列举出例如序列号45～58等，但是不限于它们。进而3个氨基酸被置换的环肽可列举出例如序列号59～70等，但是不限于它们。进而，4个氨基酸被置换的环肽可列举出例如序列号71～75等，但是不限于它们。另外，通过将上述氨基酸适当组合、可以置换5个以上氨基酸是不言而喻的。

可以使1个～数个氨基酸缺失的氨基酸可以与能够用上述其它氨基酸置换的氨基酸同样地进行。

另外，缺失或者用其它氨基酸置换或附加的氨基酸数，相对于本发明的环肽可以为具有80％同源性、优选90％同源性的环肽。

进而，本发明可以为上述的突变体或进而其衍生物。只要具有本发明的效果则任意突变体或其衍生物也包含于本发明的环肽。另外，另外的方式中，可以至少具有BNP活性。需要说明的是，为了使本发明的环肽的活性提高、使本发明的效果持续、和/或使本发明的环肽的保存稳定性增加等，可以适当改变本发明的环肽或构成其的氨基酸。例如可以进行对本发明的环肽的氨基酸等的化学修饰等、使构成环肽的一部分氨基酸缺失、置换为其它氨基酸等和/或附加新的氨基酸。

例如，对于环肽的一个Cys的C末端基团，可以替代-COOH而形成-COOR¹、-CONHR¹或-CONR¹ ₂，和/或对于环肽的另一个Cys的N末端基团，可以替代NH₂而形成-NHC(O)R¹或-N(C(O)R¹)₂。在此，R¹每一次出现独立地是碳数1～20的支链或直链的烃基或亚烷基二醇链或糖链。需要说明的是，R¹的碳数优选为1～10、更优选1～5、进一步优选1～2。

另外，作为可药用盐，没有特别限定，作为本发明的环肽或衍生物，可列举出例如与无机碱的盐、与有机碱的盐、与无机酸的盐、与有机酸的盐、与碱性或酸性氨基酸的盐等。作为与无机碱的盐的优选例子，可列举出例如钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐；以及铝盐、铵盐等。作为与有机碱的盐的优选例子，可列举出例如与三甲胺、三乙胺等烷基胺的盐；与吡啶、甲基吡啶等杂环式胺的盐；与乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等烷醇胺的盐；与环己基胺、二环己基胺等环烷基胺的盐；与N,N’-二苄基亚乙基二胺等亚烷基二胺衍生物的盐等。作为与无机酸的盐的优选例子，可列举出例如与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等的盐。作为与有机酸的盐的优选例子，可列举出例如与甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸等单羧酸的盐；与富马酸、草酸、马来酸等多元羧酸的盐；与酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸等羟基羧酸的盐；与甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等磺酸的盐；与苯甲酸的盐等。作为与中性氨基酸的盐的优选例子，可列举出例如与甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸等的盐，作为与碱性氨基酸的盐的优选例子，可列举出例如与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等的盐，作为与酸性氨基酸的盐的优选例子，可列举出例如与天冬氨酸、谷氨酸等的盐。

上述之中，优选为由式(I)所示的氨基酸序列形成的环肽或其可药用盐。即，式(I)所示的氨基酸序列优选没有被置换。

作为本发明的环肽、衍生物、和它们的可药用盐的制造方法，没有特别限定，例如可以使用公知的化学合成法、遗传工程学的合成法。

上述的氨基酸序列的合成通过化学合成法进行的情况下，可以利用任意化学合成法合成，可以利用公知的肽的合成方法、例如固相合成法、液相合成法合成。另外，进行合成时，可以使用市售的肽合成装置(例如岛津制作所制：PSSM-8等)。

另外，对于氨基酸序列中的二硫键没有特别限定，例如可以通过DMSO氧化法、碘氧化法等形成。此时，通过对于游离的巯基或被保护基团保护的巯基进行DMSO或碘(I₂)处理，可以形成分子内二硫键，其结果可以得到环肽。

需要说明的是，作为保护基团，可列举出例如4-甲基苄基(Bzl(4Me))、三苯甲游基(Trt)、叔丁基、N-(乙酰基)氨基甲基(Acm)等。另外，去保护可以通过对应于这些保护基团的适当处理，例如对于4-甲基苄基用强酸、对于N-(乙酰基)氨基甲基用碘进行处理来进行。

接着根据需要进行环肽的衍生物化，得到衍生物。需要说明的是，衍生物化可以利用公知方法进行。另外，也可以通过向构成环肽的氨基酸预先导入取代基，进行肽合成的同时制造环肽的衍生物。

接着根据需要进行环肽或衍生物的盐交换，由此制造可药用盐。盐交换例如可以通过使环肽或衍生物与所希望的酸或碱接触来进行。

另一方面，在遗传工程学上合成肽的情况下，可以利用公知的方法例如SambrookJ.et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual(4th edition)(Cold SpringHarbor Laboratory Press(2012))中记载的方法合成。例如首先制造编码有式(I)所示的氨基酸序列的DNA片段。DNA片段的制造例如编码有式(I-a)所示的氨基酸序列的DNA片段的情况下，可以如下进行：将含有全长人BNP基因的载体等作为模板，使用以合成规定的DNA区域的方式设计的引物，利用PCR法将DNA片段扩增，由此进行DNA片段的制造。需要说明的是，也可以在化学上合成DNA片段。

接着，将所扩增的DNA片段与适当的载体连接、得到蛋白质表达用重组载体。接着将蛋白质表达用重组载体引进到成为靶的细胞，筛选所引进的细胞。最后，回收由细胞产生的蛋白质(由式(I)所示的氨基酸序列形成的蛋白质)。

所回收的蛋白质中的二硫键的形成、衍生物化、盐的形成可以如上所述进行。

需要说明的是，得到目的的环肽等化合物的确认例如可以通过反相HPLC、质量分析等公知手法进行。

另外，对于所得到的化合物的BNP活性的有无可以通过公知的手段容易地确认，例如可以通过对于NPR-A受体表达细胞中的cGMP产生活性进行试验来确认。

2.外用剂

接着对于本发明的外用剂进行说明。

本发明的外用剂含有一种以上的上述环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐。需要说明的是，使用两种以上环肽的情况下，对于所混合的环肽的种类，没有特别的上限，但是从制造成本、简便性的观点考虑，优选为2～3种左右。可列举出例如序列号19、29、33、36、39及43等，但是若不会阻碍本发明效果则不限于它们，可以符合适用对象等来适当组合这些环肽。

2.1用途

对于本发明的外用剂没有特别限定，例如可以用于以下的用途，在各情况下发挥以往没有的显著效果。需要说明的是，本发明的外用剂在任意一种用途中都没有特别限定，可以根据其药效、效能用作药物、准药物和/或化妆品。

以下对于每种用途进行详细说明。

(1)皮炎治疗剂、皮炎预防剂

本发明的外用剂可以为皮炎治疗剂和/或皮炎预防剂。

本发明的外用剂，在适用于患有皮炎的对象的皮肤或粘膜上的情况下，可以使由于皮炎而产生或有可能产生的搔痒感、痛(疼痛)、热的感觉、胀痛感、红斑、浸润、丘疹、苔癣化、痂皮、浸出、皮肤干燥等能够知觉的各种症状、状态迅速地减轻或消失的同时，改善皮炎的症状。另外，本发明的外用剂在适用部位不会产生刺激感。

并且含有本发明的环肽的外用剂的这种作用，与含有具有尾部的BNP的外用剂的作用相比，更迅速地表现出来，其持续时间也更长。这种与BNP相比的环肽的有利效果的原因不确定，但是认为本发明的环肽与BNP相比，对于作为其受体的NPR-A受体在结合上具有有利的结构，由此认为，可以通过患部附近的NPR-A受体迅速地结合的同时，其结合时间更长。另外认为，通过比较迅速地与患部附近的NPR-A受体结合，可以防止环肽由于血流等而扩散到患部外，可以使环肽比较长时间停留于患部附近。

另外，本发明的外用剂不仅抑制或预防皮炎的炎症，还具有使皮肤的屏障功能恢复或维持的作用。在此，皮肤的屏障功能具有防止源自外部环境的刺激、杂菌等对皮肤的侵入的功能、保湿功能，但是通过利用外用剂使屏障功能恢复，可以防止炎症的进展、恶化。需要说明的是，皮肤的屏障功能对于角质层的角质细胞的排列状态、即肌理的状态、保湿状态等造成大的影响，因而本发明的外用剂具有整理肌理、使肌肤湿润的作用，因此也可知该外用剂的皮肤屏障功能的恢复作用、维持作用。

另外，本发明的外用剂对于通常也被称为痤疮的粉刺、红斑性丘疹、脓疱、囊肿·结节等皮肤症状也是有效的。

另外，通过能够知觉的症状、状态迅速地减轻或消失，对象(患者)的负担减轻、患者的QOL提高的同时，可以防止注意到发痒、疼痛而接触、挠破患部等使患部损伤的患者的动作。这种本发明的外用剂的能够知觉的症状、状态的减轻、消失效果通常在适用后10分钟以内、优选5分钟以内、更优选3分钟以内表现出来。

并且，本发明的外用剂，对于下述皮炎也能够治疗：产生甾类化合物皮肤症(Steroid Dermatopathy)的皮炎，不能用甾类化合物、他克莫司等其它通常的皮炎治疗用的药剂治疗的皮炎、例如得不到满意的治疗效果、对于这些制剂存在抗性、使用不合适或不优选的皮炎等。另外，迄今通用的甾类化合物外用剂的情况下，存在下述大问题：若中止外用则立即返回到外用前的重症度或者产生反跳现象而与外用前相比恶化，但是对于本发明的外用剂而言，没有这种反跳现象等问题。

皮炎通常为在皮肤或粘膜上产生炎症的疾病。皮炎通常伴随有选自由红斑、浸润性红斑、丘疹、小水疱、脓疱、浸润、结痂、脱屑等急性湿疹症状，苔癣化、色素沉着等慢性湿疹症状，鳞屑、痂皮(疮痂)附着、搔抓、挠破痕、痒疹结节、糜烂、浮肿、潮湿感、鳞状化组成的组中的1种以上症状。

在此，作为皮炎，若为在皮肤或粘膜上伴随有炎症的疾病则没有特别限定，可列举出例如慢性湿疹、汗疱、幼儿性干燥湿疹等湿疹、特应性皮肤炎；过敏性接触皮炎、一次刺激性接触皮炎等接触性皮炎；脂溢性皮炎；皮脂缺乏性皮炎；自身敏感性皮炎；瘀滞性皮炎；过敏性荨麻疹(例如食物性荨麻疹、药物性荨麻疹)、非过敏性荨麻疹(例如物理性荨麻疹、日光荨麻疹、胆碱性荨麻疹)等荨麻疹；虫咬；药疹；寻常性银屑病、滴状牛皮癣、银屑病性红皮病、脓疱性银屑病、牛皮癣性关节炎等干癣；慢性痒疹、急性痒疹、妊娠性痒疹、结节性痒疹等痒疹；酒渣鼻；酒渣鼻样皮炎；皮肤过敏性脉管炎等皮肤脉管炎；全身性皮肤瘙痒症、局限性皮肤瘙痒症、老年性皮肤瘙痒症、妊娠瘙痒症等皮肤瘙痒症；日光皮炎；红皮病、红皮病；钱币状皮炎；局限性搔抓皮炎；口周皮炎；汗疱疹；毛发角化病；扁平苔藓、汗疱、异汗症、痱子、寻常痤疮等，本发明的外用剂在任意一种疾病的治疗和预防中都能够适用。

本发明的外用剂，特别是对于湿疹、特应性皮肤炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎、虫咬、过敏性或非过敏性荨麻疹、干癣，优选对于湿疹、特应性皮肤炎、接触性皮炎、虫咬，更优选对于湿疹、特应性皮肤炎发挥优异的效果。因此，本发明的外用剂，可以以选自上述组中的至少一种以上皮炎的治疗或预防作为目的来使用。

(2)化妆品或护肤用品的材料

本发明的外用剂可以为化妆品或护肤用品的材料。

本发明的外用剂在适用于皮肤和/或粘膜的情况下，在适用部位提供湿润，发挥保湿效果而防止干燥的同时，防止皮肤粗糙。在适用部位存在角质层的情况下，发挥整理适用部位的肌理的效果。另外，对于皮肤和粘膜赋予·保持适当的弹性和柔软性，肌肤变得柔软，在皮肤、粘膜产生张力，使其紧绷。另外，在适用部位，包括细纹、深纹的皱纹、松弛得到改善，进而暗淡、斑点不明显。另外，由于暗淡、斑点不明显，因此结果得到美白效果。

作为结果，本发明的外用剂可以以皮肤和/或粘膜的状态的维持或改善作为目的，没有特别限定，例如以选自由干燥肌肤、皮肤粗糙、敏感肌肤、唇粗糙、松弛、细纹和深纹的产生防止、进行防止或改善以及皮肤或粘膜的状态的维持、防衰老和美白组成的组中的至少一种作为目的，或者以得到选自上述效果中的至少一种效果作为目的来使用。

需要说明的是，本说明书中，皮肤粗糙包括痱子、冻疮、裂口、皲裂、痤疮、尿布疹、溃烂、大腿内侧擦伤和剃须皮疹。

对于本发明的外用剂的作为化妆品或护肤用品的材料的具体的用途，没有特别限定，可列举出例如化妆水、乳液、美容液、乳膏、雪花膏、凝胶、面膜(mask)、润肤膏、粉末、洗手皂、香水、除臭剂、或者粉底、香粉、眼影膏、眼线笔、睫毛膏、染眉膏、腮红、妆底、口红、唇膏、指甲油等彩妆化妆品、进而洗发剂、护发素、调理剂、染发用品、生发液、定形剂、电烫发剂等头发化妆品等、洗脸剂、清洁剂、沐浴皂等身体洗涤剂、爽身粉、须后洗剂、须前洗剂等护肤产品、浴剂(入浴剂)。

本发明的外用剂的上述效果迅速地表现出来，根据其效果种类不同而不同，但是通常在适用后10分钟以内、优选5分钟以内、更优选3分钟以内表现出来。

另外，本发明的外用剂的上述效果持续比较长，根据其效果种类不同而不同，但是通常在效果表现出来后持续4小时以上、优选8小时以上、更优选24小时以上。

(3)止痒剂

本发明的外用剂可以为止痒剂。

如上所述，本发明的外用剂在适用于皮肤或粘膜上时，在适用部位迅速地发挥优异的止痒效果，因此作为止痒剂是合适的。

另外，上述的本发明的外用剂的止痒效果通常在适用后10分钟以内、优选5分钟以内、更优选3分钟以内表现出来。

(4)秃发症治疗剂、秃发症预防剂、育发剂和生发剂

另外，本发明的外用剂可以为秃发症治疗剂、秃发症预防剂、育发剂和/或生发剂。

本发明的外用剂，在适用于秃发部位或生发部位等部位的情况下，具有下述效果：防止适用部位中的秃发的同时促进生发或育发。另外，在适用部位中具有养发效果、生发促进效果、薄发改善·预防等效果。这种情况下，存在生发的毛发容易形成终毛、容易形成并非白发的头发的倾向。另外，这些效果与以往秃发症治疗剂中使用的其它活性成分、例如BNP相比比较早期地表现出来，所得到的效果也显著。

另外，本发明的外用剂如上所述具有皮炎的改善、预防效果。因此，可以改善或预防秃发症伴随的皮肤的炎症。这种效果特别是在起因于头皮等适用部位的皮肤状态而秃发症恶化的情况下是有利的。

进而，本发明的外用剂在如上所述适用于皮肤的情况下，在适用部位发挥保湿效果和整理肌理的效果。可以去除头皮屑、发痒，抑制它们的产生的同时，对于毛发、头皮提供湿润，改善、防止干燥，可以健康地保持头皮、头发。另外，可以改善脂溢状态。

另外，本发明的外用剂如上所述具有能够知觉的症状、状态减轻、消失效果。由此，对象(患者)的负担减轻、患者的QOL提高。进而可以防止注意到发痒、疼痛而接触、挠破患部等使患部损伤的患者的动作。其结果，可以防止产生秃发症的皮肤状态的恶化。

本发明的外用剂用作秃发症治疗剂或秃发症预防剂的情况下，作为能够适用的秃发症，没有特别限定，可列举出例如以下的秃发症，能够以它们之中的一种以上的治疗或预防作为目的来使用。

(后天性秃发症)

(i)不伴随有瘢痕或皮肤病变的秃发症(圆形秃发症、男性型秃发症、脂溢性秃发症、糠秕性秃发症、女性型秃发症、妊娠性秃发症、恶性秃发症、老年性秃发症、全头秃发症、多发性秃发症、匐行性秃发症、由于药物所导致的秃发症、癌化学疗法剂性秃发症和由于被放射线照射所导致的秃发症、外伤性·机械的秃发症、营养失调·代谢障碍伴随的秃发症、内分泌异常伴随的秃发症、静止期秃发(分娩后秃发症、高烧后秃发症))

(ii)皮肤病变或病态皮肤发现的秃发症(由于感染所导致的秃发、由于肿瘤所导致的秃发、由于炎症所导致的秃发)

(iii)瘢痕性秃发症(由于皮肤感染症所导致的秃发、由于炎症性细胞浸润所导致的秃发)

(先天性秃发症)

弥漫性秃发、先天性无毛症、遗传性的综合征中的秃发、局限性秃发、痣性、皮肤发育不全(aplasia cutis)、先天性三角形秃发

上述之中，本发明的外用剂特别是对于后天性秃发症，优选对于不伴随有瘢痕或皮肤病变的秃发症，更优选对于圆形秃发症、男性型秃发症、脂溢性秃发症、糠秕性秃发症、女性型秃发症、妊娠性秃发症、恶性秃发症、老年性秃发症、全头秃发症、多发性秃发症、匐行性秃发症、由于药物所导致的秃发症、癌化学疗法剂性秃发症和由于被放射线照射所导致的秃发症、外伤性·机械的秃发症、营养失调·代谢障碍伴随的秃发症、内分泌异常伴随的秃发症、静止期秃发，发挥优异的效果。因此，本发明的外用剂可以以选自上述组中的至少一种以上秃发症的治疗或预防作为目的来使用。

(5)鼻炎治疗剂和/或鼻炎预防剂

另外，本发明的外用剂可以为鼻炎治疗剂和/或鼻炎预防剂。

鼻炎为起因于鼻腔和/或鼻窦的粘膜的炎症的疾病，除了鼻塞、鼻漏、突发反复性的喷嚏等主要症状之外，还引起搔痒感等症状。需要说明的是，本发明中，“鼻炎”不仅包括狭义上的伴随有鼻腔粘膜的炎症的鼻炎，也包括伴随有鼻窦粘膜的炎症的鼻窦炎。

本发明的外用剂，在适用于鼻腔粘膜和/或鼻窦粘膜的情况下，可以改善或预防鼻塞、鼻漏、喷嚏、搔痒感等鼻炎伴随的各种症状。特别是这些效果与含有具有尾部的BNP的鼻炎治疗剂相比迅速地表现出来、另外其持续时间也长。

这种本发明的外用剂对于鼻炎的效果通常在适用后8分钟以内、优选5分钟以内、更优选3分钟以内表现出来。

另外，上述的本发明的外用剂对于鼻炎的效果通常在效果表现出来后持续4小时以上、优选8小时以上、更优选24小时以上。

本发明的外用剂用作鼻炎治疗剂和/或鼻炎预防剂的情况下，作为能够适用的鼻炎，没有特别限定，可列举出例如包括急性鼻炎、慢性鼻炎的感染性鼻炎；包括复合型(花过敏症)鼻炎、鼻漏型鼻炎、淤血型鼻炎、浮肿型鼻炎和干燥型鼻炎的过敏性非感染性鼻炎；包括物理性鼻炎、化学性鼻炎和放射线性鼻炎的刺激性鼻炎；以及萎缩性鼻炎和特发性肉芽肿性鼻炎；急性鼻窦炎、慢性鼻窦炎(蓄脓症)、嗜酸细胞性鼻窦炎、鼻窦真菌症等鼻窦炎等，能够以上述之中一种以上的治疗或预防作为目的来使用。

另外，作为复合型鼻炎，可列举出例如包括常年性过敏性鼻炎和季节性过敏性鼻炎的过敏性鼻炎、和包括血管舒缩性(特发性)鼻炎和嗜酸细胞增多性鼻炎的非过敏性鼻炎。

作为鼻漏型鼻炎，可列举出例如味觉性鼻炎、冷气吸入性鼻炎和老年性鼻炎。

作为淤血型鼻炎，可列举出例如药物性鼻炎、心因性鼻炎、妊娠性鼻炎、内分泌性鼻炎和寒冷性鼻炎。

作为浮肿型鼻炎，可列举出例如阿斯匹林过敏性鼻炎。

上述之中，本发明的外用剂特别是对于过敏性非感染性鼻炎、刺激性鼻炎、鼻窦炎，优选对于过敏性非感染性鼻炎、慢性鼻窦炎，更优选对于复合型(花过敏症)鼻炎、鼻漏型鼻炎、淤血型鼻炎、浮肿型鼻炎和干燥型鼻炎、慢性鼻窦炎，发挥优异的效果。因此，本发明的外用剂可以以选自上述组中的至少一种以上鼻炎的治疗或预防作为目的来使用。

另外，从症状的观点考虑，本发明的外用剂由于具有上述效果，因此对于喷嚏·鼻漏型鼻炎、鼻塞型鼻炎和充全型鼻炎中的任意一种都可以使用。

进而，本发明的外用剂，即使对于利用甾体药物等以往使用的鼻炎治疗剂而难以治疗的鼻炎也表现出症状的改善效果。

(6)其它外用剂

另外，本发明的外用剂，以上述环肽的效果作为目的，也可以用于上述以外的用途。这种情况下，本发明的外用剂，可以将上述环肽的效果以外的效果作为主要目的。这种情况下，本发明的环肽、其衍生物和/或可药用盐以辅助外用剂的主要效果或以追加主要效果以外的效果作为目的来使用。

作为这种用途，没有特别限定，可列举出例如爽身粉、除臭剂、秃发剂、肥皂、体用香波、入浴剂、洗手皂、香水、防晒剂、消炎止痛剂、抗真菌剂等。

2.2剂型

本发明的外用剂，通过对于皮肤或粘膜的目的的部位(例如患部)局部给药，可以使作为有效成分的环肽、其衍生物和/或可药用盐的效果在适用部位附近更切实且迅速地表现出来。

对于这种外用剂没有特别限定，例如可以为外皮用剂、滴眼剂、滴耳剂、滴鼻剂、口腔剂、或栓剂。它们之中，本发明的外用剂为皮炎治疗剂、皮炎预防剂、止痒剂、护肤用品、秃发症治疗剂、秃发症预防剂、育发剂或生发剂的情况下，优选为外皮用剂。另一方面，本发明的外用剂为鼻炎治疗剂和/或鼻炎预防剂的情况下，优选为滴鼻剂。进而为角膜疾病治疗和/或预防剂的情况下，优选为滴眼剂。

本发明的外用剂为外皮用剂的情况下，没有特别限定，可列举出例如外用固体剂、外用液体制剂、喷雾剂、软膏剂、乳液、乳膏剂、凝胶剂或贴剂。

外用固体剂为用于对于皮肤等涂布或散布的固体制剂。作为这种外用固体剂，可列举出例如粉末状的外用散剂。

外用液体制剂为用于对于皮肤等涂布的液态的制剂。作为这种外用液体制剂，可列举出例如洗剂和涂抹剂。

喷雾剂为将有效成分以雾状、粉末状、泡沫状或糊剂状等形式喷雾到皮肤的制剂。作为这种喷雾剂，可列举出例如外用气雾剂和泵喷雾剂等。

软膏剂为涂布于皮肤的使有效成分溶解或分散于基质而成的半固体的制剂。另外，软膏剂也可以为用于涂布于唇等局部的唇膏。

乳膏剂为涂布于皮肤的乳化为水包油型或油包水型的半固体的制剂。

凝胶剂为涂布于皮肤的凝胶状的制剂。作为凝胶剂，可列举出例如水性凝胶剂和油性凝胶剂。

贴剂为粘贴于皮肤的制剂。作为贴剂，可列举出例如带剂和巴布剂。

滴鼻剂为对于鼻腔或鼻粘膜给药的制剂。作为滴鼻剂，可列举出例如滴鼻粉末剂和滴鼻液体制剂。其中，优选为滴鼻液体制剂。

上述任意一种剂型中，本发明的外用剂至少含有上述的本发明的环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐。

剂型为外用液体制剂、软膏剂、乳膏剂或凝胶剂的情况下，本发明的外用剂，例如以0.0001～1000000μg/g、优选0.001～10000μg/g、更优选0.01～1000μg/g、进一步优选0.1～100μg/g的浓度含有环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐。另外，其它方式中，可以以1～800μg/g、3～500μg/g的浓度含有。

另外，剂型为喷雾剂的情况下，本发明的外用剂在喷雾剂的原液中例如以0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、0.01～1000μg/mL、更优选0.1～100μg/mL、进一步优选1～100μg/mL的浓度含有环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

剂型为贴剂的情况下，本发明的外用剂例如以0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、更优选0.01～1000μg/mL、进一步优选0.1～100μg/mL、特别优选1～100μg/mL的浓度含有环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

另外，剂型为滴鼻剂特别是液体滴鼻剂的情况下，本发明的外用剂在滴鼻剂的液体(滴鼻液)中例如以0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、更优选0.01～1000μg/mL、进一步优选0.1～100μg/mL、特别优选1～100μg/mL的浓度含有环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

本发明的外用剂为上述任意一种剂型的情况下，都可以使用本领域技术人员已知的方法和构成材料制剂。

作为能够利用的构成材料，没有特别限定，可列举出例如胶凝剂、油性成分、高级醇、脂肪酸、紫外线吸收剂、紫外线散射剂、粉体、颜料、表面活性剂、多元醇·糖、高分子、生理活性成分、溶剂、抗氧化剂、香料、防腐剂等。

作为胶凝剂，可以使用有机、无机化合物的各种胶凝剂。

作为无机化合物的胶凝剂，可列举出例如含水性或吸水性的硅酸盐、例如硅酸铝(例如膨润土)、硅酸镁-铝、胶态氧化硅等。

作为有机化合物的胶凝剂，可以使用天然、半合成或合成的聚合物。作为天然和半合成聚合物，可列举出例如纤维素等多糖类、淀粉、黄蓍胶、阿拉伯胶、黄原胶、琼脂、明胶、海藻酸及其盐(例如海藻酸钠及其衍生物)、低级烷基纤维素(例如甲基纤维素或乙基纤维素)、羧基-或羟基-低级-烷基纤维素(例如羧基甲基纤维素或羟基丙基纤维素)等。作为合成聚合物，可列举出例如羧基乙烯基聚合物、聚丙烯酸钠、(乙烯基甲基醚/马来酸乙酯)共聚物、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸等。需要说明的是，作为凝胶剂，例如也可以使用Lubrajel NP、Lubrajel CG、Lubrajel DV、Lubrajel MS、Lubrajel OIL、Lubrajel TW、Lubrajel DS等(Ashland Inc.)等市售胶凝剂。

作为油分，例如除了酯系、醚系、烃系、硅氧烷系和氟系的各种油相成分之外，还可以使用动植物油和其氢化油、以及源自天然的蜡。

作为酯系的油相成分，可列举出例如三2-乙基己酸甘油酯、2-乙基己酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸乙酯、棕榈酸辛酯、异硬脂酸异鲸蜡酯、硬脂酸丁酯、肉豆蔻酸丁酯、亚油酸乙酯、亚油酸异丙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异鲸蜡酯、肉豆蔻酸异硬脂酯、棕榈酸异硬脂酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、异硬脂酸异鲸蜡酯、癸二酸二乙酯、己二酸二异丙酯、新戊酸异芳烷基酯、三(辛酸·癸酸)甘油酯、三2-乙基己酸三羟甲基丙烷酯、三异硬脂酸三羟甲基丙烷酯、四2-乙基己酸季戊四醇酯、辛酸鲸蜡酯、月桂酸癸酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、肉豆蔻酸鲸蜡酯、硬脂酸硬脂酯、油酸癸酯、蓖麻油酸鲸蜡酯、月桂酸异硬脂酯、肉豆蔻酸异十三烷基酯、肉豆蔻酸异鲸蜡酯、肉豆蔻酸异硬脂酯、棕榈酸异鲸蜡酯、棕榈酸异硬脂酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸异鲸蜡酯、油酸异癸酯、油酸辛基十二烷基酯、亚油酸辛基十二烷基酯、异硬脂酸异丙酯、2-乙基己酸十六烷基硬脂酯、2-乙基己酸硬脂酯、异硬脂酸己酯、二辛酸乙二醇酯、二油酸乙二醇酯、二癸酸丙二醇酯、二(辛酸·癸酸)丙二醇酯、二辛酸丙二醇酯、二癸酸新戊二醇酯、二辛酸新戊二醇酯、三辛酸甘油酯、三(十一烷酸)甘油酯、三异棕榈酸甘油酯、三异硬脂酸甘油酯、新戊酸辛基十二烷基酯、辛酸异硬脂酯、异壬酸辛酯、新癸酸己基癸酯、新癸酸辛基十二烷基酯、异硬脂酸异鲸蜡酯、异硬脂酸异硬脂酯、异硬脂酸辛基癸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、碳酸二丙酯、碳酸二烷基酯(C12-18)、柠檬酸三异鲸蜡酯、柠檬酸三异芳烷基酯、柠檬酸三异辛酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、乳酸鲸蜡酯、乳酸辛基癸酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰基三乙酯、柠檬酸乙酰基三丁酯、柠檬酸三辛酯、苹果酸二异硬脂酯、羟基硬脂酸2-乙基己酯、琥珀酸二2-乙基己酯、己二酸二异丁酯、癸二酸二异丙酯、癸二酸二辛酯、硬脂酸胆甾醇酯、异硬脂酸胆甾醇酯、羟基硬脂酸胆甾醇酯、油酸胆甾醇酯、油酸二氢胆甾醇酯、异硬脂酸植物甾醇酯、油酸植物甾醇酯、12-硬脂酰基羟基硬脂酸异鲸蜡酯、12-硬脂酰基羟基硬脂酸硬脂酯、12-硬脂酰基羟基硬脂酸异硬脂酯等。

作为烃系的油相成分，可列举出例如角鲨烷、液体石蜡、α-烯烃低聚物、异链烷烃、白蜡(Ceresin)、链烷烃、液体异链烷烃、固体链烷烃、聚丁烯、微晶蜡、凡士林等。

作为硅氧烷系的油相成分，可列举出例如二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、甲基环聚硅氧烷、八甲基聚硅氧烷、十甲基聚硅氧烷、十二甲基环硅氧烷、甲基氢化聚硅氧烷、聚醚改性有机聚硅氧烷、二甲基硅氧烷·甲基鲸蜡基氧基硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷·甲基硬脂氧基硅氧烷共聚物、烷基改性有机聚硅氧烷、末端改性有机聚硅氧烷、氨基改性硅油、氨基改性有机聚硅氧烷、二甲基硅氧烷醇、硅氧烷凝胶、丙烯酸硅氧烷、三甲基甲硅烷氧基硅酸、硅氧烷RTV橡胶等。

作为氟系的油相成分，可列举出例如全氟聚醚、氟改性有机聚硅氧烷、氟化沥青、氟碳化物、氟代醇、氟代烷基·聚氧化烯共改性有机聚硅氧烷等。

作为动植物油和其氢化油、以及源自天然的蜡，可列举出例如牛脂、氢化牛脂、猪脂、氢化猪脂、马油、氢化马油、貂油、大西洋胄胸鲷油、鱼油、氢化鱼油、蛋黄、霍霍巴油等动植物油及其氢化油、鳄梨油、杏仁油、橄榄油、可可脂、杏仁油、桐油、芝麻油、小麦胚芽油、米胚芽油、米糠油、红花油、牛油树脂、大豆油、月见草油、山茶油、玉米油、菜籽油、氢化菜籽油、棕榈仁油、氢化棕榈仁油、棕榈油、氢化棕榈油、花生油、氢化花生油、蓖麻油、氢化蓖麻油、向日葵油、葡萄籽油、霍霍巴油、氢化霍霍巴油、澳洲坚果油、白池花油、棉籽油、氢化棉籽油、椰子油、氢化椰子油、蔷薇油等植物油及其氢化油、蜂蜡、高酸值蜂蜡、羊毛脂、还原羊毛脂、氢化羊毛脂、液态羊毛脂、巴西棕榈蜡、褐煤蜡等蜡等。

作为高级醇，可列举出例如月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇、异硬脂醇、油醇、山嵛醇、2-乙基己醇、十六烷醇、辛基十二烷醇等。

作为脂肪酸，可列举出例如辛酸、癸酸、十一碳烯酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、二十二烷酸、芥酸、2-乙基己酸等。

作为紫外线吸收剂，可列举出例如对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸戊酯、对氨基苯甲酸乙基二羟基丙酯、对氨基苯甲酸甘油酯、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸辛酯、对氨基苯甲酸辛基二甲酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸辛酯、水杨酸三乙醇胺、水杨酸苯酯、水杨酸丁基苯酯、水杨酸苄酯、水杨酸高薄荷酯(Homomenthyl salicylate)、肉桂酸苄酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、二对甲氧基肉桂酸单2-乙基己酸甘油酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基氢化肉桂酸二乙醇胺盐、肉桂酸二异丙基·二异丙基酯混合物、尿刊酸、尿刊酸乙酯、羟基甲氧基二苯甲酮、羟基甲氧基二苯甲酮磺酸及其盐、二羟基甲氧基二苯甲酮、二羟基甲氧基二苯甲酮二磺酸钠、二羟基二苯甲酮、二羟基二甲氧基二苯甲酮、羟基辛氧基二苯甲酮、四羟基二苯甲酮、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷、2,4,6-三苯胺基-p-(羰基-2-乙基己基-1-氧基)-1,3,5-三嗪、2-(2-羟基-5-甲基苯基)苯并三唑、甲基-O-氨基苯甲酸酯、2-乙基己基-2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸酯、苯基苯并咪唑硫酸、3-(4-甲基苄叉基)莰酮、异丙基二苯甲酰基甲烷、4-(3,4-二甲氧基苯基亚甲基)-2,5-二氧代-1-咪唑烷丙酸2-乙基己酯等、以及它们的高分子衍生物、硅烷衍生物、氧化钛、氧化锌及其分散物等。需要说明的是，氧化锌、氧化钛等可以经过表面处理。

作为经皮吸收助剂，可列举出例如乙酸、乙酸钠、柠檬烯、薄荷脑、水杨酸、透明质酸、油酸、N,N-二乙基-间-甲苯酰胺(N,N-二乙基-3-甲基苯甲酰胺)、硬脂酸正丁酯、苯甲醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、聚丙二醇、克罗米通、癸二酸二乙酯、N-甲基吡咯烷酮、N-乙基吡咯烷酮、月桂醇等。

作为粉体、颜料，可列举出例如红色104号、红色201号、黄色4号、蓝色1号、黑色401号、碱性染料、HC颜色、分散染料、直接染料等色素、黄色4号AL色淀、黄色203号BA色淀等色淀色素、尼龙粉末、丝粉末、氨基甲酸酯粉末、硅氧烷粉末、聚甲基丙烯酸甲酯粉末、纤维素粉末、淀粉、硅氧烷弹性体球状粉体、聚乙烯粉末等高分子、氧化铁黄、氧化铁红、氧化铁黑、氧化铬、炭黑、群青、普鲁士蓝等有色颜料、氧化锌、氧化钛、氧化铈等白色颜料、滑石、云母、绢云母、高岭土、板状硫酸钡等体质颜料、云母钛等珠光颜料、硫酸钡、碳酸钙、碳酸镁、硅酸铝、硅酸镁等金属盐、二氧化硅、氧化铝等无机粉体、硬脂酸铝、硬脂酸镁、棕榈酸锌、肉豆蔻酸锌、肉豆蔻酸镁、月桂酸锌、十一碳烯酸锌等金属皂、膨润土、绿土、氮化硼等。对于这些粉体的形状(球状、棒状、针状、板状、不定形状、鳞片状、纺锤状等)和粒径没有特别限制。

需要说明的是，这些粉体和颜料可以通过以往公知的表面处理、例如氟化合物处理、硅氧烷处理、有机硅树脂处理、侧基处理、硅烷偶联剂处理、钛偶联剂处理、油剂处理、N-酰基化赖氨酸处理、聚丙烯酸处理、金属皂处理、氨基酸处理、卵磷脂处理、无机化合物处理、等离子体处理、机械化学处理等事先进行表面处理。

作为表面活性剂，阴离子性表面活性剂、阳离子性表面活性剂、两性表面活性剂和非离子性表面活性剂中的任意一种都可以适当使用。

作为阴离子性表面活性剂，可列举出例如脂肪酸皂、α-酰基磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基烯丙基磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷基硫酸盐、POE烷基醚硫酸盐、烷基酰胺硫酸盐、烷基磷酸盐、POE烷基磷酸盐、烷基酰胺磷酸盐、烷酰基烷基牛磺酸盐、N-酰基氨基酸盐、POE烷基醚羧酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基磺基乙酸钠、酰基羟乙基磺酸盐、酰基化水解胶原肽盐、全氟烷基磷酸酯等。

作为阳离子性表面活性剂，可列举出例如烷基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基溴化铵、十六烷基硬脂基三甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、二十二烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、二十二烷酸酰胺丙基二甲基羟基丙基氯化铵、硬脂酸二乙基氨基乙基酰胺、硬脂酸二甲基氨基丙基酰胺、羊毛脂衍生物季铵盐等。另外，也可列举出脂肪酸酰胺二烷基胺等叔胺及其盐。

作为两性表面活性剂，可列举出例如羧基甜菜碱型、酰胺甜菜碱型、磺基甜菜碱型、羟基磺基甜菜碱型、酰胺磺基甜菜碱型、磷酸酯甜菜碱型、氨基羧酸盐型、咪唑啉衍生物型、酰胺胺型的各种两性系表面活性剂。

作为非离子性表面活性剂，可列举出例如丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、POE脱水山梨糖醇脂肪酸酯、POE山梨糖醇脂肪酸酯、POE甘油脂肪酸酯、POE烷基醚、POE脂肪酸酯、POE氢化蓖麻油、POE蓖麻油、POE·POP共聚物、POE·POP烷基醚、聚醚改性硅氧烷月桂酸烷醇酰胺、烷基胺氧化物、氢化大豆磷脂、氢氧化大豆磷脂、高分子系表面活性剂、生物表面活性剂等。

需要说明的是，也可以使用天然系表面活性剂，作为这种表面活性剂，可列举出例如卵磷脂、皂苷、糖系表面活性剂等。

作为多元醇和糖，可列举出例如乙二醇、二甘醇、聚乙二醇、丙二醇、一缩二丙二醇、聚丙二醇、甘油、二甘油、聚甘油、3-甲基-1,3-丁二醇、1,3-丁二醇、山梨醇、甘露醇、蜜三糖、赤藓醇、葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖醇、乳糖、麦芽糖、麦芽糖醇、海藻糖、烷基化海藻糖、混合异构化糖、硫酸化海藻糖、支链淀粉等。另外，也可以使用它们的化学修饰体等。

作为高分子，可列举出例如丙烯酸酯/甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸乙烯酯/巴豆酸共聚物、乙酸乙烯酯/巴豆酸/新癸酸乙烯酯共聚物、甲基乙烯基醚马来酸半酯、丙烯酸叔丁酯/丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸共聚物、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯/丙酸乙烯酯共聚物、乙酸乙烯酯/巴豆酸共聚物(ルビセットCA：BASF公司制)、乙酸乙烯酯/巴豆酸/乙烯基吡咯烷酮共聚物、乙烯基吡咯烷酮/丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/丙烯酰胺共聚物、乙酸乙烯酯/马来酸丁酯/丙烯酸异冰片酯共聚物、羧基乙烯基聚合物、丙烯酸·甲基丙烯酸烷基酯共聚物等阴离子性高分子化合物、甲基丙烯酸二烷基氨基乙基酯聚合物的乙酸两性化物、丙烯酸辛基丙烯酰胺/丙烯酸羟基丙酯/甲基丙烯酸丁基氨基乙酯共聚物等两性高分子化合物、乙烯基吡咯烷酮/甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯的季化物、甲基乙烯基氯化咪唑鎓/乙烯基吡咯烷酮共聚物等阳离子性高分子化合物、聚乙烯基吡咯烷酮、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物、乙烯基吡咯烷酮/甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯共聚物、乙烯基己内酰胺/乙烯基吡咯烷酮/甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯共聚物等非离子性高分子化合物等。另外，也可以合适地配合纤维素或其衍生物、角蛋白及胶原或其衍生物、海藻酸钙、支链淀粉、琼脂、明胶、罗望子种子多糖类、黄原胶、角叉菜胶、高甲氧基果胶、低甲氧基果胶、瓜尔胶、阿拉伯胶、结晶纤维素、阿拉伯半乳聚糖、刺槐树胶、黄蓍胶、海藻酸、白蛋白、酪蛋白、凝胶多糖、结冷胶、葡聚糖等源自天然的高分子化合物、葡寡糖、含有海藻糖的多糖体、含有鼠李糖的多糖体等。

作为生理活性成分，可列举出在涂布于皮肤的情况下对于皮肤提供一些生理活性的物质。例如为具有美白、抗炎、防衰老、紫外线防御、瘦身、紧绷、抗氧化、生发·育发、抑毛、保湿、促进血液循环、抗菌·杀菌、冰凉感·温感、促进创伤治愈、缓和刺激、止痛、细胞活化等效果的成分，可列举出植物提取物、海藻提取物、维生素及其衍生物、氨基酸、环肽以外的各种肽、透明质酸钠、粘多糖等生物体高分子、神经酰胺、植物鞘氨醇、胆甾醇、植物甾醇等细胞间脂质构成成分或其类似成分、酶成分等。

作为它们的合适的配合成分的例子，可列举出例如明日叶提取物、鳄梨提取物、甘茶提取物、蜀葵提取物、山金车花提取物、芦荟提取物、杏提取物、杏仁提取物、异黄酮、银杏提取物、茴香提取物、姜黄提取物、乌龙茶提取物、营实提取物、狭叶松果菊叶提取物、黄芩提取物、黄柏提取物、黄连提取物、大麦提取物、小连翘提取物、野芝麻提取物、水田芥菜提取物、橙子提取物、可可提取物、海水干燥物、海藻提取物、水解弹力蛋白、水解小麦粉末、水解蚕丝、南瓜种子提取物、洋甘菊(camomilla)提取物、胡萝卜提取物、茵陈蒿提取物、甘草提取物、玫瑰茄提取物、火棘提取物、猕猴桃提取物、奎宁皮提取物、黄瓜提取物、鸟苷、栀子提取物、山白竹提取物、苦参根提取物、红莓苔提取物、核桃提取物、葡萄柚提取物、铁线莲提取物、小球藻提取物、桑提取物、龙胆提取物、红茶提取物、酵母提取物、牛蒡提取物、米糠发酵提取物、米胚芽油、雏菊提取物、胶原、越橘提取物、菜苔提取物、柴胡提取物、脐带萃取液、鼠尾草提取物、石碱草提取物、细竹提取物、山楂提取物、花椒提取物、香菇提取物、地黄提取物、紫草根提取物、紫苏提取物、椴树提取物、蚊子草提取物、芍药提取物、菖蒲根提取物、白桦提取物、问荆提取物、常春藤提取物、山楂提取物、欧洲接骨木提取物、欧蓍草提取物、洋薄荷提取物、鼠尾草提取物、锦葵提取物、川芎提取物、獐芽菜提取物、大豆提取物、大枣提取物、大豆发酵提取物、百里香提取物、茶提取物、丁香提取物、白茅提取物、陈皮提取物、月见草提取物、积雪草提取物、诃子提取物、当归提取物、金盏花提取物、桃仁提取物、桧树提取物、鱼腥草提取物、西红柿提取物、纳豆提取物、人参提取物、大蒜提取物、蔷薇提取物、扶桑提取物、麦门冬提取物、欧芹提取物、蜂蜜、香蕉花提取物、金缕梅提取物、墙草提取物、延命草提取物、没药醇、枇杷提取物、款冬提取物、蜂斗菜芽提取物、茯苓提取物、假叶树提取物、葡萄提取物、蜂胶、丝瓜提取物、红花提取物、薄荷提取物、欧椴树提取物、牡丹提取物、蛇麻草提取物、松树提取物、欧洲七叶树提取物、观音莲提取物、无患子提取物、蜂花提取物、桃提取物、矢车菊提取物、桉树提取物、虎耳草提取物、柚提取物、薏苡仁提取物、艾蒿提取物、熏衣草提取物、苹果提取物、荔枝(茘枝)提取物、莴苣提取物、柠檬提取物、紫云英提取物、玫瑰提取物、迷迭香提取物、罗马甘菊提取物、蜂王浆提取物等。

另外，可列举出例如脱氧核糖核酸、粘多糖类、透明质酸钠、硫酸软骨素钠、胶原、弹力蛋白、甲壳质、壳聚糖、水解卵鞍等生物体高分子、氨基酸、水解肽、乳酸钠、尿素、吡咯烷酮羧酸钠、甜菜碱、乳清、三甲基甘氨酸、蓖麻子白朊·精氨酸缩合物等多肽等保湿成分、神经鞘脂、神经酰胺、植物鞘氨醇、胆甾醇、胆甾醇衍生物、植物甾醇衍生物、磷脂等细胞间脂质构成成分或其类似物、ε-氨基己酸、甘草酸、β-甘草亭酸、氯化溶菌酶、愈创蓝油烃、ヒドロコールチゾン、茶树油等抗炎剂、维生素A及其衍生物、维生素B2及其衍生物、维生素B6及其衍生物、维生素C及其衍生物、维生素D及其衍生物、维生素E及其衍生物、泛酸钙、生物素、烟酸酰胺等维生素类、尿囊素、二异丙基胺二氯乙酸酯、4-氨基甲基环己烷羧酸等活性成分、生育酚、类胡罗卜素、类黄酮、单宁、木酚素、皂苷等抗氧化剂、α-羟基酸、β-羟基酸等细胞活化剂、γ-谷维素、维生素E衍生物等促进血液循环剂、视黄醇、视黄醇衍生物等创伤治愈剂、熊果苷、曲菌酸、胎盘提取物、硫磺、鞣花酸、亚油酸、氨甲环酸、谷胱甘肽等美白剂、千金藤素、甘草提取物、辣椒酊、日柏酚、碘化大蒜提取物、盐酸吡多辛、DL-α-生育酚、乙酸DL-α-生育酚酯、烟酸、烟酸衍生物、泛酸钙、D-泛酰醇、乙酰基泛醇乙醚、生物素、尿囊素、异丙基甲基苯酚、雌二醇、乙炔基雌二醇、卡普氯铵、苯扎氯铵、盐酸苯海拉明、Takanal、莰酮、水杨酸、壬酸香兰基酰胺、壬酸香兰基酰胺、吡罗克酮乙醇胺、十五烷酸甘油酯、L-薄荷脑、单硝基愈创木酚、间苯二酚、γ-氨基丁酸、苄索氯铵、盐酸美西律、生长素、雌激素、斑蝥酊、环孢素、巯氧毗啶锌、ヒドロコールチゾン、米诺地尔、单硬脂酸聚氧亚乙基脱水山梨糖醇酯、薄荷油、Sasanishiki提取物等育发剂等。

作为抗氧化剂，可列举出例如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠、硫代二丙酸二月桂酯、生育酚、甲苯基双胍、正二氢愈创酸、对羟基茴香醚、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、硬脂酸抗坏血酸酯、棕榈酸抗坏血酸酯、没食子酸辛酯、没食子酸丙酯、类胡萝卜素、类黄酮、单宁、木酚素、皂苷、苹果提取物、丁香提取物等发现抗氧化效果的植物提取物等。

作为溶剂，可列举出生理盐水、纯化水、乙醇、低级醇、醚类、LPG、氟碳化物、N-甲基吡咯烷酮、氟代醇、挥发性直链状硅氧烷、新一代氟利昂等。

需要说明的是，本发明的环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐如上所述可以用于制造外用剂，因此本发明另外也涉及本发明的环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐在制造外用剂中的应用。

3.外用剂的使用方法

接着对于本发明的外用剂的使用方法进行说明。

本发明的外用剂的使用方法包括将上述的本发明的外用剂适用于对象的皮肤和/或粘膜。

作为对象，除了人之外，没有特别限定，可列举出例如鸟类、哺乳动物等脊椎动物。特别是作为哺乳动物，可列举出例如小鼠、大鼠、沙鼠、仓鼠、豚鼠等啮齿类、兔等实验动物、猪、牛、山羊、马、绵羊、貂等家畜、狗、猫等宠物、人、猴、食蟹猴、猕猴、绒猴、猩猩、黑猩猩等灵长类等。另一方面，也可以由对象将人排除之外。

另外，作为适用外用剂的对象的皮肤和/或粘膜，可以为对象的任意部位的皮肤、粘膜，例如能够适用于头(头皮)、面部、脖子、胳膊、躯体、胳膊、手、腿脚等的皮肤或粘膜。

本发明的外用剂的更具体的使用方法如下所述。

(1)皮炎的治疗和预防方法

本发明的外用剂用作皮炎治疗剂或皮炎预防剂的情况下，可以将该外用剂直接适用于目的的皮肤和/或粘膜部位(例如皮炎发病的患部)。

作为适用频度，没有特别限定，例如为1～10次/天、优选1～5次/天、进一步优选1～3次/天。需要说明的是，本发明的外用剂由于其效果的持续时间长，即使是比较少的频度例如以1次/天适用的情况下，也发挥充分的效果。

另外，作为用量，没有特别限定，例如每1次适用，本发明的环肽及其衍生物以及它们的可药用盐的总量可以设为0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、更优选0.01～1000μg/mL、进一步优选0.1～100μg/mL、特别优选1～100μg/mL。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

(2)发痒的减轻或消失方法

本发明的外用剂用作止痒剂的情况下，可以将该外用剂直接适用于目的的皮肤和/或粘膜部位。

作为适用频度，没有特别限定，例如为1～10次/天、优选1～5次/天、进一步优选1～3次/天。

另外，作为用量，没有特别限定，例如每1次适用，本发明的环肽及其衍生物以及它们的可药用盐的总量可以设为0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、更优选0.01～1000μg/mL、进一步优选0.1～100μg/mL、特别优选1～100μg/mL。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

(3)化妆品使用方法

本发明的外用剂用作化妆品的情况下，可以将该外用剂直接适用于目的的皮肤和/或粘膜部位。

作为适用频度，没有特别限定，例如为1～10次/天、优选1～5次/天、进一步优选1～3次/天。

另外，作为用量，没有特别限定，例如每1次适用，本发明的环肽及其衍生物以及它们的可药用盐的总量可以设为0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、更优选0.01～1000μg/mL、进一步优选0.1～100μg/mL、特别优选1～100μg/mL。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

(4)秃发症的治疗和预防方法以及生发方法及育发方法

本发明的外用剂用作秃发症治疗剂、秃发症预防剂、生发剂或育发剂的情况下，可以将该外用剂直接适用于目的的部位(例如头皮、皮肤的秃发部位)。

作为适用频度，没有特别限定，例如为1～10次/天、优选1～5次/天、进一步优选1～3次/天。

另外，作为用量，没有特别限定，例如每1次适用，本发明的环肽及其衍生物以及它们的可药用盐的总量可以设为0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、更优选0.01～1000μg/mL、进一步优选0.1～100μg/mL、特别优选1～100μg/mL。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

(5)鼻炎的治疗和预防方法

本发明的外用剂用作鼻炎治疗剂或鼻炎预防剂的情况下，可以将该外用剂直接适用于目的的部位(例如鼻腔粘膜)。

作为适用频度，没有特别限定，例如为1～10次/天、优选1～5次/天、进一步优选1～3次/天。

另外，作为用量，没有特别限定，例如每1次适用各鼻腔，本发明的环肽及其衍生物以及它们的可药用盐的总量可以设为0.0001～1000000μg/mL、优选0.001～10000μg/mL、更优选0.01～1000μg/mL、进一步优选0.1～100μg/mL、特别优选1～100μg/mL。另外，其它方式中，可以以1～800μg/mL、3～500μg/mL的浓度含有。

4.药物

接着对于本发明的药物进行说明。

本发明的药物含有一种以上的本发明的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐。

如上所述，本发明的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐与BNP同样地，与具有鸟苷酸环化酶结构域的受体NPR-A(别名GC-A)结合而促进环状鸟苷一磷酸(Cyclicguanosine monophosphate、cGMP)的产生，例如认为具有利尿作用、血管扩张作用、肾素-醛固酮分泌抑制、交感神经抑制、肥大抑制等作用。另外认为，这些本发明的化合物与BNP相比具有优异的药效、效能、特别是优异的速效性。

因此，本发明的药物可以用于与以往含有BNP作为有效成分的药物同样的目的。

作为本发明的药物能够适用的疾病，没有特别限定，例如除了上述各种疾病之外，还可列举出高血压症、不稳定型心绞痛、急性心肌梗塞、浮肿性疾病、肾功能衰竭、心力衰竭、免疫疾病、肥胖、代谢综合征等。

另外，对于本发明的药物的剂型没有特别限定，除了上述外用剂之外，例如还可以形成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、经口液体制剂、糖浆剂、经口胶冻剂等经口给药用制剂、口腔用片剂、口腔用喷雾剂、口腔用半固体剂、含漱剂等口腔适用用制剂、注射剂、输液剂等注射给药用制剂、透析用剂等透析用制剂、吸入剂、滴眼剂、眼软膏剂、滴耳剂、阴道片、阴道用栓剂等。

实施例

以下通过实施例对于本发明进行更具体说明。但是，本发明不被这些实施例所限定。

1.环肽的制造

首先合成由式I-a所示的氨基酸序列形成的环肽。

具体而言，使用肽合成机，通过肽固相合成法依次结合氨基酸，形成由17个氨基酸形成的直链状的肽。然后，使处于Cys1、Cys17的保护基团离去后进行碘(I₂)处理，氧化性地形成同氨基酸残基之间的半胱氨酸键，形成环肽。

对于所得到的含有环肽的组合物，利用反相液体高速色谱(反相HPLC)进行纯化，然后进行冷冻干燥，得到白色粉末形式的环肽的纯化物。

另外，进行所得到的环肽的质量分析。

HPLC的条件如以下所示。

装置：Agilent 1100

流速：1.0ml/分钟

洗脱液A：0.1％三氟乙酸/水

洗脱液B：0.1％三氟乙酸/乙腈

梯度：80％洗脱液B等梯度

质量分析(MS)的条件如以下所示。

装置：Thermo Finnigan LCQ Advantage

离子化法：电喷射离子化

分析法：离子陷阱法

其结果，观测到m/z＝901.83([M+2H]²⁺)、m/z＝1801.84([M+H]⁺)，确认了上述肽与由目的的环肽的组成式(C₇₂H₁₂₀N₂₄O₂₄S₃)算出的理论值的分子量(1802.07)和质量数(1800.8069)一致。

进而，为了测定上述肽的纯度而利用HPLC在以下的条件下进行测定。

色谱柱：Discovery C18、4.6mm×250mm、粒径5微米

柱温：室温

洗脱液A：0.1％三氟乙酸/水

洗脱液B：0.1％三氟乙酸/乙腈

梯度：10～30％洗脱液B/20分钟

流量：1.2ml/分钟

温度：室温

注入量：20μl

检测器：UV检测器(检出波长215nm)

测定的结果确认了，所得到的蛋白质的纯度为99.2％。

2.制剂的制造

2.1凝胶制剂的制造

含有由式I-a所示的氨基酸序列形成的环肽(以下的实施例中称为“B环”的情况下，指的是上述式I-a所示的环肽)的凝胶基质制剂(B环凝胶制剂、实施例)和含有人BNP的凝胶基质制剂(BNP凝胶制剂、比较例)如下所述制造。

将对羟基苯甲酸甲酯(商品名：メッキンスM、上野制药制)0.1g、苯氧基乙醇0.2g、1,2-戊二醇3.0g称量于同一容器中，加热到60～70℃形成均匀的溶液，投入到混合釜。

接着向混合釜投入浓甘油6.0g，然后加入羧基乙烯基聚合物(商品名：Carbopol 940、Lubrizol Advanced Materials公司制)0.44g和黄原胶(商品名：ケルトロールT、CP KELCO公司制)0.08g的混合物，用叶片进行搅拌，将它们充分分散。

接着用叶片进行搅拌的同时缓慢地投入纯化水83.95g，将釜温加热到70～80℃的同时，用叶片、分散器进行搅拌，使所分散的内容物溶解而得到溶液。然后，停止分散器，确认溶液中的内容物溶解，立即开始冷却。在釜温达到40℃左右的时点，将Ashland Inc.制的Lubrajel NP 6.0g(甘油2.7g、羧基乙烯基聚合物0.06g、聚丙烯酸钠0.018g、水3.222g)加入到溶液，用叶片均匀混合。然后，进一步加入氢氧化钾0.230g将溶液中和，在釜温达到25℃的时点，停止叶片的旋转制造凝胶基质。

接着，将由式I-a所示的氨基酸序列形成的环肽(B环)20.1mg溶解于144mL的生理盐水得到的B环溶液0.131mL均匀搅拌混合于上述中得到的凝胶基质10g，制造上述B环的浓度约1μM(约1.8μg/g)的凝胶基质制剂(B环凝胶制剂)。同样地，制造B环的浓度约0.3μM(约0.54μg/g)、约0.5μM(约0.9μg/g)、约2.0μM(约3.6μg/g)的凝胶基质制剂。需要说明的是，以下的实施例中，只要没有特别记载，则“B环凝胶制剂”使用约1μM的B环浓度的B环凝胶制剂。

接着将人BNP-32：20.5mg(American Peptide Company)溶解于118mL的生理盐水得到的BNP溶液0.2mL均匀搅拌混合于上述中得到的凝胶基质10g，制造BNP-32的浓度约1μM的凝胶基质制剂(BNP凝胶制剂)。同样地，制造BNP-32的浓度约0.5μM、2.0μM的凝胶基质制剂。需要说明的是，以下的实施例中，只要没有特别记载则“BNP凝胶制剂”使用约1μM的BNP浓度的BNP

凝胶制剂。

2.2滴鼻剂的制造含有由式I-a所示的氨基酸序列形成的环肽(B环)的滴鼻剂(B环滴鼻剂、实施例)和含有人BNP的滴鼻剂(BNP滴鼻剂、比较例)如以下所述制造。

首先将由式I-a所示的氨基酸序列形成的环肽(B环)溶解于生理盐水，调节浓度，得到约1微摩尔/l(约1.8μg/g)的B环浓度的B环滴鼻液。

接着，将B环滴鼻液填充到定量式的滴鼻用喷雾容器(AS ONE Corporation制)，进而进行调节以使每1次的喷雾量为100μl(0.1ml)，得到B环滴鼻剂。

同样地对于人BNP(American Peptide Company)，也得到1微摩尔/l的BNP浓度的BNP滴鼻液，将其填充到定量式的滴鼻用喷雾容器(AS ONE Corporation制)，进而进行调节以使每1次的喷雾量为100μl(0.1ml)，得到BNP滴鼻剂。

3.皮炎治疗效果的确认

3.1B环凝胶制剂的效果确认

对于患有各种皮炎的受试者，将前述的B环凝胶制剂涂布于患部，观察涂布前后的症状的变化。需要说明的是，能够的情况下，作为比较例对于同一受试者，在没有涂布B环凝胶制剂的患部涂布前述的BNP凝胶制剂，观察涂布前后的症状的变化。需要说明的是，关于搔痒感，对于各患部使用视觉模拟评分法(VAS、Visual analogue scale)以10个等级进行评价。

试验结果与受试者的年龄、性别、症状和对于受试者的处方一起示于表1～7。

[表1]

[表2]

[表3]

[表4]

[表5]

[表6]

[表7]

[表8]

如表1～8所示，对于任意一受试者，对于任意一症状的皮炎，在适用B环凝胶制剂的部位都观察到皮炎的各种症状减轻、消失。

特别是适用B环凝胶制剂的情况下，刚适用后立即观察到搔痒感的减轻、消失。对于皮炎而言，通常患者若感觉到搔痒感则存在挠破感觉到搔痒感的部位的倾向，这有可能成为皮炎的重症化的原因之一。但是，通过如此搔痒感显著地减轻、消失，结果能够防止皮炎的重症化。

另外，B环凝胶制剂的效果，对于任意一病例而言，与适用BNP凝胶制剂时的效果相比优异。特别是B环凝胶制剂与BNP凝胶制剂相比，速效性和持续性优异，具有更强力的止痒效果。需要说明的是，确认了这些效果在利用凝胶基质时是得不到的。

3.2利用左右分别涂布法的B环凝胶制剂和凝胶基质的比较

对于患有各种皮炎的受试者，将B环凝胶制剂和凝胶基质涂布于患部，观察涂布前后的症状的变化(下表)。

[表9]

4.作为化妆品的效果的确认

利用含有B环的化妆品的效果，对于作为含有B环的凝胶剂、入浴剂和头发化妆品(洗发剂、护发素)或沐浴皂使用的结果进行评价，确认其效果。

4.1.1肌肤质量改善效果的确认(B环凝胶制剂与BNP凝胶制剂的比较)

对于受试者，将上述的B环凝胶制剂、BNP凝胶制剂作为处方。接着，对于各受试者的面颊、眼睛，右侧涂布B环凝胶制剂、左侧涂布BNP凝胶制剂，观察肌肤状态的变化并进行比较(下表)。需要说明的是，肌肤状态的变化基于受试者的体感的评价、和作为医生的本发明人等的客观观察进行判定。

[表10]

另外，不进行左右分别涂布，而涂布了B环凝胶制剂的例子如以下总结(下表)。需要说明的是，肌状态的变化用与上述相同的方法进行。

[表11]

以上示出，本发明的B环具有皮肤的保湿效果的同时可以整理肌理，进而对于美白(斑点、暗淡)、防衰老(松弛、张力、深纹)等肌肤质量改善是有效的同时，对于唇粗糙等粘膜状态的改善也是有效的。

对于任意一受试者而言，与涂布了BNP凝胶制剂的部位相比，对于涂布了B环凝胶制剂的部位，发现肌肤质量的显著改善效果和其维持。具体而言，肌肤整齐、肌肤湿润、肌肤的肌理整齐、肌肤有张力而紧绷、肌肤变得柔软、皮肤的干燥得到抑制、细纹不明显、肌肤的水分、油分得到补充保持、眼梢的皱纹变浅、不明显、没有肌肤的刺痛感、发痒消失、得到抑制、肌肤的干裂得到缓和、肌肤的健康状态得到保持等效果，对于涂布了B环凝胶制剂的部位而言，与涂布了BNP凝胶制剂的部位相比，被显著发现。

另外，特别是对于20几岁和30几岁的受试者而言，具有皱纹改善、消失，面颊的松弛得到改善，皮肤湿润，补充保持水分、油分等效果，肌肤紧绷、面颊提升、另外没有肌肤的刺痛感，肌肤的干裂得到缓和等效果，对于涂布了B环凝胶制剂的部位而言，与涂布了BNP凝胶制剂的部位相比被显著发现，与BNP凝胶涂布部位相比该效果也更大。

进而，特别是对于40几岁～50几岁的受试者而言，B环凝胶制剂涂布后迅速显著发现：松弛、深纹、干燥得到改善，肌肤紧绷，暗淡、斑点不明显等效果，该效果与涂布BNP凝胶剂时的效果相比增大。

对于效果的表现而言，与BNP凝胶制剂相比，B环凝胶制剂显著快。具体而言，大部分情况下，在B环凝胶制剂涂布2分钟后左右确认了皱纹消失、开始消失、不明显，肌肤丰满而有张力等效果。另外，该效果此后也持续数小时。没有B环凝胶制剂涂布伴随的刺激症状。

图1表示60几岁的受试者的B环凝胶制剂涂布后的右侧面部的照片。对于相同实验者而言，在B环凝胶制剂涂布20分钟后发现湿润、对于肌肤提供湿润、光泽和柔软性、肌肤紧绷、肌理整齐、提供张力、以及肌肤的深纹不明显的效果。与作为比较对照的BNP凝胶制剂相比，该结果示出本发明的环肽对于细纹当然有效，对于皱纹、松弛也是有效的，进而还具有斑点、暗淡不明显的效果。

4.1.2肌肤质量改善效果的确认(B环凝胶制剂与凝胶基质的比较)

为了对于B环凝胶制剂和BNP凝胶制剂的效果中的凝胶基质的贡献的有无进行研究，在3名受试者的右面部涂布B环凝胶制剂、在左面部涂布凝胶基质，对于受试者的面部的肌肤状态的变化进行观察(下表)。

[表12]

其结果，任意一受试者，都在涂布了凝胶基质的部分感觉到刺痛的刺激、皮肤的干燥感没有改善。另外，任意一受试者，对于涂布了凝胶基质的部分，没有观察到肌理整齐、毛孔紧绷等效果。另一方面，任意一受试者，涂布了B环凝胶制剂的部分的肌肤湿润、变得柔软、被保湿。

4.2涂布了B环凝胶制剂的粘膜的状态的观察

对于具有唇粗糙的症状的正常受试者，涂布B环凝胶制剂，观察唇的粘膜的状态变化(下表)。需要说明的是，粘膜的状态的变化基于受试者的体感的评价、和作为医生的本发明人等的客观观察进行判定。

[表13]

如上所述本发明的环肽也具有改善粘膜状态的作用，进而也可以确认关于这种作用具有速效性。

4.3涂布了B环凝胶制剂的头皮·毛发的状态的观察

对于具有头皮·毛发的症状的正常受试者，涂布B环凝胶制剂，观察头皮及毛发状态的变化(下表)。需要说明的是，头皮及毛发状态的变化基于受试者的体感的评价、和作为医生的本发明人等的客观观察进行判定。

[表14]

以上示出，本发明的BNP环肽，对于头皮、头发提供、保持湿润的同时，补充保持适当的水分、油分，可以改善、防止干燥，可以洁净头皮、毛发。进而，对于抑制头皮的发痒、头皮屑也是有效的同时，对于毛发而言，对于薄发、秃发的预防、育发、生发促进、生发、促发是有效的，对于病后·产后的秃发、养发等的改善也是有效的。

4.4使用了含有B环的入浴剂时的皮肤状态的观察

对于以0.01μM溶解有B环的37～41℃的热水(相对于热水200L溶解B环20μM溶液100ml)，使受试者1次/天入浴14天，将受试者的皮肤状态与新热水(仅热水)时进行比较(表14)。需要说明的是，皮肤状态的变化基于受试者的体感的评价、和作为医生的本发明人等的客观观察进行判定。

[表15]

以上示出，含有本发明的B环的入浴剂，对于痱子、肌肤的裂口、皲裂、湿疹，不仅痱子、肌肤的裂口、皲裂减轻，而且对于湿疹也发现改善效果。进而，发现肌肤的干燥、肌肤的痛痒的改善，对于皮肤状态的改善是有效的。

4.5使用含有B环的头发化妆品(洗发剂、护发素)或沐浴皂时的头皮和头发状态或皮肤状态的观察

4.5.1含有B环的洗发剂按照以下的组成进行配合、制造。

[表16]

将A和B在70℃下加温溶解后，向A加入B，并进行搅拌、混合。进而进行搅拌的同时在40～35℃下添加C，搅拌的状态下冷却至室温。

4.5.2含有B环的护发素按照以下的组成进行配合、制造。

[表17]

	成分名称(商品名)	配合量(％)
			A	戊二醇	1.50
	BG	3.50
				甘油	1.00
	尼泊金甲酯	0.20
				卡波姆	0.20
	EDTA-2Na	0.10
				用水调成总量	100.00
B	复合乳化剂(NIKKOL ニコムルスLC)	4.00
				月桂酸甲基庚基酯	3.50
	角鲨鲨	0.50
				鲸腊醇	1.50
	澳洲坚果油	0.50
				鳄梨油	0.50
	牛油树脂	0.50
				尼泊金丙酯	0.10
C	水、B环(B环浓度1μM)	1mL

将A和B在80℃下加温溶解后，将A和B保持于80℃的状态下，将A用均相混合机搅拌的同时将B缓慢地加入到A，进行乳化。进而添加C，在搅拌的状态下冷却至35℃。

4.5.3含有B环的沐浴皂按照以下的组成进行配合、制造。

[表18]

将A和B在80℃下加温溶解后，搅拌的同时向A缓慢地加入B。进而搅拌的同时在40～35℃下添加C，搅拌的状态下冷却至室温。

1次/天使用根据上述制造的洗发剂、护发素或沐浴皂14天，评价受试者的头皮和头发状态或皮肤状态中的结果(下表)。需要说明的是，对于皮肤状态的变化而言，头皮的头皮屑、红斑等通过受试者的肉眼评价，头皮的发痒、湿润感、毛发的梳理、光泽、张力·弹力作为受试者的体感的评价。

[表19]

以上示出，含有本发明的B环的头发剂的使用，对于头皮的发痒、红斑、干燥，发现速效性的改善效果。另外对于薄发、掉头发，若连续使用2周以上则对于该症状的改善是有效的。进而，含有本发明的B环的沐浴皂的使用，对于干燥肌肤、敏感肌肤具有改善效果。

5.秃发症治疗效果的确认

涂布B环凝胶制剂、BNP凝胶制剂，观察对于各种秃发的症状的效果(下表)。需要说明的是，症状的变化基于受试者的体感的评价、和作为医生的本发明人等的客观观察进行判定。

[表20]

[表21]

[表22]

5.2病例总结

对于上述的具有女性型秃发症、男性型秃发症、泛发性秃发症、匐行状秃发症、多发性秃发症的受试者的病例而言，作为比较对照，与BNP凝胶制剂相比，适用实施例的B环凝胶制剂的情况下，掉头发显著减少，终毛的生发范围扩大，其生长也快(参照图2)。进而，现有头发产生张力，其弹力变强。与适用任意一比较例的BNP凝胶制剂的情况相比，其症状的改善显著表现出来。即，B环凝胶制剂与BNP凝胶制剂相比，对于上述症状的效能优异。

进而，B环凝胶制剂，改善脂溢性，使头皮洁净，可以抑制头皮屑。另外，预防白发、产生黑发、实现薄发的改善。进而，抑制发痒的效果在10分钟后可以抑制，可知其速效性的效果高。另外，根据病例，涂布后3分钟以内可以抑制发痒。

6.鼻炎的治疗效果的确认

6.1病例

喷雾B环滴鼻剂、BNP凝胶滴鼻剂，观察对于受试者的鼻炎等的效果(表17)。需要说明的是，症状的变化基于受试者的体感的评价、和作为医生的本发明人等的客观观察进行判定。

[表23]

[表24]

[表25]

[表26]

6.2病例总结

对于上述任意一病例，适用实施例的B环滴鼻剂的情况下，鼻漏、鼻塞与适用比较例的BNP滴鼻剂的情况相比，其改善、解除都迅速进行。即，B环滴鼻剂与BNP滴鼻剂相比速效性优异。另外，B环滴鼻剂的效能与BNP滴鼻剂的效能相比为同等以上，另外，其效能的持续时间长、可以抑制症状的复发。

需要说明的是，上述的病例中，对于鼻塞症状、鼻漏症状改善的时点，在由病例信息可以掌握的范围内总结于下表。

[表27]

7.与人BNP的A型受体的结合状态的解析

本发明的B环化合物与以往的BNP相比对于各疾病等的药理效果优异，对此如上所述基于各临床例用数据进行说明，对于上述药理效果由发明人等进行的化合物的立体结构解析的结果证明，为了进行参考，用以下的实验报告进行说明。

为了对于人BNP(BNP-32)与作为相同BNP的受体的A型受体(NPR-A)的结合状态进行研究，进行使用了立体结构的利用同源模拟的in silico解析。模拟使用Swiss-Pdb viewer和SWISS-MODEL。

7.1模板结构

首先在上述解析之前，选定用于研究人BNP与A型受体之间的结合状态的模板结构。作为这种模板结构，使用大鼠NPR-A和大鼠ANP肽的复合体的立体结构(PDB ID：1T34)。大鼠NPR-A为由A链、B链形成的同源二聚体。而这种大鼠NPR-A在大鼠ANP的Cys7～Arg27的21个残基结合的状态下通过X射线晶体结构解析确定立体结构。另外，大鼠NPR-A的立体结构由作为蛋白质立体结构数据库的Protein Data Bank获得。另外，人NPR-A与大鼠NPR-A的氨基酸一致度为85％。

7.2 BNP肽模型

此次，作为BNP的肽模型，使用如下所示的人BNP(BNP-32、序列号13、Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His)中的Cys10～Arg30的区域的氨基酸序列(序列号14、Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg)。需要说明的是，在上述肽模型中，本申请发明的B环的氨基酸序列相当于上述人BNP中的Cys10～Cys26，即为Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys(序列号15)的区域。

7.3同源模拟

为了推测关于人NPR-A的人BNP结合的氨基酸残基，BNP肽与人NPR-A结合而成的复合体模型通过同源模拟构筑。具体而言，通过同源模拟，基于模板结构的大鼠ANP肽，模拟人BNP肽模型，基于模板结构的大鼠NPR-A，模拟人NPR-A的模型结构。

接着，由在人BNP肽模型与人NPR-A之间检出的氨基酸残基推测直接参与相互作用的残基。

该结果示出，BNP肽模型与人NPR-A的二聚体以被其A链和B链夹着的状态结合。需要说明的是，模型中使用的氨基酸序列(序列号14、Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg)等氨基酸序列中的氨基酸作为氨基酸(数字)记载。即，括弧内的数字表示由上述氨基酸序列的N末端计数的数字，例如Phe2指的是由上述肽模型的N末端计数的第2个Phe的氨基酸。

所构筑的复合体模型中，在BNP肽模型与NPR-A的A链之间，推测为利用Phe2的侧链的疏水性键、利用Phe2的主链的氢键、利用Arg4、Met6、Arg8、Ser10、Ser11的侧链的氢键。需要说明的是，BNP肽模型的Phe2、Arg4、Met6、Arg8、Ser10、Ser11，在人BNP中分别对应于Phe11、Arg13、Met15、Arg17、Ser19、Ser20。即，该结果暗示了，人BNP中，这些氨基酸残基为有助于NPR-A活化的残基的可能性。

7.4考察

由以上，通过利用in silico解析的立体结构解析推测，人BNP，存在于其环状部分的氨基酸残基为有助于NPR-A活化的残基，另一方面，存在于尾部的氨基酸残基为没有贡献的残基。另外，BNP环状结构与BNP-32相比为低分子，暗示可以容易且迅速地结合。实际上在临床上适用BNP环状结构的肽，结果实际上确认了BNP环状结构与BNP-32相比迅速地得到治疗效果。该临床结果与BNP环状结构有助于NPR-A活化、进而与BNP-32相比可以容易且迅速地结合的in silico解析一致。由此认为，BNP环状结构为与通常的BNP肽相比具有优异的治疗效果的不同物质。

另一方面，由利用NMR的解析可知，ANP在水溶液中不会形成特定的立体结构、大幅摇晃，认为BNP也同样。即推测，人BNP中，若其环状部分的氨基酸残基有助于与人NPR-A的结合则尾部的氨基酸残基反而由于其大幅摇晃而人BNP难以进入到被人NPR-A的A链和B链夹着的狭窄的BNP结合部位。因此认为，人BNP的环状部分与以往已知的人BNP等不同，比较而言为低分子，通过NPR-A的BNP结合部位，能够容易且迅速地进入。另外推测，人BNP的环状部分与BNP-32相比对于人NPR-A的亲和性高。这证明了仅具有BNP的环状部分的肽与BNP-32相比得到更快的治疗效果等本说明书记载的临床结果。

另外为了推测源自人以外的种类的BNP的环状结构(B环)对于人A型受体的效果，制成人NPR-A与源自猪、鸟、大鼠的BNP环的复合体模型，推测相互作用。其结果，若使用人以外的其它动物种类例如猪、鸟、大鼠等的BNP环，对于人NPR-A也表现出亲和性，则暗示可以充分期待本申请发明的效果。

8.BNP环状部分中的能够置换的氨基酸残基的推定

使用所构筑的复合体的模型结构，对于推测了相互作用的氨基酸残基以外的氨基酸残基的置换可能性进行研究。

具体而言，将推测了相互作用的氨基酸残基以外的氨基酸残基置换为其它氨基酸时，为了研究置换肽能否对于NPR-A结合，制作BNP的突变体模型，对于相互作用进行解析。模拟使用Swiss-Pdb viewer。

具体而言，人BNP的氨基酸残基中、Gly12、Lys14、Asp16、Ile18、Ser21、Ser22、Gly23、Leu24、Gly25作为对象，能否置换为其它氨基酸由以下几点研究。

·与NPR-A结合时不会产生位阻。在NPR-A与BNP突变体模型结构中，没有发现原子间的碰撞。

·对于表面的静电位没有造成影响。

·分子内能量的值不会大幅增加(原子间的结合不会产生不合理的角度、扭转)。

·在NPR-A与BNP的链间以及BNP的链内不会形成本来没有发现的氢键。

·不会产生Cavity(空洞、间隙)。

需要说明的是，上述之中，分子内能量的值通过Swiss-Pdb viewer的ComputeEnergy指令算出。分子内能量通过原子间的结合的长度、结合角、扭转、结合能量等的总计，以单位千焦耳/摩尔(Kj/摩尔)算出。

解析的结果示出，人BNP的氨基酸残基中的Gly12、Lys14、Ile18、Ser21、Ser22、Leu24和Gly25中，能够置换的氨基酸残基(下表)。

[表28]

由以上暗示了，人BNP的环状部分、即式I-a所示的肽中，进行对应于上述表中记载的置换的氨基酸残基的置换的情况下，进行了这种置换的肽也发挥与由式I-a所示的氨基酸序列形成的肽相同的效果。

9.置换了氨基酸的环肽的治疗效果的确认

接着对于置换了一部分氨基酸的环肽，为了确认其效果，供于以下的试验。需要说明的是，上述环肽的制造方法和所制造的肽的氨基酸序列的确认方法，与上述的环肽的制造方法和质量分析方法相同。

9.1对头皮或头发的效果的确认

将所得到的环肽用纯化水配合成3、15、30、100、500μg/ml，并涂布于患部。需要说明的是，表中的处方A～E分别指的是3、15、30、100、500μg/ml的环肽浓度。用纯化水处置的情况下，没有效果，因此确认了并非安慰剂效果。

[表29-1]

[表29-2]

[表29-3]

[表29-4]

[表29-5]

[表29-6]

[表29-7]

[表29-8]

[表29-9]

[表29-10]

[表29-11]

[表29-12]

[表29-13]

由上述结果证实，即使是置换了本发明的环肽的一部分的氨基酸而成的环肽、也发挥与式I-a所示的环肽相同的效果。

特别是适用于秃发部位或生发部位等部位的情况下，具有下述效果：防止适用部位中的秃发的同时，促进生发或育发的效果，对于头发提供张力和弹力、体积增加、掉头发急剧减少的效果。另外，在适用部位中，具有养发效果、生发促进效果、薄发改善·预防等效果。这种情况下，存在生发的毛发容易形成终毛、容易形成并非白发的头发的倾向。另外，这些效果，与以往秃发症治疗剂中使用的其它活性成分、例如BNP相比即使是例如难治性的多发性秃发症、匐行状秃发症，仅通过一次涂布在次日就可以确认生发等，显著早期地表现出来，所得到的效果在涂布中止后也继续生发等显著持续。对于AGA、健康者而言，在次日发现对于头发提供张力和弹力、体积增大、掉头发急剧减少的速效性的效果，该效果在涂布中止后也持续。另外，具有皮炎的改善、预防效果。因此可以改善或预防秃发症伴随的皮肤的炎症。这种效果在起因于头皮等适用部位的皮肤的状态而秃发症恶化的情况下是有利的。进而，本发明的外用剂如上所述适用于皮肤的情况下，在适用部位发挥保湿效果和整理肌理的效果。头皮屑、发痒消失，可以抑制它们的产生的同时，对于毛发、头皮提供湿润，改善、防止干燥，可以保持头皮、头发健康。另外，可以改善脂溢状态。另一方面，作为秃发症治疗剂或秃发症预防剂使用的情况下，作为能够适用的秃发症，没有特别限定，可列举出例如以下的秃发症，能够以它们之中一种以上的治疗或预防作为目的来使用。

(后天性秃发症)

(i)不伴随有瘢痕或皮肤病变的秃发症(圆形秃发症、男性型秃发症、脂溢性秃发症、糠秕性秃发症、女性型秃发症、妊娠性秃发症、恶性秃发症、老年性秃发症、全头秃发症、多发性秃发症、匐行性秃发症、由于药物所导致的秃发症、癌化学疗法剂性秃发症和由于被放射线照射所导致的秃发症、外伤性·机械的秃发症、营养失调·代谢障碍伴随的秃发症、内分泌异常伴随的秃发症、静止期秃发(分娩后秃发症、高烧后秃发症))

(ii)皮肤病变或病态皮肤发现的秃发症(由于感染所导致的秃发、由于肿瘤所导致的秃发、由于炎症所导致的秃发)

(iii)瘢痕性秃发症(由于皮肤感染症所导致的秃发、由于炎症性细胞浸润所导致的秃发)

(先天性秃发症)

弥漫性秃发、先天性无毛症、遗传性的综合征中的秃发、局限性秃发、痣性、皮肤发育不全(aplasia cutis)、先天性三角形秃发

特别是对于后天性秃发症，优选对于不伴随有瘢痕或皮肤病变的秃发症，更优选对于圆形秃发症、男性型秃发症、脂溢性秃发症、糠秕性秃发症、女性型秃发症、妊娠性秃发症、恶性秃发症、老年性秃发症、全头秃发症、多发性秃发症、匐行性秃发症、由于药物所导致的秃发症、癌化学疗法剂性秃发症和由于被放射线照射所导致的秃发症、外伤性·机械的秃发症、营养失调·代谢障碍伴随的秃发症、内分泌异常伴随的秃发症、静止期秃发，发挥优异的效果。因此，本发明的外用剂可以以选自上述组中的至少一种以上秃发症的治疗或预防作为目的来使用。

在前述的适用部位，以3μg/ml～500μg/ml在患部单纯涂布1次后立即发现发痒、头皮屑、头皮的发红、炎症等的改善、消失的速效性，仅1次涂布次日发现生发、育发、头发有张力、弹力、体积增大、掉头发急剧减少、该效果持续1周以上的持续性。另外，若继续涂布1周左右则这些效果进一步提高，涂布中断后，也发现1周～2周生发、增发持续，几乎没有掉头发的状态持续的持续性的效果。

9.2对肌肤的效果的确认

将所得到的环肽用纯化水配合成3、15、30、100、500μg/ml，并涂布于患部。需要说明的是，表中的处方A～E分别指的是3、15、30、100、500μg/ml的环肽浓度。需要说明的是，没有配合肽、用纯化水处置的情况下没有效果，因此确认了并非安慰剂效果。

[表30-1]

[表30-2]

[表30-3]

[表30-4]

[表30-5]

[表30-6]

[表30-7]

[表30-8]

[表30-9]

[表30-10]

[表30-11]

[表30-12]

由上述结果证实，即使是置换了本发明的环肽的一部分的氨基酸而成的环肽、也发挥与式I-a所示的环肽相同的效果。另外，将置换了的环肽混合来适用的情况下，通过适用有效量的环肽，也可以得到相同的效果。

特别是对于具有特应性皮炎、湿疹等的受试者，以3μg/ml～500μg/ml在患部涂布1次后立即发现发痒消失，红斑、浸润、丘疹、挠伤上皮化，浸出液停止、龟裂上皮化等速效性。另外发现，仅1次涂布，其效果持续1周以上的持续性。

需要说明的是，适用于健常肌肤、皮肤粗糙的情况下，涂布后立即在数分钟以内发挥保湿效果、改善干燥、对于皮肤和粘膜赋予、保持适当的弹性和柔软性、肌肤变得柔软、皮肤、粘膜产生张力、紧绷。另外，在适用部位中，细纹、松弛得到改善，进而暗淡、斑点不明显。这些涂布1次发现1周以上的效果的持续性。

9.3对鼻的效果的确认

将所得到的环肽用生理盐水配合成3、15、30、100、500μg/ml，将大致0.1ml对鼻腔滴鼻。需要说明的是，表中的处方A～E分别指的是3、15、30、100、500μg/ml的环肽浓度。需要说明的是，没有配合肽、用生理盐水处置的情况下没有效果，因此确认了并非安慰剂效果。

[表31-1]

[表31-2]

[表31-3]

[表31-4]

[表31-5]

[表31-6]

由上述结果证实，即使是置换了本发明的环肽的一部分的氨基酸而成的环肽、也发挥与式I-a所示的环肽相同的效果。

特别是适用于鼻腔粘膜和/或鼻窦粘膜的情况下，可以改善或预防鼻塞、鼻漏、喷嚏、搔痒感等鼻炎伴随的各种症状。另外，对于鼻炎没有特别限定，可列举出例如包括急性鼻炎、慢性鼻炎的感染性鼻炎；包括复合型(花过敏症)鼻炎、鼻漏型鼻炎、淤血型鼻炎、浮肿型鼻炎和干燥型鼻炎的过敏性非感染性鼻炎；包括物理性鼻炎、化学性鼻炎和放射线性鼻炎的刺激性鼻炎；以及萎缩性鼻炎和特性肉芽肿性鼻炎；急性鼻窦炎、慢性鼻窦炎(蓄脓症)、嗜酸细胞性鼻窦炎、鼻窦真菌症等鼻窦炎等，能够以上述之中一种以上的治疗或预防作为目的来使用。

而作为复合型鼻炎，可列举出例如包括常年性过敏性鼻炎和季节性过敏性鼻炎的过敏性鼻炎、和包括血管舒缩性(特发性)鼻炎和嗜酸细胞增多性鼻炎的非过敏性鼻炎。作为鼻漏型鼻炎，可列举出例如味觉性鼻炎、冷气吸入性鼻炎和老年性鼻炎。作为淤血型鼻炎，可列举出例如药物性鼻炎、心因性鼻炎、妊娠性鼻炎、内分泌性鼻炎和寒冷性鼻炎。

作为浮肿型鼻炎，可列举出例如阿斯匹林过敏性鼻炎。

上述之中，特别是对于过敏性非感染性鼻炎、刺激性鼻炎、鼻窦炎，优选对于过敏性非感染性鼻炎、慢性鼻窦炎，更优选对于复合型(花过敏症)鼻炎、鼻漏型鼻炎、淤血型鼻炎、浮肿型鼻炎和干燥型鼻炎、慢性鼻窦炎，发挥优异的效果。因此，本发明的外用剂可以以选自上述组中的至少一种以上鼻炎的治疗或预防作为目的来使用。

另外，从症状的观点考虑，由于具有上述效果，因此对于喷嚏·鼻漏型鼻炎、鼻塞型鼻炎和充全型鼻炎中的任意一种都可以使用。

以3μg/ml～500μg/ml、0.1ml对于各鼻腔、患部滴鼻1次后，立即发现鼻涕停止、鼻塞改善、鼻腔粘膜发痒、喷嚏停止的速效性，仅1次滴鼻涂布发现持续1天、根据病例其效果持续1周以上的持续性。另外，对于利用以往的甾体药等以往使用的鼻炎治疗剂而局部刺激强、不希望使用滴鼻药的受试者而言，由于完全没有局部刺激，能够放心使用。

根据上述实施例，以下总结本发明的环肽中的多个能够置换的氨基酸的一例，但是不限于它们。

[表32]

B环的多种置换的候补

Claims (22)

1.一种环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其具有式I所示的氨基酸序列，

该氨基酸序列不具有构成该氨基酸序列的氨基酸之间以外的肽键，

[化学式1]

式中，

X¹表示Gly、Val、Ala、Ser或Thr，

X²表示Arg、Gln或His，

X³表示Lys或Arg，

X⁴表示Met、Leu或Ile，

X⁵表示Ile或Val，

X⁶表示Ser或Gly，

X⁷表示Ser或Ala，

X⁸表示Ser、Gln、Val、Ala、Thr、Leu、Ile或Met，

X⁹表示Ser、Val、Ala或Thr，

X¹⁰表示Gly或Arg，

X¹¹表示Leu、Met、Ile、Val或Ala，

X¹²表示Gly、Ser或Ala，

连接2个Cys的线表示二硫键。

2.根据权利要求1所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其中，X¹～X¹²为选自由以下的(1)～(12)组成的组中的一种或两种以上：

(1)X¹表示Gly、Val、Ala、Ser或Thr，

(2)X²表示Arg、Gln或His，

(3)X³表示Lys或Arg，

(4)X⁴表示Met、Leu或Ile，

(5)X⁵表示Ile或Val，

(6)X⁶表示Ser或Gly，

(7)X⁷表示Ser或Ala，

(8)X⁸表示Ser、Gln、Val、Ala、Thr、Leu、Ile或Met，

(9)X⁹表示Ser、Val、Ala或Thr，

(10)X¹⁰表示Gly或Arg，

(11)X¹¹表示Leu、Met、Ile、Val或Ala，以及

(12)X¹²表示Gly、Ser或Ala。

3.根据权利要求1所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其选自序列号3～8和序列号16～75的环肽中。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐，其中，衍生物为对于环肽中的氢原子、羟基、羧基、氨基、亚氨基用能够取代的取代基取代而成的。

5.通过使权利要求3所述的式(I-a)～(I-e)中任一项所示的环肽中的氨基酸1个以上且4个以下缺失或者用其它氨基酸置换或附加而形成，并且具有与所述各式所示的环肽同等的功能的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐。

6.一种外用剂，其含有权利要求1～5中任一项所述的环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐一种以上。

7.根据权利要求6所述的外用剂，其为皮炎治疗剂、皮炎预防剂、止痒剂、消炎剂、伤上皮化促进剂或护肤用品的材料。

8.根据权利要求7所述的外用剂，其中，护肤用品为保湿用和/或防止·改善皮肤粗糙用和/或皮脂护理·痤疮护理用和/或缓和刺激·抗炎用和/或美白用和/或防止衰老用和/或预防·缓和紫外线伤害用和/或瘦身用和/或皮肤洁净用。

9.根据权利要求6所述的外用剂，其为入浴剂、身体洗涤剂或头发用洗涤剂。

10.根据权利要求6所述的外用剂，其为秃发症治疗剂、秃发症预防剂、育发剂和/或生发剂。

11.根据权利要求6所述的外用剂，其为鼻炎治疗剂和/或鼻炎预防剂。

12.根据权利要求6所述的外用剂，其为化妆品。

13.根据权利要求6～12中任一项所述的外用剂，其中，剂型为固体剂、半固体剂、粉末剂、液体制剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、乳液剂、凝胶剂或贴剂。

14.根据权利要求6～13中任一项所述的外用剂，其用作药物、准药物或化妆品。

15.权利要求1～4中任一项所述的环肽和/或其衍生物以及/或它们的可药用盐在制造外用剂中的应用。

16.一种外用剂的使用方法，其包括将权利要求6～14中任一项所述的外用剂适用于对象的皮肤和/或粘膜。

17.根据权利要求16所述的外用剂的使用方法，其中，粘膜为口唇、口腔、鼻腔、眼或阴道。

18.根据权利要求16所述的外用剂的使用方法，其为皮炎的治疗和/或预防方法、发痒的减轻或消失方法、湿疹等所导致的糜烂、溃疡的治疗方法或护肤方法。

19.根据权利要求16所述的外用剂的使用方法，其为秃发症的治疗和/或预防方法以及/或生发方法以及/或育发方法。

20.根据权利要求16所述的外用剂的使用方法，其为鼻炎的治疗和/或预防方法。

21.一种药物，其含有权利要求1～5中任一项所述的环肽或其衍生物或者它们的可药用盐一种以上。

22.根据权利要求21所述的药物，其为高血压症、不稳定型心绞痛、急性心肌梗塞、浮肿性疾病、肾功能衰竭、心力衰竭、免疫疾病、肥胖、代谢综合征的治疗药。