CN107691486A - 一种从苜蓿草中提取天然抗霉剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种从苜蓿草中提取天然抗霉剂的方法,本发明以苜蓿草为原料,通过对苜蓿草进行抗霉变试验,筛选出具有抗霉变能力的苜蓿草,并对具有抗霉变能力的苜蓿草进行有效物提取,获得天然抗霉剂。本发明制备的天然抗霉剂应用过程中抗霉高效、安全无副作用、无耐药性、性能稳定、抗霉效果持久。而且原料来源丰富,制作工艺简单、成本低。
Description
技术领域
本发明公开了一种从苜蓿草中提取天然抗霉剂的方法,属于抗霉领域。
背景技术
抗霉变一直是世界难题,粮食及饲料在高温高湿的环境下极易被曲霉、青霉等霉污染而导致霉变,粮食霉变会造成巨大的经济损失,同时对人和动物的健康造成威胁。如果霉变的饲料适口性差,营养成份恶变,易引起畜禽霉中毒,甚至诱发死亡。此外,霉在繁殖过程中大多会产生霉毒素,如黄曲霉素、褐霉素等,这些毒素进入畜禽体内,不仅造成畜禽中毒,还可通过各种渠道进入人体,从而危害人体健康。在饲料或谷物中添加防霉剂是饲料防霉的常用方法,国内外目前多用化学防霉剂,其刺激性大,腐蚀性强,气味不良,且残留问题不易解决,同时在一些发酵饲料如青贮饲料的制作过程,使用中化学性防腐剂会影响发酵品质。为此,天然饲料防霉剂成为各国开发的热点。我国植物药资源丰富,开发天然的防霉剂大有前途。
苜蓿草资源丰富,主要应用于动物饲料。由于其营养价值丰富,目前研发出很多对人类具有保健功的苜蓿草功能性产品。苜蓿草自身没有毒性成分,其提取物安全无毒、无污染、无残留的特点。本发明以苜蓿草为原料,通过对苜蓿草进行抗霉变试验,筛选出具有抗霉变能力的苜蓿草,提取其抗霉物制成天然抗霉剂。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对传统化学防霉剂,其刺激性大,腐蚀性强,气味不良,且残留问题,提供一种从苜蓿草中提取天然抗霉剂的方法。本发明以苜蓿草为原料,通过对苜蓿草进行抗霉变试验,筛选出具有抗霉变能力的苜蓿草,并对具有抗霉变能力的苜蓿草进行有效物提取,获得天然抗霉剂。
为解决以上问题本发明采取的技术方案为
1. 一种从苜蓿草中提取天然抗霉剂的方法,具体制备步骤为:
(1)在苜蓿草收割前期,取苜蓿草不同植株的部分叶片,分别用45%乙醇回流提取,提取液在5000r/min下离心,取上清液,冷冻干燥浓缩后成浸膏;
(2)取吸水力强的优质滤纸,用打孔器打成6mm的圆片,干热灭菌1~2h后浸于上述中药液中置冰箱1~2 h,然后真空抽干,得到含药滤纸片,另取45%乙醇滤纸片做空白及0.5%山梨酸钾滤纸片做阳性对照;
(3)将黄曲霉、土曲霉、焦曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、圆弧青霉、桔青霉、皱褶青霉、绳状青霉、产紫青霉分别加入等量的水混合均匀,制成霉菌液;
(4)将供试霉菌液10毫升,趋热倒入察氏固体培养基,冷却后倒入霉菌悬浮液,制成上层含霉菌的琼脂平皿;
(5)将含药滤纸片均匀地贴在平皿表面,每皿贴6片,测量透明抑菌圈的直径;
(6)抑菌圈直径均在15mm以上的滤纸片,为最佳抗霉剂;
(7)将抗霉效果最好的苜蓿草收割,用45%乙醇回流提取,提取液在5000r/min下离心,取上清液冷冻干燥浓缩后成浸膏,获得抗霉剂;
2.其中1所述的苜蓿草为现行国内外所有种植的苜蓿草品种均可。
本发明制备得到的天然抗霉剂抗霉率为90%以上,对黄曲霉、土曲霉、焦曲霉、黑曲霉抗霉率为90%以上,对杂色曲霉、圆弧青霉、桔青霉、皱褶青霉、绳状青霉、产紫青霉白色念珠霉的抗霉率为95%以上;该抗霉剂过40~50℃的水反复洗涤25~30次后,其对上述霉的抗霉性能保持在原本的85%以上,经过40~50℃的水反复洗涤50~100次后,抗霉性能保持在原本的65%以上。
本发明的有益效果是:
本发明制备的天然抗霉剂应用过程中抗霉高效、安全无副作用、无耐药性、性能稳定、抗霉效果持久,而且原料来源丰富,制作工艺简单、成本低。
具体实施方式
实施例1
在苜蓿草收割前期,取苜蓿草不同植株的部分叶片,分别用45%乙醇回流提取、提取液在5000r/min下离心,取上清液冷冻干燥浓缩后成浸膏;取吸水力强的优质滤纸,用打孔器打成6mm的圆片,干热灭菌1h后浸于上述中药液中置冰箱1h,然后真空抽干,得到含药滤纸片,另取45%乙醇滤纸片做空白及0.5% 山梨酸钾滤纸片做阳性对照;将黄曲霉、土曲霉、焦曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、圆弧青霉、桔青霉、皱褶青霉、绳状青霉、产紫青霉分别加入等量的水混合均匀,制成霉菌液;将供试霉菌液10毫升,趋热倒入察氏固体培养基,冷却后倒入霉菌悬浮液,制成上层含霉菌的琼脂平皿;将含药滤纸片均匀地贴在平皿表面,每皿贴6片,测量透明抑菌圈的直径;抑菌圈直径均在15mm~20mm的滤纸片,为最佳抗霉剂。将抗霉效果最好的苜蓿草收割,用45%乙醇回流提取,提取液在5000r/min下离心,取上清液冷冻干燥浓缩后成浸膏,即为天然抗霉剂。所述苜蓿草的选择为现行国内外所有种植的苜蓿草品种均可。
本发明制备得到的天然抗霉剂抗霉率为95%以上,对黄曲霉、土曲霉、焦曲霉、黑曲霉抗霉率为95%以上,对杂色曲霉、圆弧青霉、桔青霉、皱褶青霉、绳状青霉、产紫青霉白色念珠霉的抗霉率为95%以上;该抗霉剂过40℃的水反复洗涤25次后,其对上述霉的抗霉性能保持在原本的90%以上,经过40的水反复洗涤50~100次后,抗霉性能保持在原本的60%。
实施例2
在苜蓿草收割前期,取苜蓿草不同植株的部分叶片。分别用45%乙醇回流提取,提取液在5000r/min下离心,取上清液冷冻干燥浓缩后成浸膏。取吸水力强的优质滤纸,用打孔器打成6mm的圆片,干热灭菌2h后浸于上述中药液中置冰箱2 h,然后真空抽干,得到含药滤纸片,另取45%乙醇滤纸片做空白及0.5% 山梨酸钾滤纸片做阳性对照;将黄曲霉、土曲霉、焦曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、圆弧青霉、桔青霉、皱褶青霉、绳状青霉、产紫青霉分别加入等量的水混合均匀,制成霉菌液;将供试霉菌液10毫升,趋热倒入察氏固体培养基,冷却后倒入霉菌悬浮液,制成上层含霉菌的琼脂平皿;将含药滤纸片均匀地贴在平皿表面,每皿贴6片,测量透明抑菌圈的直径;抑菌圈直径均在20~30mm以上的滤纸片,为最佳抗霉剂。将抗霉效果最好的苜蓿草收割,用45%乙醇回流提取,提取液在5000r/min下离心,取上清液冷冻干燥浓缩后成浸膏,即为天然抗霉剂。所述苜蓿草的选择为现行国内外所有种植的苜蓿草品种均可。
本发明制备得到的天然抗霉剂抗霉率为93%以上,对黄曲霉、土曲霉、焦曲霉、黑曲霉抗霉率为90%以上,对杂色曲霉、圆弧青霉、桔青霉、皱褶青霉、绳状青霉、产紫青霉白色念珠霉的抗霉率为97%以上;该抗霉剂过50℃的水反复洗涤30次后,其对上述霉的抗霉性能保持在原本的85%以上,经过50℃的水反复洗涤100次后,抗霉性能保持在原本的60%以上。
Claims (2)
1.一种从苜蓿草中提取天然抗霉剂的方法,其特征在于具体制备步骤为:
(1)在苜蓿草收割前期,取苜蓿草不同植株的部分叶片,分别用45%乙醇回流提取,提取液在5000r/min下离心,取上清液,冷冻干燥浓缩后成浸膏;
(2)取吸水力强的优质滤纸,用打孔器打成6mm的圆片,干热灭菌1~2h后浸于上述中药液中置冰箱1~2 h,然后真空抽干,得到含药滤纸片,另取45%乙醇滤纸片做空白及0.5%山梨酸钾滤纸片做阳性对照;
(3)将黄曲霉、土曲霉、焦曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、圆弧青霉、桔青霉、皱褶青霉、绳状青霉、产紫青霉分别加入等量的水混合均匀,制成霉菌液;
将供试霉菌液10毫升,趋热倒入察氏固体培养基,冷却后倒入霉菌悬浮液,制成上层含霉菌的琼脂平皿;
(4)将供试霉菌液10毫升,趋热倒入察氏固体培养基,冷却后倒入霉菌悬浮液,制成上层含霉菌的琼脂平皿;
(5)将含药滤纸片均匀地贴在平皿表面,每皿贴6片,测量透明抑菌圈的直径;
(6)抑菌圈直径均在15mm以上的滤纸片,为最佳抗霉剂;
(7)将抗霉效果最好的苜蓿草收割,用45%乙醇回流提取,提取液在5000r/min下离心,取上清液冷冻干燥浓缩后成浸膏,获得抗霉剂。
2.根据权利要求1所述,苜蓿草的选择为现行国内外所有种植的苜蓿草品种均可。
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