CN1075816C - 降低活体内氧化氮水平的方法及其可用的组合物 - Google Patents

降低活体内氧化氮水平的方法及其可用的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN1075816C
CN1075816C CN96194392A CN96194392A CN1075816C CN 1075816 C CN1075816 C CN 1075816C CN 96194392 A CN96194392 A CN 96194392A CN 96194392 A CN96194392 A CN 96194392A CN 1075816 C CN1075816 C CN 1075816C
Authority
CN
China
Prior art keywords
replacement
alkyl
person
ring
mgd
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CN96194392A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1186495A (zh
Inventor
赖青山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Medical College of Wisconsin Research Foundation Inc
Original Assignee
Medical College of Wisconsin Research Foundation Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/459,518 external-priority patent/US5756540A/en
Application filed by Medical College of Wisconsin Research Foundation Inc filed Critical Medical College of Wisconsin Research Foundation Inc
Publication of CN1186495A publication Critical patent/CN1186495A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1075816C publication Critical patent/CN1075816C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/295—Iron group metal compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C333/00—Derivatives of thiocarbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C333/14—Dithiocarbamic acids; Derivatives thereof
    • C07C333/16—Salts of dithiocarbamic acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Inorganic Compounds Of Heavy Metals (AREA)

Abstract

本发明提供了在活体内降低哺乳动物体内氧化氮水平的方法。与现有技术中所述的抑制方法(例如，其中负责产生氧化氮酶的作用受到抑制)相比，本发明采用一种清除方法，其中将过量产生的氧化氮在活体内结合到一种合适的氧化氮清除剂上。产生的配合物使氧化氮不再有害并最终从主体的尿中排出。此外，本发明还提供了用于实现上述方法的组合物和配方。本发明还涉及一种作为治疗遭受发炎和/或传染病痛苦的主体的手段而降低活体的氧化氮水平的方法。以含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂向需要这种治疗的主体给药，这些清除剂与活体内产生的·NO反应形成一种稳定的二硫代氨基甲酸盐-金属-NO配合物，含NO的配合物然后通过肾过滤，在尿中浓缩，最后被主体排出体外，从而降低了活体中·NO的水平。

Description

降低活体内氧化氮水平的方法及其可用的组合物
本发明的领域
本发明涉及一种降低哺乳动物体内氧化氮水平的方法。特别地，一方面，本发明涉及一种通过以作为氧化氮的清除剂的二硫代氨基甲酸盐-金属配合物向遭受发炎和/或传染病痛苦的主体给药而降低哺乳动物体内氧化氮水平的方法，另一方面本发明涉及这里所公开的方法中所用的组合物和配方。
本发明的技术背景
氧化氮(·NO)是一种自由基细胞信使，具有多种生物功能，包括调节血管紧张度，调控大脑中的细胞通讯，以及通过非特异性免疫应答处死病原体(见例如Ignarro,L.J.,Ann.Rev.Toxicol30:535-560(l990)；Moncada,S.,Acta.Physiol.Scand.145:201-227(1992)；和Lowenstein andSnyder,Cell 70:705-707(1992)。氧化氮是L-精氨酸的化学等价的胍基氮原子的五-电子酶催化氧化作用的产物，这种氧化作用受酶即氧化氮合成酶的催化。已经鉴定出两种主要类型的氧化氮合成酶：组成型的氧化氮合成酶和诱导型的氧化氮合成酶。
组成型的·NO合成酶存在于内皮中，其中·NO作为有效的血管扩张剂连续不断地以低浓度从内皮中产生以调节血压和血管紧张度；诱导型的·NO合成酶存在于多种细胞中，包括巨噬细胞，噬中性白细胞，白细胞，肝细胞，血管内皮细胞和平滑肌细胞。后面这种·NO合成酶受脂多糖(LPS)和细胞活素诱导，以高浓度产生·NO达好几天，在抗发炎和抗感染的非特异性免疫中起重要作用(Kilbourn和Griffith,J.Natl.CancerInst.,84:827-831,(1992)；Moncada和Higga,N.Eng.J.Med.,329:2002-2-12,(1993))。在严重感染的情况下，·NO和细胞活素的过量产生可导致威胁生命的低血压，多器官坏死和最终死亡(St.John和Dorinsky,Chest.103:932-943(1993)。
在血液中，内皮产生的·NO各向同性地沿各个方向扩散进入邻近的组织。当·NO扩散进入血管平滑肌时，它与催化cGMP产生的鸟苷酸环化酶结合，诱导血管扩张(见例如，Ignarro,L.J.,Supra；Moncada,S.,Supra；和Lowenstein和Snyder,Supra)。另一方面，当·NO扩散进入血液循环时，它与血红细胞中的血红蛋白反应生成硝酸盐和高铁血红蛋白(Kelm和Schrader,Circ.Res.66:1561-1575(1990))。硝酸盐通过肾脏排泄而被消除，高铁血红蛋白被红细胞中的高铁血红蛋白还原酶催化转变，回到血红蛋白。因此，动物和人类的细胞活素诱导的休克和腐烂性休克中硝酸盐水平增加也就不足为奇了(见例如，Nava等，J.Cardiovasc.Pharmacol.20(Suppl.12):S132-134(1992)；Hibbs等.J.Clini.Invest.89:867-877(1992)；和Evans等Circulatory Shock 41:77-81(1993)。
已经证实，由LPS和细胞活素(如白介素-1(IL-1)，白介素-2(IL-2)，肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素)诱导产生的氧化氮的过量产生能导致全身性低血压(Kilbourn和Griffith,supra,Moncada和Higgs,supra)。研究了用抑制·NO的产生(通过抑制氧化氮合成酶)的试剂作为治疗由·NO的过量产生而导致的全身性低血压，例如，观察到NG-甲基-L-精氨酸(NMMA)一种氧化氮生物合成路线的竞争性抑制剂(在静脉注射后)能够逆转动物体内LPS-诱导的低血压(Aisaka等，Biochem.Biophys.Res.Commun.,60:881-886(1989)；Rees等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86:3375-3379,(1989))。然而，正如最近的许多报道中所述的那样，抑制·NO合成酶对主体是有害的。参见，例如Henderson等在Arch.Surg.129:1271-1275(1994),Hambrecht等在J.Leuk.Biol.52:390-394(1992),Luss等在Biochem.and Biophys.Res.Comm.204:635-640(1994),Robertson等在Arch.Surg.129:149-156(1994),Statman等在J.Surg.Res.57:93-98(1994)，和Minnard等在Arch.Surg.129:142-148(1994)所报道的。
因此，本领域还需要能够有效地治疗与·NO的过量产生有关的全身性低血压如腐烂性休克的方法。
本发明的简要描述
按照本发明，研制了用于降低活体的氧化氮水平的方法。与现有技术中所述的抑制方法(见前述的参考文献)相反，本发明采用一种清除方法，其中使过量产生的氧化氮结合到一种合适的氧化氮清除剂上，产生的配合物使得氧化氮无害并最终从主体的尿中排出。按照本发明，还研制了用于实现上述方法的组合物和配方。
可望用于本发明方法的氧化氮清除剂为二硫代氨基甲酸盐-亚铁配合物，该配合物结合·NO，形成一个稳定的水溶性的具有特征性的三-线光谱(亚硝酰-铁配合物的标志)的二硫代氨基甲酸盐-铁-NO配合物，该光谱可以很容易地用电子顺磁(EPR)光谱仪在室温下检测到(见Komarov等在Biochem.Biophys.Res.Commun.,195:1191-1198(1993)；Lai和Komarov在FEBSLett.,345:120-124,(1994)中的报道)。这种在实际时间内检测体液中·NO的方法最近由Lai在这里通过参考文献引入的美国专利US5,358,703中作了描述。本发明涉及作为治疗遭受发炎和/或感染性疾病的主体的手段而用于降低活体的·NO水平的方法。以含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂向需要这样的治疗的主体给药，这些清除剂与活体产生的·NO作用，形成一个稳定的二硫代氨基甲酸盐-铁-NO配合物。虽然游离的·NO是一个有效的血管扩张剂，但是与二硫代氨基甲酸盐-铁-配合物螯合的·NO却不是。然后含NO的配合物通过肾脏过滤，在尿中浓缩，最后被主体排泄掉，因此降低了活体中·NO的水平。
附图的简要说明
图1说明·NO抑制剂对从家鼠尿中检测到的[(MGD)2/Fe]-配合物(MGD为N-甲基-D-葡萄糖胺二硫代氨基甲酸盐)的体外9.5-Ghz EPR光谱的影响。在NMMA(50mg/kg)(B)或地塞米松(3mg/kg)(C)的存在下，给家鼠皮下注射0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物，详细的试验步骤在实施例中加以描述。注射给药两个小时后，处死动物，采集尿样并转移到扁平石英池内，于22℃下进行EPR测量。[(MGD)2/Fe]-配合物的三线光谱用空心圆圈指示(O)，作为[(MGD)2/Cu]-配合物光谱的一部分的一条宽EPR线用箭头指示。
图1A表示注射以上的[(MGD)2/Fe]-配合物时得到的结果。
图1B表示注射[(MGD)2/Fe]-配合物和NMMA时得到的结果。
图2表示注射了15N·-精氨酸的家鼠尿中的[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物体外9.5-GhzEPR光谱。给小鼠注射0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)和(A)10mg15N-精氨酸或(B)5mg15N-精氨酸。注射后两个小时，处死动物，把尿样转移到扁平石英池内，于22℃下进行EPR测量。注意：[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的双线光谱用实心圆圈(●)指示。A中用空心圆圈(○)指示的[(MGD)2/Fe-14NO]的光谱的虚线是在没有注射15N-精氨酸时得到的。A的接收器增益比B高1.3倍，其它实验条件都一样，如图1所述。
图2A表示注射[(MGD)2/Fe]-配合物和10mg15N-精氨酸时得到的结果。
图2B表示注射[(MGD)2/Fe]-配合物和5mg15N-精氨酸时得到的结果。
图3表示在鼠尾的循环液中的[(MGD)2/Fe-NO]-配合物的活体3.5GhzEPR光谱，以LPS给药后6小时，给小鼠注射10mg15N-精氨酸的生理盐水溶液和0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物，在以[(MGD)2/Fe]给药后2小时，记录活体的S波段EPR光谱(实线)。
图3A代表[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的特征双线光谱(●)，用(○)指示的[(MGD)2/Fe-14NO]的虚线光谱是在从上述的注射液中去掉15N-精氨酸时得到的。
图3B表示从15N-精氨酸处理过的小鼠得到的全血的体外X-波段EPR光谱。
图4表示经静脉注射15N-精氨酸后，在LPS-处理的小鼠的各种组织中检测到的[(MGD)2/Fe-15NO]和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的活体3.5Ghz EPR光谱。在LPS给药后6小时，给小鼠注射10mg15N-精氨酸的生理盐水溶液和0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)，在[(MGD)2/Fe]-配合物给药后2小时，处死小鼠，将湿的组织转移到石英管(内径2mm)，于22℃下进行EPR测量。
图4A表示从肝组织得到的光谱，[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的双线光谱(●)与[(MGD)2/Fe-14NO]的三线光谱(○)叠加，[(MGD)2/Fe-14NO]的虚的三线光谱是在从的注射液中去掉15N-精氨酸时得到的，每个光谱为9个30秒的扫描的平均值。
图4B代表从肾组织得到的光谱，所示的光谱为9个30秒扫描的平均值。
图5为NMMA对经LPS处理的小鼠尿中的[(MGD)2/Fe-NO]-配合物的体外9.5-GHz EPR光谱的影响图。在LPS给药后6小时，给小鼠注射0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)，腹膜注射NMMA(50mg/kg)或者不注射，在注射[(MGD)2/Fe]-配合物后2小时，处死小鼠，采集尿样，于22℃下进行EPR测量。
图5A代表单独注射[(MGD)2/Fe]-配合物时得到的结果。
图5B代表注射[(MGD)2/Fe]-配合物和NMMA(50mg/kg)时得到的结果。注意：NMMA给药后抑制了活体NO的产生，因而显著降低了尿中[(MGD)2/Fe-NO]的信号强度。
图6代表经LPS处理的注射了15N-精氨酸的小鼠尿中的[(MGD)2/Fe-15NO]和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的体外9.5-GHz EPR光谱图。在LPS给药后6小时，给小鼠注射10mg15N-精氨酸的生理盐水溶液和0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)，在[(MGD)2/Fe]-配合物给药后2小时，采集尿样并转移到石英管(内径2mm)中，于22℃下进行EPR测量。
图6A代表从试验中得到的光谱，其中用了10mg的15N-精氨酸。图3A中的实线为两种光谱例如[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的双线光谱(●)和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的三线光谱(○)的复合线，[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的虚的三线光谱(○)的是在从注射液中去掉15N-精氨酸时得到的。
图6B代表从试验中得到的光谱，其中用了5mg的15N-精氨酸。注意：与[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的信号强度(○)相比，[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的信号强度(●)至少降低-半。
本发明的详细说明
按照本发明，提供了活体降低主体中氧化氮水平的方法，该方法包括：以有效量的至少一种含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂对主体给药。
可用于本发明的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂包括二硫代氨基甲酸盐部分的任意生理上可接受的衍生物(即(R)2N-C(S)-SH)。这样的化合物可参考下列的一般结构而加以描述：
[R1R2N-C(S)-S-]xM+1,+2,+3其中：R1和R2各自独立地选自C1-C18烷基，取代的烷基，环烷基，杂环，取代的环烷基，取代的杂环，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，芳基，取代的芳基，杂环芳基，取代的杂环芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，芳基链烯基，取代的芳基链烯基，芳基链炔基，取代的芳基链炔基，芳酰基，取代的芳酰基，脂酰基，取代的脂酰基，或者R1与R2共同形成一个包含N,R1和R2的5-,6-或7-员环，
X为1或2，和
当X为1时，M为一价阳离子，或当X为2时，M为生理上可接受的二价阳离子或三价过渡金属阳离子。
优选的具有上述通式结构的化合物是那些化合物，其中：
R1和R2各自为C1-C12烷基，取代的烷基，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，其中取代基选自羧基，-C(O)H，氧酰基，苯酚，苯氧基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，酰氨基，羟基，硝基或磺酰基，而，
M为Fe+2或Fe+3。
特别优选的具有上述通式结构的化合物是那些其中：
R1=C2-C8烷基或取代的烷基，其中取代基选自羧基，乙酰基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，酰氨基，羟基或硝基，
R2选自C1-C6烷基或取代的烷基，或者R2与R1共同形成一个包含N,R1和R2的5-,6-或7-员环，而
M为Fe+2。
最优选的具有上述通式结构的化合物是那些其中：
R1=C2-C8烷基或取代的烷基，其中取代基选自羧基，乙酰基，酰氨基或羟基，
R2=C1-C4烷基或取代的烷基，而
M为Fe+2。
当R1与R2共同形成一个5-,6-或7-员环时，R1与R2共同可以为多种饱和或不饱和的选自亚烷基或含有-O-,-S-,-C(O)-和/或-N(R)-的亚烷基部分的4,5或6原子桥基团，其中R为H或低级烷基部分。
可用于结合入上述化合物的一价阳离子包括H+,Na+,NH4 +，四烷基铵等。考虑用于结合入上述化合物的生理上相容的二价或三价过渡金属阳离子包括带电形成的铁，钴，铜，锰离子等(例如Fe+2,Fe+3,Co+2,Co+3,Cu+2,Mn+2或Mn+3)。按照本发明，二硫代氨基甲酸盐与平衡离子M的比例可以在很宽的范围内变化，这样以含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂给药时可以不添加任何的金属平衡离子(例如M=H+，或者过渡金属阳离子与二硫代氨基甲酸盐的比值为0)，过渡金属阳离子与二硫代氨基甲酸盐的比例最高约为1∶2时(例如二硫代氨基甲酸盐∶过渡金属阳离子=2∶1)较为合适。
这里所说的“取代的烷基”包括还含有一个或多个选自羟基，烷氧基(低级烷基的)，巯基(低级烷基的)，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，芳基，取代的芳基，杂环芳基，取代的杂环芳基，芳基氧基，取代的芳基氧基，卤素，三氟甲基，氰基，硝基，氮羰基，氨基，酰氨基，-C(O)H，酰基，氧酰基，羧基，氨基甲酸盐，磺酰基，磺酰氨基，砜基等取代基的烷基。
这里所说的“环烷基”是指包含3-8个碳原子的含环的基团，而“取代的环烷基”是指还含有一个或多个上述取代基的环烷基。
这里所说的“链烯基”是指含有至少一个碳碳双键，含有2-12个碳原子的直链或支链烃基，而“取代的链烯基”是指还含有一个或多个上述取代基的链烯基。
这里所说的“链炔基”是指含有至少一个碳碳三键，含有2-12个碳原子的直链或支链烃基，而“取代的链炔基”是指还含有一个或多个上述取代基的链炔基。
这里所说的“芳基”是指含有6-14个碳原子的芳香基，而“取代的芳基”是指还含有一个或多个上述取代基的芳基。
这里所说的“烷基芳基”是指烷基取代的芳基，而“取代的烷基芳基”是指还含有一个或多个上述取代基的烷基芳基。
这里所说的“芳基烷基”是指芳基取代的烷基，而“取代的芳基烷基”是指还含有一个或多个上述取代基的芳基烷基。
这里所说的“芳基链烯基”是指芳基取代的链烯基，而“取代的芳基链烯基”是指还含有一个或多个上述取代基的芳基链烯基。
这里所说的“芳基链炔基”是指芳基取代的链炔基，而“取代的芳基链炔基”是指还含有一个或多个上述取代基的芳基链炔基。
这里所说的“芳酰基”是指芳基羰基，而“取代的芳酰基”是指还含有一个或多个上述取代基的芳酰基。
这里所说的“杂环”是指含有一个或多个作为环结构组成部分的杂原子(例如N,O,S等)，含有3-14个碳原子的环状(例如含有环的)基团，而“取代的杂环”是指还含有一个或多个上述取代基的杂环基团。这里所说的“酰基”是指烷基羰基。
这里所说的“卤素”是指氟，氯，溴或碘原子。
按照本发明的另一个实施方案，提供了治疗主体内氧化氮过量产生的方法，该发明方法包括：
以有效量的至少一种含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂向主体给药。
氧化氮的过量产生与广泛的病态和/或症状例如腐烂性休克，局部缺血，细胞活素的给药，细胞活素的过量表达，溃疡，发炎性肠道疾病(例如溃疡性结肠炎或节段性回肠炎)，糖尿病，关节炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，硬化症，硬变病，同种移植排斥，脑脊髓炎，脑膜炎，胰腺炎，腹膜炎，脉管炎，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎，肾小球性肾炎，眼色素层炎，回肠炎，肝炎，肾炎，出血性休克，过敏性休克，发烧，感染(包括细菌性(如大肠杆菌感染)，病毒性(如HIV)，真菌性(如念珠菌病和组织胞浆菌病)和寄生性(例如利什曼病和血吸虫病)感染)，渗血病，慢性疲劳综合症，中风，癌症(例如乳腺癌，黑色瘤，肿瘤等)，心肺分流术，局部缺血/再灌损伤等有关。
特别地，针对细胞活素治疗，本发明将会发现广泛的用途，因为细胞活素治疗(其结果为诱导氧化氮的过量产生)一般用于对癌症和艾滋病患者治疗。由与·NO的过量产生而导致的全身性低血症是受剂量限制的细胞活素治疗的副作用，因此众多数量的患者群体将有益于本发明的方法。
优选的按照本发明的方法治疗的症状包括腐烂性休克，局部缺血，IL-1的给药，IL-2的给药，IL-6的给药，IL-12的给药，肿瘤坏死因子的给药，干扰素-γ的给药，溃疡，溃疡性结肠炎，糖尿病，关节炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，多硬化症，硬变病或同种移植排斥。特别优选的按照本发明的方法治疗的症状包括与腐烂性休克相关的氧化氮过量产生和与细胞活素治疗相关的氧化氮过量产生。
按照本发明的一个特定方面，把含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂与细胞活素(例如IL-1,IL-2,IL-6,IL-12,TNF或干扰素-γ)，抗生素(例如庆大霉素，妥布霉素，阿米卡星，哌拉西林，氯林可酶素，头孢西丁或万古霉素或其混合物)，血管作用剂(例如茶酚胺，去甲肾上腺素，多巴胺或多巴酚丁胺)，或其混合物。这样，利用含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂，许多上述药剂的有害的副作用可以排出或减少。因此，可以用氧化氮过量产生的证据(例如血压降低)对用上述任何药剂治疗的病人进行监督，第一次得到氧化氮过量产生的证据时，就开始同时以合适的剂量以上述的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂给药，因而减轻(或极大地减小)了主要治疗的副作用。
本领域技术人员知道这里所述的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂可以多种方式给药，例如口服，静脉注射，皮下注射，肠胃外给药，直肠给药，吸人法给药等。
由于各个主体的症状的严重程度差异很大，每种药剂都有其特定的治疗特性，对每个主体其精确的给药方式和所用剂量留给执业医生去处理。一般地，本发明方法中所用的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂的剂量落在大约0.01-0.5mmole/kg(主体体重)/小时的范围。
按照本发明的另外一个实施方案，提供了包含具有下述的结构式Ⅰ或结构式Ⅱ的化合物的有生理活性的组合物，以一种使所说的化合物能通过口服，皮下注射，静脉注射，肌肉注射，表面渗透，鼻腔吸人等方式传送。如上所述，结构式Ⅰ的化合物(例如不含过渡金属阳离子的二硫代氨基甲酸盐)能直接用于本发明中，或者前体形式的二硫代氨基甲酸盐-过渡金属螯合物(例如Ⅱ的化合物)(过渡金属与二硫代氨基甲酸盐具有不同比例)可以用于本发明中。
依所用的传送方式，含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂可以多种药学上可接受的形式传送，例如清除剂可以固体，溶液，乳液，分散液，胶束，脂质体等形式传送。
本发明的药物组合物可以固体，溶液，乳液，分散液，胶束，脂质体等形式使用，其中产生的组合物含有一种或多种本发明的化合物作为活性成分，与有机或无机载体或赋形剂混合，适于内用或外用。例如，活性成分可与通常的无毒的，药学上可接受的载体组合制成片剂，丸剂，胶囊，拴剂，溶液，乳液，分散液，悬浮液，或任何其它适于使用的形式。可使用的载体包括葡萄糖，乳糖，阿拉伯树胶，明胶，甘露糖醇，淀粉糊，聚三硅酸镁，滑石粉，玉米淀粉，角蛋白，胶态氧化硅，马铃薯淀粉，脲尿，中等链长度的三甘油酯，葡聚糖和其它固体，半固体或液体形式的适用于产生制备的载体。除助剂外，还可以使用稳定剂，增稠剂，染色剂和芳香剂。把活性化合物(即这里所说的结构式Ⅰ的化合物和结构式Ⅱ的化合物)以一定数量包括在药物组合物中使得在病症的治疗方法或条件下产生预期的效果。
包含活性成分的药物组合物可以为适于口服的剂型例如片剂，锭剂，糖锭剂，水性或油性悬浮液，可分散的粉剂或粒剂，乳剂，硬的或软的胶囊，或酏剂。以口服方式使用的组合物可按照本领域已知的产生药物组合物的方法制备，为了提供美味上口的药物，这样的组合物还可以含有一种或多种选自甜味剂(例如蔗糖，乳糖或糖精)，调味剂(例如薄荷，冬青油或草莓)，着色剂和防腐剂的助剂。含有与无毒的药学上可接受的赋形剂混合使用的活性成分的片剂也可以用已知的方法产生。所用的赋形剂例如可以是：(1)惰性稀释剂如碳酸钙，乳糖，磷酸钙或硫酸钠；(2)成粒剂或崩解剂如玉米淀粉，马铃薯淀粉或藻酸；(3)粘合剂如黄薯胶，玉米淀粉，明胶或阿拉伯树胶和(4)润滑剂如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石粉。片剂可以是不包衣的或者是用已知技术包衣的以延缓在消化道内的崩解和吸收，因而提供持续长时间的作用。例如可以用一种时间延长材料如单硬脂酸甘油酯或二单硬脂酸甘油酯，也可以用美国专利US4,256,108,US4,160,452和US4,265,874中所述的技术包衣，制成可渗透的控制释放的治疗片剂。
在某些情况下，口服用的剂型可以制成硬胶囊，其中活性成分与一种惰性的固体赋形剂例如碳酸钙，磷酸钙或者高岭土混合；也可以制成软胶囊形式，其中活性成分与水或油介质例如花生油，液体石蜡或橄榄油混合。
药物组合物可以制成无菌的可注射的悬浮液，这种悬浮液可以按照已知的方法，用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂制成。这种无菌的可注射的药剂也可以是一种溶于无毒的胃肠能接受的赋形剂或溶剂中的无菌的可注射的溶液或悬浮液，例如溶于1,3-丁二醇而成的溶液。无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质，为了这种目的，可用任何空白的固定油包括合成的甘油一酯或甘油二酯，脂肪酸(包括油酸)，天然产的植物油象芝麻油，可可油，花生油，棉籽油等，合成的脂肪赋形剂象油酸乙酯等。缓冲液，防腐剂，抗氧剂等可按需要掺入。
考虑用于本发明的化合物也可以制成拴剂用于向直肠给药。这些组合物可以通过把药物与一种合适的无刺激性的赋形剂例如可可油，合成的聚乙二醇甘油酯混合而制成，该组合物常温下为固体，但在直肠腔中液化和/或溶解以释放药物。
由于各个主体在病症的严重程度上存在巨大的差异，而且每种药物都有它独特的医疗特性，有待于执业医生去确定主体对治疗的反应并相应地改变剂量。
一般地，典型的每日剂量落在大约10μg-100mg/kg体重的范围，优选在50ug-10mg/kg体重的范围，并且每日给药可高达到4次，每日的四次剂量落在大约1μg-100mg/kg体重的范围，优选在10μg-10mg/kg体重的范围。
按照本发明的另一个实施方案，提供了具有结构式Ⅰ的化合物：
R1R2N-C(S)-S-M+    (Ⅰ)
其中：
R1和R2定义如上，而
M为一价阳离子，
然而，条件是：下列化合物要从式Ⅰ的定义中掉，即当R1为乙基时，R2不是乙基；或者当R1为CH2(CHOH)4CH2OH时，R2不是甲基，异戊基，苄基，4-甲基苄基或对异丙基苯甲基；或者当R1为CH2CO2 -时，R2不是CH2CO2 -；或者当R1为CO2 -时，R2不是CH3；或者当R1为CH2CH2-OH时，R2不是CH2CH2-OH；或者当R1和R2结合在一起时，它们与氨基甲酸盐的氮原子一起形成吡咯烷基-2-甲酸盐。
按照本发明的再一个实施方案，提供了具有结构式Ⅱ的化合物：
[R1R2N-C(S)-S-]2M+2,+3    (Ⅱ)
其中：
R1和R2定义如上，而
M为生理上相容的二价或三价过渡金属阳离子，
然而，条件是：下列化合物要从式Ⅰ的定义中去掉，例如当R1为乙基时，R2不是乙基；或者当R1为CH2(CHOH)4CH2OH时，R2不是甲基，异戊基，苄基，4-甲基苄基或对异丙基苯甲基；或者当R1为CH2CO2 -时，R2不是CH2CO2 -；或者当R1为CO2 -时，R2不是CH3；或者当R1为CH2CH2-OH时，R2不是CH2CH2-OH；或者当R1和R2结合在一起时，它们与氨基甲酸盐的氮原子一起形成吡咯烷基-2-甲酸盐。
还考虑了代表结构式Ⅰ的化合物与结构式Ⅱ的化合物的组合的组合物，即二硫代氨基甲酸盐，其中比值M+1：二硫代氨基甲酸盐小于1∶1，比值M+2,+3：二硫代氨基甲酸盐小于1∶2，优选的组合物是其中比值M+2,+3：二硫代氨基甲酸盐小于大约1∶5(例如把大约40％的二硫代氨基甲酸盐掺入二硫代氨基甲酸盐：过渡金属阳离子配合物中，而大约60％的二硫代氨基甲酸盐以一价形式存在)。
优选的具有结构式Ⅱ的化合物是那些化合物其中：
R1=C1-C12的烷基，取代的烷基，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，其中取代基选自羧基，-C(O)H，氧酰基，苯酚，苯氧基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，酰氨基，羟基，硝基或磺酰基，
R2=C1-C4的烷基或取代的烷基，而
M=Fe+2或Fe+3。
特别优选的具有结构式Ⅱ的化合物是那些化合物，其中：
R1=C2-C8的烷基或取代的烷基，其中取代基选自羧基，乙酰基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，酰氨基，羟基或者硝基，
R2=甲基，乙基，丙基或丁基，而
M=Fe+2。
最优选的具有结构式Ⅱ的化合物是那些化合物，其中：
R1=C2-C8的烷基或取代的烷基，其中取代基选自羧基，乙酰基，酰氨基或者羟基，
R2=甲基，乙基，丙基或丁基，而
M=Fe+2。
现在通过参考下面的非限制性实施例对本发明作更加详细的描述。
实施例1
ICR小鼠(雌性，20-30g)由Harlan Sprague-Dawley(lndianapolis,IN)提供。
地塞米松，脂多糖(LPS；E.coli 026:B6)和氯化乙酰胆碱从Sigma(St.Louis,MO)获得，15N2-胍基-L-精氨酸(15N-精氨酸)从Cambridge Isotope Laboratories(Woburn,MA)购得，NG-一甲基-L-精氨酸(NMMA)从Calbiochem(San Diego,CA)得到，甲氧氟烷从Pitman-Moore(Mundelein,IL)得到。
净的·NO气体从Matheson(Joliet,IL)购得，而纯净的氩气从Airo(Murray Hill,NJ)得到。饱和的·NO水溶液按照下面的Kelm和Schrader,supra方法制得。
经世界精密仪器公司(Sarasota,FL)产生的NO标准仪证实，饱和·NO水溶液的浓度为2.0mM,NO2 -用光度分析法测量(Green等，Anal.Biochem.126:131-138(1982))，先用E.coil硝酸还原酶把NO3 -在转化为NO2 -(Bartholomew,B.,Fd.Chem.Toxic.22:541-543(1984),然后按上述方法测量。
N-甲基-D-葡萄糖氨和二硫化碳从Aldrich公司(Milwaukee,WI)得到，N-甲基-D-葡萄糖氨二硫代氨基甲酸盐(MGD)用下列Shinobu等人的方法合成(Acta Pharmacol.Toxicol.54:189-194(1984)。
实施例2
氧化氮水平的EPR测量
A．活体测量LPS处理的小鼠的循环液中[(MGD)2/FE-NO]的水平
以EPR光谱仪记录非侵害的活体EPR光谱，用S-波段微波桥和具有1cm长的4-mm环的低频环隙谐振腔在3.5GHz下测量(Froncisz和Hyde,J.Magn.Reson.47:515-521(1982))。仪器设置包括：100G磁场扫描，30秒的扫描时间，0.1秒的时间常数，2.5G的调制幅度，100KHz的调制频率和25mW的微波功率。测量的空谐振腔的空载Q值为3000，负载Q值为400(在鼠尾的存在下)，其它仪器参数的设置和试验条件已有记载(Komarov等，supra和Lai及Komarov,supra)。
为测量15NO的产生，在通过外侧的鼠尾静脉进行静脉注射LPS(6mg/只小鼠)后6小时用甲氧氟烷麻醉小鼠，然后皮下注射15N-精氨酸(5mg或10mg/只小鼠)的生理盐水和0.4ml[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和34mg/kg的FeSO4)的水溶液，注射的[(MGD)2/Fe]配合物浓度最高达体重的1％时不影响小鼠的生存(Lai和Komarov,supra)。注射后，立即把小鼠关进一个有机玻璃约束管中并转移到S波段的EPR光谱仪，通过用一个薄而窄的有机玻璃刺拍击使鼠尾不动，然后将其置于谐振腔中；没有使用麻醉剂，注射[(MGD)2/Fe]配合物后2小时，记录活体的EPR信号(Lai和Komarov,supra)。
为作抑制试验，在LPS处理6小时后，给小鼠腹膜注射整份的50mg/kg的N-甲基-L-精氨酸(NMMA)的生理盐水，NMMA既是结构性合成酶，又是诱导性合成酶活性的抑制剂(Aisaka等，Supra和Rees等，supra)。在其它的试验中，在LPS激发前1.5小时，给小鼠静脉注射3mg/kg的地塞米松的生理盐水地塞米松是诱导性·NO合成酶的抑制剂，但不是结构性合成酶的抑制剂(Rees等，Biochem.Biophys.Res.Commun.173:541-547(1990)。在注射[(MGD)2/Fe]配合物后2小时，也记录下活体的EPR信号(Lai和Komarov,supra)。
B．体外测量家鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]的水平
给关在一个约束管中的家鼠皮下注射0.4ml[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4),2小时后处死动物，从膀胱采集尿样，将棕黑色的([(MGD)2/Fe]存在的表征)尿样转移到一个平板石英池，进行EPR测量，在22℃下，用X-波段EPR光谱仪，于9.5GHz下测量记录光谱。仪器参数设置包括：100G磁场扫描，4分钟的扫描时间，0.5秒的时间常数，2.5G的调制幅度，100KHz的调制频率和100mW的微波功率。通过比较从样品得到的信号强度与含有0.1mM的[(MGD)2/Fe-NO]配合物的标准溶液的信号强度，计算尿样中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的浓度。
要作抑制试验，在注射[(MGD)2/Fe]配合物之后，立即给小鼠腹膜注射50mg/kg的NMMA的生理盐水，在其它的试验中，在注射[(MGD)2/Fe]配合物前1.5小时，给小鼠静脉注射3mg/kg的地塞米松的生理盐水。要测量家鼠中15NO的产生，在给小鼠皮下注射15N-精氨酸(5或10mg/只小鼠)的生理盐水之后，立即注射[(MGD)2/Fe]配合物。氯化乙酰胆碱是在皮下注射之前新鲜制备的，剂量为67mg/kg。
C体外测量LPS-处理的小鼠尿中的[(MGD)2/Fe-NO]的水亚
在LPS处理后0,2,4,6或8小时(6mg/只小鼠，至少每组三只动物)，把小鼠关进一个约束管中，用甲氧氟烷麻醉小鼠，然后皮下注射0.4ml[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和34mg/kg的FeSO4),2小时后处死动物，从膀胱采集尿样并立即转移到一个平板石英池，按照上述实施例2B中的方法进行X波段EPR测量。用NMMA或地塞米松进行的抑制试验，除了在·NO抑制试验步骤之前用LPS处理小鼠外，按照实施例2A的方法进行。湿组织和血液样品的S-波段EPR的测量方法以前已有记载(Lai和Komarov,suPra)。实施例3
家鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]配合物检测
给家鼠皮下注射整份的(0.4ml)的[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4)(A)(以及在NMMA(50mg/kg)(B)，或地塞米松(3mg/kg)(C)存在下)后2小时后，处死动物，采集尿样并转移到一个平板石英池，在22℃下，用X-波段(9.5GHz)进行EPR测量。发现尿样的光谱由两个成分组成：一个[(MGD)2/Fe-NO]配合物的特征的三-线光谱(αN=12.5G,gISO=2.04)和一个高强度的宽信号(见图1A)。高强度的宽信号是存在于尿中的由尿中的铜被排出的MGD分子螯合而产生的[(MGD)2/Cu]配合物的光谱的一部分。家鼠尿样中检出的[(MGD)2/Fe-NO]配合物的浓度估计为1.3μM(见表1)。
                        表1
测定的各种条件下小鼠尿中存在的[(MGD)2/Fe-NO]的数量条件                              [(MGD)2/Fe-NO],μMa对照                              1.3±0.2(8)b+NMMA(50mg/kg)                    0.4±0.3(8)*+乙酰胆碱(67mg/kg)                3.9±0.8(3)*+地塞米松(3mg/kg)                 1.4±0.3(7)a   通过比较从小鼠尿的EPR信号强度与含有已知浓度的
[(MGD)2/Fe-NO]的标准溶液的信号强度，计算小鼠尿中
[(MGD)2/Fe-NO]配合物的数量。b   提供的数据是平均值±标准偏差(小鼠数量)*   与对照相比较，P＜0.05
同时注射[(MGD)2/Fe]和NMMA显著地降低了尿样中[(MGD)2/Fe-NO]的信号，见图1B和表1，另一方面，如图1C和表1所示，给预先用地塞米松处理过的小鼠注射[(MGD)2/Fe]对[(MGD)2/Fe-NO]的信号的影响可以忽略不计。
这些结果显示：在家鼠尿中检测到的以[(MGD)2/Fe-NO]配合物形式存在的·NO是由结构性·NO合成酶产生的而不是由诱导性·NO合成酶产生的。
为了进一步证实这个建议，试验了乙酰胆碱-一种已知能影响基础性·NO水平而不影响诱导性·NO水平的血管扩张剂(Aisaka等，Biochem.Biophys.Res.Commun.163:710-717(1989)；Whittle等，Br.J.Pharmacol.98:646-652(1989)；和Vicaut等，J.Appl.Physiol.77:536-533(1994))对家鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]的水平的影响，发现注射乙酰胆碱使尿中[(MGD)2/Fe-NO]的水平增加三倍。这些检测数据提供了最直接的活体证据，证实由乙酰胆碱释放的从内皮产生的松弛因子(Furchgott现象)确实是氧化氮。
提出的问题是家鼠尿中检出的·NO(实施例3)和[(MGD)2/Fe]配合物捕获的·NO是否是由注射[(MGD)2/Fe]配合物而产生的结果。换句话说，单独注射该配合物能增加活体的·NO产生吗？以前的试验中已经表明，静脉注射[(MGD)2/Fe]配合物不影响小鼠的平均动脉压(Komarov等，supra)，这暗示配合物就其本身似乎并不影响活体的·NO产生。
实施例4
本领域公知，通过·NO合成酶，L-精氨酸被转变为·NO和胍氨酸(Ignarro,L.J.,supra；Moncada,S.,supra；和Lowenstein及Snyder,supra)。为了确定家鼠尿中检出的·NO的来源，同时注射15N-精氨酸(10mg/kg)和[(MGD)2/Fe]，然后按上述方法测定产生的尿样中的EPR信号。这样，给小鼠注射[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4)和(A)10mg15N-精氨酸或(B)5mg15N-精氨酸。2小时后，处死动物，将尿样转移到一个平板石英池，在22℃下EPR测量。
可以这样推理，如果家鼠尿中检出的，NO的来源于精氨酸-NO合成酶途径，那么在注射15N-精氨酸后，应当期望能在尿中检出[(MGD)2/Fe-15NO]配合物形式的15NO。通过EPR可以看到这的确是事实，其中在尿中检出了[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的双线光谱以及[(MGD)2/Fe-14NO]配合物一个弱的的三线光谱(图2A的实线)。除了利用内在的14N-精氨酸作为底物外，14NO也以同样的酶催化途径产生。这暗示皮下注射的15N-精氨酸能有效地与内在的14N-精氨酸竞争作为·NO合成酶的底物，当从注射液中去掉15N-精氨酸时，[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的典型的三线光谱变得更加清晰可见了(见图2A中的虚线)。
另一方面，当注射的15N-精氨酸的量减小一半(5mg/只小鼠)时，[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的信号强度与[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的信号强度相比减小了(见图2B)。因此，可以得出这样的结论，给家鼠皮下注射的[(MGD)2/Fe]配合物与组织中通过精氨酸-结构性·NO合成酶途径产生的·NO作用，形成[(MGD)2/Fe-NO]配合物，该配合物最终浓缩在尿中并排出。
实施例5
LPS处理的小鼠血液循环中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的检测
前人的试验已经表明，灌注LPS(6mg/kg)药团后，6小时之内，小鼠处于类似腐烂性休克的状态，其标志是平均动脉压从121±3mmHg缓慢降低到85±7mmHg(Lai和Komarov,supra)。另外，还表明，LPS处理后6小时，用S波段的EPR光谱在鼠尾的循环液中活体观察到[(MGD)2/Fe-NO]配合物的三线光谱(其中在EPR测量前2小时皮下注射[(MGD)2/Fe])(Lai和Komarov,supra)。
为了进一步确认在LPS处理的小鼠中检测到的·NO的化学本质，给LPS处理的小鼠注射了15N-精氨酸(10mg/kg)和0.4ml[(MGD)2/Fe]自旋标记的试剂(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4)，然后活体测量S波段的EPR光谱，活体S波段的EPR光谱，是在[(MGD)2/Fe-NO]给药后2小时记录的。
鼠尾循环液中的[(MGD)2/Fe-NO]配合物的活体双线光谱虽然很弱但清晰可见(图3A实线)，这更进一步证实在LPS处理的小鼠中以[(MGD)2/Fe-NO]配合物形式检测到的·NO是以精氨酸-NO合成酶途径产生的。当去掉15N-精氨酸时，导到了[(MGD)2/Fe-14NO]配合物典型的三线光谱(图3A虚线)。把用15N-精氨酸处理的小鼠处死，将得到的全血转移，在22℃下，测量X波段EPR光谱。从15N-精氨酸处理的小鼠得到的全血的EPR信号(图3B)与图3A的实线一样，这暗示图3A或图3B中的EPR信号属于在血液中循环的[(MGD)2/Fe-NO]配合物，而不属于注射位点或附近鼠尾肌肉中存留的[(MGD)2/Fe-NO]配合物。
也检测了从LPS处理的注射了[(MGD)2/Fe]配合物和15N-精氨酸的小鼠得到的各种分离的组织中[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的S波段EPR信号(图4)，这样，在肝和肾脏中观察到了[(MGD)2/Fe-15NO]的特征的双线光谱与[(MGD)2/Fe-14NO]的特征的三线光谱叠加在一起(分别见图4A和图4B)，另外，当从注射液中去掉15N-精氨酸时，在小鼠肝脏检测到了[(MGD)2/Fe-14NO]的特征光谱(见图4A虚线)。
实施例6
LPS处理的小鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的检测
测定了NMMA对LPS处理的小鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的体外9.5Ghz EPR光谱的影响。这样，在LPS处理后6小时，给小鼠注射[(MGD)2/Fe]配合物，皮下注射或不注射NMMA(50mg/kg)。注射[(MGD)2/Fe]配合物后2小时，处死小鼠，采集尿样，在22℃下进行EPR测量。
从LPS处理的注射了[(MGD)2/Fe]配合物的小鼠的尿样中检测到了[(MGD)2/Fe-NO]配合物较强特征的三线光谱(见图5A)，在LPS激发后8小时，配合物的浓度估计为35.1μM；在注射LPS6小时后，注射[(MGD)2/Fe]配合物。
注射NMMA显著的降低了[(MGD)2/Fe-NO]配合物的信号强度和数量(表2)，这与这个观点，即被注射进LPS处理的小鼠中的[(MGD)2/Fe]配合物捕获的·NO主要是由诱导性的·NO合成酶产生的，相一致。这样，活的动物体内的诱导性的·NO合成酶可通过用这里所述的·NO捕捉剂处理而降低。
此外，同时给LPS处理的小鼠注射15N-精氨酸(10mg/kg)和[(MGD)2/Fe-NO]配合物，产生由[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的双线光谱(实心圆圈)和[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的三线光谱(空心圆圈)的复合光谱，如图6A(实线)所示，图6A中虚线所示的纯粹的[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的三线光谱是当从注射液中去掉15N-精氨酸时得到的。另外，当15N-精氨酸以5mg/只小鼠的水平给药时，[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的信号强度与[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的信号强度相比减小了(图6B)。这些结果清楚地证实，在LPS处理的鼠尿中测到的·NO是通过精氨酸-NO合成酶的途径而过量产生的。
总之，用15N-精氨酸作的同位素示踪试验清楚地证明：在正常小鼠或LPS处理的小鼠中被[(MGD)2/Fe]配合物捕获的·NO是通过精氨酸-NO合成酶的途径产生的(图2,3,4和6)。因此，在我们的试验体系中，活体产生的被[(MGD)2/Fe]配合物捕获的·NO的真实性已经被牢固地建立起来。
LPS给药后，在尿样中检测到的[(MGD)2/Fe-NO]水平随时间的增加如表2中所示。
                        表2
在LPS处理的鼠尿中存在的[(MGD)2/Fe-NO]数量随时间的变化条件                       [(MGD)2/Fe-NO],μMaLPS处理的b0小时                      1.4±0.4(3)c2小时                      7.3±2.2(3)*4小时                      18.2±4.8(4)*6小时                      17.1±4.8(4)*8小时                      35.1±5.7(3)*LPS处理的(6小时以后)d+NMMA(50mg/kg)             3.6±0.9(4)l+NMMA(100mg/kg)            3.8±2.3(3)la   尿中[(MGD)2/Fe-NO]数量按表1所述的方法确定。b   LPS激发后，在所标出的不同的时间点，给小鼠注射
[(MGD)2/Fe],2小时后处死小鼠，采集尿样，进行EPR测量。c   所列数据为平均值±标准偏差(小鼠数量)。d   LPS激发后6小时，注射[(MGD)2/Fe]之前皮下注射的NMMA
的各种数量，尿样
是在2小时以后采集的。*   与对照相比，P＜0.05(见表1)。t   与LPS处理6小时后的组相比，P＜0.05。
实施例7
用[(MGD)2/Fe]活体降低LPS处理的小鼠中·NO的水平
按照前述方法(见Komarov和Lai,supra)，测定了LPS处理的小鼠原生质中硝酸盐水平随时间的增加，其结果概括在表3中。
                        表3
LPS和[(MGD)2/Fe]对小鼠原生质中硝酸盐/亚硝酸盐总水平的影响条件                           硝酸盐/亚硝酸盐，μMa对照                           73±7(10)dLPS处理的b2小时                          103±10(6)*4小时                          291±38(6)*6 小时                         506±75(4)*4小时                          638±29(8)*LPS+[(MGD)2/Fe]配合物c8小时                          336±46(3)*la   小鼠原生质中硝酸盐/亚硝酸盐水平的测定按前述方法进行(见
Komarov和Lai,supra)。b   静脉注射LPS后，在所示的不同时间点处死小鼠。c   LPS激发后6小时，给小鼠皮下注射[(MGD)2/Fe],2小时后处
死小鼠。d   所列数据为平均值±标准偏差(小鼠数量)。*   与对照相比，P＜0.05(见表1)。1   与LPS处理6小时后的组相比，P＜0.05。
可以看到，LPS激发后，硝酸盐水平随时间增大。注射·NO的捕捉剂[(MGD)2/Fe]后，把原生质中的硝酸盐水平降低了一半，该结果暗示，·NO被LPS处理的小鼠中的[(MGD)2/Fe]捕获，阻止了它与红细胞中的血红蛋白作用，因而降低了原生质中的硝酸盐水平。这些结果表明，以含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除剂如[(MGD)2/Fe]配合物给药，有效地降低了LPS处理的小鼠活体中·NO的水平。
实施例8
虽然皮下注射的自旋捕捉剂在排入尿中之前进入组织的途径还不知哓，但可以想象，皮下注射后，[(MGD)2/Fe]配合物扩散穿过毛细血管床，并在那里与·NO合成酶产生的·NO作用，形成[(MGD)2/Fe-NO]配合物，后者然后进入血液循环并最终在尿中排泄和浓缩，因而降低了活体中·NO的水平。发现分离出来的含有[(MGD)2/Fe-NO]配合物的尿可在4℃下稳定好几个小时。当把[(MGD)2/Fe]配合物静脉注射到正常的或LPS处理的小鼠中时，也在尿中检测到了[(MGD)2/Fe-NO]配合物的EPR信号。这暗示，不论以何种途径给药，含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除剂如[(MGD)2/Fe]配合物都能与活体产生的·NO作用，形成一个二硫代氨基甲酸酯-Fe-NO的配合物，从而降低了活体中·NO的水平。
实施例9
如实施例7所示，[(MGD)2/Fe]配合物皮下给药，降低了LPS处理的小鼠活体中·NO的水。由于已知·NO的过量产生能导致全身性低血压，注射[(MGD)2/Fe]配合物能降低活体中·NO的水平，也应当能恢复由LPS处理而导致的低血压动物的血压。为了验证这个观点，作试验测定了[(MGD)2/Fe]配合物给药对由LPS激发而导致的低血压大鼠的血压的影响。
这样，禁食过夜的雄性威斯塔大鼠用塞布塔巴比妥(仲丁硫巴比妥钠，100mg/kg，腹膜注射)麻醉，将一个导管插入股静脉内以利于药物扩散，股动脉里插入套管以便连续地测量血压。给大鼠静脉注射LPS药团(S.流行性斑疹伤寒内毒素，4mg/kg),LPS激发后2小时，按下列方法之一处理大鼠：
(a)对照组，生理盐水灌注-静脉注射1.0ml生理盐水，然后以1.0ml生理盐水/hr的速度灌注1.5小时，
(b)[(MGD)2/Fe](以2/0.4的比例)-静脉注射0.1mmole/kg药团，然后以0.1mmole/kg灌注1.5小时，
(c)[(MGD)2/Fe](以2/0.2的比例)-静脉注射0.1mmole/kg药团，然后以0.1mmole/kg灌注1.5小时，和
(d)[(MGD)2/Fe](以2/0的比例)-静脉注射0.1mmole/kg药团，然后以0.1mmole/kg灌注1.5小时，测量的平均动脉压概括在表4中。
                        表4
各种比例的[(MGD)2/Fe]处理对脂多糖(LPS)诱导的休克大
       鼠的平均动脉压(MAP，用mmHg表示)的影响
     条件1 基线2(平均值±标准偏差)   LPS处理后2小时   LPS处理后1.5小时
a)对照生理盐水(n=16)3   96±2    77±2     78±4
b)[(MGD)2/Fe](2/0.4)4(n=16)   95±3    75±2     96±3
c)[(MGD)2/Fe](2/0.2)(n=6)   98±3    73±4     87±4
d)MGD(2/0)(n=6)   102±5    73±2     94±6
1 试验条件如文本中所述
2 LPS处理前MAP的值
3 n为每组动物的数量
4 [(MGD)2/Fe](2/0.4)其意义为：[(MGD)2/Fe]的比例为2/0.4
被麻醉的大鼠其MAP在96-102mmHg的范围，LPS处理后2小时，MAP下降到73-77mmHg，这是全身性低血压开始的标志。然而生理盐水灌注1.5小时没有改变MAP，灌注从2/0.4(MGD/Fe)-2/0(MGD/Fe)范围的各种比例的[(MGD)2/Fe]，使血压恢复到87-96mmHg(表4)。这些结果暗示，静脉灌注MGD，加或不加铁(Fe)都能使因LPS激发而诱导的低血压大鼠恢复到正常血压(表4)。
由于MGD不结合·NO，可以想象，因灌注MGD而产生的MAP的恢复可至少部分归结于MGD对由过量的·NO产生而释放的细胞内铁的螯合作用，已知在脓毒病或腐烂性休克期间，过量的·NO产生能进攻细胞内的含铁蛋白并导致细胞内的铁损失。这个例子表明：MGD，加或不加铁，都能有效地治疗与多种炎症或感染性疾病相关的全身性低血压症状。
尽管对本发明的详细描述参考了某些特定的优选的实施方案，但是应当明白，对本发明的改进和变化都在本发明的说明书和权利要求书的实质和范围内。

Claims (41)

1．二硫代氨基甲酸盐在制备降低受验者体内氧化氮水平的药物中的应用。
2．二硫代氨基甲酸盐在制备治疗受验者体内氧化氮过量产生的药物中的应用。
3．按照权利要求2所述的应用，其中所说的氧化氮过量产生与腐烂性休克，局部缺血，细胞活素的给药，细胞活素的过量表达，溃疡，溃疡性结肠炎，糖尿病，关节炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，多发性硬化症，硬变病，同种移植排斥，脑脊髓炎，脑膜炎，胰腺炎，腹膜炎，脉管炎，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎，肾不球性肾炎，眼色素层炎，回肠炎，肝炎，肾炎，出血性休克，过敏性休克，发烧，节段性回肠炎，感染，渗血病，慢性疲劳综合症，中风，癌症，心肺分流术，局部缺血/再灌注损伤等有关。
4．按照权利要求2所述的应用，其中所说的氧化氮过量产生与腐烂性休克，局部缺血，白细胞介素-1(IL-1)的给药，白细胞介素-2(IL-2)的给药，白细胞介素-6(IL-6)的给药，白细胞介素-12(IL-12)的给药，肿瘤坏死因子的给药，干扰素-γ的给药，溃疡，溃疡性结肠炎，糖尿病，关节炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，多发性硬化症，硬变病或同种移植排斥有关。
5．按照权利要求2所述的应用，其中所说的氧化氮过量产生与腐烂性休克有关。
6．按照权利要求2所述的应用，其中所说的氧化氮过量产生与细胞活素治疗有关。
7．按照权利要求2所述的应用，其中所说的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂包括一种生理上相容的二价或三价过渡金属离子和含有下列结构的二硫代氨基甲酸根部分：
                  R1R2N-C(S)-S-
其中：
R1和R2各自独立地选自C1-C18的烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，芳基，取代的芳基，杂环芳基，取代的杂环芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1与R2共同形成包含N,R1和R2的5-员环，6-员环或7-员环。
8．按照权利要求7所述的应用，其中过渡金属离子与二硫代氨基甲酸盐部分的比例在大约0-1∶2的范围。
9．按照权利要求7所述的应用，其中所说的生理上相容的二价或三价过渡金属离子选自铁，钴，铜或锰。
10．按照权利要求2所述的应用，其中使所说的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂与细胞活素，抗生素，血管活性剂，或其混合物一起给药。
11．按照权利要求10所述的应用，其中所说的细胞活素选自白细胞介素-1(IL-1)，白细胞介素-2(IL-2)，白细胞介素-6(IL-6)，白细胞介素-12(IL-12),TNF或干扰素-γ。
12．按照权利要求10所述的应用，其中所说的血管活性剂选自儿茶酚胺，去甲肾上腺素，多巴胺或多巴酚丁胺。
13．按照权利要求2所述的应用，其中所说的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂以口服，静脉注射，皮下注射，肠胃外，直肠或吸入方式给药。
14．按照权利要求2所述的应用，其中所说的含有二硫代氨基甲酸盐的氧化氮清除剂以固体，液体，乳剂，分散剂，胶束或脂质体方式给药。
15．一种组合物，包括具有结构Ⅰ的化合物及其药学上可接受的载体，其中所说的药学上可接受的载体是无菌可注射溶液或悬浮液，适合小肠或肠胃外给药的有机或无机载体，用于片剂、锭剂、糖锭、小丸、胶囊、栓剂、乳剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、脂质体、硬或软胶囊、糖浆或酏剂的无毒载体，并且其中结构Ⅰ为：
         R1R2N-C(S)-S-Fe+2,+3    (Ⅰ)
其中：
R1选自C1-C12烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，芳基，取代的芳基，杂环芳基，取代的杂环芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1与R2共同形成包含N,R1和R2的5-员环，6-员环或7-员环，且
R2选自C1-C6烷基或取代的烷基，或者R2与R1共同形成包含N,R2和R1的5-员环，6-员环或7-员环。
16．按照权利要求15所述的组合物，还包括至少一种具有结构Ⅱ的化合物及其药学上可接受的载体，其中所说的药学上可接受的载体是无菌可注射溶液或悬浮液，适合小肠或肠胃外给药的有机或无机载体，用于片剂、锭剂、糖锭、小丸、胶囊、栓剂、乳剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、脂质体、硬或软胶囊、糖浆或酏剂的无毒载体，并且其中结构Ⅱ为：
         [R1R2N-C(S)-S-]xM+1,+2,+3    (Ⅱ)
其中：
R1选自C1-C12烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，芳基，取代的芳基，杂环芳基，取代的杂环芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1与R2共同形成包含N,R1和R2的5-员环，6-员环或7-员环，
R2选自C1-C6烷基或取代的烷基，或者R2与R1共同形成包含N,R2和R1的5-员环，6-员环或7-员环，
当x是1时，M是一价阳离子，或者当x是2或3时，M是生理相容的二价或三价金属阳离子。
17．按照权利要求16所述的组合物，其中过渡金属离子与二硫代氨基甲酸盐部分的比例在大约0-1∶2的范围。
18．按照权利要求16所述的组合物，其中M+1选自H+,Na+,NH4 +或四烷基铵。
19．按照权利要求16所述的组合物，其中M+2,+3选自Co+2,Co+3,Cu+2,Mn+2或Mn+3。
20．按照权利要求16所述的组合物，其中：
R1=C1-C12烷基，取代的烷基，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，其中所说的取代基选自羧基，-C(O)H，氧酰基，苯酚，苯氧基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，酰氨基，羟基，硝基或磺酰基，和
R2=C1-C4烷基或取代的烷基。
21．按照权利要求16所述的组合物，其中：R1=C2-C8烷基或取代的烷基，其中所说的取代基选自羧基，乙酰基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，酰氨基，羟基或硝基，和
R2=甲基，乙基，丙基或丁基。
22．按照权利要求16所述的组合物，其中：
R1=C2-C8烷基或取代的烷基，其中所说的取代基选自羧基，乙酰基，酰氨基或羟基，和
R2=甲基，乙基，丙基或丁基。
23．按照权利要求15所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体选自固体、乳剂、分散剂、胶束或脂质体。
24．按照权利要求15所述的组合物，其中所说的组合物还包括肠溶衣。
25．一种组合物，包括具有结构Ⅰ的化合物与一种药理活性剂，其中结构Ⅰ为：
      R1R2N-C(S)-S-M+    (Ⅰ)其中：
R1选自C1-C12烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，芳基，取代的芳基，杂环芳基，取代的杂环芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1与R2共同形成包含N,R1和R2的5-员环，6-员环或7-员环，且
R2选自C1-C6烷基或取代的烷基，或者R2与R1共同形成包含N,R2和R1的5-员环，6-员环或7-员环，
M是一价阳离子，
然而，条件是：下列化合物要从式(Ⅰ)的定义中去掉，即当R1为乙基时，R2不是乙基；或者当R1为CH2(CHOH)4CH2OH时，R2不是甲基，异戊基，苄基，4-甲基苄基或对异丙基苯甲基；或者当R1为CH2CO2-时，R2不是CH2CO2 -；或者当R1为CO2 -时，R2不是CH3；或者当R1为CH2CH2-OH时，R2不是CH2CH2-OH；或者当R1和R2结合在一起时，它们与胺基甲酸盐的氮原子一起形成吡咯烷基-2-甲酸盐。
26．按照权利要求25所述的组合物，其中所说的药理活性剂选自细胞素、抗生素、血管活性剂或其混合物。
27．按照权利要求25所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是无菌注射悬浮液或溶液。
28．按照权利要求25所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是适合小肠或肠胃外给药的有机或无机载体。
29．按照权利要求25所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是用于片剂、锭剂、糖锭、小丸、胶囊、栓剂、乳剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、脂质体、硬或软胶囊、糖浆或酏剂的无毒载体。
30．按照权利要求16所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体选自固体、乳剂、分散剂、胶束或脂质体。
31．按照权利要求16所述的组合物，其中所说的组合物还包括肠溶衣。
32．按照权利要求16所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是无菌注射液或悬浮液。
33．按照权利要求16所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是适合小肠或肠胃外给药的有机或无机载体。
34．按照权利要求16所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是用于片剂、锭剂、糖锭、小丸、胶囊、栓剂、乳剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、脂质体、硬或软胶囊、糖浆或酏剂的无毒载体。
35．一种组合物，包括具有结构Ⅱ的化合物和药理活性剂，其中结构Ⅱ为：
        [R1R2N-C(S)-S-]2M+2,+3    (Ⅱ)其中：
R1选自C1-C12烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，杂环，取代的杂环，链烯基，取代的链烯基，链炔基，取代的链炔基，芳基，取代的芳基，杂环芳基，取代的杂环芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1与R2共同形成包含N,R1和R2的5-员环，6-员环或7-员环，
R2选自C1-C6烷基或取代的烷基，或R2与R1共同形成包含N,R2和R1的5-员环，6-员环或7-员环，且
M是生理上相容的二价或三价过渡金属离子阳离子，然而，条件是：下列化合物要从式(Ⅱ)的定义中去掉，即当R1为乙基时，R2不是乙基；或者当R1为CH2(CHOH)4CH2OH时，R2不是甲基，异戊基，苄基，4-甲基苄基或对异丙基苯甲基；或者当R1为CH2CO2 -时，R2不是CH2CO2 -；或者当R1为CO2 -时，R2不是CH3；或者当R1为CH2CH2-OH时，R2不是CH2CH2-OH；或者当R1和R2结合在一起时，它们与胺基甲酸盐的氮原子一起形成吡咯烷基-2-甲酸盐。
36．按照权利要求35所述的组合物，其中所说的药理活性剂选自细胞素、抗生素、血管活性剂或其混合物。
37．按照权利要求35所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是无菌注射悬浮液或溶液。
38．按照权利要求35所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是适合小肠或肠胃外给药的有机或无机载体。
39．按照权利要求35所述的组合物，其中所说的药学上可接受载体是用于片剂、锭剂、糖锭、小丸、胶囊、栓剂、乳剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、脂质体、硬或软胶囊、糖浆或酏剂的无毒载体。
40．按照权利要求35的组合物，其中所说的药学上可接受的载体选自固体，溶液，乳剂，分散剂，胶束或脂质体。
41．按照权利要求35的组合物，其中所说的组合物还包括肠溶衣。
CN96194392A 1995-06-02 1996-02-27 降低活体内氧化氮水平的方法及其可用的组合物 Expired - Lifetime CN1075816C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/459,518 US5756540A (en) 1995-06-02 1995-06-02 Methods for in vivo reduction of nitric oxide levels and compositions useful therefor
US08/459,518 1995-06-02
US08/554,196 1995-11-06
US08/554,196 US5741815A (en) 1995-06-02 1995-11-06 Methods for in vivo reduction of nitric oxide levels and compositions useful therefor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1186495A CN1186495A (zh) 1998-07-01
CN1075816C true CN1075816C (zh) 2001-12-05

Family

ID=27039393

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN96194392A Expired - Lifetime CN1075816C (zh) 1995-06-02 1996-02-27 降低活体内氧化氮水平的方法及其可用的组合物

Country Status (8)

Country Link
US (2) US5741815A (zh)
EP (1) EP0850240A4 (zh)
JP (1) JP3393606B2 (zh)
KR (1) KR19990022174A (zh)
CN (1) CN1075816C (zh)
AU (1) AU703952B2 (zh)
CA (1) CA2223276A1 (zh)
WO (1) WO1996038457A1 (zh)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2686899B1 (fr) * 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US6469057B1 (en) * 1995-06-02 2002-10-22 Mcw Research Foundation, Inc. Methods for in vivo reduction of free radical levels and compositions useful therefor
US5747532A (en) * 1995-11-21 1998-05-05 Medinox, Inc. Combinational therapeutic methods employing nitric oxide scavengers and compositions useful therefor
US5922761A (en) * 1996-09-06 1999-07-13 Medinox, Inc. Methods for in vivo reduction of iron levels and compositions useful therefor
US6160021A (en) * 1997-02-04 2000-12-12 The General Hospital Corporation Method for treating epidermal or dermal conditions
US5858402A (en) * 1997-02-11 1999-01-12 Medinox, Inc. Methods for in vivo reduction of cyanide levels and compositions useful therefor
US6093743A (en) * 1998-06-23 2000-07-25 Medinox Inc. Therapeutic methods employing disulfide derivatives of dithiocarbamates and compositions useful therefor
US6596770B2 (en) * 2000-05-05 2003-07-22 Medinox, Inc. Therapeutic methods employing disulfide derivatives of dithiocarbamates and compositions useful therefor
US6265420B1 (en) * 1998-06-23 2001-07-24 Medinox, Inc. Use of nitric oxide scavengers to treat side effects caused by therapeutic administration of sources of nitric oxide
US6124349A (en) * 1999-02-18 2000-09-26 Medinox, Inc. Method for preparation of pharmaceutical-grade dithiocarbamate
US6274627B1 (en) * 1999-10-12 2001-08-14 Medinox, Inc. Conjugates of dithiocarbamate disulfides with pharmacologically active agents and uses therefor
US6231894B1 (en) 1999-10-21 2001-05-15 Duke University Treatments based on discovery that nitric oxide synthase is a paraquat diaphorase
US20050100991A1 (en) * 2001-04-12 2005-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
AU2001266557A1 (en) * 2000-04-12 2001-10-23 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
CA2446739A1 (en) * 2001-05-25 2002-12-05 Human Genome Sciences, Inc. Chemokine beta-1 fusion proteins
WO2003059934A2 (en) * 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
EP2261250B1 (en) 2001-12-21 2015-07-01 Human Genome Sciences, Inc. GCSF-Albumin fusion proteins
JP2006503103A (ja) * 2002-06-28 2006-01-26 ファルマシア コーポレーション 酸化窒素の定量に有用な方法及び造影剤
US20060142621A1 (en) * 2003-01-29 2006-06-29 Tiekink Edward R T Bismuth dithiocarbamate compounds and uses thereof
US20060235370A1 (en) * 2005-04-04 2006-10-19 Oblong John E Method of regulating mammalian keratinous tissue
CA2609980C (en) * 2005-05-27 2015-10-13 Queen's University At Kingston Treatment of protein folding disorders
WO2007139897A1 (en) * 2006-05-23 2007-12-06 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods for the inhibition of endothelial nitric oxide synthase activity
US7975699B2 (en) * 2007-10-30 2011-07-12 The Invention Science Fund I, Llc Condoms configured to facilitate release of nitric oxide
US8642093B2 (en) * 2007-10-30 2014-02-04 The Invention Science Fund I, Llc Methods and systems for use of photolyzable nitric oxide donors
US20110190604A1 (en) * 2006-12-22 2011-08-04 Hyde Roderick A Nitric oxide sensors and systems
US20090112193A1 (en) * 2007-10-30 2009-04-30 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Systems and devices that utilize photolyzable nitric oxide donors
US20110182970A1 (en) * 2007-10-30 2011-07-28 Hyde Roderick A Nitric oxide sensors and systems
US10080823B2 (en) * 2007-10-30 2018-09-25 Gearbox Llc Substrates for nitric oxide releasing devices
US8877508B2 (en) * 2007-10-30 2014-11-04 The Invention Science Fund I, Llc Devices and systems that deliver nitric oxide
US20090112055A1 (en) * 2007-10-30 2009-04-30 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Sleeves configured to facilitate release of nitric oxide
US8685728B2 (en) 2008-01-31 2014-04-01 Rutgers The State University Of New Jersey Kit containing stem cells and cytokines for use in attenuating immune responses
US10046011B2 (en) 2008-01-31 2018-08-14 Rutgers, The State University Of New Jersey Compositions for inducing or suppressing an immune response
WO2010003308A1 (zh) * 2008-07-10 2010-01-14 卞化石 一氧化氮及其信息传递系统在制备恶性肿瘤靶向治疗药物中的应用
US9572774B2 (en) 2011-05-19 2017-02-21 Savara Inc. Dry powder vancomycin compositions and associated methods
GB201117051D0 (en) * 2011-10-04 2011-11-16 Uni I Oslo Carbonic anhydrase inhibitors
US20140350097A1 (en) * 2013-05-23 2014-11-27 Medinox,Inc. Treatment of hypotension associated with hemodialysis

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1863572A (en) * 1926-12-18 1932-06-21 Ig Farbenindustrie Ag N-substituted dithiocarbamic acids and the salts thereof
US2876159A (en) * 1957-04-12 1959-03-03 Sunderman Frederick William Dithiocarbamates for treatment of nickel poisoning
US4554108A (en) * 1983-07-26 1985-11-19 Phillips Petroleum Company Alkali carboxyalkyl dithiocarbamates and use as ore flotation reagents
US4595538A (en) * 1985-03-04 1986-06-17 Phillips Petroleum Company Tri-alkali metal-di(carboxyalkyl)dithiocarbamate and triammonium-di(carboxyalkyl)dithiocarbamate flotation agents

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL108029C (zh) * 1957-11-18
US4166866A (en) * 1975-05-21 1979-09-04 The California Polytechnic State University Foundation Immunosuppressive method with dithiocarbamates
US4160452A (en) * 1977-04-07 1979-07-10 Alza Corporation Osmotic system having laminated wall comprising semipermeable lamina and microporous lamina
US4256108A (en) * 1977-04-07 1981-03-17 Alza Corporation Microporous-semipermeable laminated osmotic system
JPS54126734A (en) * 1978-03-24 1979-10-02 Mamoru Morioka Skin disease treating agent of human
US4265874A (en) * 1980-04-25 1981-05-05 Alza Corporation Method of delivering drug with aid of effervescent activity generated in environment of use
EP0140835B1 (de) * 1983-09-30 1987-04-15 Hydrel AG Verfahren zum Aufwinden eines Fadens zu einer Spule und elektrohydraulische Changiereinrichtung zur Ausführung des Verfahrens
US5807884A (en) * 1992-10-30 1998-09-15 Emory University Treatment for atherosclerosis and other cardiovascular and inflammatory diseases
US5380747A (en) * 1992-10-30 1995-01-10 Emory University Treatment for atherosclerosis and other cardiovascular and inflammatory diseases
US5358703A (en) * 1993-09-27 1994-10-25 Mcw Research Foundation, Inc. Method for the detection of nitric oxide

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1863572A (en) * 1926-12-18 1932-06-21 Ig Farbenindustrie Ag N-substituted dithiocarbamic acids and the salts thereof
US2876159A (en) * 1957-04-12 1959-03-03 Sunderman Frederick William Dithiocarbamates for treatment of nickel poisoning
US4554108A (en) * 1983-07-26 1985-11-19 Phillips Petroleum Company Alkali carboxyalkyl dithiocarbamates and use as ore flotation reagents
US4595538A (en) * 1985-03-04 1986-06-17 Phillips Petroleum Company Tri-alkali metal-di(carboxyalkyl)dithiocarbamate and triammonium-di(carboxyalkyl)dithiocarbamate flotation agents

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FEBS LETTCRS 345 1994 120-124 1994.1.1 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP0850240A1 (en) 1998-07-01
EP0850240A4 (en) 2001-08-29
US5741815A (en) 1998-04-21
US5847004A (en) 1998-12-08
CN1186495A (zh) 1998-07-01
WO1996038457A1 (en) 1996-12-05
KR19990022174A (ko) 1999-03-25
AU4930396A (en) 1996-12-18
AU703952B2 (en) 1999-04-01
JP3393606B2 (ja) 2003-04-07
JPH11510789A (ja) 1999-09-21
CA2223276A1 (en) 1996-12-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1075816C (zh) 降低活体内氧化氮水平的方法及其可用的组合物
CN1222286C (zh) 过亚硝酸盐分解催化剂的应用方法及其药物组合物
CN1152869A (zh) 动脉粥样硬化和其它心血管疾病及炎症的治疗方法
CN1167444A (zh) 金属复合物作为ct扫描中的肝胆放射造影剂的应用
CN1155392C (zh) 高分子嵌段共聚物-药物复合制剂
CN1168636A (zh) 脂质体剂
CN1246121A (zh) 免疫抑制化合物及方法
CN1960720A (zh) 肽类化合物治疗肌萎缩性侧索硬化的新用途
CN1109016C (zh) 合成的多不饱和脂肪酸类似物
RU2755181C2 (ru) Новые хелатные соединения гадолиния с высокой релаксивностью для применения в магнитно-резонансной визуализации
TWI309162B (en) Amino acid composition for improving functional disorder of liver
JP2007513998A (ja) 選択的アンドロゲン受容体調節剤のプロドラッグ及びその使用方法
JPH07508973A (ja) 血中酸素親和性の抑制のためのヘモグロビンのアロステリック修飾剤の使用
CN1729007A (zh) 用于预防和治疗炎性疾病,自体免疫性疾病,和移植排斥的组成物及方法
US6469057B1 (en) Methods for in vivo reduction of free radical levels and compositions useful therefor
CN1032534C (zh) 二氨基三氟甲基吡啶衍生物的制备方法
CN1219130A (zh) 用于治疗眼部炎症的含硝酮化合物的组合物
CN1258277A (zh) 细胞增生抑制剂氰基胍
US5756540A (en) Methods for in vivo reduction of nitric oxide levels and compositions useful therefor
Lorber et al. Entero-Hepatic Circulation of Bromsulphalein: I. Studies on Man with Special Reference to the Clinical BSP Test
CN1142765A (zh) 以聚戊二烯基衍生物作为有效成分的炎症性细胞素产生抑制剂
CN1579377A (zh) 姜黄素在制备治疗肺病的药物中的用途
CN1923211A (zh) 一种黄芪甲苷注射液及其制备方法
CN115124484B (zh) 一类新型mr肝脏特异性造影剂及其合成方法
JPH07165610A (ja) 血圧制御剤

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20011205

EXPY Termination of patent right or utility model