CN107646679A - 一种苦瓜幼胚的拯救方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种苦瓜幼胚的拯救方法，取授粉后12‑18天的苦瓜幼果，洁净处理后晾干；用灭菌手术刀沿幼果纵切，将幼果沿切口分开，切面向上；将未发育成熟的种子取出，放置在灭过菌的双层滤纸上，将种子远离胚芽端切一小口，将种皮剥离，取出幼胚，接种到添加了6‑BA和NAA的MS基本培养基上，然后在黑暗条件下，25℃放置2‑3天，再放在光照强度8000‑10000lx，温度25℃的条件下进行培养，7‑10天后，幼胚发育成苗；待苗有两片真叶时，将幼苗在灭菌的营养基质中驯化，最后定植到大田。采用本发明方法，可以在苦瓜种子成熟之前，获得发育正常的新种质植株，将从授粉到新种定植时间缩短到25天左右，缩短了育种时间。

Description

一种苦瓜幼胚的拯救方法
技术领域
本发明涉及一种苦瓜幼胚的拯救方法，属于植物组织培养技术领域，。
背景技术
在苦瓜种质创新过程中，传统的苦瓜育种的收种方法是在苦瓜雌雄花开放时，进行授粉受精，然后等35-40天种瓜成熟后，刨开果实，洗干净种子进行播种育苗，田间定植获得新的植株。如果种子未成熟即收获播种，则不能正常发芽成苗。此过程从授粉到种子成熟约40天，播种到出苗大致需要5-7天，出苗到定植大致需要30-35天。从授粉到获得新种质定植整个过程最少需要75天左右。而且，授粉受精后可能因为环境因素，如病虫害、灾害性天气、管理不善等因素导致幼果发育不良，获得不了成熟的种子，影响育种进程。
幼胚拯救的主要内容是胚的培养，是针对一些具有营养、生理或遗传等个别或综合问题而无法依靠播种得到植株，或发育早期阶段就败育或退化的胚，进行离体培养，提供充分而适宜的生长环境，使其生长发育形成成熟植株。幼胚拯救作为一种辅助传统育种方式的技术，在缩短育种周期、选育早熟品种及特早熟品种、园艺花卉百合育种等许多应用方面均获得了显著的成果，但在苦瓜方面至今未见相关研究资料。
在幼胚拯救过程中影响幼胚拯救成功的因素有很多，比如幼胚发育程度、培养环境、基本培养基、植物激素、培养方式等方面，适宜的条件对胚拯救技术的成败至关重要。而且，不同的作物，对幼胚拯救过程中培养环境、基本培养基类型、植物激素类型及浓度、培养方式等均不相同。只能根据具体作物进行培养条件进行探索，寻找适合该作物的培养条件。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种苦瓜幼胚的拯救方法，该从幼胚胚龄、培养基及激素浓度及种类等方面入手，研究出一套适合苦瓜幼胚的拯救方法，可以在苦瓜种子成熟之前，获得发育正常的新种质植株，将从授粉到新种质定植时间缩短到25天左右，大大缩短育种时间，时不受外界环境因素影响，为苦瓜创制新的育种材料提供了技术保障。
技术方案
一种苦瓜幼胚的拯救方法，包括如下步骤：
(1)取授粉后12-18天的苦瓜幼果，洁净处理后晾干；
(2)用灭菌手术刀沿幼果纵切，切口深度为0.8-1.2cm，将幼果沿切口分开，切面向上；
(3)将未发育成熟的种子从胎座中全部取出，放置在灭过菌的双层滤纸上，用灭菌手术刀片将种子远离胚芽端切一小口，小心将种皮剥离(必须将种皮剥离，否则胚芽和胚根发育不良)，取出幼胚，接种到添加了6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)的MS基本培养基上，6-BA的添加量为0.15-0.45mg·L-1，NAA的添加量为0.005-0.02mg·L-1；
(4)将接种好的培养基放置在黑暗条件下，25℃放置2-3天后，再放置在光照强度8000-10000lx，温度25℃的条件下进行培养，7-10天后，幼胚发育成苗；
(5)待苗有两片真叶时，将幼苗在灭菌的营养基质中驯化，然后定植到大田。
进一步，步骤(1)中，优选采用授粉后15天的苦瓜幼果。
进一步，步骤(1)中，所述洁净处理是先用流动水进行冲洗，晾干，再用75％的乙醇清洗。
进一步，步骤(2)中，切口深度为1cm。
进一步，步骤(3)中，所述MS基本培养基中，优选6-BA的添加量为0.2mg·L-1，NAA的添加量为0.01mg·L-1。在该配比的激素影响下，拯救效果最好。
本发明的有益效果：采用本发明方法，可以在苦瓜种子成熟之前，获得发育正常的新种质植株，将从授粉到新种质定植时间缩短到25天左右，大大缩短育种时间，同时不受外界环境因素影响，为苦瓜创制新的育种材料提供了技术保障，填补了苦瓜在幼胚培养方面的技术空白。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
实施例1
一种苦瓜幼胚的拯救方法，包括如下步骤：
(1)取授粉后15天的苦瓜幼果，先用流动水进行冲洗，晾干，再用75％的乙醇消毒，晾干；
(2)用灭菌手术刀沿幼果纵切，切口深度为1cm，将幼果沿切口分开，切面向上；
(3)将未发育成熟的种子从胎座中全部取出，放置在灭过菌的双层滤纸上，用灭菌手术刀片将种子远离胚芽端切一小口，小心将种皮剥离(必须将种皮剥离，否则胚芽和胚根发育不良)，取出幼胚，接种到添加了6-BA和NAA的MS基本培养基上，0.2mg·L-1，NAA的添加量为0.01mg·L-1；
(4)将接种好的培养基放置在黑暗条件下，25℃放置3天后，再放置在光照强度8000lx，温度25℃的条件下进行培养，8天后，幼胚发育成苗；
(5)待苗有两片真叶时，将幼苗在灭菌的营养基质中驯化，然后定植到大田。
对比例1
基本过程与实施例1相同，只除了步骤(3)中，取出幼胚后，接种到没有添加6-BA和NAA的MS基本培养基上。
对比例2
基本过程与实施例1相同，只除了步骤(3)中，取出幼胚后，接种到添加了6-BA的MS基本培养基上，6-BA的添加量为0.2mg·L-1。
对比例3
基本过程与实施例1相同，只除了步骤(3)中，取出幼胚后，接种到添加了6-BA的MS基本培养基上，6-BA的添加量为1.0mg·L-1。
对比例4
基本过程与实施例1相同，只除了步骤(3)中，取出幼胚后，接种到添加了6-BA和NAA的MS基本培养基上，6-BA的添加量为0.5mg·L-1，NAA的添加量为0.01mg·L-1。
采用实施例和对比例的方法对苦瓜幼胚进行拯救后，幼胚生根和芽的发育状态见下表1：
表1
本发明人取授粉后15天的幼胚，在MS基本培养基添加不同种类、不同浓度激素的培养基上进行幼胚培养。结果发现，MS不添加任何激素培养基上，幼胚的芽正常发育，但是胚根上须根很少；在MS添加0.2mg.L-16-BA的培养基上，幼胚的芽正常发育，但是胚根上须根比MS不添加激素时更少，只有直根，基本没有须根；当6-BA浓度超过0.5mg.L-1时，幼胚的芽不能正常发育，幼胚胚根只有直根，没有须根；在MS添加0.2mg.L-16-BA同时附加0.01mg.L-1NAA时，幼胚的芽正常发育，须根很多，小植株正常发育；但是6-BA浓度增至0.5mg.L-1同时附加0.01mg.L-1NAA时，尽管须根很多，但是幼胚的芽不能正常发育，小植株也发育不良。综合各项评价指标，本发明实施例选取MS添加0.2mg.L-16-BA同时附加0.01mg.L-1NAA为最佳培养基配方，对苦瓜幼胚的拯救效果最好。

Claims (5)

1.一种苦瓜幼胚的拯救方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取授粉后12-18天的苦瓜幼果，洁净处理后晾干；
(2)用灭菌手术刀沿幼果纵切，切口深度为0.8-1.2cm，将幼果沿切口分开，切面向上；
(3)将未发育成熟的种子从胎座中全部取出，放置在灭过菌的双层滤纸上，用灭菌手术刀片将种子远离胚芽端切一小口，小心将种皮剥离，取出幼胚，接种到添加了6-BA和NAA的MS基本培养基上，6-BA的添加量为0.15-0.45mg·L-1，NAA的添加量为0.005-0.02mg·L-1；
(4)将接种好的培养基放置在黑暗条件下，25℃放置2-3天后，再放置在光照强度8000-10000lx，温度25℃的条件下进行培养，7-10天后，幼胚发育成苗；
(5)待苗有两片真叶时，将幼苗在灭菌的营养基质中驯化，然后定植到大田。
2.如权利要求1所述的苦瓜幼胚的拯救方法，其特征在于，步骤(1)中，采用授粉后15天的苦瓜幼果。
3.如权利要求1所述的苦瓜幼胚的拯救方法，其特征在于，步骤(1)中，所述洁净处理是先用流动水进行冲洗，晾干，再用75％的乙醇清洗。
4.如权利要求1所述的苦瓜幼胚的拯救方法，其特征在于，步骤(2)中，切口深度为1cm。
5.如权利要求1所述的苦瓜幼胚的拯救方法，其特征在于，步骤(3)中，所述MS基本培养基中，6-BA的添加量为0.2mg·L-1，NAA的添加量为0.01mg·L-1。
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