CN107646698A - 薯莨的组织培养繁殖方法 - Google Patents

薯莨的组织培养繁殖方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107646698A
CN107646698A CN201711124729.XA CN201711124729A CN107646698A CN 107646698 A CN107646698 A CN 107646698A CN 201711124729 A CN201711124729 A CN 201711124729A CN 107646698 A CN107646698 A CN 107646698A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
dye yam
seedling
explant
extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711124729.XA
Other languages
English (en)
Inventor
陈乾平
谷筱玉
白隆华
潘丽梅
龙海荣
蒋妮
冯世鑫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Original Assignee
Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants filed Critical Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority to CN201711124729.XA priority Critical patent/CN107646698A/zh
Publication of CN107646698A publication Critical patent/CN107646698A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种薯莨的组织培养繁殖方法，取薯莨的顶芽作为外植体，分别进行以下培养，将外植体置于诱导培养基中进行培养至得到腋芽；将腋芽置于增殖培养基中进行增殖培养得到丛生芽；将丛生芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到试管苗；将试管苗置于生根培养基中培养得到生根苗，所述生根培养基为1/2MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.2mg/L异亮氨酸、0.3mg/L巴西磁石粉末以及0.5mg/L的中药提取物，其中，所述中药提取物由肉桂叶提取物和白花蛇舌草提取物按质量比1:2混合而成。本发明具有抑制薯莨在组织培养过程中发生褐化的概率，提高生根率和存活率的优点。

Description

薯莨的组织培养繁殖方法
技术领域
本发明涉及组织培养领域。更具体地说，本发明涉及一种薯莨的组织培养繁殖方法。
背景技术
薯莨(Dioscrea cirrhosa Lour.)又名血母、红孩儿、山羊头、山猪薯、金花果，是薯蓣科薯蓣属的一种多年生藤本野生植物，药用其块茎。盛产于我国浙江南部、福建、台湾、湖南、江西南部、广东、广西、四川、云南、西藏墨脱。民间应用薯莨有悠久的历史，其主要生物活性成分是块茎中的鞣质成分,能活血止血,理气止痛,收敛固涩,清热解毒,对多种疾病具有较好的疗效，是具有较高经济价值，有待于大规模开发利用的野生植物，适宜广泛推广种植。目前，对于薯莨的研究报道较少，多是关于药理成分的报道；在野外生长中，顶芽繁殖、侧茎繁殖和种子繁殖是薯莨主要的繁殖方式，但这几种繁殖方式在自然的状态下并不能保证成活率，给科学研究带来极大困难。现有技术没有薯莨组织培养的相关报道。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种生根培养基，提高薯莨的生根率。
本发明还有一个目的是通过小青龙汤煎液处理薯莨外植体，抑制其褐化，减少后期组培过程中的褐化率。
本发明还有一个目的是提供一种适合薯莨移栽的基质，提高薯莨炼苗的存活率。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种薯莨的组织培养繁殖方法，取薯莨的顶芽作为外植体，分别进行以下培养，
将外植体置于诱导培养基中进行培养至得到腋芽，光照强度为2100lx，光期为10h/d，温度为24℃，其中，所述诱导培养基包括：MS、5g/L琼脂、30g/L蔗糖、1.5-2.5mg/L的显齿蛇葡萄总黄酮以及0.5-1.5mg/L的赤霉素，调节诱导培养基pH值为5.8；
将腋芽置于增殖培养基中进行增殖培养得到丛生芽，光照强度为2100lx，光期为12h/d，温度为25℃，其中，所述增殖培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.5mg/L显齿蛇葡萄总黄酮、1.5～2.5mg/L的TDZ植物生长调节剂以及0.1～0.3mg/L的氯吡脲，调节增殖培养基pH值为5.8；
将丛生芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到试管苗，其中，所述壮苗培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.1-0.5g/L活性炭、0.1～0.5mg/L的萘乙酸以及0.2～0.6mg/L的灵发素，调节壮苗培养基pH值为5.8；
将试管苗置于生根培养基中培养得到生根苗，所述生根培养基为1/2MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.2mg/L异亮氨酸、0.3mg/L巴西磁石粉末以及0.5mg/L的中药提取物，其中，所述中药提取物由肉桂叶提取物和白花蛇舌草提取物按质量比1:2混合而成。
优选的是，所述外植体在进行培养前，进行了消毒处理。
优选的是，将所述生根苗进行炼苗后移栽至基质，所述基质由肉桂提取物、珍珠岩、松鳞、秸秆发酵产物按质量比3:20:2:10混合而成；所述秸秆发酵产物由棉花秸秆和玉米秸秆按质量比3:2混合发酵制成。
优选的是，所述外植体在进行组织培养前进行了防褐化预处理，具体为：将外植体置于小青龙汤煎液，并采用红外线照射灯下照射15-30min；所述小青龙汤煎液的制作方法为：将小青龙汤置于放有水的砂锅中浸泡2-3h，之后用武火煮沸，转文火煎煮至砂锅中的水量为原水量体积的1/3，即得；其中，每升水中浸泡5g小青龙汤。
本发明至少包括以下有益效果：本发明属首次对薯莨开展组织培养技术的研究成果，通过建立薯莨组织培养繁殖方法，具有存活率高、抑制薯莨在组培过程中褐化、提高薯莨试管苗生根率等优点，便于在生产上大面积推广种植，满足了中药资源开发的迫切需要。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
一种薯莨的组织培养繁殖方法，取薯莨的顶芽作为外植体，并经消毒处理，分别进行以下培养：
步骤一、将外植体置于诱导培养基中进行培养至得到腋芽，光照强度为2100lx，光期为10h/d，温度为24℃，其中，所述诱导培养基包括：MS、5g/L琼脂、30g/L蔗糖、2mg/L的显齿蛇葡萄总黄酮以及0.8mg/L的赤霉素，调节诱导培养基pH值为5.8；
步骤二、将腋芽置于增殖培养基中进行增殖培养得到丛生芽，光照强度为2100lx，光期为12h/d，温度为25℃，其中，所述增殖培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.5mg/L显齿蛇葡萄总黄酮、2mg/L的TDZ植物生长调节剂以及0.2mg/L的氯吡脲，调节增殖培养基pH值为5.8；
步骤三、将丛生芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到试管苗，其中，所述壮苗培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.3g/L活性炭、0.2mg/L的萘乙酸以及0.4mg/L的灵发素，调节壮苗培养基pH值为5.8；
步骤四、将试管苗置于生根培养基中培养得到生根苗，所述生根培养基为1/2MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.2mg/L异亮氨酸、0.3mg/L巴西磁石粉末以及0.5mg/L的中药提取物，其中，所述中药提取物由肉桂叶提取物和白花蛇舌草提取物按质量比1:2混合而成。
对比例1
对比例1的步骤一～步骤三均与实施例1中相同，在步骤四种采用的生根培养基为1/2MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖和0.3mg/L的吲哚丁酸。其他步骤均与实施例1相同。
选取100株经实施例1的步骤一～步骤三培育得到的健康的试管苗随机平均为分两组，第一组经过实施例1中的步骤四的生根培育，第二组经过对比例1的步骤四的生根培育，结果见表1。
表1不同生根培养基对薯莨试管苗生根的影响
培养基 平均生根数/条 生根率/％ 生根最短时间/天
实施例1 3.5 80.3 11.33
对比例1 1.7 42.4 21.51
从表1可以看出，添加有巴西磁石粉末和中药提取物的培养基，其生根数、生根率都显著高于添加常规生根剂吲哚丁酸的培养基，由此可知采用本申请的生根培养基能显著提高薯莨的生根效果，缩短生根时间。
实施例2
将实施例1培育的薯莨生根苗进行炼苗，选取健康的炼苗移栽至基质，所述基质由肉桂提取物、珍珠岩、松鳞、秸秆发酵产物按质量比3:20:2:10混合而成；所述秸秆发酵产物由棉花秸秆和玉米秸秆按质量比3:2混合发酵制成。实施例2中培育50株薯莨炼苗，50株薯莨炼苗平均生根数为2.1，平均根长3.22cm，记录50株薯莨炼苗在基质中培育的存活率以及生根数和平均根长。
对比例2
将实施例1培育的薯莨生根苗进行炼苗，选取健康的炼苗移栽至基质，将生根苗进行炼苗后移栽至基质，所述基质由泥炭土、蛭石及细河砂按质量比1:2:1混合而成。对比例2中培育50株薯莨炼苗，50株薯莨炼苗平均生根数为2.2，平均根长3.21cm，记录50株薯莨炼苗在基质中培育的存活率以及生根数和平均根长。
表2不同基质培育炼苗成活率/％
基质 5天 10天 15天 20天 30天
实施例2 100 100 98 94 94
对比例2 100 87 73 67 65
从表2可以看出，炼苗移植于添加肉桂提取物、松鳞和秸秆发酵产物的基质中一个月后，其存活率为94％，而采用常规的基质，炼苗的存活率只能达到65％，由此可知，本申请中的栽培基质能显著提高炼苗的存活率。
另外，30天后，实施例2中的50株薯莨炼苗的平均生根数为4.4，平均根长4.12cm，对比例2中50株薯莨炼苗的平均生根数为3.2，平均根长3.67cm，由此可知本申请中的基质能够促进薯莨炼苗的生根数和生根长度。
实施例3
本实施例中薯莨外植体的组织培养方法与实施例1相同，在进行外植体的组织培养前，对100个外植体进行了防褐化预处理，具体为：将外植体置于小青龙汤煎液，并采用红外线照射灯下照射15min；所述小青龙汤煎液的制作方法为：将小青龙汤置于放有水的砂锅中浸泡2-3h，之后用武火煮沸，转文火煎煮至砂锅中的水量为原水量体积的1/3，即得；其中，每升水中浸泡5g小青龙汤。
实施例4
一种薯莨的组织培养繁殖方法，取薯莨的顶芽作为外植体，并经消毒处理，分别进行以下培养：
步骤一、将100个薯莨外植体置于小青龙汤煎液，并采用红外线照射灯下照射15min；所述小青龙汤煎液的制作方法为：将小青龙汤置于放有水的砂锅中浸泡2-3h，之后用武火煮沸，转文火煎煮至砂锅中的水量为原水量体积的1/3，即得；其中，每升水中浸泡5g小青龙汤。
步骤二、将处理后的外植体置于诱导培养基中进行培养至得到腋芽，光照强度为2100lx，光期为10h/d，温度为24℃，其中，所述诱导培养基包括：MS、5g/L琼脂、30g/L蔗糖以及0.8mg/L的赤霉素，调节诱导培养基pH值为5.8。
步骤三、将腋芽置于增殖培养基中进行增殖培养得到丛生芽，光照强度为2100lx，光期为12h/d，温度为25℃，其中，所述增殖培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、2mg/L的TDZ植物生长调节剂以及0.2mg/L的氯吡脲，调节增殖培养基pH值为5.8；
步骤四、将丛生芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到试管苗，其中，所述壮苗培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.3g/L活性炭、0.2mg/L的萘乙酸以及0.4mg/L的灵发素，调节壮苗培养基pH值为5.8。
步骤五、将试管苗置于生根培养基中培养得到生根苗，所述生根培养基为1/2MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.2mg/L异亮氨酸、0.3mg/L巴西磁石粉末以及0.5mg/L的中药提取物，其中，所述中药提取物由肉桂叶提取物和白花蛇舌草提取物按质量比1:2混合而成。
对比例3
取100个薯莨的顶芽作为外植体，经过常规消毒后直接接种于MS培养基中，调节培养基的pH为5.8。选取100个薯莨顶芽作为外植体采用对比例3的方法进行组织培养。
表3不同环境下薯莨组织培养的褐化率％
实施例3 实施例4 对比例3
褐化率/％ 11.3 22.7 47.8
从表3可知，将薯莨的顶芽在组培前通过小青龙汤煎液的浸泡处理，能显著降低薯莨在组织培养过程中的褐化率，并且在诱导培养基和增殖培养基中加入显齿蛇葡萄总黄酮，能进一步降低薯莨组织培养过程中的褐化率。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims (4)

1.一种薯莨的组织培养繁殖方法，其特征在于，取薯莨的顶芽作为外植体，分别进行以下培养，
将外植体置于诱导培养基中进行培养至得到腋芽，光照强度为2100lx，光期为10h/d，温度为24℃，其中，所述诱导培养基包括：MS、5g/L琼脂、30g/L蔗糖、1.5-2.5mg/L的显齿蛇葡萄总黄酮以及0.5-1.5mg/L的赤霉素，调节诱导培养基pH值为5.8；
将腋芽置于增殖培养基中进行增殖培养得到丛生芽，光照强度为2100lx，光期为12h/d，温度为25℃，其中，所述增殖培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.5mg/L显齿蛇葡萄总黄酮、1.5～2.5mg/L的TDZ植物生长调节剂以及0.1～0.3mg/L的氯吡脲，调节增殖培养基pH值为5.8；
将丛生芽置于壮苗培养基中进行壮苗培养得到试管苗，其中，所述壮苗培养基包括：MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.1-0.5g/L活性炭、0.1～0.5mg/L的萘乙酸以及0.2～0.6mg/L的灵发素，调节壮苗培养基pH值为5.8；
将试管苗置于生根培养基中培养得到生根苗，所述生根培养基为1/2MS、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、0.2mg/L异亮氨酸、0.3mg/L巴西磁石粉末以及0.5mg/L的中药提取物，其中，所述中药提取物由肉桂叶提取物和白花蛇舌草提取物按质量比1:2混合而成。
2.如权利要求1所述的薯莨的组织培养繁殖方法，其特征在于，所述外植体在进行培养前，进行了消毒处理。
3.如权利要求1所述的薯莨的组织培养繁殖方法，其特征在于，将所述生根苗进行炼苗后移栽至基质，所述基质由肉桂提取物、珍珠岩、松鳞、秸秆发酵产物按质量比3:20:2:10混合而成；所述秸秆发酵产物由棉花秸秆和玉米秸秆按质量比3:2混合发酵制成。
4.如权利要求1所述的薯莨的组织培养繁殖方法，其特征在于，所述外植体在进行组织培养前进行了防褐化预处理，具体为：将外植体置于小青龙汤煎液，并采用红外线照射灯下照射15-30min；所述小青龙汤煎液的制作方法为：将小青龙汤置于放有水的砂锅中浸泡2-3h，之后用武火煮沸，转文火煎煮至砂锅中的水量为原水量体积的1/3，即得；其中，每升水中浸泡5g小青龙汤。
CN201711124729.XA 2017-11-14 2017-11-14 薯莨的组织培养繁殖方法 Pending CN107646698A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711124729.XA CN107646698A (zh) 2017-11-14 2017-11-14 薯莨的组织培养繁殖方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711124729.XA CN107646698A (zh) 2017-11-14 2017-11-14 薯莨的组织培养繁殖方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107646698A true CN107646698A (zh) 2018-02-02

Family

ID=61121435

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711124729.XA Pending CN107646698A (zh) 2017-11-14 2017-11-14 薯莨的组织培养繁殖方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107646698A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109156351A (zh) * 2018-09-29 2019-01-08 江苏农林职业技术学院 一种提高组培植株诱导率的培养基及制备方法与应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105248283A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 河南师范大学 一种调控盾叶薯蓣三倍体植株生根的方法
CN107258546A (zh) * 2017-08-04 2017-10-20 黄小燕 定心藤的组织培养繁殖方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105248283A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 河南师范大学 一种调控盾叶薯蓣三倍体植株生根的方法
CN107258546A (zh) * 2017-08-04 2017-10-20 黄小燕 定心藤的组织培养繁殖方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李运合等: "小花盾叶薯蓣的组织培养和快速繁殖", 《植物生理学通讯》 *
王道瑞: "《中医学用心得集：伤寒温病讲稿》", 31 May 2016, 中国中医药出版社 *
蒋玉宝等: "薯蓣植物组织培养的研究进展", 《生物技术》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109156351A (zh) * 2018-09-29 2019-01-08 江苏农林职业技术学院 一种提高组培植株诱导率的培养基及制备方法与应用
WO2020063955A1 (zh) * 2018-09-29 2020-04-02 江苏农林职业技术学院 一种提高组培植株诱导率的培养基及制备方法与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104335903B (zh) 一种促进白及快速繁殖的方法
CN103039361B (zh) 一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法
CN105052737B (zh) 一种滇黄精种子一步成苗的组培方法
CN104045407A (zh) 一种中草药芽茎叶菜培养液的制备方法
CN103548694B (zh) 一种剑叶龙血树的组织培养快速繁殖方法
CN109258460A (zh) 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法
CN105309311A (zh) 一种玄参良种繁育方法
CN107750797A (zh) 一种柑橘的育苗方法
CN103688830B (zh) 一种使铁皮石斛组培苗快速生根发芽的方法
CN109220790A (zh) 一种红果参离体外繁方法
CN105409771A (zh) 一种佛手参的快速繁殖方法
CN103168693A (zh) 弄岗马兜铃组织培养的增殖培养基及其应用
CN104488723A (zh) 一种朝鲜淫羊藿组培快速繁殖方法
CN102487829A (zh) 一种粉用型荸荠综合脱毒快繁的方法
CN106613068A (zh) 一种青钱柳种子育苗方法
CN104115753A (zh) 一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法
CN111149702A (zh) 一种朝鲜淫羊藿根段诱导芽的快速繁殖方法
CN107646698A (zh) 薯莨的组织培养繁殖方法
CN106665364B (zh) 龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育及生根的方法
CN102511390B (zh) 肥荚红豆种子无菌诱导植株再生的方法及其专用培养基
CN104082135A (zh) 一种快速繁殖铁皮石斛苗的方法
CN104798492A (zh) 一种提高土人参发芽率的实验方法
CN109874679B (zh) 一种一枝黄花的组织培养及快速繁殖技术育苗方法
CN106665355A (zh) 一种岩笋组织培养育苗方法
CN106069122A (zh) 一种茜草的扦插快速繁殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180202

RJ01 Rejection of invention patent application after publication