CN107703314B - 一种促肾上腺皮质激素溶液及其应用 - Google Patents

一种促肾上腺皮质激素溶液及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种促肾上腺皮质激素溶液及其应用。该溶液含有促肾上腺皮质激素抗原、2‑吗啉乙磺酸、NaCl、海藻糖、酪蛋白、4‑氨基安替比林、水。本发明提供了所述促肾上腺皮质激素溶液的制备方法及其应用。该溶液制备方法简单，节约成本，工艺流程可操控，成品具有良好的稳定性，37℃保持7‑14天，效价保留率仍大于85％，在2～8℃存放12个月后，效价保留率大于90％，可作为促肾上腺皮质激素的校准品或质控品，用于体外定量检测人血浆中促肾上腺皮质激素，具有良好的临床应用前景。

Description

一种促肾上腺皮质激素溶液及其应用
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂校准品或质控品，特别是涉及一种制备方法简单、效价稳定的液态促肾上腺皮质激素校准品或质控品及其应用。
背景技术
促肾上腺皮质激素(ACTH)是一种由39个氨基酸组成的肽类激素，分子量约为4.5kD。ACTH在垂体中产生，作用于肾上腺皮质，具有促进肾上腺皮质组织增生、皮质激素生成和分泌的作用。在临床上，ACTH检测对于鉴别诊断肾上腺功能减退和分泌亢进很有价值。因此，出现了针对ACTH测定的体外诊断试剂。
针对ACTH测定的体外诊断试剂中需要配备ACTH质控品或校准品，然而现有技术中液态的ACTH质控品或校准品稳定性差，不宜长期保存，并且对温度敏感，不利于ACTH体外诊断试剂的产业化生产。因此，目前体外诊断试剂中的促肾上腺皮质激素主要以冻干粉的形式保存，使用时再用适当的溶液溶解。然而ACTH冻干粉的冻干工艺复杂，对工作人员、仪器设备等均要求较高，由于工作人员、仪器设备、复溶等不可控的因素均会增大ACTH质控品或校准品产品的批间、瓶间差异，影响检测结果，也在一定程度上增加了产品的生产成本。因此迫切需要一种制备方法简单、容易操作、成本相对较低且成品稳定性好的液态ACTH质控品和校准品。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷提供一种稳定性好的促肾上腺皮质激素溶液及其应用。
本发明提供的一种促肾上腺皮质激素溶液，含有促肾上腺皮质激素抗原、2-吗啉乙磺酸、NaCl、海藻糖、酪蛋白、4-氨基安替比林、水。
进一步地，本发明的促肾上腺皮质激素溶液还含有表面活性剂、丙三醇和生物防腐剂。
具体地，本发明的促肾上腺皮质激素溶液含有以下成分：2-吗啉乙磺酸10～100mM，NaCl 0.9％，海藻糖0.5％～2％(m/V)，酪蛋白 0.5％～2％(m/V)，4-氨基安替比林0.005‰～0.05‰(m/V)，表面活性剂 0.05‰～0.5‰(V/V)，丙三醇0.05‰～0.5‰(V/V)，生物防腐剂 0.5‰～2‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原1～2000pg/ml，pH5.5～6.7。
进一步地，本发明的促肾上腺皮质激素溶液含有以下成分：2- 吗啉乙磺酸10～50mM，NaCl 0.9％，海藻糖0.8％～1.5％(m/V)，酪蛋白0.8％～1.5％(m/V)，4-氨基安替比林0.01‰～0.04‰(m/V)，表面活性剂0.05‰～0.3‰(V/V)，丙三醇0.05‰～0.3‰(V/V)，生物防腐剂 0.5‰～1‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原5～2000pg/ml，pH5.5～6.7。
优选地，本发明的促肾上腺皮质激素溶液含有以下成分：2-吗啉乙磺酸10～30mM，NaCl 0.9％，海藻糖0.8％～1.2％(m/V)，酪蛋白 0.8％～1.2％(m/V)，4-氨基安替比林0.01‰～0.03‰(m/V)，TX-100 0.08‰～0.2‰(V/V)，丙三醇0.08‰～0.2‰(V/V)，Proclin300 0.5‰～1‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原5～2000pg/ml，pH5.5～6.7。
更优选地，本发明的促肾上腺皮质激素溶液含有以下成分：2- 吗啉乙磺酸20mM，NaCl 0.9％，海藻糖1％(m/V)，酪蛋白1％(m/V)， 4-氨基安替比林0.02‰(m/V)，TX-1000.1‰(V/V)，丙三醇0.1‰(V/V)， Proclin300 1‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原5～2000pg/ml， pH5.9～6.1。
本发明提供了制备上述的促肾上腺皮质激素溶液的方法，包括以下步骤：
(1)2-吗啉乙磺酸溶于水，再加入NaCl，完全溶解后，调pH 值至5.4-5.6；
(2)向步骤(1)溶液中依次加入海藻糖、酪蛋白、4-氨基安替比林、表面活性剂、丙三醇、生物防腐剂，之后加NaOH或盐酸调 pH值至5.5-6.7；pH值优选5.9-6.1；
(3)向步骤(2)的溶液中加入促肾上腺皮质激素抗原。
本发明的促肾上腺皮质激素溶液可作为ACTH校准品或质控品。
本发明提供了所述促肾上腺皮质激素溶液在制备促肾上腺功能相关疾病诊断试剂盒中的应用。
含有本发明所述的促肾上腺皮质激素溶液的试剂盒或诊断试剂属于本发明的保护范围。
本发明提供了所述促肾上腺皮质激素溶液在非疾病诊断目的的体外促肾上腺皮质激素定性或定量检测中的应用。
本发明具有以下有益效果：(1)本发明的促肾上腺皮质激素溶液制备方法简单，对工作人员和仪器设备均无苛刻要求，便于操作和配制；克服了现有技术中ACTH冻干粉的冻干工艺复杂，对工作人员、仪器设备等均要求较高的缺点；(2)本发明的促肾上腺皮质激素溶液稳定性好，能够在37℃放置14天，效价保留率＞85％，在2～8℃存放12个月后，效价保留率≥90％，符合使用要求；(3)制备成本有效降低；(4)可作为促肾上腺皮质激素的校准品或质控品，用于非疾病诊断目的的促肾上腺皮质激素的体外定量检测，具有良好的临床应用前景。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。抗 ACTH单克隆抗体、磁微粒、吖啶酯和发光激发液均购自四川迈克生物新材料技术有限公司，制备后获得包被抗ACTH单克隆抗体的磁微粒、吖啶酯标记的抗ACTH单克隆抗体。
实施例1促肾上腺皮质激素溶液的制备
本发明促肾上腺皮质激素溶液包括以下步骤：
(1)2-吗啉乙磺酸溶于水，再加入NaCl，完全溶解后，加NaOH 或盐酸调pH值至5.4-5.6；
(2)向步骤(1)溶液中依次加入海藻糖、酪蛋白、4-氨基安替比林、表面活性剂、丙三醇、生物防腐剂，之后加NaOH或盐酸调 pH值至5.5-6.7；pH优选5.9-6.1。
(3)向步骤(2)的溶液中加入促肾上腺皮质激素抗原。
具体成分的用量和来源见表1。以纯化水为配液溶剂，前一物料完全溶解后才能投入另一物料。
表1
实施例2促肾上腺皮质激素溶液的性能评价
采用表2中A、B、C、D、E五组不同的配方，进行稳定性试验。其中B组为本发明促肾上腺皮质激素溶液的各组分最佳配比，C组为本发明促肾上腺皮质激素溶液的各组分较高浓度配比，D组为本发明促肾上腺皮质激素溶液的各组分较低浓度配比，E组除未添加4-氨基安替比林外其他组分配比、pH值与B组相同。
表2
A B C D E
磷酸缓冲液 20mM / / / /
2-吗啉乙磺酸 / 20mM 100mM 10mM 20mM
NaCl 0.90％ 0.90％ 0.90％ 0.90％ 0.90％
海藻糖 1％ 1％ 2％ 0.50％ 1％
酪蛋白 1％ 1％ 2％ 0.50％ 1％
4-氨基安替比例 0.02‰ 0.02‰ 0.05‰ 0.005‰ /
TritonX-100 0.1‰ 0.1‰ 0.5‰ 0.05‰ 0.1‰
丙三醇 0.1‰ 0.1‰ 0.5‰ 0.05‰ 0.1‰
Proclin300 1‰ 1‰ 1‰ 0.5‰ 1‰
促肾上腺皮质激素抗原 * * * * *
pH 7.4 6.0 6.7 5.5 6.0
注：表中“/”为未添加；“*”为根据实际需求添加不同用量的ACTH抗原。
1、热稳定性实验：按表2中A、B、C、D、E配置成促肾上腺皮质激素溶液，每组含有两个浓度水平L1(20～40pg/mL)和L2 (800～1200pg/mL)，分别经37℃、45℃热破坏7天和14天后，搭配包被有抗ACTH单克隆抗体的磁微粒、吖啶酯标记的抗ACTH单克隆抗和发光激发液，检测发光信号值(本发明实施例2的促肾上腺皮质激素溶液与包被抗ACTH单克隆抗体的磁微粒、吖啶酯标记的抗ACTH 单克隆抗体结合形成双抗体夹心复合物，该夹心复合物可与发光激发液发生化学发光反应，通过光检测系统测量相对发光信号值(RLUs))，每个浓度水平测定3次，把3次测定结果的均值作为该浓度的RLUs检测结果，并计算37℃、45℃条件下与2～8℃的RLUs保留率。(RLUs保留率与试剂效价呈正相关)
表3各组溶液ACTH的浓度
表4 A组(磷酸盐缓冲液对照组)热稳定性结果
表5 B组热稳定性结果
表6 C组热稳定性结果
表7 D组热稳定性结果
表8 E组(对照组：不加4-AAP)热稳定性结果
由以上数据可知，B配方的促肾上腺皮质激素溶液的热稳定性明显优于A配方，可见2-吗啉乙磺酸(MES)对试剂的热稳定性起着关键作用；E配方的促肾上腺皮质激素溶液的热稳定性比A好，弱于B，说明4-氨基安替比林对试剂的热稳定性起着明显的协同作用；根据B、C、D配成的促肾上腺皮质激素溶液在37℃放置14天后，RLUs保留率大于85％，说明所述溶液的热稳定性良好，利于试剂的运输、使用。
2、长期稳定性：根据B配方配成的终浓度为5pg/mL(a)、25pg/mL (b)、50pg/mL(c)、125pg/mL(d)、500pg/mL(e)、1000pg/mL(f)、 2000pg/mL(g)的促肾上腺皮质激素溶液，搭配包被有抗ACTH单克隆抗体的磁微粒、吖啶酯标记的抗ACTH单克隆抗和发光激发液，检测相对发光信号值(RLUs)，作出“浓度-RLUs”的标准曲线。按条件 A、B、C、D、E配置成促肾上腺皮质激素溶液，见表3，保存在2℃～8℃条件里，分别在第3、6、9、12个月检测RLUs(取每个浓度水平重复 3次检测结果的均值)，通过上述标准曲线计算浓度值。并计算第3、6、 9、12个月的浓度值与配制浓度的百分比，即浓度保留率。(浓度保留率与试剂效价呈正相关)
表9 A组长期稳定性观察
表10 B组长期稳定性观察
表11 C组长期稳定性观察
表12 D组长期稳定性观察
表13 E组长期稳定性观察
由以上数据可知，根据A、B、C、D、E配成的促肾上腺皮质激素溶液在2～8℃的环境下存放12个月，A的长期稳定性效果最差，浓度保留率约65％；B的浓度保留率几乎没有变化，接近100％，长期稳定性效果最佳；C、D的浓度保留率显逐渐缓慢降低的趋势，均≥90％；E的浓度保留率高于A，约80％。
综上所述，本发明的促肾上腺皮质激素溶液，配置简单、成本低廉，具有更好的热稳定性，在2～8℃的环境下可稳定存放12个月，可作为促肾上腺皮质激素的校准品或质控品，具有良好的临床应用前景。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种促肾上腺皮质激素溶液，其特征在于，含有以下成分：2-吗啉乙磺酸10～100mM，NaCl 0.9％，海藻糖0.5％～2％(m/V)，酪蛋白0.5％～2％(m/V)，4-氨基安替比林0.005‰～0.05‰(m/V)，表面活性剂0.05‰～0.5‰(V/V)，丙三醇0.05‰～0.5‰(V/V)，生物防腐剂0.5‰～2‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原1～2000pg/ml，pH5.5-6.7。
2.如权利要求1所述的促肾上腺皮质激素溶液，其特征在于，含有以下成分：2-吗啉乙磺酸10～50mM，NaCl 0.9％，海藻糖0.8％～1.5％(m/V)，酪蛋白0.8％～1.5％(m/V)，4-氨基安替比林0.01‰～0.04‰(m/V)，表面活性剂0.05‰～0.3‰(V/V)，丙三醇0.05‰～0.3‰(V/V)，生物防腐剂0.5‰～1‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原5～2000pg/ml，pH5.5-6.7。
3.如权利要求1-2任一所述的促肾上腺皮质激素溶液，其特征在于，含有以下成分：2-吗啉乙磺酸10～30mM，NaCl 0.9％，海藻糖0.8％～1.2％(m/V)，酪蛋白0.8％～1.2％(m/V)，4-氨基安替比林0.01‰～0.03‰(m/V)，Triton X-100 0.08‰～0.2‰(V/V)，丙三醇0.08‰～0.2‰(V/V)，Proclin300 0.5‰～1‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原5～2000pg/ml，pH5.5-6.7。
4.如权利要求1-2任一所述的促肾上腺皮质激素溶液，其特征在于，含有以下成分：2-吗啉乙磺酸20mM，NaCl 0.9％，海藻糖1％(m/V)，酪蛋白1％(m/V)，4-氨基安替比林0.02‰(m/V)，TritonX-100 0.1‰(V/V)，丙三醇0.1‰(V/V)，Proclin300 1‰(V/V)，促肾上腺皮质激素抗原5～2000pg/ml，pH5.9-6.1。
5.制备权利要求1-4任一所述的促肾上腺皮质激素溶液的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)2-吗啉乙磺酸溶于水，再加入NaCl，完全溶解后，调pH值至5.4-5.6；
(2)向步骤(1)溶液中依次加入海藻糖、酪蛋白、4-氨基安替比林、表面活性剂、丙三醇、生物防腐剂，之后加NaOH或盐酸调pH值至5.5-6.7；
(3)向步骤(2)的溶液中加入促肾上腺皮质激素抗原。
6.权利要求1-4任一所述的促肾上腺皮质激素溶液在制备液态ACTH校准品或质控品中的应用。
7.权利要求1-4任一所述的促肾上腺皮质激素溶液在制备促肾上腺功能相关疾病诊断试剂盒中的应用。
8.含有权利要求1-4任一所述的促肾上腺皮质激素溶液的试剂盒。
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