CN107602661A

CN107602661A - 一种聚普瑞锌的制备方法

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Publication number: CN107602661A
Application number: CN201710737311.XA
Authority: CN
Inventors: 杜体建; 孙蕊; 高健; 肖景超; 刘志刚; 杨光; 李炬
Original assignee: YANTAI WANRUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: YANTAI WANRUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2017-08-24
Filing date: 2017-08-24
Publication date: 2018-01-19
Anticipated expiration: 2037-08-24
Also published as: CN107602661B

Abstract

本发明公开了一种聚普瑞锌的制备方法，属于制药技术领域。其包括如下步骤：将2‑氰基乙酰氯与二氯甲烷配成溶液，滴加至三甲基硅基保护的L‑组氨酸的二氯甲烷溶液中，加入咪唑，得到(s)‑2‑氰基乙酰氨基‑3‑(1H‑咪唑‑4‑基)丙酸；经催化氢化反应，得到L‑肌肽粗品；经碱性大孔离子交换树脂吸附，用碱金属的醋酸盐水溶液冲洗，经喷雾干燥，得到L‑肌肽的碱金属盐固体；溶于甲醇中，加入醋酸锌的甲醇溶液，经甲醇水溶液打浆精制后，得到聚普瑞锌的精品。本发明可以获得高纯度的L‑肌肽钠和聚普瑞锌，聚普瑞锌精制烘干工艺耗时少，精品聚普瑞锌易于粉碎，收率高，成本低，适用于工业化生产。

Description

一种聚普瑞锌的制备方法

技术领域

本发明涉及一种聚普瑞锌的制备方法，属于制药技术领域。

背景技术

聚普瑞锌是由日本Hamari新药株式会社开发的新型抗溃疡药物，它是第一个用于临床的含锌化合物，该药于1994年以商品名Promac在日本上市，剂型为颗粒剂。聚普瑞锌是L-肌肽锌络合物，其结构式如下：

L-肌肽是由β-丙氨酸和L-组氨酸组成的二肽，它是一种抗氧化剂；锌可以促进伤口愈合。临床实验数据表明，聚普瑞锌具有抗氧化及膜稳定的作用，从而保持胃粘膜体内平衡，达到保护胃粘膜细胞的作用，同时它也能促进伤口愈合，增强防御因子作用，达到防治消化性溃疡的作用。

现有的制备聚普瑞锌的方法陈述如下：

1.从哺乳动物的肌肉中提取L-肌肽，L-肌肽经成盐、配位反应得到聚普瑞锌。该方法所用L-肌肽中含有铁及铁合血红素等杂质，严重影响了所得聚普瑞锌的品质，故该方法未在工业上得到规模应用。

2.不同的化工原料为初始原料，化学合成L-肌肽，L-肌肽经成盐(与氢氧化钠、甲醇钠或碱性树脂等)、锌盐配位反应得到聚普瑞锌。该类方法中生产的L-激肽避免了引入生化杂质，聚普瑞锌品质及安全性显著提高。具体合成L-肌肽的方法总结如下：

1)Sifferd等以β-丙氨酸为原料合成N-苄氧羰基-β-丙氨酸，再与亚硝酸钠反应生成N-苄氧羰基叠氮，然后与L-组氨酸甲酯反应，再经水解、氢解得到L-肌肽。该方法中间体涉及易爆炸的叠氮化物，制备过程存在极大的安全隐患，不适合工业化生产。

2)Vnick等从β-丙氨酸出发，先合成二氢-1,3-噻唑-2,4-二酮中间体，再与L-组氨酸反应。得L-肌肽。此方法，生成的杂质较多，产品质量差，生产过程产生对环境污染严重的有毒硫化物。

3)Skoblik等和张国林等以Boc-β-丙氨酸或N-苄氧羰基-β-丙氨酸为原料，分别与丁二酰羟亚胺反应得到相应的N-羟基丁二酰羟亚胺酯，再与L-组氨酸反应得到二肽，脱保护基后，得L-肌肽，该方法，步骤长，生产成本高，不宜工业化生产。

4)日本专利P2005-306782，以L-组氨酸及β-丙氨酸为原料，分别与对甲苯磺酸反应，生成相应的对甲苯磺酸盐，此两种盐加热反应，生成L-肌肽的对甲苯磺酸盐，后经离子交换树脂交换，得到L-肌肽，此路线短，但是产生大量的强酸废水，环保成本压力极大，且制备所得产品收率及品质均较低，不适合大规模工业化生产。

5)李晓萌以L-组氨酸及β-丙氨酸为原料，分别经过硅保护，邻苯二甲酰基保护，分别生成三甲基硅基保护的L-组氨酸及邻苯二甲酰基丙氨酸，邻苯二甲酰基保护的丙氨酸转化成酰氯，再与三甲基硅基保护的L-组氨酸反应，生成邻苯二甲酰基-L-肌肽，最后经肼解反应，制备得到L-肌肽。此合成路线，较长，收率偏低，成本偏高但是制备所得产品质量较好，可以满足制备聚普瑞锌的要求，国内已有企业应用该路线生产L-肌肽(详见李晓萌.氨基酸衍生物的合成及性能研究[D].济南：山东轻工业学院，2010：39-61)。

6)US7162048报道，L-组氨酸和氰乙酸乙酯为原料，醇钠为催化剂，经氨解反应合成N-氰乙酰-L-组氨酸，经催化氢化获得L-肌肽。该路线较短，但是生成的杂质较多，纯化困难，且用到了额价格格较贵的铑碳催化剂，成本高。

7)日本特开公平07-116160号专利及日本特开2007-204397号专利中，L-肌肽经成盐反应后、在醇类溶剂中配位反应得到结晶性聚普瑞锌，所得聚普瑞锌含有大量的碱金属盐，需经大量水洗涤除去该类盐，经水洗涤后的聚普瑞锌，粘度大且含有大量的水，过滤时间长，需长时间烘干，且烘干后的聚普瑞锌为硬块或硬球，需长时间粉碎，才能达到目标粒径。

3.CN101659641专利，以L-肌肽为原料，将L-肌肽溶于纯化水，经离子交换树脂活化，再与锌盐反应制备得到聚普瑞锌。该方法优势是反应过程避免了使用有机溶剂，合成成本低，但是由此方法合成得到的聚普瑞锌为无定型态，现在规模化生产用于制造聚普瑞锌制剂的原料为结晶性聚普瑞锌。

4.KR2017023417专利，以L-肌肽为原料，L-肌肽和醋酸锌的醇混悬液中，加入自制醇的碱金属盐，制备聚普瑞锌，加纯化水精制聚普瑞锌，除去副产物醋酸盐。该方法使用醇的碱金属盐为有机强碱，碱性过强，极易产生杂质并发生副反应，产品的后续精制困难。

综上，上述方法存在缺点是：中间体L-肌肽纯度低且杂质含量高、聚普瑞锌精制和烘干消耗时间长，产生大量废水、污染严重、工艺复杂、收率低、成本高等。鉴于此，有必要研发一种原材料廉价易得，工艺简单、生产成本低的聚普瑞锌的制备方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种聚普瑞锌的制备方法。本发明可以获得高纯度的L-肌肽和聚普瑞锌，聚普瑞锌精制烘干工艺耗时少，精品聚普瑞锌易于粉碎，收率高，成本低，适用于工业化生产。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种聚普瑞锌的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：在1,2-二氯乙烷存在下，将L-组氨酸、浓硫酸与六甲基二硅胺烷按照摩尔比为1.0:(0.1～0.2):(1.5～5.5)混合在一起，于常压、25～100℃，反应8～16小时，再于-0.08～-0.1MPa、50～80℃，蒸除上述1,2-二氯乙烷和六甲基二硅胺烷，在残余物里加入二氯甲烷混匀，得到三甲基硅基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液；

步骤2：在甲苯存在下，2-氰基乙酸与酰化试剂按照摩尔比为1.0：(1.5～2.5)混合在一起，在常压、25～100℃，反应8～16小时，再于-0.08～-0.1MPa，50～85℃，蒸除上述甲苯和酰化试剂，得到2-氰基乙酰氯；

步骤3：控制反应温度-10～0℃，将步骤2得到的2-氰基乙酰氯与二氯甲烷配成2-氰基乙酰氯质量分数为8～15％的溶液，滴加至步骤1得到的三甲基硅基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液中，0～30℃保温反应3～8小时，加入咪唑，继续保温0.5小时，于-0.08～-0.09MPa下蒸出二氯甲烷，加入甲醇重结晶，得到(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，其中，所述三甲基硅基保护的L-组氨酸与2-氰基乙酰氯和咪唑的摩尔比为1.0:(1.1～1.5):(1.0～1.5)；

步骤4：将步骤3得到的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，在催化剂下，经催化氢化反应，生成L-肌肽，过滤除去上述催化剂，滤液蒸出甲醇和水的混合物，残余物用甲醇水溶液打浆，得到L-肌肽粗品；

步骤5：将步骤4得到的L-肌肽粗品溶于纯化水，经碱性大孔离子交换树脂吸附，用碱金属的醋酸盐水溶液冲洗，得到L-肌肽碱金属盐的水溶液，经喷雾干燥，得到L-肌肽的碱金属盐固体；

步骤6：将步骤5得到的L-肌肽的碱金属盐固体溶于甲醇中，加入醋酸锌的甲醇溶液，反应1～3小时，过滤，得到聚普瑞锌粗品，经甲醇水溶液打浆精制后，得到聚普瑞锌的精品。

上述步骤1中，所述制备三甲基硅基保护的L-组氨酸的反应方程式如下：

步骤2中，所述制备2-氰基乙酰氯的反应方程式如下：

步骤3中，所述制备(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸的反应方程式如下：

步骤4中，所述制备L-肌肽的反应方程式如下：

步骤6中，所述制备聚普瑞锌的反应方程式如下：

本发明的合成路线是：

本发明的步骤3中，三甲基硅基保护的L-组氨酸和2-氰基乙酰氯-10～0℃下快速反应，制备得到高纯度(纯度99％以上)的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，此过程不产生废水。而US164028中所述L-组氨酸和2-氰基乙酸乙酯在大极性高沸点溶剂中，高温及强碱的作用下才发生胺解反应，生成纯度低(纯度67～72％)的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，且产生大量废水。本申请人分析原因如下：L-组氨酸中的氨基及羧基未进行保护，一方面溶解性差，需要使用大极性的高沸点溶剂，使L-组氨酸尽可能溶解参与反应，另一方面在强碱及高温的条件下，未经保护基保护的L-组氨酸及氰基乙酸乙酯更容易发生副反应，产生更多的杂质；从反应机理上将，经胺解反应制备酰胺的反应活性比经胺与酰氯反应制备酰胺的活性低，反应速率慢，反应时间更长，L-组氨酸中的氨基发生副反应的概率急剧增大。

步骤5中，L-肌肽溶于纯化水，过碱性大孔离子交换树脂，实现了L-肌肽精制及成盐一步完成，减少了工艺步骤，节省工时。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，步骤1所述浓硫酸的质量百分数为95～98％；所述三甲基硅基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液中三甲基硅基保护的L-组氨酸的质量百分数为40～45％。

进一步，步骤2所述酰化试剂为二氯亚砜或者草酰氯。

进一步，步骤4所述催化剂为雷尼镍和Ru-C的混合物；所述催化氢化的温度为80～100℃，压力为3.0～5.0MPa,反应时间为1～5小时。

采用上述进一步的有益效果是：高纯度的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸经过雷尼镍和Ru-C混合催化剂催化氢化，产品经甲醇水溶液打浆,再经碱性大孔离子交换树脂纯化后,可以高收率地制备得到高纯度的L-肌肽钠(收率85～88％，HPLC纯度99.5～99.9％)，解决了现有方法中L-肌肽钠纯度低、收率低且杂质含量高的问题。

进一步，步骤4所述甲醇水溶液的质量百分数为95～99％。

采用上述进一步的有益效果是：更容易纯化除去杂质。

进一步，步骤5所述碱性大孔离子交换树脂为碱性大孔阴离子交换树脂。

采用上述进一步的有益效果是：可以实现L-肌肽精制和成盐一步完成，减少工艺，节约工时。

进一步，步骤5所述碱金属的醋酸盐为醋酸钠、醋酸钾、三水合醋酸钠中的一种。

进一步，步骤6所述甲醇水溶液的质量百分数为95～99％，所述甲醇水溶液的用量为聚普瑞锌粗品质量的3～15倍。

采用上述进一步的有益效果是：用质量百分数为95～99％的甲醇水溶液对聚普瑞锌粗品进行精制，不会出现现有技术中用纯水打浆精制聚普瑞锌粗品所出现的产品发粘、过滤困难、烘干时间长、烘干品硬等问题。此外，用质量分数为95～99％的甲醇水溶液精制聚普瑞锌粗品时，产品松散，过滤容易，烘干容易。

本发明的有益效果：

(1)本发明可以获得高纯度的L-肌肽钠和聚普瑞锌，聚普瑞锌精制烘干工艺耗时少，精品聚普瑞锌易于粉碎，收率高，成本低，适用于工业化生产。

(2)三甲基硅基保护的L-组氨酸和2-氰基乙酰氯-10～0℃下快速反应，制备得到高纯度(纯度99％以上)的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，此过程不产生废水。

(3)高纯度的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸经过雷尼镍和Ru-C混合催化剂催化氢化，产品经甲醇水溶液打浆,再经碱性大孔离子交换树脂纯化后,可以高收率地制备得到高纯度的L-肌肽钠(收率85～88％，HPLC纯度99.5～99.9％)，解决了现有方法中L-肌肽钠纯度低、收率低且杂质含量高的问题。

(4)用质量百分数为95～99％的甲醇水溶液对聚普瑞锌粗品进行精制，不会出现现有技术中用纯水打浆精制聚普瑞锌粗品所出现的产品发粘、过滤困难、烘干时间长、烘干品硬等问题。此外，用质量分数为95～99％的甲醇水溶液精制聚普瑞锌粗品时，产品松散，过滤容易，烘干容易。

(5)本发明的制备方法简单，市场前景广阔，适合规模化生产。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1

本实施例的聚普瑞锌的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：500mL三口瓶中，依次将18.4g L-组氨酸(0.118mol)、1.2g浓硫酸(0.01188mol)、66.8g六甲基二硅胺烷(0.414mol)、376.8g 1,2-二氯乙烷加入反应瓶，于常压、60～65℃，体系回流保温反应，体系中白色固体逐渐溶解，反应8小时后，再于-0.08～-0.1MPa、50～80℃，蒸除上述1,2-二氯乙烷和六甲基二硅胺烷，得42.4g橙黄色残余物(液体)，收率96.80％。残余物与57.8g二氯甲烷混匀，配成溶液，即为三甲基硅基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液。

步骤2：1L三口瓶中，依次将24.1g(0.283mol)2-氰基乙酸、50.5g(0.425mol)二氯亚砜、152.4g甲苯加入反应瓶，60～62℃加热，体系回流保温反应，反应5小时后，于-0.08～-0.1MPa，50～85℃，蒸除上述甲苯和二氯亚砜，得淡黄色液体28.0g，即为2-氰基乙酰氯，收率95.6％，GC纯度99.1％。

步骤3：将步骤1得到的三甲基硅烷基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液(含87.6g三甲基硅烷基保护的L-组氨酸和119.4g二氯甲烷)加入1L三口瓶，-4.0～-0.5℃，开始滴加27.0g(0.261mol)2-氰基乙酰氯与298.4g二氯甲烷配制成的溶液，滴毕2-氰基乙酰氯溶液，升温至28±2℃保温反应，6小时后停止反应，加入17.8g咪唑(0.261mol)，继续保温0.5小时，于-0.08～-0.09MPa下蒸出二氯甲烷，加入200.0g甲醇重结晶，得到51.9g白色粉末状固体，即为(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，收率96.8％，产品HPLC纯度99.1％。

步骤4：2L加压釜中，依次加入步骤3得到的40.0g(0.18mol)(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸、3.2g雷尼镍和3.2g Ru-C的混合物为催化剂，加入377.0g浓氨水和250.0g甲醇，氮气置换两次，加热至95℃，氢气充压至4MPa,保温反应3小时，降温，过滤除去上述催化剂，0.09MPa,60～80℃，蒸出甲醇和水的混合物，得170.0g液体，加入550.0g质量百分数为98％的甲醇水溶液，降温至0～10℃，加入0.1g L-肌肽，搅拌析晶8小时，过滤，滤饼于45℃，-0.08MPa烘干，得到8.8g固体，即为L-肌肽粗品，收率85.2％，HPLC纯度98.5％。

步骤5：250mL三口瓶中，加入步骤4得到的13.4g L-肌肽粗品、134g去离子水，机械搅拌，固体全溶，体系为淡黄色溶液，将所得溶液通过装入预处理后的134g碱性大孔阴离子交换树脂的树脂柱，吸附活化，流速0.8vvh^-1,质量百分数为3％的醋酸钠溶液洗脱，当体系中无L-肌肽钠盐析出时，合并洗脱液，经喷雾干燥，得到27.4g L-肌肽钠与乙酸钠的混合物，含乙酸钠50％，收率85.7％，L-肌肽钠的HPLC纯度99.91％。

步骤6：1L三口瓶中，加入400g甲醇、步骤5得到的54.8g L-肌肽钠盐与乙酸钠的混合物(含27.4g L-肌肽钠的碱金属盐，0.103mol)溶解，滴加22.67g二水合醋酸锌(0.103mol)和260g甲醇的混合液,15分钟滴加完毕，滴毕，保温2小时，过滤，滤饼用80g甲醇淋洗两次，滤饼于80℃，-0.08MPa烘干4小时，得到36.59g白色松散固体。将此36.59g白色松散固体用110g质量百分数为98％的甲醇水溶液，于25-30℃打浆3小时，过滤得到白色固体，此滤饼继续用110g质量百分数为98％的甲醇水溶液打浆3小时，于80℃，-0.08MPa烘干4小时，得26.8g白色结晶性粉末，即为聚普瑞锌的精品，收率89.9％。所得聚普瑞锌精品的检测结果如表1所示。

实施例2

本实施例的聚普瑞锌的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：500mL三口瓶中，依次将18.4g L-组氨酸(0.118mol)、2.3g浓硫酸(0.02376mol)、104.7g六甲基二硅胺烷(0.649mol)、376.8g 1,2-二氯乙烷加入反应瓶，在常压、60～65℃的温度下，体系回流保温反应，体系中白色固体逐渐溶解，反应13小时后，于-0.08～-0.1MPa、50～80℃下，蒸除六甲基二硅胺烷和1,2-二氯乙烷，得43.0g橙黄色残余物(液体)，收率98.2％。残余物与58.6g二氯甲烷混匀，配成溶液，即为三甲基硅基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液。

步骤2：1L三口瓶中，依次将24.1g(0.283mol)2-氰基乙酸、68.3g(0.538mol)草酰氯、152.4g甲苯加入反应瓶，60～62℃加热，体系回流保温反应，反应5小时后，于-0.08～-0.1MPa，50～85℃，蒸除上述甲苯及草酰氯，得淡黄色液体29.0g，即为2-氰基乙酰氯，收率99.0％，GC纯度99.5％。

步骤3：将步骤1得到的三甲基硅烷基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液(含87.6g三甲基硅烷基保护的L-组氨酸和119.4g二氯甲烷)加入1L三口瓶，-4.0～-0.5℃，开始滴加29.0g(0.280mol)2-氰基乙酰氯与298.4g二氯甲烷配制成的溶液，滴毕2-氰基乙酰氯溶液，升温至28±2℃保温反应，6小时后停止反应，加入19.1g咪唑(0.280mol)，继续保温0.5小时，于-0.08～-0.09MPa下蒸出二氯甲烷，加入200.0g甲醇重结晶，得到52.0g白色粉末状固体，即为(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，收率97.0％，产品HPLC纯度99.2％。

步骤4：2L加压釜中，依次加入步骤3得到的40.0g(0.18mol)(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸、4.0g雷尼镍和5.6g Ru-C的混合物为催化剂，加入377.0g浓氨水和250.0g甲醇，氮气置换两次，加热至95℃，氢气充压至4.0MPa,保温反应3小时，降温，过滤除去上述催化剂，-0.09MPa,60～80℃，蒸出甲醇和水的混合物，得170.0g液体，加入550.0g质量百分数为95％的甲醇水溶液，降温至0～10℃，加入0.1gL-肌肽，搅拌析晶8小时，过滤，滤饼于45℃，-0.08MPa烘干，得到8.8g固体，即为L-肌肽粗品，收率88.1％，HPLC纯度98.8％。

步骤5：250mL三口瓶中，加入步骤4得到的13.4g L-肌肽粗品、134g去离子水，机械搅拌，固体全溶，体系为淡黄色溶液，将所得溶液通过装入预处理后134g碱性大孔阴离子交换树脂的树脂柱，吸附活化，流速0.8vvh^-1,质量百分数为3％的醋酸钾溶液洗脱，当体系中无L-肌肽钠盐析出时，合并洗脱液，经喷雾干燥，得到30.2g L-肌肽钠与乙酸钠的混合物，含乙酸钠52％，收率90.6％，L-肌肽钠的HPLC纯度99.79％。

步骤6：1L三口瓶中，加入400g甲醇、步骤5得到的54.8g L-肌肽钠盐与乙酸钠的混合物(含27.4g L-肌肽钠的碱金属盐，0.103mol)溶解，滴加22.67g二水合醋酸锌(0.103mol)和260g甲醇的混合液,15分钟滴加完毕，滴毕，保温2小时，过滤，滤饼用80g甲醇淋洗两次，滤饼于80℃，-0.08MPa烘干4小时，得到36.59g白色松散固体。将此36.59g白色松散固体用110g质量百分数为98％的甲醇水溶液，于25-30℃打浆3小时，过滤得到白色固体，此滤饼继续用183g质量百分数为98.5％的甲醇水溶液打浆3小时，于80℃，-0.08MPa烘干4小时，得27.4g白色结晶性粉末，即为聚普瑞锌的精品，收率92.0％。所得聚普瑞锌精品的检测结果如表1所示。

实施例3

本实施例的聚普瑞锌的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：500mL三口瓶中，依次将18.4g L-组氨酸(0.118mol)、1.2g浓硫酸(0.01188mol)、66.8g六甲基二硅胺烷(0.414mol)、376.8g 1,2-二氯乙烷加入反应瓶，在常压、60～65℃的温度下，体系回流保温反应，体系中白色固体逐渐溶解，反应16小时后，于-0.08～-0.1MPa、50～80℃下，蒸除六甲基二硅胺烷和1,2-二氯乙烷，得43.2g橙黄色残余物(液体)，收率98.6％。残余物与58.9g二氯甲烷混匀，配成溶液，即为三甲基硅基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液。

步骤2：1L三口瓶中，依次将24.1g(0.283mol)2-氰基乙酸、84.2g(0.708mol)二氯亚砜、152.4g甲苯加入反应瓶，60～62℃加热，体系回流保温反应，反应5小时后，于-0.08～-0.1MPa，50～85℃，蒸除甲苯及二氯亚砜，得淡黄色液体28.8g，即为2-氰基乙酰氯，收率98.3％，GC纯度99.4％。

步骤3：将步骤1得到的三甲基硅烷基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液(含有87.6g三甲基硅烷基保护的L-组氨酸和119.4g二氯甲烷)加入三口瓶，-4.0～-0.5℃，开始滴加36.9g(0.356mol)2-氰基乙酰氯与298.4g二氯甲烷配制成的溶液，滴毕2-氰基乙酰氯溶液，升温至28±2℃保温反应，8小时后停止反应，加入24.3g咪唑(0.356mol)，继续保温0.5小时，于-0.08～-0.09MPa下蒸出二氯甲烷，加入200.0g甲醇重结晶，得到53.0g白色粉末状固体，即为(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，收率98.8％，产品HPLC纯度99.4％。

步骤4：2L加压釜中，依次加入步骤3得到的40.0g(0.18mol)(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸、4.5g雷尼镍和3.2gRu-C的混合物为催化剂，加入377.0g浓氨水和250.0g甲醇，氮气置换两次，加热至95℃，氢气充压至4MPa,保温反应3小时，降温，过滤除去上述催化剂，-0.09MPa,60～80℃，蒸出甲醇和水的混合物，得170.0g液体，加入550.0g质量百分数为99％的甲醇水溶液，降温至0～10℃，加入0.1gL-肌肽，搅拌析晶8小时，过滤，滤饼于45℃，-0.08MPa烘干，得到9.0g固体，即为L-肌肽粗品，收率87.1％，HPLC纯度98.6％。

步骤5：250mL三口瓶中，加入步骤4得到的13.4g L-肌肽粗品、134g去离子水，机械搅拌，固体全溶，体系为淡黄色溶液，将所得溶液通过装入预处理完134g碱性大孔阴离子交换树脂的树脂柱，吸附活化，流速0.8vvh^-1,用三水合醋酸钠配制的质量百分数为3％的醋酸钠溶液洗脱，当体系中无L-肌肽钠盐析出时，合并洗脱液，经喷雾干燥，得到30.0gL-肌肽钠与乙酸钠的混合物，含乙酸钠51％，收率91.9％，L-肌肽钠的HPLC纯度99.50％。

步骤6：1L三口瓶中，加入400g甲醇、步骤5得到的54.8g L-肌肽钠盐与乙酸钠的混合物(含27.4g L-肌肽钠的碱金属盐，0.103mol)溶解，滴加22.67g二水合醋酸锌(0.103mol)和260g甲醇的混合液,15分钟滴加完毕，滴毕，保温2小时，过滤，滤饼用80g甲醇淋洗两次，滤饼于80℃，0.08MPa烘干4小时，得到36.59g白色松散固体。将此36.59g白色松散固体用110g质量百分数为98％的甲醇水溶液，于25-30℃打浆3小时，过滤得到白色固体，此滤饼继续用183g质量百分数为98.5％的甲醇水溶液打浆3小时，于80℃，-0.08MPa烘干4小时，得27.7g白色结晶性粉末，即为聚普瑞锌的精品，收率93.0％。所得聚普瑞锌精品的检测结果如表1所示。

表1实施例1-3所得聚普瑞锌精品的检测结果

对比例1

以US164028中(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸的制备作为对比例1，与实施例1中步骤(3)对比。与实施例1中步骤(3)中不同的是，US164028专利中，采用L-组氨酸和2-氰基乙酸乙酯在N,N-二甲基甲酰胺中反应，制备(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸。

对比例1中所述L-组氨酸和2-氰基乙酸乙酯在大极性高沸点溶剂N,N-二甲基甲酰胺中，高温及强碱的作用下才发生胺解反应，生成纯度低(67～72％)的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，且产生大量含有DMF的高COD废水。而实施例1中，经硅烷基保护的L-组氨酸和2-氰基乙酰氯低温下可以快速反应，制备得到高纯度(纯度99％以上)的(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸，此过程不产生废水。具体如表2所示。

表2实施例1中步骤(3)和对比例1所得(s)-2-氰基乙酰氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸的对比

分析原因：L-组氨酸中的氨基及羧基未进行保护，一方面溶解性差，需要使用大极性的高沸点溶剂，使L-组氨酸尽可能溶解参与反应，另一方面在强碱及高温的条件下，未经保护基保护的L-组氨酸及氰基乙酸乙酯更容易发生副反应，产生更多的杂质；从反应机理上将，经胺解反应制备酰胺的反应活性比经胺与酰氯反应制备酰胺的活性低，反应速率慢，反应时间更长，L-组氨酸中的氨基发生副反应的概率急剧增大。

对比例2

以日本特开公平07-116160号专利中L-肌肽钠盐制备作为对比例2，与实施例2中的步骤(5)对比。日本特开公平07-116160方法采用L-肌肽粗品溶于甲醇和水的混合溶液重结晶精制3次，得到L-肌肽精品,所得L-肌肽精品溶于甲醇中，与氢氧化钠反应，得到L-肌肽钠盐。

日本特开公平07-116160方法中，得到高纯度的L-肌肽钠盐，需精制多次，收率低，产生大量的高COD废水。而实施例2的L-肌肽溶于纯化水，过碱性大孔离子交换树脂，实现了L-肌肽精制及成盐一步完成，减少了工艺步骤，节省工时。具体如表3所示。

表3实施例2中步骤(5)和对比例2所得L-肌肽钠盐的对比

对比例3

以日本特开2007-204397号专利中“聚普瑞锌的粗品精制过程”作为对比例3。与实施例3中步骤(6)不同的是，日本特开2007-204397号专利中，采用纯水打浆精制聚普瑞锌粗品，其余操作都相同。对比两种精制溶剂下，过滤时间、烘干时间及烘干产品状态的差异，详见表4。

对比例3用纯水打浆精制聚普瑞锌粗品，会出现产品发粘、过滤困难、烘干时间长、烘干品硬等问题。而实施例3中聚普瑞锌精制时，用质量百分数为95～99％的甲醇水溶液对聚普瑞锌粗品进行精制，则不会出现上述问题，且实施例3得到的聚普瑞锌精品，产品松散，过滤容易，烘干容易。

表4实施例3中步骤(6)和对比例3精制溶剂对聚普瑞锌精制工时的影响

聚普瑞锌精制溶剂	过滤时间/小时	烘干时间/小时	烘干产品状态
				实施例3中步骤(6)	0.25	3	白色松散固体
对比例3	4	18	白色球状硬块

说明：以过滤500g聚普瑞锌和烘干500g聚普瑞锌计。

由此可见，本发明的方法可以可以获得高纯度的L-肌肽钠和聚普瑞锌，聚普瑞锌精制烘干工艺耗时少，精品聚普瑞锌易于粉碎，收率高，成本低，废水少，适用于工业化生产的聚普瑞锌制备方法。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，步骤1所述浓硫酸的质量百分数为95～98％；所述三甲基硅基保护的L-组氨酸的二氯甲烷溶液中三甲基硅基保护的L-组氨酸的质量百分数为40～45％。

3.根据权利要求1所述的一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，步骤2所述酰化试剂为二氯亚砜或者草酰氯。

4.根据权利要求1所述的一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，步骤4所述催化剂为雷尼镍和Ru-C的混合物；所述催化氢化的温度为80～100℃，压力为3.0～5.0MPa,反应时间为1～5小时。

5.根据权利要求1所述的一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，步骤4所述甲醇水溶液的质量百分数为95～99％。

6.根据权利要求1所述的一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，步骤5所述碱性大孔离子交换树脂为碱性大孔阴离子交换树脂。

7.根据权利要求1所述的一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，步骤5所述碱金属的醋酸盐为醋酸钠、醋酸钾、三水合醋酸钠中的一种。

8.根据权利要求1所述的一种聚普瑞锌的制备方法，其特征在于，步骤6所述甲醇水溶液的质量百分数为95～99％，所述甲醇水溶液的用量为聚普瑞锌粗品质量的3～15倍。