CN107630053A - 一种生产β‑丙氨酸的方法及其专用工程菌 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生产β‑丙氨酸的方法及其专用工程菌。本发明提供了一种生产β‑丙氨酸的方法，包括如下步骤：以L‑天冬氨酸和5′‑磷酸吡哆醛为原料，在工程菌的作用下，生产β‑丙氨酸；所述工程菌为表达功能蛋白的重组菌，是将编码所述功能蛋白的功能基因导入出发菌得到的；所述功能蛋白为序列表的序列1所示的蛋白质或序列表的序列3所示的蛋白质。本发明提供的方法和重组菌在将来β‑丙氨酸的生物合成中具有重大的应用潜力。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产β-丙氨酸的方法及其专用工程菌。
背景技术
β-丙氨酸(β-alanine)，即3-氨基丙酸(3-aminopropanoic acid)，是自然界存在的唯一一种非蛋白质氨基酸，也是一种β型氨基酸，β-丙氨酸可用于合成泛酸/泛酸钙、肌肽、帕米膦酸钠、巴柳氮等，在医药、饲料、食品、电镀等领域应用广泛。
目前，化学合成仍是生产β-丙氨酸的主要方法，包括丙烯腈氨化水解法、丙烯酸/酯氨化法及β-氨基丙腈水解法。然而，化学合成法存在原料成本高、产生腈类三废、工艺条件苛刻(高温高压、强酸强碱的反应环境)、副产物多纯化难等问题。
目前生物法生产β-丙氨酸主要有以下几种方法：
(1)使用藤黄八叠球菌将丙烯酸转化为β-丙氨酸，转化率为54％左右；
(2)以富马酸为底物，采用含氨基裂解酶的大肠杆菌细胞进行酶催化生产β-丙氨酸，但是该方法不仅工艺条件复杂，转化率低，而且生产周期长，副产物较多；
(3)以β-氨基丙腈为底物，采用产腈水解酶的基因工程菌进行催化生产β-丙氨酸，但是该方法底物浓度过高，会产生副产物β-氨基丙酰胺。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产β-丙氨酸的方法及其专用工程菌。
本发明提供了一种生产β-丙氨酸的方法，包括如下步骤：以L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛为原料，在工程菌的作用下，生产β-丙氨酸；所述工程菌为表达功能蛋白的重组菌，是将编码所述功能蛋白的功能基因导入出发菌得到的；
所述功能蛋白为如下(a)或(b)或(c)：
(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(c)将序列1的氨基酸序列或序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白质。
所述功能基因为如下1)或2)或3)的DNA分子：
1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；
2)编码区如序列表中序列4所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述功能蛋白的DNA分子；
4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％以上同源性且编码所述功能蛋白的DNA分子。
上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。
所述方法中，L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：5-500g：5-500μmol。所述方法中，L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：50g：50μmol。
所述方法中，工程菌、L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：10g：5-500g：5-500μmol。所述方法中，工程菌、L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：10g：50g：50μmol。
所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，L-天冬氨酸的浓度为5-500g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为5-500μM。所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，L-天冬氨酸的浓度为50g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为50μM。
所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，工程菌的浓度为1-100g/L，L-天冬氨酸的浓度为5-500g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为5-500μM。所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，工程菌的浓度为10g/L，L-天冬氨酸的浓度为50g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为50μM。
所述液相反应体系的溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)或醋酸盐缓冲液。
所述磷酸盐缓冲液为50mM的PBS缓冲液。
所述液相反应体系由工程菌、L-天冬氨酸、TritonX-100和磷酸盐缓冲液组成。
初始反应体系中，TritonX-100的浓度为0.01％-1％(体积百分含量)，具体可为0.1％(体积百分含量)。
所述液相反应体系的pH为6.0-8.0，具体可为6.0-7.0，更具体可为7.0。
所述方法中，反应温度可为30℃-40℃(具体可为37℃)。
所述方法中，反应时间可为3小时以上，具体可为3-12小时、6-12小时或9-12小时，更具体可为3小时、6小时、9小时或12小时。
所述方法中，在振荡条件下进行反应。所述振荡具体可为80rpm振荡。
所述出发菌可为大肠杆菌。所述出发菌具体可为大肠杆菌BW25113、大肠杆菌ΔasnB、大肠杆菌ΔasnA、大肠杆菌ΔansA、大肠杆菌ΔnadB、大肠杆菌ΔlysC、大肠杆菌ΔaspA、大肠杆菌ΔpurA或大肠杆菌ΔargG。
所述功能基因通过重组质粒导入出发菌；所述重组质粒是将所述功能基因插入出发载体得到的。所述重组质粒具体可为：将载体pBAD/HisB的XhoI和PstI酶切位点之间的小片段取代为了序列表的序列2所示的双链DNA分子或序列表的序列4所示的双链DNA分子，得到的重组质粒。
所述工程菌具体可先进行如下处理：
(1)将工程菌培养至OD600nm＝0.6-0.8(具体可为0.7)；
(2)完成步骤(1)后，在培养体系中加入L-阿拉伯糖进行诱导；
(3)完成步骤(2)后，离心收集工程菌。
所述工程菌具体可先进行如下处理：
(1)将工程菌接种至液体培养基(例如LB培养基或2YT培养基)，振荡培养至OD600nm＝0.6-0.8(具体可为0.7)；
(2)完成步骤(1)后，在培养体系中加入L-阿拉伯糖并使其在培养体系中的浓度为0.2g/100mL，振荡培养12小时；
(3)完成步骤(2)后，离心收集工程菌。
所述工程菌具体可先进行如下处理：
(1)将工程菌接种至含50μg/mL链霉素的LB液体培养基，37℃、220rpm振荡培养至OD600nm＝0.6-0.8(具体可为0.7)；
(2)完成步骤(1)后，在培养体系中加入L-阿拉伯糖并使其在培养体系中的浓度为0.2g/100mL，30℃、200rpm振荡培养12小时；
(3)完成步骤(2)后，取整个培养体系，4℃、6000rpm离心15min，收集细胞沉淀，即为工程菌。
本发明还保护将重组质粒导入出发菌得到的工程菌；所述重组质粒为将所述功能基因插入出发载体得到的；所述出发菌为大肠杆菌；所述出发载体为载体pBAD/HisB。
所述重组质粒具体可为：将载体pBAD/HisB的XhoI和PstI酶切位点之间的小片段取代为了序列表的序列2所示的双链DNA分子或序列表的序列4所示的双链DNA分子，得到的重组质粒。
所述出发菌具体可为大肠杆菌BW25113、大肠杆菌ΔasnB、大肠杆菌ΔasnA、大肠杆菌ΔansA、大肠杆菌ΔnadB、大肠杆菌ΔlysC、大肠杆菌ΔaspA、大肠杆菌ΔpurA或大肠杆菌ΔargG。
本发明还保护所述重组菌在制备β-丙氨酸中的应用。
所述应用中，以L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛为原料。
L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：5-500g：5-500μmol。所述方法中，L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：50g：50μmol。
工程菌、L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：10g：5-500g：5-500μmol。所述方法中，工程菌、L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：10g：50g：50μmol。
本发明还保护一种生产β-丙氨酸的方法，包括如下步骤：以L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛为原料，在所述功能蛋白的作用下，生产β-丙氨酸。
所述方法中，L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：5-500g：5-500μmol。所述方法中，L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：50g：50μmol。
所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，L-天冬氨酸的浓度为5-500g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为5-500μM。所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，L-天冬氨酸的浓度为50g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为50μM。
所述液相反应体系的溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)或醋酸盐缓冲液。
所述磷酸盐缓冲液为50mM的PBS缓冲液。
所述液相反应体系还包括TritonX-100。TritonX-100的浓度为0.01％-1％(体积百分含量)，具体可为0.1％(体积百分含量)。
所述液相反应体系的pH为6.0-8.0，具体可为6.0-7.0，更具体可为7.0。
所述方法中，反应温度可为30℃-40℃(具体可为37℃)。
所述方法中，反应时间可为3小时以上，具体可为3-12小时、6-12小时或9-12小时，更具体可为3小时、6小时、9小时或12小时。
所述方法中，在振荡条件下进行反应。所述振荡具体可为80rpm振荡。
所述功能蛋白的存在形式可为：完整的微生物细胞、细胞破碎液、粗酶或纯酶。
本发明的优势在于：⑴在催化合成β-丙氨酸的过程中，酶活性更稳定，从而提高L-天冬氨酸的转化率；⑵利用单敲除菌株作为宿主菌，克服了宿主菌本身对于底物L-天冬氨酸的消耗，从而提高β-丙氨酸的产率。利用本发明提供的重组菌进行催化合成β-丙氨酸，转化率可以达到92％。因此，本发明所述的重组菌在将来β-丙氨酸的生物合成中具有重大的应用潜力。
附图说明
图1为β-丙氨酸的结构示意图。
图2为L-天冬氨酸标准品和β-丙氨酸标准品的HPLC图谱。
图3为重组菌Ⅱ完成步骤4的反应体系进行步骤5的色谱图。
图4为实施例1的步骤二的6的结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。如无特殊说明，实施例中的磷酸盐缓冲液均为50mM的PBS缓冲液。对于同一条件参数下的不同次反应的色谱图来说，目标峰保留时间会有一定的误差范围，一般相差0.1min内可以视为误差，可以认定为同一目标物。实施例中的细胞浓度“g/L”中的“g”均代表细胞湿重。转化率的计算公式：某一时刻反应体系中β-丙氨酸的实际摩尔量/初始时刻反应体系中L-天冬氨酸的摩尔量×100％。
载体pBAD/HisB：Invitrogen公司，产品目录号为V430-01。大肠杆菌BW25113：Biovector NTCC INC，货号为355297。大肠杆菌ΔasnB：NBRP E.coli strain，产品目录号：ME9658。大肠杆菌ΔasnA：NBRP E.coli strain，产品目录号：JE7616。大肠杆菌ΔansA：NBRP E.coli strain，产品目录号：ME8606。大肠杆菌ΔnadB：NBRP E.coli strain，产品目录号：ME5371。大肠杆菌ΔlysC：NBRP E.coli strain，产品目录号：ME6078。大肠杆菌ΔaspA：NBRP E.coli strain，产品目录号：ME8770。大肠杆菌ΔpurA：NBRP E.coli strain，产品目录号：ME8615。大肠杆菌ΔargG：NBRP E.coli strain，产品目录号：JE5724。L-天冬氨酸(又称L-天冬氨酸标准品)：购自Aladdin公司，产品目录号：A137730。β-丙氨酸(又称β-丙氨酸标准品)：购自Aladdin公司，产品目录号：A105703。5′-磷酸吡哆醛(又称辅因子PLP)：Aladdin公司，产品目录号：P101874。β-丙氨酸的结构示意图见图1。
实施例1、构建重组菌并应用重组菌制备β-丙氨酸
一、构建重组菌
1、将序列表的序列2所示的双链DNA分子插入载体pBAD/HisB的XhoI和PstI酶切位点之间，得到重组质粒甲。根据测序结果，对重组质粒甲进行结构描述如下：在载体pBAD/HisB的XhoI和PstI酶切位点之间插入了序列表的序列2所示的双链DNA分子。序列表的序列2所示的DNA分子编码序列表的序列1所示的蛋白质。
2、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌BW25113，得到重组菌Ⅰ。
3、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔasnB，得到重组菌Ⅱ。
4、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔasnA，得到重组菌Ⅲ。
5、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔansA，得到重组菌Ⅳ。
6、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔnadB，得到重组菌Ⅴ。
7、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔlysC，得到重组菌Ⅵ。
8、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔaspA，得到重组菌Ⅶ。
9、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔpurA，得到重组菌Ⅷ。
10、将步骤1得到的重组质粒甲导入大肠杆菌ΔargG，得到重组菌Ⅸ。
11、将载体pBAD/HisB导入导入大肠杆菌BW25113，得到对照菌Ⅰ。
12、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔasnB，得到对照菌Ⅱ。
13、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔasnA，得到对照菌Ⅲ。
14、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔansA，得到对照菌Ⅳ。
15、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔnadB，得到对照菌Ⅴ。
16、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔlysC，得到对照菌Ⅵ。
17、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔaspA，得到对照菌Ⅶ。
18、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔpurA，得到对照菌Ⅷ。
19、将载体pBAD/HisB导入大肠杆菌ΔargG，得到对照菌Ⅸ。
重组菌Ⅰ、重组菌Ⅱ、重组菌Ⅲ、重组菌Ⅳ、重组菌Ⅴ、重组菌Ⅵ、重组菌Ⅶ、重组菌Ⅷ或重组菌Ⅸ中，胞内表达序列1所示的蛋白质。
二、应用重组菌制备β-丙氨酸
步骤一制备的各个重组菌分别进行如下操作：
1、取重组菌的单克隆，接种到含50μg/mL链霉素的LB液体培养基，37℃、220rpm振荡培养至OD600nm＝0.7(实际应用中，OD600nm＝0.6-0.8均可)。
2、完成步骤1后，在培养体系中加入L-阿拉伯糖并使其在培养体系中的浓度为0.2g/100mL，30℃、200rpm振荡培养12小时。
3、完成步骤2后，取整个培养体系，4℃、6000rpm离心15min，收集细胞沉淀。
4、制备β-丙氨酸。
反应体系的组成：步骤3得到的细胞沉淀、L-天冬氨酸、TritonX-100、5′-磷酸吡哆醛和pH7.0的磷酸盐缓冲液。反应体系中，各组分的初始浓度如下：细胞10g/L、L-天冬氨酸50g/L、TritonX-100 0.1％(体积百分含量)、5′-磷酸吡哆醛50μM。
反应条件：37℃、80rpm振荡12小时。
反应过程中采用2M HCl控制反应体系的pH为7.0。
5、检测β-丙氨酸含量
(1)完成步骤4后，取反应体系，6000rpm离心15min，收集上清液。
(2)用蒸馏水稀释步骤(1)得到的上清液，得到稀释液。
(3)衍生化反应。
衍生剂的制备方法：取0.343g邻苯二甲醛和0.1472g N-乙酰-L-半胱氨酸，再加入5mL无水乙醇，然后用蒸馏水定容到25mL。
衍生反应：取300μL步骤(2)得到的稀释液，加入360μL硼酸缓冲液(50mmol/L，pH9.5)，混匀，再加入240μL衍生剂，继续混匀，然后80rpm、振荡20min，然后12000rpm离心2min，收集上清液。
(4)取步骤(3)得到的上清液，进行HPLC检测。
HPLC系统：Agilent 1260；色谱柱：Agilent Eclipse plus C18；
流动相：35mmol/L乙酸钠水溶液：甲醇＝7:3(体积比)。
流速：1mL/min；
温度：30℃；
检测器：DAD；检测波长：334nm。
将L-天冬氨酸标准品和β-丙氨酸标准品进行上述步骤(3)和(4)，HPLC图谱见图2。L-天冬氨酸标准品的出峰位置为0.957min。β-丙氨酸标准品的出峰位置为10.935min。
用β-丙氨酸标准品建立β-丙氨酸含量与峰面积的标准曲线方程如下：y＝25534x+74.6，R2＝0.998(其中x为HPLC色谱图中的峰面积，y为β-丙氨酸的含量，单位为g/L)。
重组菌Ⅱ完成步骤4的反应体系进行步骤5的色谱图见图3(分别在0.978min和10.986min显示出峰)。
各个重组菌进行上述步骤，β-丙氨酸的产量和转化率见表1(应用各重组菌时的结果，均为10次重复试验的平均值)。
表1
| 完成步骤4后反应体系中的β-丙氨酸浓度 | 转化率 | |
| 重组菌Ⅰ | 29.2g/L | 84.5％ |
| 重组菌Ⅱ | 31.8g/L | 92.0％ |
| 重组菌Ⅲ | 30.0g/L | 86.7％ |
| 重组菌Ⅳ | 29.1g/L | 84.3％ |
| 重组菌Ⅴ | 29.5g/L | 85.2％ |
| 重组菌Ⅵ | 29.3g/L | 84.6％ |
| 重组菌Ⅶ | 29.6g/L | 85.7％ |
| 重组菌Ⅷ | 30.1g/L | 86.8％ |
| 重组菌Ⅸ | 30.4g/L | 87.8％ |
6、应用重组菌制备β-丙氨酸
反应体系的组成：重组菌Ⅱ步骤3得到的细胞沉淀、L-天冬氨酸、TritonX-100、5′-磷酸吡哆醛和pH7.0的磷酸盐缓冲液。反应体系中，各组分的初始浓度如下：细胞10g/L、L-天冬氨酸50g/L、TritonX-100 0.1％(体积百分含量)、5′-磷酸吡哆醛50μM。
反应条件：37℃、80rpm振荡。
反应过程中采用2M HCl控制反应体系的pH为7.0。
分别于0小时、1.5小时、3小时、6小时、9小时和12小时后取样，按照步骤5的方法检测β-丙氨酸含量并计算转化率。
结果见图4(10次重复试验的平均值)。
实施例2、构建重组菌并应用重组菌制备β-丙氨酸
一、构建重组菌
制备得到重组质粒乙。根据测序结果，对重组质粒乙进行结构描述如下：将载体pBAD/HisB的XhoI和PstI酶切位点之间的小片段取代为了序列表的序列4所示的双链DNA分子。序列表的序列4所示的DNA分子编码序列表的序列3所示的蛋白质。
将重组质粒乙导入大肠杆菌BW25113，得到重组菌a。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔasnB，得到重组菌b。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔasnA，得到重组菌c。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔansA，得到重组菌d。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔnadB，得到重组菌e。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔlysC，得到重组菌f。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔaspA，得到重组菌g。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔpurA，得到重组菌h。
将重组质粒乙导入大肠杆菌ΔargG，得到重组菌i。
二、应用重组菌制备β-丙氨酸
分别取步骤一得到的各个重组菌，按照实施例1的步骤二依次进行步骤1至5。
β-丙氨酸的产量和转化率见表2(10次重复试验的平均值)。
表2
| 完成步骤4后反应体系中的β-丙氨酸浓度 | 转化率 | |
| 重组菌a | 25.1g/L | 72.5％ |
| 重组菌b | 27.8g/L | 80.3％ |
| 重组菌c | 26.7g/L | 77.1％ |
| 重组菌d | 25.3g/L | 73.1％ |
| 重组菌e | 25.2g/L | 72.8％ |
| 重组菌f | 25.3g/L | 73.1％ |
| 重组菌g | 25.0g/L | 72.2％ |
| 重组菌h | 26.5g/L | 76.6％ |
| 重组菌i | 26.6g/L | 76.9％ |
对比例、
用实施例1制备的各个对照菌(对照菌Ⅰ、对照菌Ⅱ、对照菌Ⅲ、对照菌Ⅳ、对照菌Ⅴ、对照菌Ⅵ、对照菌Ⅶ、对照菌Ⅷ或对照菌Ⅸ)代替重组菌，依次进行实施例1的步骤二的1至5。
采用上述各个对照菌，完成步骤4的反应体系中β-丙氨酸的浓度均为0g/L。
Claims (10)
1.一种生产β-丙氨酸的方法，包括如下步骤：以L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛为原料，在工程菌的作用下，生产β-丙氨酸；
所述工程菌为表达功能蛋白的重组菌，是将编码所述功能蛋白的功能基因导入出发菌得到的；
所述功能蛋白为如下(a)或(b)或(c)：
(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(c)将序列1的氨基酸序列或序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白质。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中，L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：5-500g：5-500μmol。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中，工程菌、L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛的配比为：10g：5-500g：5-500μmol。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，L-天冬氨酸的浓度为5-500g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为5-500μM。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中采用液相反应体系；初始反应体系中，工程菌的浓度为1-100g/L，L-天冬氨酸的浓度为5-500g/L，5′-磷酸吡哆醛的浓度为5-500μM。
6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，反应条件为：30℃-40℃、3-12h。
7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述出发菌为大肠杆菌。
8.将重组质粒导入出发菌得到的重组菌；
所述重组质粒为将功能基因插入出发载体得到的；所述出发菌为大肠杆菌；所述出发载体为载体pBAD/HisB；所述功能基因为编码功能蛋白的基因；
所述功能蛋白为如下(a)或(b)或(c)：
(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(c)将序列1的氨基酸序列或序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白质。
9.权利要求8所述重组菌在制备β-丙氨酸中的应用。
10.一种生产β-丙氨酸的方法，包括如下步骤：以L-天冬氨酸和5′-磷酸吡哆醛为原料，在功能蛋白的作用下，生产β-丙氨酸；
所述功能蛋白为如下(a)或(b)或(c)：
(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(c)将序列1的氨基酸序列或序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白质。
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| CN201610565703.8A CN107630053A (zh) | 2016-07-18 | 2016-07-18 | 一种生产β‑丙氨酸的方法及其专用工程菌 |
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| CN105431520A (zh) * | 2013-07-31 | 2016-03-23 | 诺维信公司 | 利用表达昆虫天冬氨酸1-脱羧酶的重组酵母的3-羟基丙酸生产 |
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