CN107686526A - 一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺 - Google Patents
一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺 Download PDFInfo
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Abstract
一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,包括将根部浸没于乙酸溶液中,洗净晾干后浸没于乙醇中,回流提取后过滤收集滤渣,洗净晾干获得药渣;药渣粉碎后水浴回流提取,过滤提取液得到滤液,向滤液中加入无水乙醇,静置过夜后离心取沉淀,将晾干沉淀溶于去离子水中,然后加入Sevage试剂,依次进行振荡、静置和离心操作,重复3~5次,合并收集的上层溶液;向所述上层溶液中加入活性碳,搅拌后过滤,滤液经减压浓缩后制得铁皮石斛根部石斛多糖。本发明的工艺不但能保护铁皮石斛有效成分不会受热破坏,而且最大限度的保存石斛多糖的结构。
Description
技术领域
本发明涉及一种活性成分的提取和纯化工艺,特别涉及一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,属于药物原料深加工技术领域。
背景技术
铁皮石斛是兰科石斛属多年生草本植物,其主要药用部位是新鲜或干燥茎,主要分布于安徽、浙江、广西、湖南、云南、贵州等地,是传统名贵中药材。铁皮石斛含有石斛多糖、黄酮、蛋白质、17 种氨基酸及无机元素等,具有益胃生津,滋阴清热之功效。《神农本草经》将其列为上品,道家养生经典《道藏》将它誉为“中华九大仙草”之首。民间称铁皮石斛为“救命仙草”、“寸金草”,作为养生保健的极品,历代医家推崇信至。
目前文献报道的铁皮石斛提取物的制备方法大多围绕多糖开展研究,活性成分单一,提取方式主要有加热浸提法、酶解法、超声辅助提取法、微波辅助提取法等,且都采用水作为提取溶剂,存在有效成分利用不充分,提取效率低等弊端。此外,铁皮石斛的成分研究主要围绕多糖含量,并未对其组成成分开展深入研究。
铁皮石斛的主要有效成分是石斛多糖和石斛碱,研究表明,多糖成分与铁皮石斛的药效,如增强机体免疫机能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、降血糖等方面,有着密切的联系,有关的研究报道也比较多。也正因为铁皮石斛的神奇效果,其野外资源由于长期过度采摘而濒临灭绝,现已被列为国家重点保护野生药用植物。迄今为止,前人对铁皮石斛的研究主要集中于其主茎,相关文件报道也较多较深入,而对其须根、鳞片叶和花等“边角料”则研究报道均较少或较浅,甚至有时作为废弃物处理而浪费。
发明内容
本发明的目的是:为了克服现有技术的缺陷,获得一种能够从铁皮石斛根部提取石斛多糖,且能够提高石斛多糖的活性和纯度的方法,本发明提供了一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺。
为实现上述目的及其他相关目的,本发明提供的技术方案是:一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,其特征在于:包括下列步骤:
第一步:将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于5~10倍体积的乙酸溶液中1~3小时,然后用水洗净,晾干得到晾干后的根部;
第二步:将所述晾干后的根部浸没于3~15倍体积的体积分数为75~90%的乙醇中,回流提取2~5次,每次1~3小时,过滤后收集滤渣,用水洗净后晾干获得药渣;
第三步:将所述药渣粉碎,过50~100目筛后的筛下物置于一反应容器内,然后向所述反应容器内加入提取剂,在100℃条件下,水浴回流提取2~3次,每次30~55分钟,得到提取液,接下过滤所述提取液得到滤液;所述筛下物与提取剂两者之间的质量比例为1:12~18,所述提取剂为质量分数为0.5~2.5%的硫酸钠水溶液或质量分数为0.1~1.4%的硫酸氢铵水溶液;
第四步:向所述第三步得到的滤液中加入1.5~2倍体积的无水乙醇,摇匀后于4℃条件下静置过夜,然后离心取沉淀,该沉淀用无水乙醇洗涤2~3次,晾干至无乙醇味后获得晾干后的沉淀;
第五步:将所述晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/5~1/3倍体积的Sevage试剂,依次进行振荡、静置和离心操作,重复3~5次,合并收集的上层溶液;
第六步:向所述上层溶液中加入活性碳,搅拌后过滤,滤液经减压浓缩后制得铁皮石斛根部石斛多糖。
优选的技术方案为:将新鲜铁皮石斛根部洗净、烘干后即得处理后的新鲜铁皮石斛根部。
优选的技术方案为:包括下列步骤:
第一步:将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于8倍体积的乙酸溶液中2.5小时,然后用水洗净,晾干得到晾干后的根部;
第二步:将所述晾干后的根部浸没于12倍体积的体积分数为80%的乙醇中,回流提取4次,每次2小时,过滤后收集滤渣,用水洗净后晾干获得药渣;
第三步:将所述药渣粉碎,过80目筛后的筛下物置于一反应容器内,然后向所述反应容器内加入提取剂,在100℃条件下,水浴回流提取3次,每次40分钟,得到提取液,接下过滤所述提取液得到滤液;所述筛下物与提取剂两者之间的质量比例为1:16,所述提取剂为质量分数为1.8%的硫酸钠水溶液或质量分数为0.9%的硫酸氢铵水溶液;
第四步:向所述第三步得到的滤液中加入1.8倍体积的无水乙醇,摇匀后于4℃条件下静置过夜,然后离心取沉淀,该沉淀用无水乙醇洗涤3次,晾干至无乙醇味后获得晾干后的沉淀;
第五步:将所述晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/4倍体积的Sevage试剂,依次进行振荡、静置和离心操作,重复4次,合并收集的上层溶液;
第六步:向所述上层溶液中加入活性碳,搅拌后过滤,滤液经减压浓缩后制得铁皮石斛根部石斛多糖。
由于上述技术方案运用,本发明与现有技术相比具有的优点是:
1、本发明的工艺能够针对铁皮石斛根部的石斛多糖进行高效、高纯度的提取。
2、本发明的工艺不但能保护铁皮石斛有效成分不会受热破坏,而且最大限度的保存石斛多糖的结构。
3、本发明的工艺具有溶剂用量小、提取时间短、产品质量高、生产成本低的优点。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式,熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
实施例1:一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺
一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,所述工艺包含以下步骤:
(1)采集新鲜铁皮石斛,取根部、洗净、烘干、阴凉处保存备用;将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于5倍体积的乙酸溶液中1小时,然后清水洗净,晾干;乙酸溶液为体积分数为36%的乙酸水溶液,在其它实施方式中可以采用体积分数为10~98%的乙酸水溶液。
(2)将步骤(1)晾干后的根部浸没于3倍的体积分数为75%的乙醇中,回流提取2次,每次1小时,过滤,收集滤渣,清水洗净,晾干获得药渣。
(3)将步骤(2)收集的药渣打粉,过50目筛,筛下物置于圆底烧瓶内,然后向圆底烧瓶内加入提取剂,在温度100℃条件下,水浴回流提取2次,每次30分钟,结束后过滤弃残渣,收集滤液;药渣粉末与提取剂的质量比为1:12,所述提取剂为质量分数为0.5%的硫酸钠水溶液,在其他实施方式中采用质量分数为0.1%的硫酸氢铵水溶液。
(4)向步骤(3)收集的滤液中加入1.5倍体积的无水乙醇,振荡摇匀,4℃静置过夜,离心取上清,收集沉淀,加无水乙醇洗涤2次,晾干至无醇味;
(5)将步骤(4)晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/5倍体积量的Sevage试剂,剧烈振荡,静置,离心,收集上层溶液,重复该步骤3次;
(6)向步骤(5)收集的上层溶液中加入活性碳,搅拌,过滤,滤液减压浓缩制得铁皮石斛根部石斛多糖。
实施例2:一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺
一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,所述工艺包含以下步骤:
(1)采集新鲜铁皮石斛,取根部、洗净、烘干、阴凉处保存备用;将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于8倍体积的乙酸溶液中2.5小时,然后清水洗净,晾干;乙酸溶液为体积分数为38%的乙酸水溶液,在其它实施方式中可以采用体积分数为10~98%的乙酸水溶液。
(2)将步骤(1)晾干后的根部浸没于12倍的体积分数为80%的乙醇中,回流提取4次,每次2小时,过滤,收集滤渣,清水洗净,晾干获得药渣。
(3)将步骤(2)收集的药渣打粉,过80目筛,筛下物置于圆底烧瓶内,然后向圆底烧瓶内加入提取剂,在温度100℃条件下,水浴回流提取3次,每次40分钟,结束后过滤弃残渣,收集滤液;药渣粉末与提取剂的质量比为1:16,所述提取剂为质量分数为1.8%的硫酸钠水溶液,在其他实施方式中采用质量分数为0.9%的硫酸氢铵水溶液。
(4)向步骤(3)收集的滤液中加入1.8倍体积的无水乙醇,振荡摇匀,4℃静置过夜,离心取上清,收集沉淀,加无水乙醇洗涤3次,晾干至无醇味;
(5)将步骤(4)晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/4倍体积量的Sevage试剂,剧烈振荡,静置,离心,收集上层溶液,重复该步骤4次;
(6)向步骤(5)收集的上层溶液中加入活性碳,搅拌,过滤,滤液减压浓缩制得铁皮石斛根部石斛多糖。
实施例3:一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺
一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,所述工艺包含以下步骤:
(1)采集新鲜铁皮石斛,取根部、洗净、烘干、阴凉处保存备用;将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于8倍体积的乙酸溶液中2小时,然后清水洗净,晾干;乙酸溶液为体积分数为45%的乙酸水溶液,在其它实施方式中可以采用体积分数为10~98%的乙酸水溶液。
(2)将步骤(1)晾干后的根部浸没于12倍的体积分数为85%的乙醇中,回流提取4次,每次1小时,过滤,收集滤渣,清水洗净,晾干获得药渣。
(3)将步骤(2)收集的药渣打粉,过50目筛,筛下物置于圆底烧瓶内,然后向圆底烧瓶内加入提取剂,在温度100℃条件下,水浴回流提取3次,每次50分钟,结束后过滤弃残渣,收集滤液;药渣粉末与提取剂的质量比为1:12,所述提取剂为质量分数为2%的硫酸钠水溶液,在其他实施方式中采用质量分数为1%的硫酸氢铵水溶液。
(4)向步骤(3)收集的滤液中加入2倍体积的无水乙醇,振荡摇匀,4℃静置过夜,离心取上清,收集沉淀,加无水乙醇洗涤3次,晾干至无醇味;
(5)将步骤(4)晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/3倍体积量的Sevage试剂,剧烈振荡,静置,离心,收集上层溶液,重复该步骤5次;
(6)向步骤(5)收集的上层溶液中加入活性碳,搅拌,过滤,滤液减压浓缩制得铁皮石斛根部石斛多糖。
实施例4:一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺
一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,所述工艺包含以下步骤:
(1)采集新鲜铁皮石斛,取根部、洗净、烘干、阴凉处保存备用;将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于10倍体积的乙酸溶液中3小时,然后清水洗净,晾干;乙酸溶液为体积分数为15%的乙酸水溶液,在其它实施方式中可以采用体积分数为10~98%的乙酸水溶液。
(2)将步骤(1)晾干后的根部浸没于15倍的体积分数为90%的乙醇中,回流提取5次,每次31小时,过滤,收集滤渣,清水洗净,晾干获得药渣。
(3)将步骤(2)收集的药渣打粉,过100目筛,筛下物置于圆底烧瓶内,然后向圆底烧瓶内加入提取剂,在温度100℃条件下,水浴回流提取3次,每次55分钟,结束后过滤弃残渣,收集滤液;药渣粉末与提取剂的质量比为1:18,所述提取剂为质量分数为2.5%的硫酸钠水溶液,在其他实施方式中采用质量分数为1.4%的硫酸氢铵水溶液。
(4)向步骤(3)收集的滤液中加入2倍体积的无水乙醇,振荡摇匀,4℃静置过夜,离心取上清,收集沉淀,加无水乙醇洗涤3次,晾干至无醇味;
(5)将步骤(4)晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/3倍体积量的Sevage试剂,剧烈振荡,静置,离心,收集上层溶液,重复该步骤5次;
(6)向步骤(5)收集的上层溶液中加入活性碳,搅拌,过滤,滤液减压浓缩制得铁皮石斛根部石斛多糖。
对实施例1~4所述工艺提取的石斛多糖进行测定,结果如下:
实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | |
吸光度 | 0.639 | 0.788 | 0.660 | 0.705 |
浓度(mg/mL) | 0.837 | 1.085 | 0.822 | 0.913 |
提取率(%) | 4.18 | 5.43 | 4.11 | 4.57 |
实施例5:一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺
一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,包括下列步骤:
第一步:将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于8倍体积的乙酸溶液中2小时,然后用水洗净,晾干得到晾干后的根部;
第二步:将所述晾干后的根部浸没于12倍体积的体积分数为78%的乙醇中,回流提取3次,每次3小时,过滤后收集滤渣,用水洗净后晾干获得药渣;
第三步:将所述药渣粉碎,过70目筛后的筛下物置于一反应容器内,然后向所述反应容器内加入提取剂,在100℃条件下,水浴回流提取3次,每次30分钟,得到提取液,接下过滤所述提取液得到滤液;所述筛下物与提取剂两者之间的质量比例为1:17,所述提取剂为质量分数为0.75%的硫酸氢铵水溶液;
第四步:向所述第三步得到的滤液中加入1.8倍体积的无水乙醇,摇匀后于4℃条件下静置过夜,然后离心取沉淀,该沉淀用无水乙醇洗涤2次,晾干至无乙醇味后获得晾干后的沉淀;
第五步:将所述晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/4倍体积的Sevage试剂,依次进行振荡、静置和离心操作,重复4次,合并收集的上层溶液;
第六步:向所述上层溶液中加入活性碳,搅拌后过滤,滤液经减压浓缩后制得铁皮石斛根部石斛多糖。
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例,并非企图具以对本发明做任何形式上之限制,是以,凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更,皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
Claims (3)
1.一种铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,其特征在于:包括下列步骤:
第一步:将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于5~10倍体积的乙酸溶液中1~3小时,然后用水洗净,晾干得到晾干后的根部;
第二步:将所述晾干后的根部浸没于3~15倍体积的体积分数为75~90%的乙醇中,回流提取2~5次,每次1~3小时,过滤后收集滤渣,用水洗净后晾干获得药渣;
第三步:将所述药渣粉碎,过50~100目筛后的筛下物置于一反应容器内,然后向所述反应容器内加入提取剂,在100℃条件下,水浴回流提取2~3次,每次30~55分钟,得到提取液,接下过滤所述提取液得到滤液;所述筛下物与提取剂两者之间的质量比例为1:12~18,所述提取剂为质量分数为0.5~2.5%的硫酸钠水溶液或质量分数为0.1~1.4%的硫酸氢铵水溶液;
第四步:向所述第三步得到的滤液中加入1.5~2倍体积的无水乙醇,摇匀后于4℃条件下静置过夜,然后离心取沉淀,该沉淀用无水乙醇洗涤2~3次,晾干至无乙醇味后获得晾干后的沉淀;
第五步:将所述晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/5~1/3倍体积的Sevage试剂,依次进行振荡、静置和离心操作,重复3~5次,合并收集的上层溶液;
第六步:向所述上层溶液中加入活性碳,搅拌后过滤,滤液经减压浓缩后制得铁皮石斛根部石斛多糖。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,其特征在于:将新鲜铁皮石斛根部洗净、烘干后即得处理后的新鲜铁皮石斛根部。
3.根据权利要求1所述的铁皮石斛根部石斛多糖的提取和纯化工艺,其特征在于:包括下列步骤:
第一步:将处理后的新鲜铁皮石斛根部浸没于8倍体积的乙酸溶液中2.5小时,然后用水洗净,晾干得到晾干后的根部;
第二步:将所述晾干后的根部浸没于12倍体积的体积分数为80%的乙醇中,回流提取4次,每次2小时,过滤后收集滤渣,用水洗净后晾干获得药渣;
第三步:将所述药渣粉碎,过80目筛后的筛下物置于一反应容器内,然后向所述反应容器内加入提取剂,在100℃条件下,水浴回流提取3次,每次40分钟,得到提取液,接下过滤所述提取液得到滤液;所述筛下物与提取剂两者之间的质量比例为1:16,所述提取剂为质量分数为1.8%的硫酸钠水溶液或质量分数为0.9%的硫酸氢铵水溶液;
第四步:向所述第三步得到的滤液中加入1.8倍体积的无水乙醇,摇匀后于4℃条件下静置过夜,然后离心取沉淀,该沉淀用无水乙醇洗涤3次,晾干至无乙醇味后获得晾干后的沉淀;
第五步:将所述晾干后的沉淀溶于去离子水中,然后加入1/4倍体积的Sevage试剂,依次进行振荡、静置和离心操作,重复4次,合并收集的上层溶液;
第六步:向所述上层溶液中加入活性碳,搅拌后过滤,滤液经减压浓缩后制得铁皮石斛根部石斛多糖。
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180213 |
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