CN107619800A - 一种具有溶藻活性的链霉菌jxj0035及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种具有溶藻活性的链霉菌及其在蓝藻水华控制中的应用，该菌的保藏号为CGMCC No.13636，该菌的菌丝体、孢子和胞外产物均具有较强的溶藻活性，可以应用于抑制蓝藻水华。

Description

一种具有溶藻活性的链霉菌JXJ 0035及其应用

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种具有溶藻活性的链霉菌及其在蓝藻水华控制中的应用。

背景技术

随着全球水体富营养化的加剧，有害蓝藻水华爆发日趋频繁，中国是蓝藻水华的重灾区。蓝藻水华造成了严重的环境问题和巨大的经济损失，并严重威胁了人类健康，因此，蓝藻水华的防治引起了人们广泛重视。虽然长期控制污染源是水华防治的最有效方法，但由于经济原因，对绝大部分国家尤其是发展中国家来说，该方法不切实际，因此，有必要开发蓝藻水华短期防治技术。

目前水华防治方法包括物理方法、化学方法和生物方法三种。物理方法主要有黏土等吸附法、机械除藻法和超声波法等，但物理除藻法处理藻的能力有限，且工作量大、能耗高、可能具有潜在的二次污染，只能作为蓝藻水华的辅助性防治方法。化学除藻法主要是利用包括硫酸铜等金属盐和除草剂等除藻，虽然快速高效，但这些化学杀藻剂选择性差，对其它水生生物均有较大的毒性，且在水环境中容易富集，因此二次污染问题严重。在这些常规蓝藻水华防治方法不甚理想的情况下，寻找高效环保的蓝藻水华防治技术势在必行。

溶藻放线菌在蓝藻水华防治上的研究引起了越来越多的关注，目前报道的溶藻放线菌主要是其中的链霉菌，溶藻链霉菌能够分泌各种天然溶藻活性成分，发挥抑藻或杀藻作用。天然溶藻化合物对水华蓝藻的选择毒性强，容易降解，不易造成二次污染，而链霉菌是生理活性物质的最大产生菌，因此筛选高效溶藻链霉菌，并利用它们或它们产生的高效溶藻化合物研制高效、环境友好的杀藻剂具有巨大的潜力。

铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)是最常见和危害最大的水华蓝藻藻种，以该藻种为指示藻，筛选高效溶藻链霉菌，对蓝藻水华的有效治理具有重要的实践价值。

发明内容

本发明的目的是要提供溶藻链霉菌及分离富集溶藻链霉菌产生的高效溶藻活性物质，用以高效和安全地控制蓝藻水华。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一株具有溶藻活性的链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13636，保藏日期为2017年01月17日。保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，电话：86-10-64807355。

本发明涉及的链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035，在高氏1号培养基、营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、麦芽膏-酵母膏培养基(ISP2)、燕麦粉琼脂培养基(ISP3)和甘油天冬酰胺琼脂培养基(ISP5)都上生长良好，气丝较发达，灰白色，基丝淡黄色，产生水溶性淡黄色色素，孢子丝为螺旋状，螺旋圈数为3-7，孢子椭圆形，表面光滑，直径0.6-0.9×1-1.7μm，生长温度5-37℃(最适28℃)。经16S rRNA基因序列分析和同源性比较，得知其与Streptomyces lushanensis相似性最高(98.2％)，故鉴定为链霉菌属(Streptomyces)的成员，命名为链霉菌JXJ 0035，该菌种的16S rRNA基因在GenBank中的登录号是的KY613503，具体请见SEQ ID NO：1。

本发明提供的一种链霉菌JXJ 0035可以应用于抑制蓝藻水华。

本发明还提供了一种链霉菌JXJ 0035发酵液的制备方法：将链霉菌JXJ 0035接种于斜面培养基，28℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28℃、160rpm摇床培养2d后，按照10％(v/v)的接种量接入发酵培养基，于28℃、160rpm摇床培养10-11d，即得链霉菌JXJ 0035发酵液，此发酵液包含了具有杀藻活性的活菌丝体和菌株分泌的溶藻活性成分。

所述斜面培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，琼脂1-2％，pH为7.4，水补足；

所述液态种子培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，pH为7.4；

所述的发酵培养基中各组分的质量比为：葡萄糖1-2％，大豆豆粕粉0.5-1.5％，酵母浸粉0.1-0.3％，淀粉0.5-1.5％，蛋白胨0.1-0.3％，麦芽浸粉0.1-0.3％，NaCl 0.3-0.5％，K₂HPO₄ 0.04-0.06％，M gSO₄·7H₂O 0.04-0.06％，水补足，调pH7.8，再加CaCO₃ 0.1-0.3％。

本发明还提供了一种链霉菌JXJ 0035活干菌丝体杀藻剂的制备方法：将链霉菌JXJ 0035发酵液在4500rpm的条件下离心，将沉淀菌丝体在真空冷冻条件下干燥，即得到活干菌丝体杀藻剂。

本发明还提供了一种链霉菌JXJ 0035孢子粉杀藻剂的制备方法：先将链霉菌JXJ0035接种在PDA等固体培养基上，待孢子大量形成后，采用加热或真空冷冻法除去培养基中的水分，得到吸附在固体培养基基质上的孢子粉杀藻剂，由于放线菌孢子抗逆性较强，因此孢子粉杀藻剂便于保藏和运输。

本发明还提供了一种链霉菌JXJ 0035的溶藻活性成分的提取方法：将链霉菌JXJ0035发酵液在4500rpm的条件下离心，得到上清液，再将上清液用Amberlite XAD-16大孔吸附树脂柱吸附活性成分，然后用1倍柱体积的去离子水洗脱，除去多糖类等水溶性物质，再用1倍柱体积的30％甲醇水溶液洗脱，再用100％甲醇洗脱，收集100％甲醇洗脱液，减压蒸馏除去甲醇，得到链霉菌JXJ 0035的溶藻活性成分。

试验表明，链霉菌JXJ 0035的菌丝体、孢子和发酵上清液均具有较强的溶藻活性，特别是对危害最大的水华蓝藻微囊藻属的藻种，诸如铜绿微囊藻、惠氏微囊藻和水华微囊藻等，同时对其它丝状水华蓝藻也具有一定的溶藻活性，诸如水华束丝藻、浮游颤藻、水华鱼腥藻、点形念珠藻和小颤藻等。链霉菌JXJ 0035的菌丝体、孢子和由发酵上清液制备的溶藻活性成分粗提物均可用于蓝藻水华的防治。

说明书附图

图1为链霉菌JXJ 0035不同发酵时间的发酵上清液对铜绿微囊藻FACHB-905的溶藻效率；

图2为链霉菌JXJ 0035的菌丝体对铜绿微囊藻FACHB-905的溶藻效率；

图3为加入铜绿微囊藻藻液的链霉菌JXJ 0035孢子在藻液中萌发，并生长形成大量菌丝体，导致藻细胞大量死亡，其中圆圈内是菌丝体包裹的藻细胞。装片用番红染料染色；

图4为链霉菌JXJ 0035发酵上清液对9种不同水华蓝藻的溶藻效率，其中1，Microcystis aeruginosa FACHB-905；2，Microcystis wesenbergii FACHB-1112；3，Microcystis viridis FACHB-1284；4，Microcystis flos-aquae FACHB-1285；5，Oscillatoria tennuis FACHB-247；6，Oscillatoria planctonica FACHB-708；7，Nostocpunctiforme FACHB-252；8，Anabaena flos-aquae FACHB-1092；9，Aphanizomenon flos-aquae FACHB-1171；

图5为链霉菌JXJ 0035产生的溶藻化合物紫外检测及茴香醛显色剂显色特征，其中a为溶藻活性成分在紫外线254nm下的吸收(吸收很弱)，b为茴香醛显色剂显色特征(方圈中的物质即为溶藻活性成分)；

图6为链霉菌JXJ 0035的溶藻活性成分在铜绿微囊藻藻平板上的溶藻活性，样品浓度30μg/张滤纸片，a为3d后的溶藻圈，b为6d后的溶藻圈。

具体实施方式

实施例1

一株具有溶藻活性的链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035，保藏号CGMCCNo.13636，在高氏1号培养基、营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、麦芽膏-酵母膏培养基(ISP2)、燕麦粉琼脂培养基(ISP3)和甘油天冬酰胺琼脂培养基(ISP5)都上生长良好，气丝较发达，灰白色，基丝淡黄色，产生水溶性淡黄色色素，孢子丝为螺旋状，螺旋圈数为3-7，孢子椭圆形，表面光滑，直径0.6-0.9×1-1.7μm，生长温度5-37℃(最适28℃)。该菌种的16S rRNA基因在GenBank中的登录号是的KY613503，可以应用于抑制蓝藻水华。

链霉菌JXJ 0035发酵液的制备方法：将链霉菌JXJ 0035接种于斜面培养基，28℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28℃、160rpm摇床培养2d后，按照10％(v/v)的接种量接入发酵培养基，于28℃、160rpm摇床培养10-11d，即得链霉菌JXJ 0035发酵液。

斜面培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2％，麦芽浸膏粉0.3％，酵母浸膏粉0.2％，琼脂1％，pH为7.4，水补足；

液态种子培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2％，麦芽浸膏粉0.3％，酵母浸膏粉0.2％，pH为7.4；

发酵培养基中各组分的质量比为：葡萄糖1％，大豆豆粕粉0.5％，酵母浸粉0.1％，淀粉0.5％，蛋白胨0.1％，麦芽浸粉0.1％，NaCl 0.3％，K₂HPO₄ 0.04％，M gSO₄·7H₂O0.04％，水补足，调pH7.8，再加CaCO₃ 0.1％。

链霉菌JXJ 0035活干菌丝体杀藻剂的制备方法：将链霉菌JXJ 0035发酵液在4500rpm的条件下离心，将沉淀菌丝体在真空冷冻条件下干燥，即得到活干菌丝体杀藻剂。

链霉菌JXJ 0035孢子粉杀藻剂的制备方法：先将链霉菌JXJ 0035接种在PDA等固体培养基上，待孢子大量形成后，采用加热或真空冷冻法除去培养基中的水分，得到吸附在固体培养基基质上的孢子粉杀藻剂，由于放线菌孢子抗逆性较强，因此孢子粉杀藻剂便于保藏和运输。

链霉菌JXJ 0035的溶藻活性成分的提取方法：将链霉菌JXJ 0035发酵液在4500rpm的条件下离心，得到上清液，再将上清液用Amberlite XAD-16大孔吸附树脂柱吸附活性成分，然后用1倍柱体积的去离子水洗脱，除去多糖类等水溶性物质，再用1倍柱体积的30％甲醇水溶液洗脱，再用100％甲醇洗脱，收集100％甲醇洗脱液，减压蒸馏除去甲醇，得到链霉菌JXJ 0035的溶藻活性成分。

实施例2

链霉菌JXJ 0035发酵液的制备方法：将链霉菌JXJ 0035接种于斜面培养基，28℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28℃、160rpm摇床培养2d后，按照10％(v/v)的接种量接入发酵培养基，于28℃、160rpm摇床培养10-11d，即得链霉菌JXJ 0035发酵液。

斜面培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.6％，麦芽浸膏粉0.7％，酵母浸膏粉0.6％，琼脂2％，pH为7.4，水补足；

液态种子培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.6％，麦芽浸膏粉0.7％，酵母浸膏粉0.6％，pH为7.4；

发酵培养基中各组分的质量比为：葡萄糖2％，大豆豆粕粉1.5％，酵母浸粉0.3％，淀粉1.5％，蛋白胨0.3％，麦芽浸粉0.3％，NaCl 0.5％，K₂HPO₄0.06％，M gSO₄·7H₂O0.06％，水补足，调pH7.8，再加CaCO₃ 0.3％。

实施例1 溶藻链霉菌的筛选

固体平板筛选：将土样、湖泊和池塘水样及泥样等各种环境的样品，采用稀释涂布法分离其中的链霉菌，将获得纯培养的链霉菌用点接法接种于ISP2固体培养基上，待链霉菌气生菌丝开始形成即采用无菌打孔器，将菌落连同其上的琼脂块一同打下，并放置于铜绿微囊藻HGZ固体藻平板上，在25℃的光照培养箱中培养，光暗周期比为12h∶12h(光照∶黑暗)，光照强度为30-50μmol photon/m²/s，1-3d后观察链霉菌菌落周围溶藻圈的有无及大小，选取溶藻圈明显且较大的菌株JXJ 0035进一步研究。

HGZ培养基组成：NaNO₃ 496mg，KH₂PO₄ 39mg，MgSO₄·7H₂O 75mg，CaCl₂·2H₂O36mg，Na₂SiO₃·9H₂O 58mg，土壤提取液3ml，PIV金属盐溶液3ml(Na₂-EDTA 75mg，FeCl₃·6H₂O 9.7mg，MnCl₂·4H₂O 4.1mg，ZnCl₂ 0.5mg，CoCl₂·6H₂O 0.2mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.4mg，蒸馏水100ml)，琼脂20g(液体培养基不要琼脂)，蒸馏水994ml，pH 8-8.5。

铜绿微囊藻藻平板制备：在灭菌并冷却至45-50℃的HGZ固体培养基中，加入30％(v/v)左右的铜绿微囊藻藻液(藻细胞密度约为5×10⁷CFU/ml)，混匀后迅速倒入无菌培养皿中，置于光照培养箱中培养，培养温度25℃，时间7-10d，光暗周期比为12h：12h(光照：黑暗)，光照强度为30-50μmol photon/m²/s。

液体溶藻活性筛选：将固体藻平板上溶藻活性好的菌采用液体发酵，先将链霉菌的孢子接种于ISP2液体培养基中，在28℃、160rpm条件下培养2-3d，再按照10％(v/v)的接种量接入发酵培养基中(配方：葡萄糖15g，大豆豆粕粉10g，酵母浸粉2g，淀粉10g，蛋白胨2g，麦芽浸粉2g，NaCl 4g，K2HPO₄ 0.5g，M gSO₄·7H₂O 0.5g，H₂O 1000ml，pH7.8，定容调pH后，再加CaCO₃ 2g)，28℃、160rpm条件下培养6-7d后，在4500rpm条件下离心20min，取上清液，并在铜绿微囊藻FACHB-905藻液(藻细胞密度为5×10⁶CFU/ml)中加入3％(v/v)链霉菌发酵上清液，培养3d后计算其溶藻效率。对照组加入3％(v/v)的无菌水。选择溶藻效率高的菌株进一步研究。

藻液培养条件：用HGZ液体培养基培养铜绿微囊藻FACHB-905，放置于25℃的光照培养箱中培养，光暗周期比为12h∶12h(光照∶黑暗)，光照强度为30-50μmol photon/m²/s，光照培养4h和8h各振荡1次，每次30s。

溶藻效率计算方法：溶藻效率(％)＝100×(对照组藻细胞密度或叶绿素a含量-试验组藻细胞密度或叶绿素a含量)/对照组藻细胞密度或叶绿素a含量，其中藻细胞密度采用血球计数板测定，叶绿素a含量采用热乙醇方法测定。

实施例2 链霉菌JXJ 0035的鉴定

用形态观察、染色、生理生化反应、16S rRNA基因序列分析等方法对溶藻活性好的菌株JXJ 0035进行鉴定，该菌为革兰氏阳性，丝状微生物，气丝发达，灰白色，基丝淡黄色，产生水溶性淡黄色色素，孢子丝为螺旋状，螺旋圈数为3-7，孢子椭圆形，表面光滑，直径0.6-0.9×1-1.7μm，生长温度5-37℃(最适28℃)。经16S rRNA基因序列分析和同源性比较，得知其与链霉菌Streptomyces lushanensis相似性最高(98.2％)，故鉴定为链霉菌属的成员，命名为链霉菌JXJ 0035。该菌已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13636，保藏日期为2017年01月17日。保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，电话：86-10-64807355。

实施例3 链霉菌JXJ 0035的发酵时间

采用液体溶藻活性的筛选条件，对菌株链霉菌JXJ 0035进行培养，培养期间每24h取样1次，连续取样13次，样品在4500rpm条件下离心，取3％(v/v)的发酵上清液加入铜绿微囊藻藻液中(藻细胞密度为5×10⁶CFU/ml)，再采用上述藻液培养方法培养3d后检测发酵上清液的溶藻效率，根据溶藻效率确定菌株的发酵时间。所有试验重复3次，试验数据表示成平均值±标准差的形式。试验结果(图1)表明，11d后发酵上清液对铜绿微囊藻的溶藻效率达到90％以上，此后没有明显变化，因此，确定发酵时间为11d。

实施例4 链霉菌JXJ 0035的菌丝体和孢子的溶藻活性

链霉菌JXJ 0035的菌丝体的溶藻效率，在100ml铜绿微囊藻藻液(藻细胞密度为5×10⁶CFU/ml)中，分别加入湿重为0.00g、0.15g、0.30g、0.45g和0.60g菌丝体，在上述光照条件下培养3d后检测溶藻效率。所有试验重复3次，试验数据表示成平均值±标准差的形式。试验结果(图2)表明，链霉菌JXJ 0035的菌丝体具有较好的溶藻效率，且呈剂量效应，在0.60g/100ml藻液时，溶藻效率达到(70.98±1.81)％。

链霉菌JXJ 0035孢子的溶藻活性，用无菌水将链霉菌孢子配成约1×10⁸CFU/ml的孢子悬液，取1ml孢子悬液加到100m1铜绿微囊藻藻液中(藻细胞密度为5×10⁶CFU/m1)，培养10d后检测溶藻效率，并镜检孢子萌发、菌丝生长和藻细胞生长等情况。本试验重复3次，溶藻效率表示成平均值±标准差的形式。结果表明，链霉菌JXJ 0035的孢子加入铜绿微囊藻藻液后，能够萌发并生长形成大量菌丝体，将藻细胞包裹其中(图3)，圆圈内为藻细胞，在试验条件下，溶藻效率为(53.41±1.36)％。

实施例5 链霉菌JXJ 0035发酵液的制备

将链霉菌JXJ 0035接种于斜面培养基，28℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28℃、160rpm摇床培养2d后，按照10％(v/v)的接种量接入发酵培养基，于28℃、160rpm摇床培养10-11d，即得链霉菌JXJ 0035发酵液，此发酵液包含了具有杀藻活性的活菌丝体和菌株分泌的溶藻活性成分。

其中，斜面培养基各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，琼脂1-2％，pH为7.4，水补足；液态种子培养基各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，pH为7.4；发酵培养基各组分的质量比为：葡萄糖1-2％，大豆豆粕粉0.5-1.5％，酵母浸粉0.1-0.3％，淀粉0.5-1.5％，蛋白胨0.1-0.3％，麦芽浸粉0.1-0.3％，NaCl 0.3-0.5％，K₂HPO₄ 0.04-0.06％，MgSO₄·7H₂O 0.04-0.06％，，水补足，调pH7.8，再加CaCO₃ 0.1-0.3％。

实施例6 链霉菌JXJ 0035的发酵上清液对不同水华蓝藻的溶藻效率

取链霉菌JXJ 0035发酵11d的发酵上清液，按照藻液体积3％的剂量加入不同水华蓝藻，放置于25℃的光照培养箱中培养，光暗周期比为12h∶12h(光照∶黑暗)，光照强度为30-50μmol photon/m²/s，光照培养4h和8h各振荡1次，每次30s，3d后测溶藻效率。所有试验重复3次，试验数据表示成平均值±标准差的形式。结果(图4)显示，链霉菌JXJ 0035的发酵上清液对微囊藻具有很好的溶藻效率，对本试验中的4种微囊藻的溶藻效率达到(85.93±1.94)％以上，对其它丝状蓝藻也具有一定的溶藻效率，为(24-47)％。试验藻种均购自中国科学院水生生物研究所淡水藻种库，其中，1为铜绿微囊藻FACHB-905；2为惠氏微囊藻FACHB-1112；3为绿色微囊藻FACHB-1284；4为水华微囊藻FACHB-1285；5为小颤藻FACHB-247；6为浮游颤藻FACHB-708；7为点形念珠藻FACHB-252；8为水华鱼腥藻FACHB-1092；9为水华束丝藻FACHB-1171。

实施例7链霉菌JXJ 0035溶藻活性成分的提取及其溶藻活性

链霉菌JXJ 0035溶藻活性成分的提取，将链霉菌JXJ 0035发酵液在4500rpm的条件下离心，上清液用Amberlite XAD-16大孔吸附树脂柱吸附活性成分，然后用1倍柱体积的去离子水洗脱，除去多糖类等水溶性物质，再用1倍柱体积的30％的甲醇水溶液洗脱，再用100％的甲醇洗脱，收集100％的甲醇洗脱液，减压蒸馏除去甲醇，得到溶藻活性成分的粗提物，该活性成分(方圈中的物质)在紫外线254nm下吸收很弱，茴香醛显色剂显紫红色(图5)。

链霉菌JXJ 0035的溶藻活性成分，取无菌滤纸片1张，用移液器取溶藻活性成分溶液(含30μg样品)滴在滤纸片上，待溶剂完全挥发后，将含溶藻活性成分的滤纸片置于铜绿微囊藻藻平板上，置于25℃的光照培养箱中培养，光暗周期比为12h：12h(光照：黑暗)，光照强度为30-50μmol photon/m²/s，定期观察。结果(图6)显示，溶藻圈直径3d后达到4.8cm，6d后达到6.2cm。

实施例8 链霉菌JXJ 0035活干菌丝体杀藻剂的制备

将链霉菌JXJ 0035液离心，将得到的菌丝体进行真空冷冻干燥处理，即得到具有较强溶藻活性的活菌丝体干丝体杀藻剂。

实施例9 链霉菌JXJ 0035孢子粉杀藻剂制备

将溶藻链霉菌的孢子接种于PDA等固体培养基上，待产生的大量孢子成熟后，即可采用加热或真空冷冻干燥，除去固体培养基中的水分，得到吸附在固体培养基基质上的溶藻放线菌孢子粉杀藻剂，由于放线菌孢子抗逆性较强，因此孢子粉杀藻剂便于保藏和运输。

SEQ ID NO:1

<110>九江学院

<120>一种具有溶藻活性的链霉菌JXJ 0035及其应用

<210>1

<211>1463

<212>RNA

<213>链霉菌JXJ 0035

TCACGGGCGG CCTGCTAAAC ATGCAGGTCG AACGATGAAG CCCTTCGGGG TGGATTAGTG 60

GCGAACGGGT GAGTAACACG TGGGCAATCT GCCCTTCACT CTGGGACAAG CCCTGGAAAC 120

GGGGTCTAAT ACCGGATAAC ACTGTTCCCT GCATGGGGGA TGGTTGAAAG CTCCGGCGGT 180

GAAGGATGAG CCCGCGGCCT ATCAGCTTGT TGGTGGGGTG ATGGCCTACC AAGGCGACGA 240

CGGGTAGCCG GCCTGAGAGG GCGACCGGCC ACACTGGGAC TGAGACACGG CCCAGACTCC 300

TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGGA AGCCTGATGC AGCGACGCCG 360

CGTGAGGGAT GACGGCCTTC GGGTTGTAAA CCTCTTTCAG CAGGGAAGAA GCGTGAGTGA 420

CGGTACCTGC AGAAGAAGCG CCGGCTAACT ACGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGTAGGG 480

CGCAAGCGTT GTCCGGAATT ATTGGGCGTA AAGAGCTCGT AGGCGGCCTG TCGCGTCGGA 540

TGTGAAAGCC CGGGGCTCAA CCCCGGGTCT GCATTCGATA CGGGCAGGCT AGAGTGTGGT 600

AGGGGAGATC GGAATTCCTG GTGTAGCGGT GAAATGCGCA GATATCAGGA GGAACACCGG 660

TGGCGAAGGC GGATCTCTGG GCCATTACTG ACGCTGAGGA GCGAAAGCGT GGGGAGCGAA 720

CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGTTGG GAACTAGGTG TTGGCGACAT 780

TCCACGTCGT CGGTGCCGCA GCTAACGCAT TAAGTTCCCC GCCTGGGGAG TACGGCCGCA 840

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TCGACGCAAC GCGAAGAACC TTACCAAGGC TTGACATACA CCGGAAACTG GCAGAGATGT 960

CAGCCCCCTT GTGGTCGGTG TACAGGTGGT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTCGTGAGA 1020

TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA CGAGCGCAAC CCTTGTTCTG TGTTGCCAGC ATCCCTTTCG 1080

GGGTGATGGG GACTCCCAGG AGACTGCCGG GGTCAATTCG GAGGAAGGTG GGGAGGACGT 1140

CAAGTCATCA TCCCCCTTAT GTCTTGGGCT GCCCACGTGC TCCAATGGCC GGTCCAATGA 1200

GCTGGGATCC CGTGAGGCGG AGCGAATCTC AAAAACCCGG TCTCAGTTCG GATTGGGGTC 1260

GGCAACTGGC CCCCATGAAT TCGGAGTTGC TAGTAATCGC AGATCACCAT TGCTGCGGTG 1320

AATACGTTCC CGGCCCTTGT CCACCCCGCC CGTCACGTCA CGAAAGTCGG TAACACCGGA 1380

AGCCGGTGGC CCAACCCCCT TGCGGGGAGG GAGCTGTCGA AGGTGGGACT GGCGATTGGA 1440

CGAAGTCGAA CAAGAGCCCC CCG 1463

Claims (8)

1.一种具有溶藻活性的链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13636，保藏日期为2017年01月17日。

2.如权利要求1所述的链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035在抑制蓝藻水华中的应用。

3.根据权利要求2所述的链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035在抑制蓝藻水华中的应用，其特征在于：所述的蓝藻为铜绿微囊藻。

4.一种链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035发酵液的制备方法，其特征在于：将链霉菌JXJ 0035接种于斜面培养基，28℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28℃、160rpm摇床培养2d后，按照体积比10％的接种量接入发酵培养基，于28℃、160rpm摇床培养10-11d，即得链霉菌JXJ 0035发酵液。

5.根据权利要求4所述的一种链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035发酵液的制备方法，其特征在于，所述斜面培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，琼脂1.5-2％，pH为7.4，水补余至100％；所述液态种子培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，水补余至100％，pH为7.4；所述发酵培养基中各组分的质量比为：葡萄糖1-2％，大豆豆粕粉0.5-1.5％，酵母浸粉0.1-0.3％，淀粉0.5-1.5％，蛋白胨0.1-0.3％，麦芽浸粉0.1-0.3％，NaCl 0.3-0.5％，K₂HPO₄ 0.04-0.06％，MgSO₄·7H₂O 0.04-0.06％，水补余至100％，调pH7.8，再加CaCO₃ 0.1-0.3％。

6.一种链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035活干菌丝体杀藻剂的制备方法，其特征在于：将链霉菌JXJ 0035发酵液在4500rpm的条件下离心，将沉淀菌丝体在真空冷冻条件下干燥，即得到活干菌丝体杀藻剂。

7.一种链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035孢子粉杀藻剂的制备方法，其特征在于：先将链霉菌JXJ 0035接种在固体培养基上，待孢子大量形成后，采用加热或真空冷冻法除去培养基中的水分，得到吸附在固体培养基基质上的孢子粉杀藻剂。

8.一种链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035溶藻活性成分的提取方法，其特征在于：将链霉菌JXJ 0035发酵液在4500rpm的条件下离心，得到上清液，再将上清液用AmberliteXAD-16大孔吸附树脂柱吸附活性成分，然后用1倍柱体积的去离子水洗脱，除去水溶性物质，再用1倍柱体积的30％甲醇水溶液洗脱，再用100％甲醇洗脱，收集100％甲醇洗脱液，减压蒸馏除去甲醇，得到链霉菌JXJ 0035的溶藻活性成分。