CN107624069A - 用于改善肌肉代谢的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

一种用于改善受试者的肌肉代谢的组合物和用于制造和使用所述组合物的方法。实施例包括具有漏芦的提取物和红景天的提取物的组合物。漏芦的提取物可包括一定量的蜕皮甾酮，包括20‑羟基蜕皮激素。红景天的提取物可包括红景天甙和肉桂醇甙，其包括络赛维。所述组合物的合适的摄入剂量可经操作以增加受试者的蛋白合成并且减少蛋白质的蛋白分解。

Description

用于改善肌肉代谢的组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年2月3日提交的美国专利申请第14/612,973号的权益，所述申请在下文中以引用的方式并入。

技术领域

本公开提供用于增加肌肉蛋白合成、减少肌肉蛋白分解、提高肌肉质量和/或力量并 且改善好氧/厌氧运动性能的组合物和方法。适用的组合物包括(但不限于)漏芦和红景天提取物，和其组合。

发明内容

在一个方面，本发明包括一种包括漏芦提取的组合物。在一些实施例中，漏芦提取物包含至少0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％脱皮类固醇，其包括例如约0.1％到10％脱皮类固醇 或约0.4％到5％脱皮类固醇。在一些实施例中，漏芦提取物组合物包含至少0.01％、 0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、 8％、9％或10％的20-羟基蜕皮激素，其包括例如0.1％到5.0％的20-羟基蜕皮激素。

在另一个方面，本发明包括一种包括红景天提取的组合物。在一些实施例中，红景天提取物包含至少0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％ 红景天甙，其包括例如约1％到4％。在一些实施例中，红景天提取物组合物包含至少 0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、 9％或10％肉桂醇甙(rosavins)，其包括例如约0.5％到10％或3％到6％肉桂醇甙。在一 些实施例中，组合物包含至少0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、 4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％络赛维(rosavin)，其包括例如约0.5％到10％络赛 维或1％到5％络赛维。在一些实施例中，红景天提取物组合物包含至少50％、55％、60％、 65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％红景天提取物，其包括例如约50％到 99％、60％到95％、70％到95％红景天提取物。

在一个方面，本发明包括一种包括漏芦提取物和红景天提取物的组合物。在一些实 施例中，漏芦提取物包含至少0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、 1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％脱皮类固醇，其包括例如约0.1％到 10％脱皮类固醇或约0.4％到5％脱皮类固醇。在一些实施例中组合物包含至少0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、 8％、9％或10％的20-羟基蜕皮激素，其包括例如0.1％到5.0％的20-羟基蜕皮激素。

在一些实施例中，红景天提取物包含至少0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％红景天甙，其包括例如约1％到4％。在一些实施例中，组合 物包含至少0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、 7％、8％、9％或10％肉桂醇甙，其包括例如约3％到6％肉桂醇甙。在一些实施例中，组 合物包含至少0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、 7％、8％、9％或10％络赛维，其包括例如约2％到5％络赛维。

在一些实施例中，组合物包含至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％红景天提取物，其包括例如约50％到99％、60％到95％、70％到95％ 红景天提取物。

在另一个方面，本发明包括具有(i)至少0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、 1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％脱皮类固醇(其包括例如约0.1％到 10％脱皮类固醇或约0.4％到5％脱皮类固醇)和(ii)至少0.5％、0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％红景天甙(其包括例如约1％到4％)的组合物。在 一些实施例中，组合物包含至少0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.75％、1％、2％、 3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的20-羟基蜕皮激素，其包括例如0.1％到5.0％ 的20-羟基蜕皮激素。在一些实施例中，组合物包含至少0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、 0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％肉桂醇甙，其包括例如约 3％到6％肉桂醇甙。在一些实施例中，组合物包含至少0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、 0.75％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％络赛维，其包括例如约2％ 到5％络赛维。

在其它实施例中，前述的组合物中的任一种可包括在药物配制物中。组合物可根据 预期投予的途径以任何方便的并且合适的配方调配。用于口服投予的合适的配制物包括 例如片剂、丸剂、胶囊、粉末、溶液、悬浮液、糖浆或酏剂。任选地，组合物进一步含 有药学上可接受的赋形剂或载剂，或其它药学上活性或非活性成分。

本发明的其它方面包括用于通过向受试者投予上文所述组合物或药物配制物中的 任一种在受试者中提高蛋白合成、提高肌肉力量和/或降低蛋白蛋白分解的方法。另外的 方面包括通过向受试者投予上文所述的组合物或药物配制物中的任一种治疗与受试者的肌肉萎缩相关联或其特征在于受试者的肌肉萎缩的病况的方法。组合物或配制物可通过任何适当的投予途径向受试者投予。在一个实施例中，组合物经口投予。在一些实施 例中，受试者投予至少1毫克/千克/天、5毫克/千克/天、10毫克/千克/天、20毫克/千克 /天、30毫克/千克/天、40毫克/千克/天、50毫克/千克/天、75毫克/千克/天、100毫克/ 千克/天200毫克/千克/天、400毫克/千克/天、600毫克/千克/天、800毫克/千克/天、1000 毫克/千克/天、2000毫克/千克/天、3000毫克/千克/天、5000毫克/千克/天或更多/天的日 剂量。在一个实施例中，口服配制物为约30毫克/千克/天到1000毫克/千克/天。在另一 个实施例中，口服配制物为约50毫克/千克/天到100毫克/千克/天、约约5毫克/千克/ 天到50毫克/千克/天，或小于200毫克/千克/天。在另外的实施例中，口服配制物可为 约200毫克/天到500毫克/天，或约50毫克/天到2000毫克/天。总日剂量可作为单一剂 量投予或拆分成在不同时间投予的多个剂量(例如每天两次、三次、四次或更多次)。

在各种实施例中，剂量可基于受试者的类型和/或受试者的质量修改。举例来说，在 一些实施例中，对于人类受试者合适的剂量可为50毫克/天到2000毫克/天或200毫克/天到500毫克/天。在一些实施例中，对于人类受试者或反刍动物受试者期望剂量可为5 毫克/千克/天到50毫克/千克/天或小于200毫克/千克/天。

在一些实施例中，受试者可治疗包括少肌症、少肌型肥胖症、癌症、多发性硬化症、肌肉萎缩症、需要固定(例如夹板或石膏模)的骨折、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、外 周神经病变、中风或恶病质的病况。受试者可患有或被诊断为患有这类病况，并且这类 病况可为特发性或次于另一种病况。在一些实施例中，受试者为哺乳动物，其包括例如 人类或动物(例如犬科动物、猫科动物、绵羊科动物、牛科动物、反刍动物等)。因此， 在各种实施例中，本文所述的组合物可用于食品、饲料产品或用于人类或动物的营养补 充剂中。

附图说明

图1a为在实例11的提取物中识别的总酚醛树脂的曲线；

图1b为在实例11的提取物中识别的总有机酸的曲线；

图2a为在实例11的提取物中识别的总游离碳水化合物的曲线；

图3a、图3b、图4a、图4b、图5a、图5b、图6a、图6b、图7a和图7b为描绘测 定在与在三种浓度下和具有低和高氨基酸的5种不同制备的漏芦提取物一起培育之后对 在C2C12肌管中的苏氨酸389的S6K1磷酸化的条形图；

图8a、图8b、图9a、图9b、图10a、图10b、图11a、图11b、图12a、图12b为 描绘测定在与在三种浓度下和具有低和高氨基酸的5种不同制备的漏芦提取物一起培育 之后对在C2C12肌管中的苏氨酸308的Akt磷酸化的条形图；

图13a、图13b、图14a、图14b、图15a、图15b、图16a、图16b、图17a、图17b 为描绘测定在与在三种浓度下和具有低和高氨基酸的5种不同制备的漏芦提取物一起培 育之后在C2C12肌管中的蛋白合成的条形图；

图18a和图18b为描绘测定在与在三种浓度下的漏芦F0和红景天提取物一起培育之后在C2C12肌管中的蛋白合成的条形图；

图19a、图19b、图20a、图20b和图21为描绘测定在与在两种浓度下的漏芦F0和 红景天提取物单独或组合一起培育之后在C2C12肌管中的蛋白合成的条形图；

图22a和图22b为描绘漏芦F0和红景天提取物对在C2C12肌管中的肌肉抑制素和atrogin基因表达的影响的条形图；

图23a、图23b、图24a和图24b为描绘漏芦F0和红景天提取物的共培育对在C2C12肌管中的肌肉抑制素基因表达的影响的条形图；

图25a、图25b、图26a和图26b为描绘漏芦F0和红景天提取物对在C2C12肌管中 的atrogin基因表达的影响的条形图；

图27a、图27b和图28为描绘测定在与在两种浓度下不同制备的漏芦提取物一起培育之后在C2C12肌管中的蛋白合成的条形图；

图29a为表示用于漏芦根的提取工艺的流程图；和

图29b为表示用不同溶剂获得的洗脱份的流程图。

图30a为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中Wistar大鼠的抓握力量(以千克的力计)的提高的条形图。

图30b为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中Wistar大鼠的抓握力量(以千克的力/克体重计)的提高的条形图。

图31a为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中Wistar大鼠的趾长伸肌(EDL)重量(以克计)的条形图。

图31b为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中Wistar大鼠的EDL重量(作为总体重的百分比)的条形图。

图32a为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中Wistar大鼠的比目鱼肌重量(以克计)的条形图。

图32b为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中Wistar大鼠比目鱼肌重量(作为总体重的百分比)的条形图。

图33a为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中在Wistar大鼠的趾长伸肌(EDL)中的蛋白含量的条形图。

图33b为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中在Wistar大鼠的EDL中的蛋白含量的条形图。

图34a为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中在Wistar大鼠的比目鱼肌中的蛋白含量的条形图。

图34b为描绘在用漏芦和红景天组合物治疗42天之后在对照组中和在实验组中在Wistar大鼠的比目鱼肌中的蛋白含量的条形图。

图35a为用抗嘌呤霉素从FDP肌肉样品提取的蛋白的蛋白质印迹。

图35b为示出了归一化为定量负载和阴性对照的任意单位的嘌呤霉素水平的曲线。 *显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图35c为示出了归一化为定量负载和乳清蛋白的任意单位的嘌呤霉素水平的曲线。 *显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图35d为示出了归一化为定量负载和红景天玫瑰(Rhodiola rosea)治疗的任意单位 的嘌呤霉素水平的曲线。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。的图

图35e为示出了归一化为定量负载和鹿草(Rhaponticum carthamoides)治疗的任意 单位的嘌呤霉素水平的曲线。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图36a为用抗嘌呤霉素从三角肌样品提取的蛋白的蛋白质印迹。*显著不同p<0.05。 **显著不同p<0.001。

图36b为曲线，示出了归一化为定量负载和阴性对照的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图36c曲线示出了归一化为定量负载和乳清蛋白的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图36d曲线示出了归一化为定量负载和红景天玫瑰治疗的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图36e曲线示出了归一化为定量负载和鹿草治疗的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图37a为用抗嘌呤霉素从二头肌样品提取的蛋白的蛋白质印迹。B：

图37b为曲线，示出了归一化为定量负载和阴性对照的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图37c为曲线，示出了归一化为定量负载和乳清蛋白的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图37d为曲线，示出了归一化为定量负载和红景天玫瑰治疗的任意单位的嘌呤霉素 水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图37e为曲线，示出了归一化为定量负载和鹿草治疗的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同p<0.05。**显著不同p<0.001。

图38为在急性对抗锻炼之后对于大鼠的所有肌肉(FDP、三角肌和二头肌组合)的蛋白合成水平的曲线，其中曲线示出了归一化为定量负载和阴性对照的任意单位的嘌呤霉素水平。*显著不同于阴性对照p<0.001。显著不同于乳清蛋白p<0.05。◇显著不同于 红景天玫瑰治疗p<0.05。■：显著不同于鹿草治疗p<0.001。

还应注意，附图仅旨在便于优选实施例的描述。附并不说明所描述的实施例的每个 方面并且并不限制本公开的范围。

具体实施方式

本公开提供用于在哺乳动物中(优选地在人类中)药物或保健食品用途以提高蛋白 合成、肌肉质量和/或肌肉力量的新颖组合物的实例实施例。工作实例表明红景天和漏芦 提取物和相关合成组合物的组合可提高蛋白合成、降低蛋白分解(抑制Atrogin-1和肌肉抑制素的表达)、提高肌肉质量和肌肉力量。在各种实施例中，提供包含红景天玫瑰 的提取物和/或鹿草的提取物的组合物。也公开了合成组合物(即，其中一种或多种成分 并非来源于植物提取物的组合物)。

漏芦提取物

漏芦的提取物可来源于任何漏芦种，其包括(但不限于)Rhaponticum acaule(L.)DC.、 Rhaponticum aulieatense Iljin、Rhaponticum australe(Gaudich.)、Rhaponticumberardioides (Batt.)、Rhaponticumcanariense DC.、Rhaponticum carthamoides(Willd.)、 Rhaponticumconiferum(L.)Greuter、Rhaponticumcossonianum(Ball)Greuter、 Rhaponticumcynaroides Less.、Rhaponticumexaltatum(Willk.)Greuter、Rhaponticumfontqueri、Rhaponticoides hajastana(Tzvelev)M.V.Agab.&Greuter、Rhaponticumheleniifolium Godr.&Gren.、Rhaponticoides iconiensis(Hub.-Mor.)M.V.Agab. &Greuter、Rhaponticuminsigne(Boiss.)Wagenitz、Rhaponticumintegrifolium C.Winkl.、 Rhapontikum karatavicum Iljin、Rhaponticumlongifolium(Hoffmanns.&Link)Dittrich、 RhaponticumlyratumC.Winkl.ex Iljin、Rhaponticumnamanganicum Iljin、 Rhaponticumnanum Lipsky、Rhaponticumnitidum Fisch、Rhaponticumpulchrum Fisch.& C.A.Mey.Rhaponticumrepens(L.)Hidalgo、Rhaponticum repensscariosum Lam.、 Rhaponticumrepensserratuloides(Georgi)Bobrov、Rhaponticum repensuniflorum(L.)DC。 在一些实施例中，漏芦的草本提取物由选自菊科、漏芦属并且更具体来说物质鹿草种的 植物制成。

提取物可由漏芦植物的任何(一个或多个)部分制备，然而，根为尤其适用的。漏芦根可用来自以下群组的溶剂提取：乙醇、甲醇、水、于水中的乙醇、乙酸乙酯、丙酮、 己烷，或任何其它常规提取溶剂，优选地于水中的乙醇或水，更优选地10％到90％v/v 的于水中的乙醇，并且甚至更优选地30％到70％(v/v)的于水中的乙醇。在一个实施 例中，提取在于将研磨的漏芦根与溶剂以在1:1到30:1之间的溶剂:植物比率混合，并且 植物可进行单次或可替代地两次提取(或更多次提取)工艺。提取持续时间优选地>1h， 最优选地1.5h。在优选实施例中，漏芦根与于水中的乙醇(50％v/v)以10:1的比率混合 并且进行3次连续提取。在提取之后，可过滤和/或离心合并的混合物，并且上清液浓缩 成30％到70％DM，最优选地50％DM，并且最后干燥成固态形式，具有<10％水分，如 呈粉末形式。除了本文公开的具体工艺之外，本领域的技术人员将认识到制备植物提取 物的多种工艺并且所述多种工艺可用于本公开。

在漏芦中所关注组分为脱皮类固醇，具体地说20-羟基蜕皮激素 ((2β,3β,5β,22R)-2,3,14,20,22,25-六羟基胆甾-7-烯-6-酮)。此化合物可用作用于确定制备 的质量的参考，虽然它可能不是带来效果的唯一化合物，并且化合物的混合物可能使得 提取物比单独20HE更有效(Timofee等人、Voldov等人)。

在一些实施例中，漏芦的提取物包含以提取物的总重量计(w/w)至少0.01％总脱皮类固醇，约0.05％到99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、 40％、30％、20％或10％总脱皮类固醇，更优选地至少约0.1％到10％总脱皮类固醇，最 优选地以提取物的总重量计(w/w)0.4％到5％总脱皮类固醇。

在一些实施例中，漏芦的提取物包含以提取物的总重量计(w/w)至少0.01％20-羟基蜕皮激素(20HE)，约0.05％到99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、 60％、50％、40％、30％、20％或10％20HE，更优选地以提取物的总重量计(w/w)至 少约0.1％到5.0％20HE。

此外，漏芦的提取物还可包含除脱皮甾酮之外的脱皮类固醇，如借助于非限制性实 例，以下脱皮类固醇：水龙骨素B、罗汉松甾酮A、2-脱氧蜕皮甾酮、Integristerone A、Integristerone B、紫杉甾酮、筋骨草甾酮C、α-蜕皮激素、Lesterone、鹿草甾酮D、牛膝 甾酮、鹿草甾酮、20-羟基蜕皮激素2,3；20,22-二丙酮化合物、20-羟基蜕皮激素2,3-单丙 酮化合物；20-羟基蜕皮激素20,22-单丙酮化合物；22-氧代-20-羟基蜕皮激素、24(28)- 脱氢罗汉松甾酮A；(24z)-29-羟基-24(28)-脱氢罗汉松甾酮C；carthamosterone；红苋甾 酮、二氢红苋甾酮；posterone、isovitexirone、leuzeasterone、罗汉松甾酮C、水龙骨素B 20,22-丙酮化合物；鹿草甾酮B、鹿草甾酮C、鹿草甾酮D 20-醋酸酯、24(24')(z)-脱氢苋 菜甾酮B、水龙骨素B-22-苯甲酸酯；carthamosterone A、carthamosterone B；苋菜甾酮 A；carthamoleusterone；24(28)-脱氢苋菜甾酮B、22-脱氧-28-羟基罗汉松甾酮C；3-表-20-羟基蜕皮激素；24-表-罗汉松甾酮A、14-表-松甾酮A22-葡糖苷；5-α-20-羟基蜕皮激素；20-羟基蜕皮激素2-醋酸酯、20-羟基蜕皮激素3-醋酸酯；1β-羟基罗汉松甾酮C；26-羟 基罗汉松甾酮C；15-羟基松甾酮A；牛膝甾酮20,22-丙酮化合物、turkestone。

漏芦的提取物还可包含以下脱皮类固醇：abutasterone25-乙酰氧基-20-羟基蜕皮激素 3-邻-；β；-d-吡喃葡萄糖苷；acetylpinnasterol；牛膝甾酮；ajugacetalsteronea； ajugacetalsterone b；ajugalide e；筋骨草甾酮b；筋骨草甾酮b；筋骨草甾酮c 3；22-二 丙酮化合物；筋骨草甾酮c 22-亚乙基；缩醛；筋骨草甾酮c 22-单丙酮化合物；筋骨草甾酮d；苋菜甾酮a；苋菜甾酮b；asteraster b；atrotosterone a；atrotosterone b；atrotosterone c；blechnoside a；blechnoside b；bombycosterol；bombycoster 3-phosphate；brahuisterone； calonysterone；calvaster a；calvaster b；canescensterone；头花杯苋甾酮；黄果茄甾醇； 栗甾酮；cheilanthone a；cheilanthoneb；coronatasterone；露水草甾酮a；杯苋甾酮；杯 苋甾酮3-醋酸酯；杯苋甾酮22-醋酸酯；杯苋甾酮3-单丙酮化合物；cyathisterone； dacryhainansterone；decumbesterone a；脱氢筋骨草内酯；脱氢筋骨草内酯；脱氢苋菜甾 酮b；脱氢杯苋甾酮2-葡糖苷；3-脱氢蜕皮素；2-脱氢-3-表-20-羟基蜕皮激素；和/或22- 脱氢-12-羟基杯苋甾酮、脱氢-20-羟基蜕皮激素；3-脱氢-20-羟基蜕皮激素；脱氢-242- 羟基罗汉松甾酮c脱氢-12-羟基-29-正杯苋甾酮；脱氢-12-羟基-29-正-森告甾酮；脱氢-12- 羟基-森告甾酮；(28)-脱氢罗汉松甾酮a；2-脱氢坡斯特甾酮；24-脱氢前杯苋甾酮；2- 脱氧栗甾酮；22-脱氧-21-二羟基蜕皮素；22-脱氧-26-二羟基蜕皮素；2-脱氧-26-二羟基 蜕皮素；3-脱氧-1(α)20-二羟基蜕皮素；2-脱氧-20-二羟基蜕皮素2-脱氧-水龙骨素b；2- 脱氧蜕皮素；脱氧蜕皮素；2-脱氧蜕皮素3-醋酸酯；2-脱氧蜕皮素22-醋酸酯；2-脱氧蜕 皮素22-腺苷-单磷酸酯；2-脱氧蜕皮素22-苯甲酸酯；2-脱氧蜕皮素3-4-(1-(β)-d-吡喃葡 萄糖基)-阿魏酸酯；2-脱氧蜕皮素22-(β)-d-葡糖苷；25-脱氧蜕皮素22-邻-(β)-d-吡喃葡萄 糖苷；2-脱氧蜕皮素22-磷酸酯；2-脱氧蜕皮素25-鼠李糖苷；(5(α))-2-脱氧-21-羟基蜕皮 激素；2-脱氧-20-羟基蜕皮激素；22-脱氧-26-羟基蜕皮激素；14-脱氧-20-羟基蜕皮激素； 2-脱氧-21-羟基蜕皮激素；2-脱氧-20-羟基蜕皮激素25-醋酸酯；2-脱氧-20-羟基蜕皮激素 22-醋酸酯；(5(α))-2-脱氧-20-羟基蜕皮激素3-醋酸酯；2-脱氧-20-羟基蜕皮激素3-醋酸酯； 2-脱氧-20-羟基蜕皮激素22-苯甲酸酯；和/或2-脱氧-20-羟基蜕皮激素3-巴豆酸酯。

漏芦的提取物可包含多酚(具体地说没食子酸和聚合物如原花青素B1)。

漏芦的提取物可包含酚醛化合物(具体地说洋蓟酸和绿原酸)。

漏芦的提取物可包含类黄酮，如藤菊黄素、6-羟基堪非醇-7-葡糖苷、槲皮万寿菊苷、 槲皮素、六羟黄酮、木犀草素、堪非醇、异鼠李素、槲皮素-3-甲基醚、槲皮素-5-邻-β-D-半乳糖苷、异鼠李素5-邻-α-L-鼠李糖苷、六羟黄酮-7-邻-β-吡喃葡萄糖苷；芹黄素、ariodictyol、圣草酚-7-β-吡喃葡萄糖苷、hesperin、矢车菊甙、花青苷。

漏芦的提取物可包含木脂素(carthamogenin、carthamoside、络石苷元、络石苷)。

漏芦的提取物可包含丹宁(土耳其鞣酸)。

漏芦的提取物可包含血清素苯丙素。

漏芦的提取物可包含聚乙炔。

漏芦的提取物可包含倍半萜烯内酯。

漏芦的提取物可包含三萜类糖苷(rhaponticosides A到H)。

漏芦的提取物可包含三萜化合物(帕克醇、醋酸帕克酯)。

红景天提取物

本公开还包括红景天的提取物，所述红景天具有约200种的高海拔生长植物，包括红景天红玫瑰和大花红景天(Kelly，《替代医学综述(Altern.Med.Rev.)》6:293-302,(2001)； Ming等人，《植物疗法研究(Phytother.Res.)》19:740-743,(2005))。红景天玫瑰为适应 原，其帮助人体适应并且抗多种物理、化学和环境应力。

用于本公开的组合物的红景天的提取物可由在以下群组中的任何植物制成：红景天 玫瑰、大花红景天、高山红景天、圣地红景天、唐古特红景天、小丛红景天、狭叶红景 天、菱叶红景天、Rhodiola yunannensis。提取物可由红景天植物的任何部分制成，然而， 由根和根茎制成的提取物尤其适用。

红景天种属可含有苯丙素如络赛维((2E)-3-苯基丙-2-烯-1-基6-O-α-L-阿拉伯糖基 -α-D-吡喃葡萄糖苷)、松香((2R,3S,4S,5R,6R)-2-(羟基甲基)-6-[(E)-3-苯基丙-2-烯氧基] 恶烷-3,4,5-三醇)和洛塞琳((2E)-3-苯基-2-丙烯基6-O-.α.-L-阿拉伯呋喃糖基-(9CI)； [(E)-3-苯基-2-丙烯基]6-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷；[(E)-3-苯基-2-丙烯 基]6-O-(α-L-阿拉伯呋喃糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷)。红景天种还可含有苯乙醇衍生物， 如红景天甙(salidroside/rhodioloside)(2-(4-羟基苯基)乙基β-D-吡喃葡萄糖苷)和酪醇 (4-(2-羟基乙基)酚)。红景天种可进一步含有类黄酮(例如rodiolin、rodionin、rodiosin、 acetylrodalgin和麦黄酮)；单萜(例如rosiridol和rosaridin)；三萜(例如胡萝卜甾醇和 β-谷固醇)；酚醛酸(例如绿原酸、羟基肉桂酸和没食子酸)；丹宁、必需氨基酸和矿物 质。活性成分，像对酪醇、红景天甙、络赛维、二苯甲基六氢吡啶(pyridrde)、红景天 素和草质素苷在大部分的红景天种中发现，但是在量方面不同。在红景天玫瑰中一种所 关注的生物活性成分为红景天甙。肉桂醇甙(例如洛塞琳、松香和络赛维的总和)为从 植物识别的另一种生物活性组分。红景天甙和/或肉桂醇甙可用作用于确定制备的质量的 参考。

在一些实施例中，以提取物的总干重计，红景天的提取物包含至少约0.10％到90％、 80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％红景天甙；更优选地至少约1％到4％红景天甙。在一些实施例中，以提取物的总重量计，红景天的提取物包含至少约0.10％ 到约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％络赛维，更优选地至少约 2.0％到5％络赛维。在一些实施例中，以草本提取物的总重量计，红景天的提取物包含 至少约0.10％到90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％肉桂醇甙(例 如洛塞琳、络赛维和松香的总和)，更优选地至少约3％到6％或1％到6％肉桂醇甙。

提取物组合

在一些实施例中，以组合物的总重量计，红景天的提取物占约1％到99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％w/w(例如 约1％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％ 或约99％w/w)，并且以组合物的总重量计，漏芦的提取物占约99％到1％w/w(例如约 1％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％ 或约99％w/w)。

红景天的提取物可占组合物的总重量的约50％到99％w/w的组合物的总重量，并且 漏芦的提取物占组合物的总重量的约1％到50％w/w。红景天的提取物可占组合物的总重量的约1％到50％w/w并且漏芦的提取物占组合物的总重量的约50％到99％w/w。红 景天和漏芦的各种合适的实例比例如下。

红景天的提取物为组合物的总重量的约90％w/w，并且漏芦的提取物为组合物的总 重量的约10％w/w。红景天的提取物占组合物的总重量的约10％w/w，并且漏芦的提取物占组合物的总重量的约90％w/w。红景天的提取物为组合物的总重量的约60％w/w， 并且漏芦的提取物为组合物的总重量的约40％w/w。红景天的提取物占组合物的总重量 的约40％w/w，并且漏芦的提取物占组合物的总重量的约60％w/w。红景天的提取物为 组合物的总重量的约50％w/w，并且漏芦的提取物为组合物的总重量的约50％w/w。在 一些实施例中，漏芦和红景天的质量比可约在60:40和80:20之间。在一个实施例中， 漏芦和红景天的质量比可为约75:25。

在一个实施例中，提供组合物，以提取物组分/组合物的总重量计，所述组合物包含 约50％w/w的红景天玫瑰(根)的提取物和约50％w/w鹿草(根)的提取物。红景天 的提取物含有1％到4％红景天甙、2％到5％络赛维和3％到6％肉桂醇甙，并且漏芦的提 取物含有0.37％20HE和0.78％总蜕皮甾酮。在一些实施例中，组合物可包含约0.1％到 10％蜕皮甾酮或约0.5％到3％蜕皮甾酮。

设想红景天玫瑰和鹿草的草本提取物的任何合适组合的比例将由本文所公开的组合 物涵盖。本文所提供的百分比是指对于组合物的总重量提取物部分的干重的w/w比率。

药物配制物

如本文所述，可选择各种的植物、草本植物或其部分作为用于治疗疾病和促进改善 的肌肉代谢的组合物和方法的一部分。这类物质的提取物可以各种合适的方式制备。在一个实施例中，植物、草本植物或其部分的提取物可经由水和/或醇或这两者并且随后干燥成细粉末获得。在另一实施例中，提取可经由超临界CO₂提取执行。

本公开的组合物可为例如包含以如本文所公开的任何比例的至少两种提取物(提取 物中的一种或多种)呈固体、液体或气溶胶形式的配制物。本公开的组合物可进一步包含其它组分，例如(但不限于)以最终产物的0.1％到99％、98％、97％、96％、95％、 90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％w/w的量添加到配制物的维生 素、药物或赋形剂，并且因此提取物的比率可因而变化。这类组合物可以各种配方制造， 其向哺乳动物投予以促进肌肉生长和肌肉力量。

在一个实施例中，本发明组合物包含于胶囊中。适合于口服投予的胶囊包括由明胶 制成的推入配合胶囊(push-fit capsule)以及由明胶和如丙三醇或山梨醇的塑化剂制成 的软密封胶囊。推入配合胶囊可含有活性成分与如乳糖的填充剂、如淀粉的粘合剂和/或如滑石或硬脂酸镁的润滑剂以及任选的稳定剂的混杂物。

用于投予的液体可为溶液或悬浮液。在一个实例中，本发明的组合物提供为干燥粉 末。受试者将粉末溶解或悬浮在选定的饮料(例如水、软饮料、果汁等)中并且随后食 用所述饮料。可替代地，本发明组合物以液体形式提供。在片剂、模制物质或胶囊情况 下，剂型应可适应于不均匀剂量。具有不同剂量水平的单位可预包装，例如在泡壳包装 中，并且标识摄入的时间。时间间隔{1]可为BID、ID、QID或更频繁[2}。在胶囊的情 况下，一种或多种延迟作用颗粒可包括有长效珠粒。毫无疑问，存在调配的其它替代方 式。作为一个实例，长效微粒和合适量的具有更多延迟作用微粒的一种或多种量的粒子 可混合并且封装。矩阵衬底可用于形成2、3或4多层片剂或压制包衣片剂。压制包衣 片剂可具有延迟作用芯。可使用不同调配的多层和压制包衣片剂，其可包括包装成指定 使用时间的包衣和未包衣片剂。长效和延迟作用微粒可同样地悬浮于肠胃外的流体中以 提供不均匀剂量。

在一些实施例中，可制备提取物(如干燥和粉末化的这类选择的物质)。在另外的实施例中，提取物可在干燥之前浓缩，其可为期望降低提取物的体积。这类浓缩可降低 提取物的体积同时保持天然植物、草本植物或其部分的全谱特征和标记化合物的水平。

在另外的实施例中，可使用低温水处理技术。这类工艺可为期望的，因为它可捕获大部分的支持组分，像多糖、类黄酮、萜类和有价值的挥发物、油和树脂(其中的一部 分通常仅由醇或己烷捕获，其中两者留下不需要的痕量)。提取的植物材料随后可浓缩， 并且浓缩的液体可使用例如产生细粉末的超高速喷雾干燥器等干燥。在一些实施例中， 待干燥成粉末的草本提取物的浓缩可降低草本粉末的体积而基本上不改变植物的组成 部分的组合物。这类方法可期望降低不需要的化学痕量，其可引入到草本材料中，并且 因此可获得更纯、全谱草本粉末。举例来说，可获得从10比1到20比1的浓缩比率， 这可显著降低材料的体积并且提供在胶囊中的方便的剂量。

“药学上可接受的载剂”是可添加到活性成分以帮助调配制备或使所述制备稳定并且不对患者造成显著的有害毒理学影响的物质。这类载剂的实例为本领域的技术人员众所周知的，并且包括水、糖(如麦芽糖或蔗糖)、白蛋白、盐(如氯化钠)等。其它 载剂例如在E.W.Martin的《雷明顿的药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》 中描述，其以引用的方式并入本文中。这类组合物将含有治疗有效量的红景天和漏芦提 取物。

药学上可接受的载剂包括无菌水溶液或分散液以及用于即用制备无菌可注射溶液 或分散液的无菌粉末。用于药学上活性物质的这类介质和试剂的使用是本领域中已知的。组合物优选地调配用于口服摄入。组合物可调配为溶液、微乳液、脂质体或适合于 高药物浓度的其它有序结构。载剂可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二 醇以及液体聚乙二醇等)以及其合适的混合物的溶剂或分散介质。在一些情况下，在组 合物中将包括等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠。

如本文所用，如本文所用的“载剂”可包括药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂，其对暴露于所采用剂量和浓度的所述载剂的细胞或哺乳动物无毒。生理学上可接受的载体常常是水性pH缓冲溶液。生理学上可接受的载剂的实例包括缓冲液，如磷酸盐、柠 檬酸盐和其它有机酸；包括抗坏血酸的抗氧化剂；低分子量(小于约10个残基)多肽； 蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸 如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；包括葡萄糖、甘露糖或糊精的单糖、 二糖和其它碳水化合物；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露醇或山梨糖醇；形成抗衡离子的 盐，如钠；和/或非离子表面活性剂如TWEEN、聚乙二醇(PEG)和普洛尼克(PLURONIC)。

药学上可接受的载剂还包括天然和非天然载剂，如麦芽糊精、阿拉伯胶(E414)、二氧化硅(E551)、木薯淀粉糊精、糊精、阿拉伯胶等。

本发明还包括具有相同比例的相同活性成分的合成配制物，如上文所列出。这些成 分可纯化或合成并且包括在组合物和配制物中，而不包括通常存在于提取物中的任何其 它天然存在的植物材料。

使用方法

红景天提取物可用于提高蛋白合成并且降低在骨骼肌细胞中肌肉抑制素和/或atrogin基因表达。漏芦提取物可用于提高蛋白合成、提高Akt路径成员的磷酸化、提高S6K1磷酸化和/或降低在骨骼肌细胞中肌肉抑制素和/或atrogin基因表达。

在另一实施例中，红景天和漏芦提取物的组合可以与当每个单独投予时相比增强其 功能的量投予。

在又一方面，提供用于改善哺乳动物的肌肉质量和肌肉力量的方法，其包含向哺乳 动物投予有效量的本文所述的组合物。哺乳动物优选地为人类，更优选地为运动员。在本公开的另一方面，提供用于促进哺乳动物的好氧和厌氧运动/物理性能的方法，其包含向哺乳动物投予有效量的本文所公开的组合物。在又一方面，提供用于治疗与哺乳动物 的肌肉萎缩相关联或其特征在于哺乳动物的肌肉萎缩的病况的方法，其包含向哺乳动物 投予有效量的本文所述的组合物。

在一些实施例中，组合物以约1毫克/天到5000毫克/天，优选地约30毫克/天到1000 毫克/天，更优选地约50毫克/天到1000毫克/天，并且甚至更优选地约100毫克/天到600毫克/天或200毫克/天到500毫克/天的日剂量经口向哺乳动物(优选地人类)投予。 可提供约0.5毫克/天的较低剂量或比5000毫克/天高的剂量。在一些实施例中，提供10 毫克每剂量、50毫克每剂量、100毫克每剂量、200毫克每剂量、300毫克每剂量、400 毫克每剂量、500毫克每剂量、600毫克每剂量、700毫克每剂量、800毫克每剂量或更 多毫克每剂量的多种日剂量。

给药间隔通常为QD(一天一次)、BID(一天两次)、TID(一天三次)、QID(一天 四次)或更频繁，其包括每天5次、6次、7次、8次、9次、10次或更多剂量。投予的 时间可基于半衰期、所采用的剂型的配制物、系统反应性、便利性、是否自行投予或按 方案投予和物质是否为治疗、营养、甾族或抗感染的。

除非组合物控制释放，或具有允许QD投予的长半衰期，否则在剂量的摄入之间的时间间隔可不均匀。举例来说，如果在日出时和当日落时摄入物质，那么时间间隔很可 能为16小时和8小时。如果在日出、中午时和当日落时服用，那么时间间隔可为5小 时、11小时和8小时。如果在清醒小时数期间均匀隔开服用，那么时间间隔可为5.33 小时、5.33小时、5.33小时和8小时。在这类情况下，合理给药应为不均匀的以与不均 匀时间间隔一致。

类药剂营养品和某些药物以及类固醇、抗生素和相似的物质可饱腹服用。这类日间 时间间隔可不均匀并且在最后一个日间剂量和下一个早晨剂量之间的时间不同。

对于疾病的预防或治疗或促进改善的身体功能，活性剂的适当剂量将取决于如上定 义的待治疗的疾病的类型或定为目标的功能、疾病的严重程度和疗程、试剂是否出于预防或治疗目的投予、先前治疗、受试者的临床病史和对试剂响应以及护理医生的判断。 试剂适当地一次或经一系列治疗向受试者投予。组合物的剂量和期望的药物浓度可根据 设想的具体用途而变化。确定适当剂量或投予途径完全在普通技术人员的能力范围内。 动物实验为确定用于人类治疗的有效剂量提供可靠指导。因此，根据本公开，“有效量” 的任何具体组合物或配制物将基于具体环境而变化，并且在施用的每种情况下适当有效 量可由本领域普通技术人员仅使用常规实验来确定，以便实现期望的效果。

如本文所用，如本文所用的术语“治疗(treating、treatment、therapy)”等是指治愈性治疗、防治性治疗和预防性治疗，包括健康受试者的治疗。“预防性治疗”的实例 为预防或减轻目标病理病况或病症。需要治疗的那些包括已经患有病症的那些以及倾向 于患有该病症的那些或要预防该病症的那些。“持续”投予是指以与急性模式相反的连 续模式投予(一种或多种)试剂，以便将初始治疗效果(活性)维持延长的一段时间。 “间歇”投予为不连续进行而不中断但是相反地在本质上为循环的治疗。与一种或多种 另外的治疗剂“组合”投予包括同步(同时)和以任何顺序连续投予。在一些实施例中， 本文所公开的组合物和方法可用于治疗与肌肉萎缩相关联或其特征在于肌肉萎缩的病 况，其包括少肌症、少肌型肥胖症、癌症、多发性硬化症、肌肉萎缩症、需要固定(例 如夹板或石膏模)的骨折、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、外周神经病变、中风或恶病质 等。这类病况可为特发性、次于诊断的病况等。

如本文所用，“治疗有效量”为赋予受试者治疗效益必需的活性剂(例如包含红景天和漏芦提取物的组合物)的最小量。举例来说，对于罹患或倾向于罹患或防止罹患的 受试者的“治疗有效量”为诱导、改善或以其它方式引起与上述病症相关联的病理症 状、疾病进展、生理状况或抵抗死于上述病症的改善。

包括以下实例以展现优选的实施例。本领域的技术人员应了解，在以下实例中公开 的技术表示发现很好地起作用的技术，并且因此可被认为构成用于其实践的优选的模式。然而，本领域的技术人员根据本公开应了解，在不脱离实施例的精神和范围的情况 下，可对所公开的具体实施例作出许多改变且仍获得相同或类似结果。

提取物制备

提取物可使用有机溶剂提取工艺制备。举例来说，鹿草根可被研磨(例如成4mm 筛网的尺寸)并且研磨的材料与包括(但不限于)100％水、于水中的1％到99％乙醇(v/v)、 于水中的1％到99％甲醇(v/v)、乙酸乙酯、丙酮、己烷或通常用于提取的任何其它有 机溶剂(例如EtOH 50％)的溶剂在反应器或具有提取功能的任何容器中混合。溶剂:植 物的合适的比率在约1:1到30:1之间，更优选地在5:1和15:1之间(例如10:1(v/w))。 举例来说，在具有搅动但可借助于浸软的回流下、在存在或不存在回流的情况下、在存 在或不存在搅动情况下和在存在或不存在施用的压力情况下，提取原料。提取温度将通 常取决于所使用的溶剂。提取时间优选至少比1h(例如1h 30)。

在提取时间之后，混合物可过滤或离心以便分离固相(饼)的液体。在过滤步骤中，可使用25微米的过滤器。

提取步骤可重复更多次以实现多于一次覆盖(例如重复2次以实现总共3次覆盖)并且合并滤液。丢弃固相。

合并的滤液可在真空(例如0.8Pa)下浓缩成在30％和70％DM之间(优选地50％DM)。可使用任何类型的溶剂蒸发系统。所得提取过去被称作“天然提取物”。

天然提取物随后干燥成约90％到99％(例如97％)的％DM含量，但是可干燥成更低％DM。此步骤可在存在或不存在载剂的情况下通过包括但不限于雾化、空气干燥、 烘箱干燥、晒干等任何干燥工艺进行。

实例1：用乙醇50％(v/v)的漏芦提取(F0)。

以下提取工艺的示意图型式在图29a中示出。称量漏芦原始草本植物(根，65kg干基)并且研磨成粗粉末。将粉末放入提取室/反应器中，并且将700L的于水中的50％乙 醇(v/v，50％醇)添加到原料，其粗略估计比率为10:1(v/w))。混合物于80℃到90℃ 的温度下在具有搅动的回流下加热1.5小时。在1.5小时之后，过滤液体并且放置在旁 边。回收残余物(固相)并且重复提取步骤两次更多次(以实现总共三次覆盖)。

在真空(0.8Pa)下浓缩成30％到60％DM(例如39％DM)之前合并滤液。获得 总共25kg的浓缩膏(被称作“F0-天然提取物”)并且分析生物活性成分。

在此过程中，乙醇可从滤液中重新收集并且在提取步骤中再使用，确保溶剂始终处 于50％醇。

浓缩提取膏然后通过雾化干燥以得到干燥粉末(小于10％水分)(F0-EtOH 50％干燥 粉末)。获得干燥粉末样品并且用于生物活性成分分析、微生物分析、重金属分析、农 药分析和营养分析。

实例2：离心和过滤步骤(如在图29a中所描绘的F0)

根据实例1制备的12kg的漏芦天然提取物(39％DM)用水稀释成10％DM，然后 离心。产量为大致10％DM的43kg的稀释的天然提取物(F0-天然稀释和离心)。

对42kg的此稀释天然提取物(10％DM)在5kDa下然后在1kDa下执行超过滤(UF) 以获得3种洗脱份：>5kDa，1kDa到5kDa和<1kDa。在真空下或雾化干燥洗脱份(产 量分别为1.55kg、0.90kg和1.15kg)(F0-天然UF)。发送样品用于生物活性分析。

实例3：纯化步骤(如在图29a中所描绘的F5')

根据实例2(F0-天然稀释和离心)制备的1kg的漏芦稀释天然提取物(大致10％DM)在吸附树脂柱D-101(树脂体积1L)上纯化。浓缩洗出液，并且干燥以得到细粉末((获 得的14.5g的纯化的提取物粉末)(F5'-纯化的EtOH 50％提取物)。

实例4：用乙醇70％(v/v)的漏芦提取工艺(F5和F7)

研磨成粗粉末的已知量的漏芦根与水以10:1(v/w)的溶剂:植物比率混合并且在没 有回流的情况下在80℃下提取2h。进行单次提取。丢弃固相并且回收液相并过滤成25 μm。

滤液的一部分使用Rota蒸发器浓缩以去除大部分的溶剂并且最后在真空下干燥成 <10％水分。提取物为粉末(F7:EtOH 70％提取物)。

如在实例3中描述，滤液的另一部分在吸附树脂柱上纯化，浓缩并且在真空下干燥成<10％水分。提取物为粉末(F5-纯化的EtOH 70％提取物)。

实例5：用水的漏芦提取工艺(F1和F3)

重复如在实例4中相同的程序，不同之处在于使用水而不是EtOH 70％：

研磨成粗粉末的已知量的漏芦根与水以10:1(v/w)的溶剂:植物比率混合并且在没 有回流的情况下在80℃下提取2h。进行单次提取。丢弃固相并且回收液相并过滤成25 μm。

滤液的一部分使用Rota蒸发器浓缩以去除大部分的水并且最后在真空下干燥成<10％水分。提取物为粉末(F1：水性提取物)。

如在实例3中描述，滤液的另一部分在吸附树脂柱上纯化，浓缩并且在真空下干燥成<10％水分。提取物为粉末。(F3-纯化的水性提取物)。

实例6：用丙酮的漏芦提取工艺(F2和F4)

重复如在实例4中相同的程序，不同之处在于使用丙酮而不是EtOH 70％：

研磨成粗粉末的已知量的漏芦根与丙酮以10:1(v/w)的溶剂:植物比率混合并且在 没有回流的情况下在80℃下提取2h。进行单次提取。丢弃固相并且回收液相并过滤成25μm。

滤液的一部分使用Rota蒸发器浓缩以去除大部分的溶剂并且最后在真空下干燥成 <10％水分。提取物为粉末。(F2:丙酮提取物)。

滤液的另一部分在吸附树脂柱上纯化，浓缩并且在真空下干燥成<10％水分。提取物 为粉末。(F4-纯化的丙酮提取物)。

实例7：红景天玫瑰草本提取物制备

干燥的红景天玫瑰材料使用水性醇提取。举例来说，在一些制备中，50％或70％乙醇的水性乙醇为优选的。然后过滤获得的提取物并且浓缩上清液。将过滤的提取物离心 并且通过柱纯化澄清的上清液。乙醇用于洗脱柱。然后浓缩获得的乙醇洗脱物。一些制 备包括任选的干燥步骤。

实例8红景天玫瑰草本提取物中的红景天甙和总肉桂醇甙剂量

使用HPLC方法测定红景天玫瑰根提取物中各种化合物(包括红景天甙和总肉桂醇甙(洛塞琳、络赛维和松香))的量，所述HPLC方法由M.Ganzera等人开发，“通过 反相高效液相色谱分析红景天玫瑰(金黄根)的标记化合物(Analysis of the marker compounds ofRhodiola rosea L.(Golden root)by reversed phase high performance liquidchromatography)”《化学与药学通报(Chem.Pharm.Bull.)》49(4)465-467(2001)。简 单来说，目标化合物的定量在配备有UV检测器的HPLC Agilent 1100HPLC系统上执行。 化合物的分离是在设定于45℃的ACE C18HPLC柱(250mm×4.6mm，5μm)上进行。 流动相由乙腈(洗脱液A)和pH 7的磷酸盐缓冲液(洗脱液B)组成。梯度如下：11％ 等度A(10min)，11％到30％A(20min)，30％到80％A(5min)，80％等度A(10min)， 80％到11％A(5min)。总运行时间为50min。注射体积为5μL，并且流动速率为1 mL/min。在225nm执行UV监测用于检测红景天甙并且在250nm执行UV监测用于检 测肉桂醇甙。通过比较样品的峰面积与已知浓度的参考化合物的峰面积来定量目标化合 物的量。

表1：红景天玫瑰根提取物中的红景天甙和总肉桂醇甙(洛塞琳、络赛维和松香)。

实例9：在不同漏芦根提取物中的20HE分析

使用配备有UV-Vis检测器的Agilent 1100HPLC系统测定在如在实例1到6中制备的不同漏芦提取物中β-蜕皮激素(20HE)的量。在其中柱温度设定为35℃的Zorbax EclipsePlus C18HPLC柱(2.1mm×50mm-1.8微米)上进行化合物分离。流动相由甲醇 (洗脱液A)和于水中的0.1％甲酸(洗脱液B)组成。流动速率为0.4mL/min。梯度为 线性的，其中在15min中具有10％到100％A匀变。注射体积为2μL。在250nm处， bw 8nm执行UV监测。通过比较样品的峰面积与已知浓度的参考化合物的峰面积来定 量目标化合物的量。

表2：在存在或不存在后续在柱上纯化的情况下，在用乙醇(50％)、乙醇(70％)、水或丙酮提取的鹿草的不同洗脱份中20-羟基蜕皮激素(20-HE)的浓度。

*值基于在分析时的样品并非基于干燥的样品表达

实例10：乙醇漏芦根提取物的脱皮类固醇分析

通过如实例1中所描述用于水中的50％(v/v)乙醇提取获得鹿草根的干燥提取物(F0-EtOH 50％干燥粉末)。使用配备有光电二极管阵列检测器的HPLC系统执行脱皮类 固醇的识别。在设定为40℃的Atlantis C18HPLC柱(150mm×3mm-3μm)上进行分 离。流动相由具有0.1％乙酸的甲醇(v/v，洗脱液A)和于水中的0.1％(v/v)乙酸(洗 脱液B)组成。流动速率为0.6mL/min。梯度程序如下：20％等度A(5min)，20％到 40％A(25min)，40％到70％A(15min)，70％到85％A(15min)。总运行时间为60min。 在242nm下执行监测。

表3：在干燥成粉末形式(水分<10％)的鹿草根的乙醇(50％v/v)提取物中识别 的脱皮类固醇

滞留时间	化学式	化合物	％
				20.2	C27H42O7		0.005％
20.8	C27H44O9	Integristerone B	Nq
				24.9	C27H42O7	Isovitexirone	0.007％
30.5	C27H44O8		Nq
				30.7	C27H44O7	20-羟基蜕皮激素	0.395％
31.1	C29H42O8		Nq
				32.1	C27H44O7		0.006％
33.7	C27H42O7	22-氧代-20-羟基蜕皮激素	0.012％
				35.3	C27H44O7		0.013％
35.6	C28H44O6		Nq
				35.7	C28H46O7	罗汉松甾酮A	0.003％
36	C28H44O7	24(28)-脱氢罗汉松甾酮A	0.004％
				37.3	C27H44O7		0.158％
38.3	C29H44O6		0.144％
				38.6	C29H46O8		Nq
39.8	C27H44O6	α-蜕皮激素	0.006％
				40.4	C29H48O7		0.030％
41.2	C27H44O7		Nq
				44.5	C29H44O6		0.005％

Nq：不可定量。总蜕皮甾酮(作为20-羟基蜕皮激素)＝0.788％。

在漏芦根提取物中识别总共19种脱皮类固醇。一些仅可通过其化学结构识别。

实例11：乙醇漏芦根提取物(不包括脱皮类固醇)的乙醇提取物的植物化学成分和物理化学分析

通过如实例1中所描述用于水中50％(v/v)乙醇提取获得鹿草根的干燥提取物(F0-EtOH 50％干燥粉末)并且分析除脱皮类固醇之外的植物化合物和物理分析。在组合物中识别的总酚醛树脂、总有机酸和总游离碳水化合物的曲线描绘于图1a、图1b和图 2中。

表4：干燥成粉末形式的鹿草根的乙醇(50％v/v)提取物的物理分析(分光光度 法和重量测定法)。

总灰分、纤维、蛋白、水和HPLC/GC结果提供70.6％的识别的提取物，发现如乙 炔噻吩和固醇的化合物呈低量(识别但不定量)。

使用漏芦和红景天提取物的方法

以下实例评估单独和组合的漏芦提取物和红景天提取物对蛋白合成和代谢信号路 径的影响。

实例12：对不同制备的鹿草提取物的苏氨酸389的S6K1的磷酸化和苏氨酸308的Akt的磷酸化(如在图29a中所描绘的步骤1)

研究被设计成评估在Akt的水平下漏芦提取物刺激蛋白合成和代谢路径的能力。由 通过对Thr³⁰⁸和Ser⁴⁷³的磷酸化的多种刺激来激活丝氨酸/苏氨酸激酶Akt(蛋白激酶B)。一旦磷酸化的Akt迁移到细胞核，那么在细胞核中它就参与如葡萄糖传输、蛋白合成或 脂质和甘油三脂贮存的多种细胞过程。

还评估漏芦提取物以S6激酶1的水平刺激蛋白合成的能力。sp70S6激酶为响应于细胞介素激活的普遍存在的细胞质蛋白。它处于mTOR/PI3K路径的下游并且使包括苏 氨酸389的多种残基磷酸化。然而，Thr389的磷酸化与体内p70激酶活性最紧密相关。 一旦激活，p70S6激酶使在引起蛋白合成过程的40S核糖体蛋白(rpS6)上的S6蛋白 磷酸化。

C2C12细胞初始由Yaffe和Saxel(1977)通过由在压扁损伤之后70h C3H小鼠的 大腿肌肉培养的成肌细胞的选择性连续继代(Yaffe D，1977)获得。这些细胞示出能够 分化。C2C12细胞为研究肌原性细胞分化成骨骼肌细胞(例如肌球蛋白磷酸化机理)和 表达肌肉蛋白和雄激素受体的适用模型。

制备五种不同制备的漏芦提取物：50％乙醇提取物、70％乙醇提取物、100％水提取 物以及在柱上(除50％EtOH以外)纯化的提取物，如本公开的实例1到5中所描述。

表5：漏芦制备

制备测试每种制备的漏芦提取物的浓度以便具有0.1μM、1μM和10μM的羟基- 蜕皮激素的最终浓度。基于在每种提取物中测量的羟基-蜕皮激素的浓度，每次制备漏芦 所用的浓度如下：

表6

在研究开始时，未确定对于F0提取物的羟基-蜕皮激素的％的值，并且测试的最终浓度是基于在F7提取物中的羟基-蜕皮激素浓度。然而，过高估计在F0中的此蜕皮激素 的浓度。这是对于F0提取物测试的羟基-蜕皮激素的最终浓度不同于其它洗脱份的原因。

收获生长细胞并且在6个孔板中以170 000个细胞/孔的密度接种。细胞在37℃下在 5％CO₂中生长48h。在细胞达到80％汇合之后，培养基被分化培养基(DMEM+2％FBS) 置换。在5天之后，成肌细胞融合成多核细胞肌管。在开始实验之前1h，细胞在Krebs 培养基中培育以使细胞的氨基酸缺乏。

用在存在正常(0.8mM)或低(0.08mM)浓度的氨基酸和具有DMSO 0.002％的情 况下以3种浓度的五种制备的漏芦植物提取物处理细胞2h。

在实验结束时，细胞在细胞裂解物缓冲液(100μL/孔)中裂解并且离心以分离在上清液中的可溶蛋白。使用衍生自劳里法(LOWRY method)的比色检验来定量来自此细 胞检验的蛋白。因此，将在100μL裂解缓冲液中的50μg的总蛋白转移到涂覆有pS6K1 或pAkt抗体的微孔条并且在37℃下培育2h。在若干次洗涤之后，添加检测抗体并且在 37℃下培育1h。再次处理若干次洗涤并且添加HRP-连接的二级抗体。在37℃下培育 30min结束时，添加TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)底物，并且在阳性孔中出现蓝色。 为了避免信号饱和，添加停止溶液，这诱导黄色。黄色的强度在450nm处在分光光度 计上可读，并且与检测的pS6K1或Akt量成正比。

以n＝5或n＝6测试每种条件。IGF1 100ng/ml用作阳性对照。

磷酸化的Akt的结果以在2h培育之后每μg的蛋白的吸光度(Abs/μg蛋白)和未 治疗的对照病况(100％)的％表达。

磷酸化的T389S6kinase1的结果以在2h培育之后每μg的蛋白的吸光度(Abs/μg 蛋白)和未治疗的对照病况(100％)的％表达。

所有结果以未治疗的对照的％表达。对于重复测量通过ANOVA随后Dunnett t检验(如果通过U-Mann-Whitney检验比较未治疗的控制对IGF1或植物提取物，ANOVA显 示相当大的差的话)来评估在获得的值之间的差；对未治疗的对照，*p<0.05，**p<0.01， ***p<0.001。

所有结果给出为平均±SEM。对于所有评估的参数，使用Kruskall-Wallis非参数检 验随后Dunn's后检验(GraphPad)执行统计分析。使用Mann Whitney检验执行在两种条件之间的比较。0.05的p值被认为具有显著性。

胰岛素(像成长因子-1(IGF-1))通过激活磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/Akt/哺乳动物雷帕霉素靶(mTOR)路径，建立为可诱导骨骼肌生长的合成代谢因子。S6K1和Akt 两者的磷酸化的刺激已由Miyazaki等人(Miyazaki M，2010)报道。因此，选择IGF-1 为实验的阳性对照。在存在正常的浓度的氨基酸的情况下S6K1的基础磷酸化比在存在 低氨基酸浓度的情况下(0.8mM对0.08mM)高四倍。

在存在低浓度的氨基酸的情况下，除F7之外的所有测试洗脱份在所有测试剂量下提高S6K1磷酸化(参见图3a、图3b、图4a、图4b、图5a、图5b、图6a、图6b、图 7a和图7b)。在测试剂量下影响不为剂量依赖性的。

在存在正常浓度的氨基酸的情况下，除F3之外最低剂量的每个洗脱份和中间浓度的F0、F3和F5刺激S6K1磷酸化(参见图3a、图3b、图4a、图4b、图5a、图5b、图 6a、图6b、图7a和图7b)。观察到的影响低于在IGF-1的情况下观察到的那些并且仅对 于F0、F1和F3洗脱份相当大(最低或中间剂量)。必须注意，在测试的中间和高浓度 的F7提取物的部分溶解性的条件下，报道S6K1磷酸化的下降。图3a、图3b、图4a、 图4b、图5a、图5b、图6a、图6b、图7a和图7b：测定在与在三种浓度下5种不同制 备的漏芦提取物一起培育之后对在C2C12肌管中的苏氨酸389的S6K1磷酸化。

在存在分化的C2C12肌管的情况下，在三种浓度下五种不同制备的漏芦提取物培育 2h。在培育结束时，细胞裂解，定量总可溶蛋白，并且测量对残余苏氨酸389的S6K1 磷酸化的水平并将其归一化的到β-肌动蛋白。平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001 对对照值。

此前报道IGF-1刺激Akt磷酸化并且在此上下文中在检验中选择作为阳性参考(Miyazaki M，2010)。在培育IGF-1(100ng/mL，2h)之后，通过因子1.6激活Akt磷 酸化。对于Akt磷酸化，类似结果此前由Latres或Miyazaki(Latres E，2005)(Miyazaki M，2010)公布。

在存在低或正常氨基酸浓度的情况下，对于除与低氨基酸浓度一起培育的洗脱份F0 和与正常氨基酸浓度一起培育的F3以外的所有在最低剂量下的不同测试洗脱份，观察到Akt磷酸化的不显著刺激，其中在中间剂量下观察到不显著提高。

注意，与低氨基酸条件相比，在存在正常氨基酸条件的情况下的Akt磷酸化的基础水平高两倍。最后，在F1(高浓度)或F7(中间和高浓度)提取物的部分溶解性的情 况下，无论使用任何浓度的氨基酸，记录Akt磷酸化的下降。

图8a、图8b、图9a、图9b、图10a、图10b、图11a、图11b、图12a、图12b：测 定在与在三种浓度下5种不同制备的漏芦提取物一起培育之后对在C2C12肌管中的苏氨 酸308的Akt磷酸化。

在存在分化的C2C12肌管的情况下，在三种浓度下的五种不同制备的漏芦提取物培 育2h。在培育结束时，细胞裂解，定量总可溶蛋白，并且测量对残余苏氨酸308的Akt 磷酸化的水平并将其归一化的到β-肌动蛋白。平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001 对对照值。

实例13：5种不同制备的鹿草提取物对在C2C12肌管中的蛋白合成(氚化亮氨酸 掺入)的影响(如在图29a中所描绘的步骤1)。

研究被设计成通过测量氚化亮氨酸的掺入来评估植物提取物刺激蛋白合成的能力。 如在实例12中制备C2C12细胞和五种不同制备的漏芦提取物。

对于蛋白合成检验，收获生长细胞并且在24孔板中以30 000个细胞/孔的密度接种。 细胞在37℃下在5％CO₂中生长48h。在细胞达到80％汇合之后，培养基被分化培养基(DMEM+2％FBS)置换。在5天之后，成肌细胞融合成多核细胞肌管。通过测量氚化 氨基酸亮氨酸的掺入来测定蛋白合成。简单来说，在亮氨酸攻击之前1h，细胞在无氨 基酸培养基中培育。然后在存在以下的情况下将细胞培育2h30：放射性标记亮氨酸5 μCi/mL和IGF1100ng/mL或在存在的正常(0.8mM)或低(0.08mM)浓度的氨基酸 和具有DMSO 0.002％的情况下的植物提取物

所有结果以未治疗的对照的％表达。对于重复测量通过ANOVA随后Dunnett t检验(如果通过U-Mann-Whitney检验比较未治疗的控制对IGF1或植物提取物，ANOVA显 示相当大的差的话)来评估在获得的值之间的差；对未治疗的对照，*p<0.05，**p<0.01， ***p<0.001。

所有结果给出为平均±SEM。对于所有评估的参数，使用Kruskall-Wallis非参数检 验随后Dunn's后检验(GraphPad)执行统计分析。使用Mann Whitney检验执行在两种条件之间的比较。0.05的p值被认为具有显著性。

在存在低(+45％，p<0,001)或正常浓度(+21％，p<0.001)的氨基酸的情况下，IGF1诱导蛋白合成。证实检验，因为IGF-1对蛋白合成的数据类似于在文献中报道的数据， 所述文献描述在存在具有低或正常浓度的氨基酸的IGF1的情况下蛋白合成的20％到 50％的提高(Kazi AA，2010)(Broussard SR，2004)。注意，放射性的掺入在存在低氨 基酸浓度的情况下较高，表明在放射性亮氨酸和冷亮氨酸之间的竞争比在存在正常浓度 的氨基酸的情况下弱，正如所预期的。

在不同制备的鹿草中，洗脱份F0(天然EtOH 50％)、F5(纯化的EtOh 70％提取物)和F7(EtOH 70％提取物)能够显著刺激蛋白合成。此刺激与参考的检验等效或比检验 的参考更强：IGF1(IGF-1 100ng/mL+21％p<0.001对F0 10μg/mL+43％p<0.001或F5 300 μg/mL+23％p<0.01或F7 10μg/mL+29％p<0.001)。洗脱份F5以剂量依赖性方式刺激蛋 白合成，并且显著影响来自对应于1μM的20HE浓度的30μg/mL。此外，F0和F7洗 脱份以最低剂量最好地呈现影响(分别等效于0.04μM和0.1μM的20HE)。通过洗脱 份F0 10μg/mL诱导的蛋白合成的刺激比在IGF-1的情况下观察到的显著更高。

在存在低氨基酸的情况下，洗脱份F1(水性提取物)和F3具有非常微小、不显著 影响，这对于在高浓度的氨基酸下的F3也为真。

图13a、图13b、图14a、图14b、图15a、图15b、图16a、图16b、图17a、图17b： 测定在与在三种浓度下5种不同制备的漏芦提取物一起培育之后在C2C12肌管中的蛋白 合成。

在存在分化的C2C12肌管和氚化亮氨酸(5μCi)的情况下，将在三种浓度下五种不同制备的漏芦提取物培育2h30。在培育结束时，细胞裂解，定量总可溶蛋白，并且对并 入细胞中的氚化亮氨酸的含量进行计数。平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001 对对照值。

在这些实验的总结中，在存在正常浓度的氨基酸的情况下，F0、F5和F7洗脱份显著刺激蛋白合成。此刺激与参考的检验类似或比参考的检验更强，IGF-1(IGF-1 100ng/mL，+20％，p<0.001对F0 10μg/mL，+43％，p<0.001或F5 300μg/mL，+23％， p<0.01或F7 10μg/mL，+29％，p<0.001)。这些洗脱份还以测试的低剂量刺激信号传导 路径(Akt和S6K1磷酸化)。对于F1 1300μg/mL和F7 1000μg/mL，在所有检验中溶解 性障碍。

另一方面，F1和F3洗脱份不刺激蛋白合成。然而，在这些洗脱份的情况下，观察 到Akt和S6K1磷酸化的刺激。

总之，F0洗脱份和就较轻微程度来说F7洗脱份，两者在最低浓度下(等效于0.04μM到0.1μM 20HE)，提高与蛋白合成的显著提高相关的Akt和S6K1磷酸化。

实例14：一种选择制备的具有红景天的鹿草提取物对在C2C12肌管中蛋白合成(氚化亮氨酸掺入)的影响(如在图29a中所描绘的步骤2a和步骤b)。

在我们的实验条件下，在存在正常氨基酸浓度的情况下用最低剂量的F0洗脱份获得最好的结果，其示出蛋白合成的刺激和信号传导的激活(S6K1和akt磷酸化的诱导) (参见实例13)。因此，选择此洗脱份以在与来源于含有红景天甙作为活性组分的红景天 种的另一种植物提取物制备的共培育实验中测试。

使用的红景天提取物含有：

表7：

编号	提取物	红景天甙的％	络赛维的％	观察结果
					1	红景天	2.88％	3.49％	褐色粉末

在研究的第一部分中，记录其中F0洗脱份在最低剂量下对于漏芦植物提取物最好的影响，在与红景天提取物的剂量响应分析并行的蛋白合成上执行在0.1-1-10μg/mL下 的新剂量响应评估。选择的红景天的浓度为：对应于1-10-40μM的最终红景天甙浓度的 10-104-417μg/mL。

表8：

表9：

对于此研究，如实例12中所描述，获得C2C12细胞。如实例13中所描述，执行蛋 白合成检验，不同之处在于在存在正常(0.8mM)浓度的氨基酸和具有DMSO 0.005％ 的情况下，使用放射性标记亮氨酸5μCi/mL和IGF1 100ng/mL，1μg/mL、5μg/mL和 10μg/mL的F0提取物或10μg/mL、104μg/mL和417μg/mL的红景天提取物。

图18a和图18b：测定在与漏芦F0和在三种浓度下的红景天提取物一起培育之后在C2C12肌管中的蛋白合成。

在存在分化的C2C12肌管和氚化亮氨酸(5μCi)的情况下，将在三种浓度下的漏 芦F0和红景天提取物培育2h30。在培育结束时，细胞裂解，定量总可溶蛋白，并且对 并入细胞中的氚化亮氨酸的含量进行计数。平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001 对对照值。

所有结果给出为平均±SEM。对于所有评估的参数，使用Kruskall-Wallis非参数检 验随后Dunn's后检验(GraphPad)执行统计分析。使用Mann Whitney检验执行在两种条件之间的比较。0.05的p值被认为具有显著性。

在存在正常浓度的氨基酸的情况下IGF1诱导的蛋白合成如此前报道(Kazi AA，2010)(Broussard SR，2004)。此结果确认产生于步骤1的我们的先前数据(IGF-1步骤 1+21％，p<0.001对IGF-1步骤2+27％，p<0.01)。

F0洗脱份能够以1μg/mL显著刺激蛋白合成(参见图18a和图18b)。此刺激类似 于检验的参考：IGF-1(IGF-1 100ng/mL或F0 1μg/mL+27％p<0.01)。在F0 10μg/mL 的情况下，观察到蛋白合成的刺激，然而，它未达到统计显著性并且比在第一步骤(+16％ 对+43％)中弱。基于红景天提取物的溶解性和下一共培育实验的预测，此差异可是由于 在此实验中使用的高浓度的DMSO。这些结果指示对蛋白合成的在F0提取物中的(一 种或多种)活性化合物对DMSO浓度敏感。

红景天提取物以最低浓度(+23％，p<0.01)诱导蛋白合成。此活性类似于IGF-1的活性。相比之下，在417μg/mL下，红景天抑制蛋白合成(参见图18a和图18b)。然而， 此高剂量很可能是由于提取物的溶解性限制并且这可导致对蛋白合成的有害影响。

因此对于下一共培育实验，决定测试在0.005％的最终浓度下的DMSO中的单独和组合的1μg/mL和10μg/mL的漏芦F0提取物和红景天提取物。每个制备进行超声处理 以改善溶解性。

在第二步骤中，研究两种植物提取物的不同组合以确定是否可记录到对蛋白合成的 增强影响。

对于此研究，如实例12中所描述，获得C2C12细胞。如实例13中所描述，执行蛋 白合成检验，不同之处在于在存在正常(0.8mM)浓度的氨基酸和具有DMSO 0.005％ 的情况下，使用放射性标记亮氨酸5μCi/mL和IGF1 100ng/mL，1μg/mL和10μg/mL 的F0提取物或1μg/mL和10μg/mL的红景天提取物，或F0与处于不同浓度的红景天 的组合。

表10：

表11：

图19a、图19b、图20a、20b和图21：测定在与在两个浓度下的漏芦F0和红景天 提取物单独或组合一起培育之后在C2C12肌管中的蛋白合成。

在存在分化的C2C12肌管和氚化亮氨酸(5μCi)的情况下，将在两种浓度的漏芦 F0和红景天提取物培育2h30。此外，在存在分化C2C12肌管和氚化亮氨酸(5μCi)的 情况下，在两种不同浓度下的漏芦F0和红景天提取物的组合各自培育2h30。在培育结 束时，细胞裂解，定量总可溶蛋白，并且对并入细胞中的氚化亮氨酸的含量进行计数。 平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001对对照值。

如此前所报道，在存在正常浓度的氨基酸的情况下，IGF1显著诱导蛋白合成(在先前研究中+22％，p<0.05对+27％，p<0.01和+21％，p<0.001)。

如此前所报道，在10μg/ml下，红景天强烈并且显著诱导蛋白合成(在先前步骤中，+30％p<0.001对+23％，p<0.01)(参见图19a、图19b、图20a、图20b和图21)。

如此前所报道，在1μg/ml和10μg/ml下，F0显著诱导蛋白合成。类似于步骤1， 通过F0(10μg/mL)诱导蛋白合成显著并且比IGF-1影响强。与步骤2a实验的差异可 是由于在提取物的溶解期间的超声处理步骤。当考虑等效剂量时，F0和红景天对蛋白合 成的影响类似(参见图19a、图19b、图20a、图20b和图21)。

在低剂量的这两种提取物的情况下，观察到增强(F0和红景天1:1+19％p<0.05对F0 1μg/ml+14％NS和红景天1μg/ml+10％NS)。在组合的情况下，蛋白合成的提高优于 漏芦或红景天提取物单独的提高并且因此观察到增强影响。

与对照相比，F0单独(10μg/ml)、红景天单独(10μg/ml)和其组合均显著提高蛋 白合成。尽管如此，与单独的每种提取物相比，在高剂量的红景天和F0的组合的情况 下，未观察到蛋白合成的增强(F0和红景天10:10+28％p<0.001对F0 10μg/ml+29％ p<0.001和红景天10μg/ml+30％p<0.001)。

在高剂量的一种提取物和低剂量的另一种提取物组合的情况下，观察到比在高剂量 (10μg/ml)下单独的每种提取物低的影响但是比在低剂量(1μg/ml)下单独的每种提取物强的影响(F0和红景天1:10+16％NS对F0 1μg/ml+14％NS和红景天10μg/ml+30％ p<0.001或F0和红景天10:1+19％p<0.05对F0 10μg/ml+29％p<0.001和红景天1 μg/ml+10％NS)。

实例15：评估两种浓度的漏芦提取物F0和两种浓度的红景天提取物对肌肉抑制素和atrogin基因表达和其组合(在图29a中描绘的步骤2c)

进行研究以通过测量提取物和其组合对肌肉抑制素和atrogin 1基因表达的影响来确 定增强是否存在于其它生理过程以及单独和组合的提取物对肌肉蛋白分解的影响。如实 例中14中所描述，使用漏芦提取物F0和红景天提取物。

对于基因表达检验，收获生长细胞并且在24孔板中以30 000个细胞/孔的密度接种。 细胞在37℃下在5％CO₂中生长48h。在细胞达到80％汇合之后，培养基被分化培养基(DMEM+2％FBS)置换。在5天之后，成肌细胞融合成多核细胞肌管。

用1μg/ml和10μg/ml的F0提取物或1μg/ml和10μg/ml的红景天提取物或不同浓 度的F0与红景天的组合治疗细胞6h。在实验结束时，C2C12细胞在试剂盒溶液中裂解 并且提取RNA并使用酚/氯仿方法纯化。通过分光光度计(260nm/280nm/320nm)定 量在提取之后的RNA量并且以1μg/μL的最终浓度悬浮。随后，1μg的RNA用作用于 使用寡聚(dT)引物和AMV逆转录酶系统合成第一链cDNA的模板，如制造商(应用 生物系统公司4368814(AppliedBiosystems 4368814))所描述。然后使用7900HT快速 实时PCR检测系统(应用生物系统公司)和标准qPCR程序(1个循环95℃15min， 40个循环95℃15s和60℃1min，对于sybergreen探针，融合曲线60℃到95℃)执 行qPCR。对于含有100ng cDNA样品和在被设计成两种不同外显子的200nM最终浓度 下的一组引物的β肌动蛋白、肌肉抑制素和Atrogin基因，在SYBR绿色PCR主混合物 (应用生物系统公司)中执行热循环实验。

所有结果给出为平均±SEM。对于所有评估的参数，使用Kruskall-Wallis非参数检 验随后Dunn's后检验(GraphPad)执行统计分析。使用Mann Whitney检验执行在两种条件之间的比较。0.05的p值被认为具有显著性。

表12：

表13：

在文献中，若干论文报道在与在10ng/mL下的IGF-1一起培育24h之后约40％的atrogin基因表达的抑制(Latres E，2005)(Stitt TN，2004)。未公布关于通过IGF-1的 肌肉抑制素基因表达的抑制的数据，因为大部分研究集中在有害肌肉抑制素影响的 IGF-1拮抗上(Trendelenburg AU，2009)。然而，内部，我们记录IGF-1对肌肉抑制素 基因表达20％到40％抑制性作用。基于文献和内部数据，选择IGF-1作为在此检验中我 们的阳性对照。在此实验中，IGF1显著抑制肌肉抑制素和atrogin基因表达(分别为-25％， p<0.001和-59％，p<0.001)。

图23a、图23b、图24a和图24b：漏芦F0和红景天提取物的共培育对在C2C12肌 管中肌肉抑制素基因表达的影响。在存在分化的C2C12肌管的情况下，将在两种不同浓 度下的漏芦F0和红景天提取物的组合各自培育6h。在培育结束时，细胞裂解并且提取 RNA，转化成cDNA以执行定量PCR。平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001对 对照值；###p<0.001对对照值(Mann-Whitney检验)。

红景天显著并且剂量依赖性地抑制肌肉抑制素基因表达(在低和高剂量下分别为-15％NS和-54％p<0.001)，而它在最高剂量下对atrogin基因表达仅具有微小、不显著 影响(-13％NS)(参见图22a和图22b)。

F0诱导肌肉抑制素基因表达的微小但不显著降低(在低和高剂量下分别为-10％NS 和-21％NS)，但是对atrogin基因表达不具有任何影响(在低和高剂量下分别为+12％NS和-4％NS)

图22a和22b图22b：漏芦F0和红景天提取物对在C2C12肌管中肌肉抑制素基因 表达的影响。

在存在分化的C2C12肌管的情况下，将在两种不同浓度下的漏芦F0和红景天提取物培育6h。在培育结束时，细胞裂解并且提取RNA，转化成cDNA以执行定量PCR。 平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001对对照值；###p<0.001对对照值 (Mann-Whitney检验)。

肌肉抑制素基因表达的结果呈现在图23a、图23b、图24a和图24b中。

F0 10μg/mL和红景天1μg/mL的组合诱导肌肉抑制素基因表达的显著降低(-23％；p<0.05对对照)，而F0 10ug/ml单独仅诱导-21％(NS对对照)和红景天1ug/ml仅-15％ (NS对对照)。因此，在组合的情况下降低优于单独的每种提取物的降低，并且观察到 增强影响。

单独或组合的F0和红景天1μg/mL诱导肌肉抑制素基因表达的微小但不显著降低。与单独的F0(-10％)或单独的红景天(-15％NS)相比，在组合的情况下影响的幅度更 强(-19％NS)(参见图23a、图23b、图24a和图24b)。

红景天10μg/mL强烈并且显著抑制肌肉抑制素基因表达；然而，在存在F0 1μg/mL或10μg/mL的情况下，未观察到增强影响，因为组合的抑制性作用系统地低于单独的 红景天(10μg/mL)的抑制性作用。

图25a、图25b、图26a和图26b：漏芦F0和红景天提取物的共培育对在C2C12肌 管中atrogin基因表达的影响。

在存在分化的C2C12肌管的情况下，将在两种不同浓度下的漏芦F0和红景天提取物的组合各自培育6h。在培育结束时，细胞裂解并且提取RNA，转化成cDNA以执行 定量PCR。平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001对对照值；###p<0.001对对照 值(Mann-Whitney检验)。

F0 1μg/mL和红景天10μg/mL的组合诱导atrogin基因表达的强并且显著降低 (-31％；p<0.05对对照)而每种洗脱份单独不诱导：单独的F0 1ug/ml诱导提高21％(NS 对对照)并且红景天10ug/ml诱导-13％(NS对对照)。因此，在组合的情况下降低优于 单独的每种提取物的降低，并且观察到强增强。

F0 10μg/mL和红景天1μg/mL的组合以非显著方式降低atrogin基因表达(-10％NS)，此降低优于单独F0(-4％NS)或单独红景天(+25％NS)的降低。

单独或组合的F0和红景天1μg/mL对atrogin基因表达不具有显著影响。必须注意，与单独F0(+21％NS)或单独红景天(+25％NS)相比，在组合的情况下影响的幅度更 强(-3％NS)，如在图25a、图25b、图26a图和26b中所描绘。

单独或组合的F0和红景天10μg/mL对atrogin基因表达具有非常微小但不显著影响，并且未观察到增强影响。

总之，组合F0 1μg/mL和红景天10μg/mL对atrogin基因表达的抑制呈现增强的影响。在组合的情况下降低优于单独的每种提取物的降低，并且观察到强增强。

实例16评估在2种浓度下来自漏芦提取物的4种新制备的洗脱份F0(如在29a图 中所描绘的步骤3)

为了改善关于蛋白合成获得的结果并且提高具有更好和更纯产品以在动物模型中 测试的机会，不同地处理洗脱份F0并且进一步纯化以获得新洗脱份。对应于初始F0的F0Ne-ETOH此前在实例12、13、14和15中测试。F1洗脱份对应于来自实例12和13 的F1洗脱份。在洗脱份F0的雾化之后，产生洗脱份F0干燥。在洗脱份F0于水溶液中 稀释和在柱上纯化之后，产生洗脱份F5'。

表14：

如实例12中所描述，获得C2C12骨骼肌细胞。如在实例13和14中执行蛋白合成 检验，不同之处在于在存在正常(0.8mM)浓度的氨基酸和具有DMSO 0.005％的情况 下，放射性标记亮氨酸5μCi/mL和IGF1 100ng/mL，11.4μg/mL和22.9μg/mL的F0提 取物，或6.5μg/mL和13μg/mL的F0干燥提取物或13.4μg/ml和26.7μg/ml的F1提取 物或1μg/ml和1.9μg/ml的F5'提取物。在实验结束时，丢弃上清液并且细胞在0.1N氢 氧化钠中裂解30min。然后统计细胞可溶洗脱份相关联的放射性并且使用热量劳里法 (coloric Lowry method)测定蛋白定量。

以n＝6测试每种条件。IGF1 100ng/ml用作蛋白合成刺激和信号传导的阳性对照。蛋白合成的结果以cpm/μL/2.5h和未治疗的对照病况(100％)的％来表达。

结果在图27a、图27b和图28中呈现。

在存在正常浓度的氨基酸的情况下，IGF1显著诱导蛋白合成(+25％，p<0.001)，如此前在步骤1-2a-2b中报道(步骤1+21％，p<0.001；步骤2a+27％，p<0.01；步骤2b +21％，p<0.05对步骤3+25％，p<0.001)。在存在正常浓度的氨基酸的情况下，类似的 结果在文献中报道(Kazi AA，2010)(Broussard SR，2004)。

漏芦提取物F0NE-EtOH 50％(天然EtOH50％提取物)在0.05μM 20HE和0.1μM 20HE下显著诱导蛋白合成(分别为+20％，p<0.01和+18％，p<0.05)。此前记录在0.04μM 20HE下通过洗脱份F0的蛋白合成的刺激(在步骤2B中，+29％，p<0.001)。在0.05μM 和0.1μM下，对蛋白合成的影响显著但是比在0.04μM下弱。

在两种浓度下漏芦提取物F0EtOH50％(干燥粉末形式)诱导蛋白合成，但是仅在最低剂量下刺激强并且显著(在对应于0.05μM HE的6.5μg/mL下，+33％，p<0.00)。 此影响比在洗脱份F0NE-EtOH 50％的情况下观察到的影响强。

在测试的任何20HE最终浓度下，观察到洗脱份F5'(纯化的EtOH50％提取物)对 蛋白合成无影响。

与NE-EtOH 50％制备和其衍生洗脱份相比，非纯化水性洗脱份F1呈现对蛋白合成的最强活性。在0.05μM的20HE的最终浓度下，F1洗脱份示出与干燥F0洗脱份类似 的蛋白合成刺激百分比(分别为+30％，p<0.001和+33％，p<0.001)。20HE的最终浓度 无论任何，F1洗脱份对蛋白合成的影响类似。

在测试的来自漏芦的不同洗脱份中，F1(水性提取物)、F0NE-ETOH 50％(天然EtOH 50％提取物)和干燥F0(F0 50％EtOH的雾化的粉末)洗脱份呈现对蛋白合成的 显著刺激影响。对于每种阳性洗脱份，在最低剂量的20HE(0.05μM)下观察到最好的 影响。在F050％EtOH的雾化的粉末的情况下，获得对蛋白合成的最强影响。

另一方面，衍生自F0NE-ETOH 50％并且在20HE中富集的F5'洗脱份不刺激蛋白合成。所有这些结果表明，漏芦提取物对蛋白合成的影响不为20HE浓度的单独依赖性， 并且能够促进蛋白合成其它(一种或多种)活性组分存在于活性提取物中。图27a、图 27b和图28：测定在与在两种浓度下不同制备的漏芦提取物一起培育之后在C2C12肌管 中的蛋白合成。

在存在分化的C2C12肌管和氚化亮氨酸5μCi的情况下，将在两种浓度下四种不同制备的漏芦提取物培育2h30。在培育结束时，细胞裂解，定量总可溶蛋白，并且对并入 细胞中的氚化亮氨酸的含量进行计数。平均±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001对 对照值。

在红景天(1μg/ml)和漏芦(1μg/ml)的组合的情况下，我们观察到对蛋白合成检验的增强。

蛋白合成可经由肌肉抑制素目标的抑制来刺激。Welle等人展示在成熟小鼠中甚至 在肌肉完全展开之后，肌肉抑制素对肌原纤维蛋白合成的速率发挥增强的抑制影响(Welle S，2008)。肌肉抑制素阻断或其天然不存在引起肌肉质量的显著提高(Lee SJ，2005)。在我们的实验中，我们记录在用10μg/mL(等效于10ppm)的红景天植物提取 物治疗C2C12之后，肌肉抑制素基因表达的降低比参考IGF-1好两倍。引起关注地， Zubeldia等人报道用20ppm的新疆筋骨草(Ajuga turkestanica)提取物(含有包括20HE 和土克甾酮(turkesterone)的蜕皮激素的植物提取物)治疗6h的肌管显著抑制肌肉抑 制素基因表达，并且抑制比由同化类固醇美雄酮(1μM)诱导的抑制强两倍(Zubeldia JM， 2012)。

漏芦F0洗脱份未示出对肌肉抑制素基因表达的显著影响，而单独的红景天(10 μg/mL)将显著降低肌肉抑制素基因表达。据我们所知，在文献中报道红景天对肌肉抑 制素基因表达无直接影响。此外，在红景天和漏芦提取物组合的情况下，在我们的研究 中观察到对肌肉抑制素基因表达抑制的影响的增强。如所观察，对于蛋白合成，此前未 记录这两种提取物(漏芦和红景天)的增强影响。

肌肉质量增益为在蛋白合成、蛋白分解和卫星细胞分化之间的平衡。在肌肉萎缩和 其它疾病病况如败血症、癌症恶病质和禁食期间，Atrogin-1或肌肉萎缩F-box(MAFbx)为在骨骼肌中高度表达的主要萎缩相关的E3泛素接合酶(Cong H，2011)。我们探索泛 素蛋白酶体系统。提取物中无一者单独呈现对atrogin基因表达的显著影响。相比之下， 引起关注地，当漏芦提取物的洗脱份F0在存在红景天提取物的情况下以1:10的比率培 育时，观察到atrogin基因表达的抑制的增强影响(-31％，p<0.05)。Cong等人示出使用 SiMAFbx腺病毒的atrogin的降低导致55％的基因表达抑制，蛋白水平的60％抑制和肌 肉质量的20％提高。已经示出在骨骼肌萎缩中，atrogin靶向MyoD降解 (Lagirand-Cantaloube J，2009)。

低氨基酸的结果：

表15：

在存在低氨基酸的情况下，报道无蛋白合成的显著诱导，除在洗脱份F0EtOH 50％的情况下之外；然而，蛋白合成或pS6K1磷酸化的刺激比由IGF-1诱导的低两倍。注意， 在几乎所有条件中，pS6K1信号传导被激活但是很可能未达到诱导生理响应所必需的阈 值。实际上，在低氨基酸条件中，pS6K1水平低于在存在正常氨基酸浓度的情况下在对 照条件中观察的pS6K1水平(对于最好的洗脱份，1.2的最大值对对于在存在正常氨基 酸浓度的情况下的对照的2.1)。因此，在存在正常氨基酸浓度的情况下优选使用植物提 取物。

F3、F5和F5'为来自水性(蓝色洗脱份)或乙醇(橙色洗脱份)提取物的纯化洗脱份。在所有这些纯化洗脱份中，未观察到对蛋白合成的刺激活性或观察到比母液的水平 低的水平。这些数据指示在纯化步骤期间，在纯化过程期间损失(一种或多种)活性分 子。

表16：

洗脱份	蛋白合成的最好刺激	[20He]
			F1步骤3	130-127％***	0.05-0.1μM
F0EtOH 50％步骤1	143％***	0.04μM
			F0EtOH 50％步骤3	120％***	0.05μM
F0干燥步骤3	133％***	0.05μM
			F7EtOH 70％步骤1	129％***	0.1μM
纯化F5步骤1	123％***	10μM
			F1步骤1	无激活	0.1-1-10μM
纯化F3步骤1	无激活	0.1-1-10μM
			纯化F5'步骤3	无激活	0.05-0.1μM

发现在20HE浓度和蛋白合成的刺激之间无实际相关性。然而，在其中报道蛋白合成的最强刺激非纯化的洗脱份中，20HE的最好浓度出现在0.05μM和0.1μM之间。这 些结果表明20HE不是参与蛋白合成的激活的唯一活性分子。因此，得到关于在不同洗 脱份中的分子分布的信息以确定哪些分子的混合液有助于蛋白合成刺激将备受关注。

表17：

观察到漏芦植物提取物在10μg/mL和100μg/mL之间的浓度下的活性最大。当由 于纯化步骤洗脱份损失其一部分活性时，观察到提取物必须在更强浓度下测试以观察对 蛋白合成的类似影响。然后对于漏芦植物提取物的体外评估的最好浓度为10μg/mL到 100μg/mL。

表18：

	漏芦	红景天	漏芦+红景天
				蛋白合成	+++	+++	0
Atrogin	0	+++	0
				肌肉抑制素	0	0	++++

漏芦和红景天提取物均对蛋白合成有活性；每种提取物单独提高蛋白合成20％到30％，达到在检验中可获得的较高水平。在其信号传导路径的水平下对蛋白合成的增强 影响应较好理解，因为当测量pAkt或pS6K时刺激的最大极限超过100％。

红景天提取物诱导肌肉抑制素基因表达的抑制，但是当红景天和漏芦的F0洗脱份共培育时观察到较低有益的影响。结果表明在F0洗脱份内的(一种或多种)分子能够 拮抗红景天提取物的有益的影响。此/这些(一种或多种)物质的识别和预纯化可改善共 培育的影响。

提取物中无一者单独呈现对atrogin基因表达的影响，而在共培育的某些情况下(F0 1μg/mL和红景天10μg/mL)，观察到对atrogin基因表达的抑制的增强影响。观察到红景天和漏芦提取物对蛋白分解的协同和有益的影响。

总之，本研究已示出漏芦提取物的EtOH 50％提取物为在评估的所有洗脱份中对蛋 白合成刺激的最强洗脱份。红景天提取物也强烈提高蛋白合成。当与漏芦的F0洗脱份一起培育时，与单独的每种提取物相比，对于此参数可示出较高影响(当每种提取物以 1μg/ml的浓度混合时)。

同时，在10μg/ml下红景天提取物强烈降低肌肉抑制素基因表达，但是当与漏芦F0洗脱份一起共培育时，未观察到更好的影响。必须注意，当组合红景天(1μg/ml) 和漏芦(1μg/ml)时，观察到对肌肉抑制素基因表达的增强影响，由此与单独的每种提 取物相比，肌肉抑制素基因的表达较低(但并非显著)。

可观察提取物的混合物对atrogin基因表达的协同抑制性作用，这表明除了对蛋白合 成的影响之外，对漏芦和红景天提取物的混合物蛋白分解的有益影响。

实例17：测试红景天提取物和漏芦提取物的组合在动物模型中对肌肉蛋白合成和相 关联路径、肌肉质量和肌肉力量的影响

测试红景天和漏芦提取物的组合对体力、肌肉重量、肌肉Akt磷酸化和蛋白含量、血浆葡萄糖和乳酸酯的影响。

通过用50％(v/v)乙醇水溶液提取来获得鹿草根的干燥提取物(F0-EtOH 50％干燥 粉末)，如实例1中所述。以草本提取物的总干重计，提取物可优选地含有大约(％w/w)0.395％20HE、0.79％总脱皮类固醇和13.4％总多酚(Folin ciocalteu)。

可获得红景天玫瑰根的乙醇提取物，以草本提取物的总干重计，其优选地包含大约 (％w/w)3.41％红景天甙、3.12％络赛维和4.20％肉桂醇甙(作为洛塞琳、络赛维和松香的总和)。

这两种提取物呈具有<5％湿度的粉末形式。以组合物的总重量计，提取物以50:50(w/w)的比率混合。在一些测试中未添加载剂或额外赋形剂。

针对目标化合物，分析红景天玫瑰根和鹿草根的两种提取物的此组合：

Wister雄性大鼠用剂量为50mg/kg bw(n＝10)的提取物组合或用媒剂(n＝10)治疗6周的时间。组合通过管饲一天投予一次。

在治疗之前(第0天)和在治疗42天之后(第43天)评估Wistar大鼠的前肢抓握 力，并且第0天到第43天的抓握力演进按Δ(d43的抓握力-d0的抓握力)计算。如本 领域中众所周知，此抓握力测试旨在测量大鼠的前肢和后肢抓握力，并且已由其他人使 用，例如在投予20HE之后测量力量(Feldman-Gorelick等人，2008，JAFC)。

如在图30a中所示，在掺合治疗组中Δ抓握力的提高比未治疗对照组中所观察到的 提高高45％。此外，如图30b中所示，当以替代方式基于体重(即，千克力/克体重)报 道Δ抓握力时，掺合治疗组仍然比未治疗对照组中所观察到的提高高40％。

大鼠体重一周测量两次(治疗期的每周)。在治疗之前和在治疗6周之后测量血浆葡萄糖和乳酸酯(运动前后)。

在43天的治疗结束时(第44天)，在抓握力测试和血液抽样之后，将动物处死。 取出Wistar大鼠的后肢和前肢肌肉(趾长伸肌(EDL)、比目鱼肌、四头肌、胫骨肌和 肱三头肌)并且称量。如在图31a和图31b中所示，观察到EDL重量和EDL重量与体 重的比率出现5％提高(对于两者，Mann-Whitney，p<0.05)。此外，如在图32a和图32b 中所示，也发现比目鱼肌肌肉重量和比目鱼肌重量与体重的比率提高。记录了其它肌肉 的肌肉重量基本上无变化。

测量肌肉样品中的蛋白含量和Akt磷酸化。以50mg/kg投予漏芦与红景天组合6 周不显著改变在EDL肌肉内的蛋白量(μg蛋白/mg组织；图33a)和EDL的蛋白总量 (mg/肌肉；图33b)。然而，观察到Wistar大鼠的比目鱼肌肌肉内的蛋白含量(μg蛋白 /mg组织；+10％，p＝0.08，图34a)和EDL的总量蛋白(mg每肌肉；+14％，图34b) 提高。

实例18：测试在对抗训练计划期间在娱乐性活动男性中8周补充红景天提取物和漏 芦提取物的组合对机体组成、肌肉质量、肌肉力量和锻炼抗性的影响。

给出体外和动物研究的结果，假定给娱乐性活动男性补充所公开的掺合物，而对抗 训练可在提高力量和肌肉尺寸方面提供额外的益处。本研究的目的为测定在8周的动态持续外部对抗(DCER)训练期间给娱乐性活动男性补充的所公开的制备物对力量和大 腿肌肉截面积的影响。

本研究的主要目标为评估8周补充漏芦/红景天提取物的组合(参见实例17对于掺合物的描述)对肌肉力量(1-RM腿部推举和平卧推)的影响。试验可使用在4周和8 周测试的1RM和平卧和腿部推举锻炼评估上部和下部身体肌肉力量。

第二目标为评估在对抗训练锻炼期间8周补充漏芦/红景天提取物的组合对机体组 成和肌肉质量(DXA)、肌肉蛋白含量、血糖和体力耗尽的抗性和时间的影响。

研究可为随机、双盲、安慰剂对照、平行组研究。根据其随机化，参与者可在8周 期间每天服用低(100mg)或高(400mg)剂量的补充剂或安慰剂。可使用1RM和平 卧和腿部推举在第0周(基线)、第4周和第8周评定肌肉力量(上部和下部身体肌肉 力量)的改变。可使用DEXA在第0周和第8周评定机体组成和肌肉质量的改变。可在 第0周和第8周执行肌肉活检和分析。可在第0周(治疗前；基线)和第8周通过1-RM 的重复的增强来测量体力耗尽的抗性/时间。可使用自感用力度(RPE)调查表在第0周 (治疗前；基线)和在第8周评估精神疲劳。

为了验证对摄取补充剂的急性代谢响应(在补充阶段开始和结束时)，可按照随机、 双盲、交叉、安慰剂对照执行急性摄取补充剂。在急性摄取低(200mg)或高(400mg) 剂量的补充剂或安慰剂后，可如上所述评定肌肉力量(上部和下部身体肌肉力量)。可 测量生物参数如血糖和血液乳酸酯。

对于所述研究，可招募健康、娱乐性活动适龄的男性(例如年龄在18岁到35岁) 参与此研究。如果参与者满足所有入选标准并且不存在排除标准中的任一个(通过调查 表确定)，那么参与者可参与所述研究。可从适当大学的伦理学委员会获得伦理批准。

如果他们满足以下，那么参与者可包括在所述研究中：

-非吸烟者；

-年龄在18岁到35岁；

-BMI在19kg/m²到29.9kg/m²；

-体重稳定(即在近3个月中未增加或损失大于3kg/m²)；

-娱乐性活动，即一周去健身大约两次但是不遵循任何密集训练或竞争计划(他们娱乐性进行的体育的类型和频率/强度待确定)；

-对于在研究开始之前的3个月已经体重训练至少一周2次；

-由调查员认为不服用任何药物(设定在研究开始之前有限的持续时间)和/或在最后一个月内未服用任何膳食补充剂来影响代谢、体重和/或食欲；和

-在研究开始之前1个月(tbd)内未服用可影响肌肉质量的增进机能水平的营养补充剂(例如肌酸、HMB等)和/或可影响合成代谢/分解激素水平的补充剂(例如雄烯 二酮、DHEA等)。

如果参与者满足以下，那么参与者将被排除：

-为吸烟者；

-去健身每周多于两次和/或遵循任何密集训练或竞争计划(不需要的类型的体育和频率/强度待确定)；

-患有当前诊断的显著医学病况；

-患有代谢、内分泌或心肌病症的任何病史或症状；

-由调查员认为服用任何药物或补充剂和/或在最后一个月内已服用任何膳食补充 剂来影响代谢、体重和/或食欲；或

-在研究开始之前1个月(tbd)内已服用可影响肌肉质量的增进机能水平的营养补充剂(例如肌酸、HMB等)和/或可影响合成代谢/分解激素水平的补充剂(例如雄烯 二酮、DHEA等)。

参与者可被分配到两个独立组中的一个：治疗或安慰剂(在每一组中20个参与者)。 组可基于物理特征尽可能接近地匹配。

研究产品可为如实例17中所描述的红景天和漏芦的提取物的组合。可在研究中测试两种剂量：测试产品的低剂量(100mg)和高剂量(400mg)。可使用匹配、惰性安 慰剂并且其可存在于纤维素中。

在补充阶段(0周)之前和在4周以及8周，所有参与者可完成力量类测试。可分 别通过平卧推(使用Smith机器)和腿部推举锻炼来评定上部和下部身体的一个重复最 大值(1RM；可在以恰当形式的特定锻炼中提升的最重体重)。

在8周补充之前和之后，可记录参与者的身高和体重以及臂围和腰围。可通过DEXA在基线(0周)和在8周之后、在1-RM锻炼前一天评定机体组成和肌肉重量。

可在补充前和补充后执行肌肉活检以测量磷酸化蛋白对总蛋白、蛋白分析、 Akt/pS6K1路径和肌肉纤维直径尺寸。还可测量血糖。

对于体力耗尽的抗性/时间，可通过增强1-RM的重复来测量这些参数。可使用自感用力度(RPE)调查表评估精神疲劳。

所有参与者可完成每周两次课程的8周监督训练计划以验证在参与者之间锻炼的均 匀性。训练负荷可为一组基线1RM测量的百分比并且训练计划可每2周进展强度。参 与者可在有资质的力量和体能训练教练的监督下一周训练2到3次。所有训练课程可在 早晨进行，并且每个课程可持续大约90min。每个课程可由标准化热身，每个锻炼的4x6 重复构成(其中在各组之间4min恢复)并且平静下来。可执行以上部身体(例如平卧 推、肩部推和三头肌加重突降)和下部身体(例如腿部推举、腿部拉伸、腘绳肌卷曲) 的肌肉组织为目标的锻炼。可在训练计划期间每隔一定间隔记录自感用力度。在研究开 始之前可教导所有参与者每种锻炼的恰当的技术。

为了控制参与者饮食中的蛋白质摄取，可使用呈24小时膳食回忆的形式的有利于蛋白质摄取和膳食记录的营养学家建议的饮食并且在0周、4周和8周分析。

可计算0周、4周和8的平均值。可在每个时间点和在使用重复测量ANOVA(或 如果仅两个时间点，那么单向ANOVA)的每个组内评定从基线的改变。

此外，对于每个变量可计算从基线的改变(ΔT_x-T₀)并且可使用多向ANOVA在各 组之间比较平均改变。

预期结果示出肌肉质量、肌肉力量(1-RM)、肌肉纤维尺寸和蛋白含量的提高。预期补充提高体力耗尽时间/锻炼抗性和精神疲劳的改善的阈值。

实例19：测试在动物模型中对抗训练之后红景天提取物或漏芦提取物或两者的组合 对肌肉蛋白合成的影响

在急性对抗训练锻炼之后测试单独的红景天提取物或漏芦提取物或者两者提取物 的组合对肌肉蛋白合成刺激的影响。

11周大的Wistar Han大鼠购自查尔斯河(Charles River)(法国罗纳省L'Arbresle的 查尔斯河实验室(Charles River Laboratories,L'Arbresle,France))并且以恒定室 温和湿度圈养并且维持在12/12h光亮/黑暗循环中。喂养30g/天用于大鼠的专门低蛋白 饮食、耗尽蛋白、抗氧化剂和维生素(参见示出饮食的成分和营养值的列表的下表)以 得到更接近于娱乐活动未强化人类饮食，并且通过SAFE(法国欧吉科学动物食品与工 程(Scientific Animal Food&Engineering,Augy,France))获得，并且任意提供水。在实 验开始时大鼠为12周大并且然后被视为完全成年。

表19：来自SAFE(法国欧吉)的专用A04低蛋白饮食的成分的列表

CD_FORM	U8220P
		CD_VER	0264
A04低蛋白10％
		标记线	QT_DOS的总和
选择的大麦	391
		玉米(CORN)	300
玉米(MAIZE)	200
		麸	50
磷酸二钙	12
		PM寡核苷酸碳酸氢盐	10
TTX大豆PCR-	10
		碳酸钙	10
维生素A03/A04	7
		大豆油	5
可溶脱脂鱼	5
		总计	1000

表20：来自SAFE(法国欧吉)的专用A04低蛋白饮食的营养值

组成_g/100g	以未加糖和香料的
		水	12.8
干物质	87.2
		蛋白(Nx5，8)(Nx6，25)	10.5
脂肪(水解)	2.6
		矿物质	4.7
纤维素	3.45
		淀粉美沙酮	52.82
糖	6.5
		ENA	65.9
ATWATER Kcal/Kg	3291.1
		ATWATER MJ/kg	13.8

对接收如下文指示的对应的治疗的8个组的8个大鼠执行实验：

第1组(对照组)：0.5％CMC(羧甲基纤维素)作为媒剂和阴性对照。 第2组：0.21mg/ml乳清蛋白Milical

第3组：10mg/ml红景天玫瑰根提取物

第4组：10mg/ml鹿草根提取物

第5组：20mg/ml红景天/漏芦，比率50:50(w/w)

第6组：10mg/ml红景天/漏芦，比率50:50(w/w)

第7组：5mg/ml红景天/漏芦，比率50:50(w/w)

第8组：2mg/ml红景天/漏芦，比率50:50(w/w)

对应的人类等效剂量(以毫克/千克体重计和以毫克/天计)以及以毫克/千克大鼠体 重计的对应的剂量在下表21中报道。

表21：在实例19研究中用于喂养不同组的动物的人类等效剂量

*根据FDA，2005的公式；人类等效剂量HED(毫克/千克)＝以毫克/千克计的动 物剂量x(以千克计的动物体重/以千克计的人体体重)^0.33

通过用50％(v/v)乙醇水溶液提取来获得鹿草根的干燥提取物(F0-EtOH 50％干燥 粉末)，如实例1中所描述。以草本提取物的总干重计，提取物可优选地含有大约(％w/w)0.395％20HE、0.79％总脱皮类固醇和13.4％总多酚(Folin ciocalteu)。

可获得红景天玫瑰根的乙醇提取物，以草本提取物的总干重计，其优选地包含大约 (％w/w)2.45％红景天甙、1.14％络赛维和2.43％肉桂醇甙(作为洛塞琳、络赛维和松香的总和)。

这两种提取物呈具有<5％湿度的粉末形式。以组合物的总重量计，提取物以50:50(w/w)的比率混合。在一些测试中未添加载剂或附加赋形剂。

针对目标化合物，分析红景天玫瑰根和鹿草根的两种提取物的此组合。

训练

在一周的适应之后，16个大鼠被随机分成2组各8个大鼠。在训练之前72小时， 大鼠执行学习课程以熟悉梯子并且在实验之前禁食24小时。

在实验当天，在1米高的梯子上以及时方式训练来自相同组的4个大鼠。每4个大鼠组在负荷下进行10次攀爬，连续达到其身体质量的0％、身体质量的50％和75％。在 每次攀爬之间，允许大鼠休息2min，并且在每组之间休息5分钟。

含有重量的袋用带接到尾根。

在训练之后，大鼠仍然禁食并且不接收新食物。

药物投予

紧接在每个训练课程之后通过口服管饲投予药物。

溶液临时在0.5％CMC中制备。

解剖和取出肌肉

在训练两小时之后，大鼠腹膜内注入10mM嘌呤霉素100μL/25g(西格玛奥德里 奇公司(Sigma Aldrich)，目录号P8833)，并且经由腹膜内注射戊巴比妥150mg.kg-1的麻醉。

在嘌呤霉素注射之后小于30分钟，收获右指深屈肌(FDP)、三角肌和二头肌并且将其放入异戊烷溶液，用液氮快速冷冻并存储在-80℃下用于另外的生物化学分析。

蛋白提取和剂量

20mg的每种样品在具有抑制性蛋白酶混合液(P8340，西格玛奥德里奇公司)的 10体积的裂解缓冲液中均匀化(Tris 20mM pH 6.8，NaCl 150mM，EDTA 2mM，Triton X-1001％)。用IKA ULTRA TURRAX T25数字提取总肌肉蛋白。均质物在4℃下旋转 10min并且收集上清液。

蛋白合成的定量

通过蛋白质印迹抗嘌呤霉素分析总蛋白合成。

使50μg蛋白样品变性，在10％SDS-PAGE上分离，并且转移到硝酸纤维膜上。第一抗体抗嘌呤霉素(抗嘌呤霉素抗体，来自EMD Millipore(1/3000)的克隆12D10在4℃ 下施用过夜，并且随后与共轭到过氧化酶的第二抗体一起培育(来自通用电气医疗集团 英国有限公司(GE Healthcare UK Limited)的抗小鼠IgG ECL)。

通过蛋白质印迹成像定量分析定量掺入蛋白链(经由肽键的形成)的嘌呤霉素表示 在体内肌肉中重新蛋白合成(蛋白合成诱导)并且表示在训练课程之后取决于药物投予的蛋白合成的刺激(Goodman和Hornberger，2013)。因此蛋白合成用对照条件(用媒 剂喂养的动物组)或其它条件下的蛋白合成相对速率表示(％)。

所有值表示为平均值±SEM。Fishers LSD ANOVA用于比较数据。显著性设定为 p<0.05。

如在图35a中所示，示出对于每种治疗八个动物的指深屈肌(FDP)肌肉的蛋白质印迹，并且在图35b中示出归一化为定量总蛋白负载和阴性对照组的任意单位的嘌呤霉 素水平，单独的鹿草根提取物但不是红景天玫瑰根提取物能够显著刺激蛋白合成并且至 比任何浓度(具有降低剂量)的两种提取物的组合小的程度。

提取物的组合(对于测试的四个降低剂量：从HED＝1000毫克/天到100毫克/天)实际上显著优于单独的红景天玫瑰根提取物或单独的鹿草根提取物，如分别在图35d和 图35e中所示(示出分别归一化为定量总蛋白负载和红景天组或漏芦组的任意单位的嘌 呤霉素水平)。此外，提取物的组合的影响(对于测试的四个降低剂量：从HED＝1000 毫克/天到100毫克/天)也显著优于乳清蛋白，如在图35c中所示(示出归一化为定量 总蛋白负载和乳清蛋白组的任意单位的嘌呤霉素水平)。表22示出与可从单独的红景天 玫瑰根提取物或单独的鹿草根提取物的结果预期的相比，在使用不同剂量的组合获得的 结果之间的差异。出乎意料地，减半浓度的红景天玫瑰根提取物和减半浓度的鹿草根提 取物的组合的对FDP中的蛋白合成的刺激的影响示出比在单独的全浓度下的红景天或 漏芦好的影响。这为协同作用。另外，一半浓度的红景天和一半浓度的漏芦的组合的影 响示出比预期的高的影响(高1.9倍)。另外，四分之一浓度的红景天和四分之一浓度的 漏芦的组合的影响示出比预期的高的影响(高3.0倍)。最后，小10倍浓度的红景天和 小10倍浓度的漏芦的组合的影响也示出比预期的高的影响(高5.8倍)。这些结果明确 表明在急性对抗锻炼后在组合比率50:50(w/w)的500毫克/天、250毫克/天和100毫 克/天下，提取物的组合对在FDP肌肉中蛋白合成刺激的协同作用。

表22：在FDP肌肉中的蛋白合成(作为归一化为定量总蛋白负载和阴性对照组的任意单位的嘌呤霉素水平)

*：在红景天玫瑰根提取物和鹿草根提取物的组合的情况下，比率50:50(w/w)，强非预期结果

如在图36a中所示，示出对于每种治疗八个动物的三角肌的蛋白质印迹，并且在图36b中示出归一化为定量总蛋白负载和阴性对照组的任意单位的嘌呤霉素水平，单独的 鹿草根提取物和红景天玫瑰根提取物两者都不能够显著刺激蛋白合成，但在降低HED 1000毫克/天、500毫克/天和250毫克/天下两种提取物的组合显著刺激蛋白合成。

提取物的组合(对于三种降低HED：500毫克/天到100毫克/天)实际上显著优于 单独的红景天玫瑰根提取物，如在图36d中所示(示出归一化为定量总蛋白负载和红景 天组的任意单位的嘌呤霉素水平)。提取物的组合(从HED：1000毫克/天到100毫克/ 天)也优于单独的鹿草根提取物，如在图36e中所示(示出归一化为定量总蛋白负载和 漏芦组的任意单位的嘌呤霉素水平)。此外，提取物的组合(对于HED＝1000毫克/天和 500毫克/天)的影响也显著优于乳清蛋白，如在图36c中所示(示出归一化为定量总蛋 白负载和乳清蛋白组的任意单位的嘌呤霉素水平)。表23(下)示出与可从单独的红景 天玫瑰根提取物或单独的鹿草根提取物的结果预期的相比，在使用不同剂量的组合获得 的结果之间的差异。出乎意料地，减半浓度的红景天玫瑰根提取物和减半浓度的鹿草根 提取物的组合的对三角肌中的蛋白合成的刺激的影响示出比在单独的全浓度下的红景 天或漏芦好的影响。这为协同作用。另外，一半浓度的红景天和一半浓度的漏芦的组合 的影响示出比预期的高的影响(高1.6倍)。另外，四分之一浓度的红景天和四分之一浓 度的漏芦的组合的影响示出比预期的高的影响(高3.4倍)。最后，小10倍浓度的红景 天和小10倍浓度的漏芦的组合的影响也示出比预期的高的影响(高5.4倍)。这些结果 明确表明在急性对抗锻炼后在组合比率50:50(w/w)的500毫克/天、250毫克/天和100 毫克/天下，提取物的组合对在三角肌中蛋白合成刺激的协同作用。

表23：在三角肌中的蛋白合成(作为归一化为定量总蛋白负载和阴性对照组的任意 单位的嘌呤霉素水平)

*：在红景天玫瑰根提取物和鹿草根提取物的组合的情况下，比率50:50(w/w)，强非预期结果

如在图37a中所示，示出对于每种治疗八个动物的二头肌的蛋白质印迹，并且在图37b中示出归一化为定量总蛋白负载和阴性对照组的任意单位的嘌呤霉素水平，单独的 鹿草根提取物和红景天玫瑰根提取物两者都不能够显著刺激蛋白合成，但在降低HED 1000毫克/天、500毫克/天和250毫克/天下，两种提取物的组合显著刺激蛋白合成。

提取物的组合(HED：1000毫克/天到500毫克/天)实际上显著优于单独的红景天玫瑰根提取物，如在图37d中所示(示出归一化为定量总蛋白负载和红景天组的任意单 位的嘌呤霉素水平)。提取物的组合(HED：1000毫克/天到500毫克/天)也优于单独的 鹿草根提取物，如在图37e中所示(示出归一化为定量总蛋白负载和漏芦组的任意单位 的嘌呤霉素水平)。此外，提取物的组合(对于HED＝1000毫克/天和500毫克/天)的影 响也显著优于乳清蛋白，如在图37c中所示(示出归一化为定量总蛋白负载和乳清蛋白 组的任意单位的嘌呤霉素水平)。表24(下)示出与可从单独的红景天玫瑰根提取物或 单独的鹿草根提取物的结果预期望的相比，在使用不同剂量的组合获得的结果之间的差 异。出乎意料地，减半浓度的红景天玫瑰根提取物和减半浓度的鹿草根提取物的组合的 对二头肌中的蛋白合成的刺激的影响示出比在单独的全浓度下的红景天或漏芦好的影 响。这为协同作用。另外，一半浓度的红景天和一半浓度的漏芦的组合的影响示出比预 期的高的影响(高2.0倍)。另外，四分之一浓度的红景天和四分之一浓度的漏芦的组合 的影响示出比预期的高的影响(高2.5倍)。最后，小10倍浓度的红景天和小10倍浓度 的漏芦的组合的影响也示出比预期的高的影响(高5.0倍)。这些结果明确表明在急性对 抗锻炼后在组合比率50:50(w/w)的500毫克/天、250毫克/天和100毫克/天下，提取 物的组合对在二头肌中蛋白合成刺激的协同作用。

表24：在二头肌中的蛋白合成(作为归一化为定量总蛋白负载和阴性对照组的任意 单位的嘌呤霉素水平)

*：在红景天玫瑰根提取物和鹿草根提取物的组合的情况下，比率50:50(w/w)， 强非预期结果

如在图38中所示，对于所有组合的肌肉(FDP+三角肌+二头肌)示出归一化为定 量总蛋白负载和阴性对照组的任意单位的嘌呤霉素水平，单独的鹿草根提取物但不是红 景天玫瑰根提取物能够显著刺激蛋白合成并且至比任何浓度(具有降低剂量)的两种提 取物的组合小的程度。对于所测试的四种递减剂量(从HED＝1000毫克/天到100毫克/ 天)来说，提取物的组合显著优于单独的红景天玫瑰根提取物，并且在HED＝1000毫克 /天和500毫克/天下显著优于单独的鹿草根提取物。此外，测试的所有剂量的提取物的 组合(从HED＝1000毫克/天到100毫克/天)显著优于乳清蛋白。

下表25示出与可从单独的红景天玫瑰根提取物或单独的鹿草根提取物的结果预期 的相比，在使用不同剂量的组合获得的结果之间的差异。出乎意料地，减半浓度的红景天玫瑰根提取物和减半浓度的鹿草根提取物的组合的对所有肌肉中的蛋白合成的刺激 的影响示出比在单独的全浓度下的红景天或漏芦好的影响。这为协同作用。另外，一半 浓度的红景天和一半浓度的漏芦的组合的影响示出比预期的高的影响(高1.8倍)。另外， 四分之一浓度的红景天和四分之一浓度的漏芦的组合的影响示出比预期的高的影响(高 3.0倍)。最后，小10倍浓度的红景天和小10倍浓度的漏芦的组合的影响也示出比预期 的高的影响(高5.4倍)。这些结果明确表明在急性对抗锻炼后在组合比率50:50(w/w) 的500毫克/天、250毫克/天和100毫克/天剂量下，提取物的组合对在所有肌肉(组合 的FDP+三角肌+二头肌)中蛋白合成刺激的协同作用。

表25：在组合在一起的FDP、三角肌和二头肌中的蛋白合成(作为归一化为定量 总蛋白负载和阴性对照组的任意单位的嘌呤霉素水平)

*：在红景天玫瑰根提取物和鹿草根提取物的组合的情况下，比率50:50(w/w)， 强非预期结果

所描述的实施例易有各种修改以及替代形式，并且其具体实例已在附图中通过举例 示出并且在本文中详细地进行了描述。然而，应理解，所描述的实施例并非限制于所公开的特定形式或方法，相反，本公开涵盖所有修改、等效物和替代方案。

参考文献

Goodman CA、Hornberger TA.用SUnSET测量蛋白合成：传统的技术的有效的替代方案？《锻炼与运动医学综述(Exercise and sport sciences reviews)》2013；41(2):107-115. doi:10.1097/JES.0b013e3182798a95，所述文献以引用的方式并入本文。

Claims (59)

1.一种组合物，其包含漏芦提取物和红景天提取物。

2.一种组合物，其包含脱皮类固醇和i)肉桂醇甙或ii)红景天甙。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述漏芦提取物和所述红景天提取物的质量比约在99:1和1:99之间。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述漏芦提取物和所述红景天提取物的质量比为约75:25。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含约0.1％到10％蜕皮甾酮。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含约0.5％到3％蜕皮甾酮。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述漏芦提取物包含约0.1％到10％脱皮类固醇。

8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述漏芦提取物包含约0.4％到5％脱皮类固醇。

9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含约0.1％到5.0％的20-羟基蜕皮激素。

10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述红景天提取物包含约1％到4％红景天甙。

11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述红景天提取物包含约1％到10％肉桂醇甙。

12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述红景天提取物包含约1％到10％络赛维(rosavin)。

13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含约1％到99％红景天提取物。

14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述红景天提取物包含：

约1％到4％红景天甙，

约0.5％到10％络赛维，和

约0.5％到10％总肉桂醇甙；并且

其中所述漏芦提取物包含：

约0.1％到5.0％20-羟基蜕皮激素，和

约0.1％到10％总蜕皮甾酮。

15.一种用于增加受试者的蛋白合成的方法，所述方法包含向所述受试者经口投予包含根据权利要求1所述的组合物的配制物。

16.根据权利要求15所述的方法，其中向所述受试者投予每天约0.5mg/kg到100mg/kg的所述组合物。

17.根据权利要求15所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到500mg的所述组合物。

18.根据权利要求15所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到2000mg的所述组合物。

19.根据权利要求15所述的方法，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。

20.一种用于减少受试者的蛋白质的蛋白分解的方法，所述方法包含向所述受试者经口投予包含根据权利要求1所述的组合物的配制物。

21.根据权利要求20所述的方法，其中向所述受试者投予每天约0.5mg/kg到100mg/kg的所述组合物。

22.根据权利要求20所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到500mg的所述组合物。

23.根据权利要求20所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到2000mg的所述组合物。

24.根据权利要求20所述的方法，其中所述受试者是人类。

25.根据权利要求20所述的方法，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。

26.一种药物配制物，其包含根据权利要求1所述的组合物，其中所述配制物经配制用于口服投予。

27.根据权利要求26所述的药物配制物，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。

28.一种组合物，其包含：

约0.1％到10％总脱皮类固醇；

约1％到4％红景天甙；和

约1％到6％总肉桂醇甙。

29.根据权利要求28所述的组合物，其包含约0.4％到5％总脱皮类固醇。

30.根据权利要求28所述的组合物，其包含0.1％到5.0％的20-羟基蜕皮激素。

31.根据权利要求28所述的组合物，其包含约1％到约5％络赛维。

32.根据权利要求28所述的组合物，其包含：

约0.4％到5％脱皮类固醇；

约0.1％到5.0％20-羟基蜕皮激素；和

约1％到5％络赛维。

33.一种用于增加受试者的蛋白合成的方法，所述方法包含向所述受试者经口投予包含选自由以下组成的群组的组合物的配制物：

(i)根据权利要求28所述的组合物，

(ii)漏芦提取物和红景天提取物，和

(iii)脱皮类固醇和(a)肉桂醇甙或(b)红景天甙。

34.根据权利要求33所述的方法，其中向所述受试者投予每天约5mg/kg到50mg/kg的所述组合物。

35.根据权利要求33所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到500mg的所述组合物。

36.根据权利要求33所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到2000mg的所述组合物。

37.根据权利要求33所述的方法，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。

38.一种用于减少受试者的蛋白质的蛋白分解的方法，所述方法包含向所述受试者经口投予包含根据权利要求28所述的组合物的配制物。

39.一种用于减轻受试者的少肌症的方法，所述方法包含经口投予选自由以下组成的群组的组合物：

(i)根据权利要求28所述的组合物，

(ii)漏芦提取物和红景天提取物，和

(iii)脱皮类固醇和(a)肉桂醇甙或(b)红景天甙。

40.一种用于抑制受试者的肌肉质量降低的方法，所述方法包含向所述受试者经口投予包含选自由以下组成的群组的组合物的配制物：

(i)根据权利要求28所述的组合物；

(ii)漏芦提取物和红景天提取物；和

(iii)脱皮类固醇和(a)肉桂醇甙或(b)红景天甙，并且

所述组合物任选地具有合适的药物载剂。

41.一种用于减轻受试者的肌肉萎缩或废退或失健的方法，所述方法包含向所述受试者经口投予包含选自由以下组成的群组的组合物的配制物：

(i)根据权利要求28所述的组合物；

(ii)漏芦提取物和红景天提取物；和

(iii)脱皮类固醇和(a)肉桂醇甙或(b)红景天甙，并且

所述组合物任选地具有合适的药物载剂。

42.根据权利要求39所述的方法，其中向所述受试者投予每天约0.5mg/kg到50mg/kg的所述组合物。

43.根据权利要求39所述的方法，其中向受试者投予每天约50mg到500mg的所述组合物。

44.根据权利要求39所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到2000mg的所述组合物。

45.根据权利要求39所述的方法，其中所述受试者是人类。

46.根据权利要求39所述的方法，其中所述受试者是动物。

47.根据权利要求39所述的方法，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。

48.一种药物配制物，其包含根据权利要求28所述的组合物，其中所述配制物经配制用于口服投予。

49.根据权利要求48所述的药物配制物，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。

50.一种用于提高受试者的肌肉质量的方法，所述方法包含向所述受试者经口投予包含根据权利要求28所述的组合物的配制物。

51.根据权利要求50所述的方法，其中向所述受试者投予每天约5mg/kg到50mg/kg的所述组合物。

52.根据权利要求50所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到500mg的所述组合物。

53.根据权利要求50所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到2000mg的所述组合物。

54.根据权利要求50所述的方法，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。

55.一种用于增强受试者的肌肉力量的方法，其包含向所述受试者经口投予包含根据权利要求28所述的组合物的配制物。

56.根据权利要求55所述的方法，其中向所述受试者投予每天约5mg/kg到50mg/kg的所述组合物。

57.根据权利要求55所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到500mg的所述组合物。

58.根据权利要求55所述的方法，其中向所述受试者投予每天约50mg到2000mg的所述组合物。

59.根据权利要求55所述的方法，其中所述配制物进一步包含药学上可接受的载剂。