CN107586349A - 中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，包括以下步骤：在加热条件下，采用中性缓冲溶液对银耳粉进行浸提，得到浸提料液；将所述浸提料液进行固液分离，得到液体组分，所述液体组分中含有银耳多糖；将所述液体组分进行醇沉，得到的沉淀为银耳多糖。本发明所述方法银耳多糖的提取率能到达29.69%，为传统水提法的2~3倍，大大的提高了银耳多糖的提取率。

Description

中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法

技术领域

本发明属于植物多糖提取技术领域，具体涉及一种中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法。

背景技术

银耳, 又名白木耳, 是一种高等真菌, 具有滋阴润肺、益气和血的功能。银耳多糖是银耳的主要有效成分, 是一种酸性杂多糖，从银耳(Tremella fuciformis Berk)子实体中得到的，其主链结构是由α-(1→3)糖苷键连接的甘露聚糖，支链由葡萄糖醛酸和木糖组成。银耳多糖具有调节免疫功能, 抗血拴, 延长凝血时间, 降血糖、降血脂、辅助抑制肿瘤，延缓衰老和抗辐射等作用。日本学者等用热水浸提法首先从银耳子实体中提取得到多糖物质, 此后, 国内外学者就如何提高多糖物质得率的问题不断加以研究和探讨。

如何进一步提高银耳多糖的提取率是实现银耳多糖工业化生产的关键。目前，可以采用热水提取法，超声辅助提取法，微波辅助提取法，挤压辅助提取法，酶法浸提法，碱浸提法等方法来提取银耳多糖。

银耳子实体细胞的细胞壁具有双层蛋白质和多糖相结合的致密结构，使得单纯使用热水提取的方法难以破坏细胞壁结构，充分释放出子实体多糖成分。如果添加超声波发生仪、微波反应系统或者高压锅等辅助仪器提取银耳多糖，增加了额外仪器投入的费用，而且能耗高。酶提取法虽然较为温和但提取过程中会面临提取液黏度增大、过滤困难、蛋白质等杂质增多、酶试剂成本等问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种提取率高，能耗低，成本低的银耳多糖的提取方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，包括以下步骤：

1）在加热条件下，采用中性缓冲溶液对银耳粉进行浸提，得到浸提料液；

2）将浸提料液进行固液分离，得到液体组分，液体组分中含有银耳多糖；

3）将液体组分进行醇沉，得到的沉淀为银耳多糖。

步骤1）中所述中性缓冲溶液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液。所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液的浓度是0.2 mol/L，pH范围为pH 5.8~8.0，由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成；所述碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液的浓度是0.1mol/L，pH范围为pH 8.7~10.6，由碳酸钠和碳酸氢钠组成；所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液则是由0.1mol/L的柠檬酸溶液和0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液配制而成，pH范围为pH 6.0~8.0；所述甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液的浓度是0.05mol/L，由0.2mol/L的甘氨酸和0.2mol/L的氢氧化钠配制而成，pH范围为pH8.6~10.6。

步骤1）中浸提的料水比为1:30 ~ 1:70 g/mL。

步骤1）中的加热方式为水浴加热，水浴温度为70~100℃，水浴时间为2~6 h。

步骤2）中所述固液分离的方式为离心，离心的转速为7000~9000rpm，离心时间为5~10min。

步骤3）中醇沉使用的是乙醇溶液，乙醇溶液的体积浓度为85~99%，液体组分与乙醇溶液的体积比为1:3~5。

步骤3）中醇沉的时间为8~14 h。

步骤3）醇沉后还包括：将醇沉得到的料液进行第二固液分离，得到沉淀。

所述第二固液分离的方式为离心，所述第二固液分离离心的转速为8000~11000rpm，离心时间为5~10min。

本发明的有益效果：本发明所述的银耳多糖提取方法，以中性缓冲溶液为提取溶剂，替换传统的水提，提取后进行醇沉得到银耳多糖。利用银耳多糖在中性缓冲溶液中的溶解度大于在热水中的溶解度的原理。本发明提供的方法对银耳多糖的提取率能到达29.69%，本发明所述方法的提取率为传统水提法的2~3倍，大大地提高了银耳多糖的提取率。另外，本发明不需要其他额外的辅助仪器或试剂，如超声波或者亚临界状态，能耗低，成本较低。

具体实施方式

本发明提供了一种中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，包括以下步骤：1）在水浴条件下，采用中性缓冲溶液对银耳粉进行浸提，得到浸提料液；所述中性缓冲溶液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液；所述水浴的温度为70~100℃，水浴的时间为2~6h，料水比为1:30~ 1:70 g/mL；2）将浸提料液进行固液分离，得到液体组分，液体组分中包括银耳多糖；3）将液体组分进行醇沉，得到的沉淀为银耳多糖。

在本发明中，对所述银耳粉的来源没有限定，可采用市售银耳晒干后粉碎、过筛获得。所述的晒干采用本领域常规的晒干方法即可，具体的可采用日光自然晒干。所述粉碎优选的采用中草药粉碎机进行，所述过筛的目数优选的为60~100目，更优选的为80目；所述银耳粉的粒度优选为150~250μm，更优选的为200~220μm。

本发明在获得银耳粉后，将银耳粉与酸性缓冲溶液混合获得浸提料液。本发明中所述中性缓冲溶液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液；所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液的浓度是0.2 mol/L，pH范围为pH 5.8~8.0，由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成；所述碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液的浓度是0.1mol/L，pH范围为pH 8.7~10.6，由碳酸钠和碳酸氢钠组成；所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液则是由0.1mol/L的柠檬酸溶液和0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液配制而成，pH范围为pH 6.0~8.0；所述甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液的浓度是0.05mol/L，由0.2mol/L的甘氨酸和0.2mol/L的氢氧化钠配制而成，pH范围为pH 8.6~10.6。

本发明中所述银耳粉的质量与中性缓冲溶液的体积比优选为1:30~70 g/mL；更优选为1：45~55 g/mL；最优选为1:50 g/mL。

本发明对浸提料液进行水浴加热。所述水浴的温度为70~100℃，优选的为90~100℃，更优选的为90℃；所述水浴时间为2~6h，优选的为4~5h；最优选的为5h。所述水浴采用本领域常规的水浴设备即可，无其他特殊限定。具体的在本发明实施例中可采用水浴锅。在所述水浴的过程中，酸性缓冲溶液对银耳粉中的银耳多糖进行提取，得到提取料液，所述提取料液中包括银耳粉固体残渣和溶于体系中的银耳多糖。

本发明将所述提取料液进行固液分离，收集液体组分。在本发明中，所述固液分离方式优选的为离心；所述离心的转速优选的为7000~9000 rpm，更优选的为8000 rpm；所述离心时间优选为5~10 min，更优选的为8 min。本发明所述固液分离的作用是将银耳粉中的不溶于酸性缓冲溶液的固体残渣去除，以利于后续银耳多糖的醇沉。

本发明在获得液体组分后，将所述液体组分进行醇沉，获得醇沉料液，所述醇沉料液中包括析出的银耳多糖和醇沉液相，得到的沉淀为银耳多糖。在本发明中，所述醇沉用试剂优选为乙醇溶液；所述乙醇溶液的体积浓度优选的为85~99%，更优选的为95%；所述液体组分与乙醇溶液的体积比优选为1:3~5，更优选为1:4。

在本发明的实施例中，所述醇沉具体为将所述液体组分与乙醇溶液混合，静置进行沉淀。本发明对所述混合方法没有特殊限定，只要能够实现混合即可。本发明中所述醇沉的时间优选的为8~14h，更优选的为11~13h，最优选的为12h；本发明中所述沉淀是通过乙醇破坏液体组分中的氢键，降低银耳多糖在液体组分中的溶解度，从而使多糖沉淀出来。

本发明在获得醇沉料液后，对所述醇沉料液进行第二固液分离，得到银耳多糖。在本发明中，所述第二固液分离方式优选的为离心；所述离心的转速优选的为8000~11000rpm，更优选的为9500~10500rpm，最优选的为10000rpm；所述离心时间优选为5~10min，更优选为8min。本发明在第二固液分离后收集固体沉淀，即为提取到的银耳多糖。

本发明中所述银耳多糖提取率的计算公式为：

。

在本发明中，将上述提取获得的银耳多糖溶于水后获得银耳多糖水溶液。用苯酚硫酸法测定银耳多糖水溶液中多糖含量，计算银耳多糖的提取率。

下面结合实施例对本发明提供的银耳多糖的提取方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

将市售银耳晒干，粉碎过90目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，5h后，将浸提料液以8000rpm的转速离心8min，去除残渣，上清液中加入4倍体积的体积浓度为90%的乙醇溶液，沉淀12h，以10000rpm的转速离心8min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为12.53mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为250.6mg，多糖提取率为25.06%，对照以水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.55%，提高了231.9%。

实施例2

将市售银耳晒干，粉碎过80目筛。向1g银耳粉加入40ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于100℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以7500rpm的转速离心5min，去除残渣，上清液中加入4.5倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液，沉淀11h，以11000rpm的转速离心6min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为9.83mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为196.6mg，多糖提取率为19.66%，对照以水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.35%，提高了167.5%。

实施例3

将市售银耳晒干，粉碎过80目筛。向1g银耳粉加入60ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于80℃的热水中水浴浸提，5h后，将浸提料液以9000rpm的转速离心7min，去除残渣，上清液中加入四倍体积的体积浓度为90%的乙醇溶液，沉淀10h，以10000rpm的转速离心10min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为9.52mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为190.6mg，多糖提取率为19.03%，对照以水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.25%，提高了162.5%。

实施例4

将市售银耳晒干，粉碎过70目筛。向1g银耳粉加入30ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以7000rpm的转速离心7min，去除残渣，上清液中加入四倍体积的体积浓度为90%的乙醇溶液，沉淀9h，以11000rpm的转速离心5min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为7.93mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为158.6mg，多糖提取率为15.86%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为6.22%，提高了155.0%。

实施例5

将市售银耳晒干，粉碎过60目筛。向1g银耳粉加入60ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于100℃的热水中水浴浸提，3h后，将浸提料液以8000rpm的转速离心6min，去除残渣，上清液中加入三倍体积的体积浓度为99%的乙醇溶液，沉淀10h，以9000rpm的转速离心9min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为10.25mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为204.9mg，多糖提取率为20.49%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为5.62%，提高了264.6%。

实施例6

将市售银耳晒干，粉碎过100目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于70℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以8000rpm的转速离心8min，去除残渣，上清液中加入四倍体积的体积浓度为95%乙醇溶液，沉淀14h，以8000rpm的转速离心10min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为6.28mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为125.6mg，多糖提取率为12.56%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为4.57%，提高了174.8%。

实施例7

将市售银耳晒干，粉碎过70目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，6h后，将浸提料液以9000rpm的转速离心8min，去除残渣，上清液中加入四倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液，沉淀8h，以10000rpm的转速离心10min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为12.16mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量243.1mg，多糖提取率为24.31%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.95%，提高了205.8%。

实施例8

将市售银耳晒干，粉碎过80目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，2h后，将浸提料液以7000rpm的转速离心5min，去除残渣，上清液中加入3倍体积的体积浓度为99%的乙醇溶液，沉淀12h，以11000rpm的转速离心7min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为7.54mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为150.8mg，多糖提取率为15.08%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为3.67%，提高了310.9%。

实施例9

将市售银耳晒干，粉碎过100目筛。向1g银耳粉加入70ml的pH 6.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以8000rpm的转速离心7min，去除残渣，上清液中加入4倍体积的体积浓度为99%的乙醇溶液，沉淀8h，以11000rpm的转速离心7min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为14.85mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为243.8mg，多糖提取率为29.69%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.32%，提高了305.6%。

实施例10

将市售银耳晒干，粉碎过80目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 8.6的甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以9000rpm的转速离心8min，去除残渣，上清液中加入5倍体积的体积浓度为90%的乙醇溶液，沉淀14h，以11000rpm的转速离心5min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换甘氨酸-氢氧化钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为4.33mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为86.6mg，多糖提取率为8.66%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.31%，提高了18.47%。

实施例11

将市售银耳晒干，粉碎过90目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 8.7的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以7000rpm的转速离心10min，去除残渣，上清液中加入4倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液，沉淀10h，以10000rpm的转速离心10min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为7.87mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为157.3mg，多糖提取率为15.73%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.31%，提高了115.2%。

实施例12

将市售银耳晒干，粉碎过80目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 8.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以7500rpm的转速离心8min，去除残渣，上清液中加入3倍体积的体积浓度为99%的乙醇溶液，沉淀11h，以9000rpm的转速离心8min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为8.85mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为176.9mg，多糖提取率为17.69%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.31%，提高了142.0%。

实施例13

将市售银耳晒干，粉碎过80目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 7.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以8000rpm的转速离心8min，去除残渣，上清液中加入3倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液，沉淀12h，以10000rpm的转速离心8min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为9.57mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为191.3mg，多糖提取率为19.13%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.31%，提高了161.7%。

实施例14

将市售银耳晒干，粉碎过70目筛。向1g银耳粉加入50ml的pH 7.8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液后，置于90℃的热水中水浴浸提，4h后，将浸提料液以8000rpm的转速离心5min，去除残渣，上清液中加入四倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液，沉淀12h，以10000rpm的转速离心5min，去除上清液，获得银耳多糖沉淀。

对照试验为用水替换磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为浸提溶剂，方法同上。

将获得的银耳多糖沉淀全部溶于20ml水中，用苯酚硫酸法测定溶液中多糖含量为7.41mg/ml，计算多糖沉淀中多糖的质量为148.1mg，多糖提取率为14.81%，对照水为浸提溶剂提取银耳多糖的提取率为7.31%，提高了102.6%。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）在加热条件下，采用中性缓冲溶液对银耳粉进行浸提，得到浸提料液；

2）将浸提料液进行固液分离，得到液体组分，液体组分中包括银耳多糖；

3）将液体组分进行醇沉，离心，得到的沉淀为银耳多糖。

2.根据权利要求1所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，步骤1）中所述中性缓冲溶液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液。

3.根据权利要求2所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液的浓度是0.2 mol/L，pH 5.8~8.0；所述碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液的浓度是0.1mol/L，pH 8.7~10.6；所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液则是由0.1mol/L的柠檬酸溶液和0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液配制而成，pH 6.0~8.0；所述甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液的浓度是0.05mol/L，由0.2mol/L的甘氨酸和0.2mol/L的氢氧化钠配制而成，pH 8.6~10.6。

4.根据权利要求1所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，步骤1）中浸提的料水比为1:30 ~ 1:70 g/mL。

5.根据权利要求1所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，步骤1）中的加热方式为水浴加热，水浴温度为70~100 ℃，水浴时间为2~6 h。

6.根据权利要求1所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，步骤2）中所述固液分离的方式为离心，离心的转速为7000~9000 rpm，离心时间为5~10 min。

7.根据权利要求1所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，步骤3）中醇沉使用的是乙醇溶液，乙醇溶液的体积浓度为85~99%；醇沉时液体组分与乙醇溶液的体积比为1:3~1:5。

8.根据权利要求1所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，步骤3）中醇沉的时间为8~14 h。

9.根据权利要求1所述的中性缓冲溶液提取银耳多糖的方法，其特征在于，步骤3）中离心时的转速为8000~11000 rpm，离心时间为5~10 min。