CN1075636A

CN1075636A - 促进动物生长的方法和含有杀死的梭状芽胞杆菌属的细菌的微生物细胞的粉末组合物

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Publication number: CN1075636A
Application number: CN92115398A
Authority: CN
Inventors: 河野和已; 水饲康之; 水落一雄; 浅野猛; 村山隆一; 北城俊男; 田中守
Original assignee: Miao Li San Co ltd; Nippon Kayaku Co Ltd
Current assignee: Miao Li San Co ltd; Nippon Kayaku Co Ltd
Priority date: 1991-12-11
Filing date: 1992-12-11
Publication date: 1993-09-01
Anticipated expiration: 2007-12-11
Also published as: DE69224734D1; EP0553444B1; CA2085258C; CN1070056C; CA2085258A1; ES2113398T3; EP0553444A1; DE69224734T2; TW245640B; US5292523A

Abstract

本发明提供了一种用于促进动物生长的方法，该方法包括使动物食用梭状芽胞杆菌属的细菌和杀死的微生物细胞，而且还提供一种粉末组合物，该组合物包括作为基本组分的梭状芽胞杆菌属的细胞的杀死的微生物营养细胞，以及糖类和/或淀粉。

Description

本发明涉及一种促进动物生长的方法和一种含有杀死的梭状芽胞杆菌属的细菌的微生物细胞的粉末组合物。

抗菌物质如抗菌素被广泛地用作饲料添加剂，以促进饲养的家畜、家禽和人工养殖的水生动物的生长。

然而，消费者，大众媒介等常常提出一个严重的问题，即在饲养的家畜、家禽和人工养殖的水生动物的肉中可能存有抗菌物质的残留物。从而，人们做了大量的关于使用抗菌物质的研究工作，这是从给人们提供高度安全的食品的立场出发的。

另一方面，很早以来人们已经使用含有前生命期（Probiotics）物质的微生物组合物以保持哺乳动物包括人类和家畜的健康。人们一般认为这样的组合物对于致病的细菌有对抗活性，因而认为有用的能活的细菌的存在对于所说的组合物来说是无可争议的。

在含有前生命期物质的微生物组合物的情况下，考虑到蛋白质变性，不允许将它们加热，从而这样的组合物不能制成有高强度的碎屑和小丸。如果将藏有前生命期物质（如梭状芽胞杆菌属的细菌）的淀粉酶加入到含有α-淀粉（作为粘合剂）的糊状饲料中（如用于人工养殖鳗鲡的饲料），这种饲料可能会由于这种淀粉酶的作用而变质。进一步而言，如果该前生命期物质是形成孢子的细菌，就需使它们进行形成孢子处理来足以避免细菌的死亡，因此制备这样的微生物组合物有很低的产率。

所以，本发明的一个目的是提供生长的促进物质，该物质可以安全地用于代替已知的抗菌物质和含有前生命期的物质的微生物组合物。

根据本发明，提供一种用于促进动物生长的方法，该方法包括使动物口服梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物细胞。本发明还涉及一种粉末组合物，该组合物的基本成分包括梭状芽胞杆菌属的细菌杀死的微生物营养细胞，以及糖类和/或淀粉。

作为梭状芽胞杆菌属的微生物，例如可能被提到的酪酸梭状芽胞杆菌。特别优选的是酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI（Clostridium butyricum MIYAIRI），它作为前生命期生物制剂可从Miyarisan Co.，Ltd.，Japan购得。就所述微生物制剂来说，已经观察到人类和家畜长时期服用后没有任何所不希望的副作用。

作为MIYAIRI种的一个例子，可能提到酪酸梭状芽胞杆菌株MIYAIRI 588，它已被寄存在日本的工业科学和技术株式会社的发酵研究所（the Fermentation Research Institute of the Agency of Industrial Science & Technology of Japan）作为布达佩斯条约的一个国际寄存，所给的登记号为FERM BP-2789。

为制备这种微生物的杀死细胞所用的存活的微生物细胞，可以没有任何限制地使用形成孢子阶段的和营养阶段的存活的细胞。优选的是营养阶段的存活细胞。用于培养这种存活的细菌的一种方法公开在美国专利4，892，731号中。

按照本发明所用的杀死的微生物细胞可以用常规的方法获得，例如，将相应的存活的微生物细胞进行热处理或用福尔马林或其它杀菌剂处理。所述杀死的微生物细胞可以是已经被大量杀死的。还可以使用当被制成制剂时可被实际上杀死的存活的微生物细胞。

例如可以通过一种适宜的方法得到梭状芽胞杆菌属的细菌的微生物营养细胞。对于培养和分离微生物细胞的方法没有限制。例如，有一种方法，特征是将梭状芽胞杆菌细菌移植到一种适宜的培养基中如一种常规的含葡萄糖的肉汤，并且在30至40℃下培养14至24小时。完成上述初步培养之后，进行主培养，也就是将在初步培养中得到的液体培养产物移植到具有较大规模的相似培养基中，并在与初步培养中所用的温度和时间条件相似的条件下培养。完成主培养后，可用适当的方式如一离心分离器分离所培养成的微生物细胞。用于所述细菌的任何培养基没有特别的限制。例如，可以使用用于酪酸梭状芽胞杆菌常规的肉汤，它含有0.8%的肉汁、1%的胨和0.5%的氯化钠。一般优选的液体培养基含有葡萄糖、酵母汁和胨。

还可以实行一种在日本专利KOKOKU NO.8300/1962中描述的方法，该方法中培养操作进行约14至24小时这样相对短的时间，然后中断该操作以获得形成孢子阶段之前的营养阶段的微生物细胞，并收获所述微生物细胞。

按照本发明所用的梭状芽胞杆菌细菌的杀死的微生物营养细胞可以通过在空气中将培养的微生物营养细胞过滤来获得。如果在空气中过滤是不够的话，那么可以将过滤后的产物悬浮到存在空气的水中。梭状芽胞杆菌属的细菌是专性的厌氧微生物，当细菌的微生物营养细胞暴露于空气中时将会杀死，从而得到细菌的杀死的微生物营养细胞。

还可以通过将相应的存活的营养细胞进行热处理或用福尔马林或其它杀菌剂处理来获得杀死的微生物营养细胞。杀死的微生物细胞可以是已被大量杀死的。另外，如果当存活的微生物细胞被制成制剂时可被大量杀死时，就可以使用存活的微生物细胞。

按照本发明，所用的杀死的微生物细胞可以是每克杀死的微生物细胞含有至少10⁹，优选为10⁹-10¹¹的微生物细胞。上述微生物细胞数是用这样的方法来计算的，将乳化的微生物细胞悬浮在一种生理盐水中，在显微镜下借助于血球计数器进行计数操作。

按照本发明的微生物组合物，每克该组合物含有至少10⁶，优选为10⁶-10¹¹，更优选为10⁶-10¹⁰杀死的微生物细胞。

食用本发明的组合物的动物是除了人类以外的那些，例如包括家畜、家禽、人工养殖的水生动物等。

本发明的微生物组合物可以通过如下方法制备，培养微生物细胞后，将该微生物细胞进行杀菌处理，并将所得到的杀死的微生物细胞分离和浓缩。这样得到的杀死的微生物细胞的干粉末可以直接制成制剂。还可以将所述干粉末与按照日本的关于饲料的安全保证和质量改进的法律所允许的一种赋形剂混合来制成制剂，所述赋形剂如脱脂米糠、小麦粉、葡萄糖、硅石、麦糠之类。而且，可以浓缩和干燥带有残留物的液体培养产物，以获得含有可将被用作本发明的组合物中的有效组分的杀死的微生物细胞的灭菌混合物。本发明的组合物可以是粉末状、片状、丸状、细粒状、胶囊等。

这样的片剂可以用传统的方法制备，可以使用赋形剂、分解剂、粘合剂、润滑剂等。

关于赋形剂，可能提到如糖类，如乳糖、D-甘露醇、D-山梨醇和蔗糖;淀粉和谷物淀粉如土豆淀粉;和无机盐如磷酸钙、硫酸钙和沉淀的碳酸钙。

分解剂的例子为淀粉如羟丙基淀粉、羧甲基钠淀粉和已被部分转化成α型的淀粉;纤维素衍生物如羧基甲基纤维素钙、羧基甲基纤维素和具有低取代度的羟丙基纤维素;和合成的高聚物如交联的聚乙烯吡咯烷酮。

关于粘合剂，例如可使用高分子量的物质如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、凝胶、阿拉伯树胶等。

润滑剂的例子一般为天然存在物质和它们的衍生物，如滑石、蜡、胶体二氧化硅;和脂肪酸如硬脂酸及其金属盐、如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸铝和蔗糖脂肪酸酯。

聚合物如Macrogol用于片剂中是适宜的。

当本发明的组合物用于促进动物生长时，它们一般作为饲料和饮用水的添加剂使用。所以，在这种情况下，优选将组合物制成粉末状。这样的粉末组合物可含有0.00005-80%，优选为0.0005-70%，更优选为0.01至50%的含有梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物细胞的粉末，其余部分用载体平衡。

至于本发明的组合物，可以说所优选的组合物不仅含有杀死的微生物营养细胞，而且还含有糖类和/或淀粉，因为这类优选的组合物的生长促进活性是相当高的。这样，优选的粉末组合物含有梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物营养细胞以及糖类和/或淀粉。

关于含有杀死的微生物细胞的粉末组合物中所用的糖类，可以使用任何糖类，例如包括葡萄糖、果糖、蔗糖、低聚糖、乳糖等，优选的是乳糖。

关于淀粉，可使用任何淀粉，如小麦淀粉、土豆淀粉和谷物淀粉，优选的是谷物淀粉。

每克含有杀死的微生物营养细胞的粉末应含有至少10⁹个，优选为10⁹-10¹¹个的微生物细胞。

本发明的含有梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物营养细胞的粉末组合物的制备可通过如下方法进行，即将含有杀死的微生物细胞的粉末与粉末状的糖类或淀粉掺和，以形成均匀的混合物。另一种方法包括将以杀死的微生物细胞为主的湿物质与糖类或淀粉混合以形成混合物，然后将该混合物干燥和粉碎。为操作简便起见，优选将杀死的微生物细胞与糖类和/或淀粉掺合以形成混合物，然后将该混合物悬浮在水中。将所得到的悬浮液进行喷雾干燥操作，其中热空气的入口温度在120和200℃之间，优选在130和170℃之间，出口温度在30和150℃之间，优选在50和100℃之间。至于所加的糖类和淀粉的量，一般来说每份重量的梭状芽胞杆菌细菌的杀死的微生物营养细胞加入糖类0.04和700份（重量），优选为0.1和70份（重量）之间，而淀粉的加入量为0.2和700份（重量），优选为0.4和70份（重量）之间。在喷雾干燥操作情况下，显然如果使用生理上允许的难溶于水的无机物如碳酸钙等作为添加剂，更容易进行所述操作。以上述基本组分的总量计，所述加入的无机物的量为0.005和0.5份，优选为0.01和0.2份，更优选为0.01和0.1份（重量）之间。

用上述方法制得的含有梭状芽胞杆菌细菌的杀死的微生物营养细胞的粉末组合物一般含有0.05-80%，优选0.5-70%，更优选5-50%以梭状芽胞杆菌细菌的杀死的微生物细胞的粉末基准，1-50%，优选3-40%，更优选5-30%的糖类，和15-90%，优选25-80%，更优选35-75%的淀粉。所述粉末组合物可含有至少10⁹个，优选10⁹-10¹¹个，更优选10⁹-10¹⁰个的杀死的微生物细胞。在组合物还含有无机物的情况下，无机物的含量一般在0.5和50%之间，优选在1和20%之间，更优选在1和10%之间。

还可以将赋形剂加到所述粉末组合物中。作为可被提到的所用的赋形剂，例如按照日本的关于饲料的安全保证和质量改进的法律所允许的任何赋形剂，包括脱脂米糠、大豆粉末、糖屑、谷壳粉末、碳酸钙、糖类、淀粉类、啤酒酵母和麦糊。可以使用任一种赋形剂或至少两种赋形剂。每份重量的上述粉末组合物（重量），所加入的赋形剂的量一般在0.01和1000份（重量）之间，优选0.1和800份（重量）之间，更优选1和500份（重量）之间。就含有赋形剂的粉末组合物来说，每克组合物所含的杀死的微生物细胞的数目一般至少约10⁶个，优选在10⁶和10¹¹个之间，更优选在10⁶和10¹⁰个之间。

含赋形剂的粉末组合物一般含有0.00005-80%，优选0.0005-70%，更优选0.01至25%的基于梭状芽胞杆菌细菌的杀死的微生物营养细胞的粉末，0.001至50%，优选0.003-40%，更优选0.01-15%的糖类，0.015-90%，优选0.03-80%，更优选0.05-40%的淀粉，和1-99.9%，优选10-99.8%，更优选50-99.7%的赋形剂。如果上述粉末组合物是通过喷雾干燥操作制备的，还含有无机物，无机物的适宜量在0.0005和33%之间，优选在0.001和15%之间，更优选在0.002和5%之间。

当使用糖类、淀粉或无机物作为赋形剂时，组合物中赋形剂的量如下：0.001-99.9%，优选为0.003-99.8%，更优选为0.01-99.7%的糖类，0.015-99.9%，优选0.03-99.8%，更优选0.05-99.7%的淀粉，和0.0005-99.9%，优选0.001-99.8%，更优选0.002-99.7%的无机物。

本发明的组合物可以加入诸如流动性改进剂、抗凝结剂、抗分散剂等的添加剂。

虽然本发明的组合物通常加到家畜、家禽或人工养殖的水生动物的饲料或饮用水中，本发明的组合物也可以施加到动物体中。如果需要，可以连续食用，通常1个月至几年的时间。

要服用的动物的例子是家畜如牛、猪、马和羊;家禽如小鸡、母鸡、鹌鹑、鸭、家养的鸭、雉和火鸡;和人工养殖的水生动物如黄尾、海鱼（sea-bram）、海豚、金枪鱼、大菱鲆、马鲐鱼、鲑、鲤鱼、鳗鲡、彩虹真鳟、淡水真鳟、龙虾类如对虾、小龙虾、龙虾属龙虾和黑虎（black tiger），以及蟹类如拟石蟹属、Chionoecetes和Erimacrus。

当将组合物加到饲料中时，所加的组合物的量为使每克饲料含微生物细胞的数目至少约10⁴个，优选为约10⁴和10⁷个之间，更优选为约10⁴和10⁶个之间。例如，当使用不含赋形剂的组合物时，所加的组合物的量可为至少0.1ppm，优选在0.1和1000ppm之间，更优选在0.1和100ppm之间。当使用含赋形剂的组合物时，组合物的量可至少为0.001%（wt），优选在0.01和10%（wt）之间，更优选为在0.1和0.5%（wt）之间。

当组合物加到饮用水时，所加的组合物的量为每毫升饮用水含微生物细胞数目至少约10⁴个，优选为约10⁴和10⁷个之间，更优选在约10⁴和10⁶个之间。例如，当所用组合物不含赋形剂时，所加入的组合物的量一般为至少0.05ppm，优选在0.05和500ppm之间，更优选在0.05和50ppm之间。当使用含有赋形剂的组合物时，所加的组合物的量一般至少0.0005%，优选在0.005%和5%之间，更优选在0.05和0.5%之间。

本发明及其效果将由下面的试验结果进一步阐明。

试验1-1

彩虹真鳟的生长试验

目的：为了观察生长促进效应，进行一些试验，将酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的死的微生物细胞加入到彩虹真鳟的饲料中。

试验方法：

样品：使用每克饲料加入10⁵酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞而制成的饲料。

步骤：彩虹真鳟（rainbow trouts）的平均体重为每只20g;将它们饲养40天，使每组彩虹真鳟的数目为525只。

试验结果示于表1中。

表1：彩虹真鳟的生长试验

组每日体重增加饲料效率

(g/鱼/天)

使用杀死的微生 0.23(110) 0.73(106)

物细胞

使用存活的微 0.21(100) 0.69(100)

生物细胞

对比 0.21(100) 0.69(100)

注释：括号中的数是基于对比组中得到的值为100时的相应的指数。

如表1所示，观察到酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞显示出对彩虹真鳟有促进生长效果。

试验1-2

老鼠生长试验：

目的：为了观察酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞的生长促进效果，进行下面的试验，将杀死的微生物细胞加到老鼠的饲料中。

样品：使用每克饲料加入10⁵个或10⁷个的酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞而制成的饲料。

试验步骤：SPF鼠，平均体重为每只25克，饲养28天增重，每组鼠数为10。

试验结果示于表2中。

表2：老鼠生长试验

组体重增加

使用每克含10⁵杀死 3.80g(129)

的微生物细胞

使用每克含10⁷杀死 4.50(153)

的微生物细胞

对比 2.95(100)

注释：括号中的数为基于对比组所得到的值为100相应的指数。

如表2所示，观察到酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞对老鼠有促进生长效果。

试验1-3

小鸡生长试验

目的：为了观察酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞的生长促进效果，进行下面的试验，将杀死的微生物细胞加入到小鸡的饲料中。

样品：使用每克饲料含10⁶酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞而制成的饲料。

试验步骤：将平均体重为每只40g的小鸡饲养28天增重，每组小鸡数目为20。

试验结果示于表3中。

表3：小鸡的生长试验

体重增加饲料转化

使用杀死的微生物 882g(104) 1.57(98)

细胞的组

对比组 846g(100) 1.61(100)

注释：括号内的数是基于对比组中得到的值为100所相应的指数。

如表3所示，观察到酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI对小鸡有促进生长效果。

试验1-4

人工养殖的鳗鲡的饲料的变质试验（即，饲料在水中的所不希望的消散试验）

目的：进行下面的试验，以观察加入以酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的存活的或杀死的微生物细胞为基质的粉末后，人工养殖鳗鲡的饲料是否出现变质

试验步骤：如表4所示，将100g饲料放入一烧杯中，并与120克水混合并揉和以制成一种象饲料糕的混合物，然后在30℃下静置10分钟，再制成团状样品，每个样品重10克。每个团状样品含有每克样品约10⁵酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的微生物细胞。

表4：样品的组成

对比组使用存活的使用杀死的

细菌组细菌组

鱼粉 80% 80% 80%

转化成α-型的淀粉 20% 19 19

存活的细菌 - 1 -

死的细菌 - - 1

将每个样品放入一体积为300毫升的锥形瓶中，与100ml水混合，并且用设置有加热装置的振动器振动30分钟。振动后，将样品静置5分钟，然后

分离出上层清液。用一分光光度计在660mμ的波长下测定上层清液的透光度。每个样品测量5次，记下平均测定值。

试验结果示于表5中。

表5：鳗鲡饲料的变质试验（水中的消散试验）

对比组使用存活的细菌组使用杀死的细菌组

透光度 56.5 31.8 57.6

(100) (56) (102)

注释：括号内的数为基于对比组中得到的值为100时相应的指数

从表5中观察到，当使用杀死的微生物细胞代替存活的微生物细胞（制成饲料）时，加入存活的微生物细胞的饲料在水中的所不希望的消散受到抑制。

试验2-1

小鸡的生长试验

（1）样品：

按本发明的样品：表示于实施例2-3中的杀死的微生物组合物（微生物细胞数：8.7×10¹⁰/g）

参考样品：示于参考实施例中的只含有杀死的微生物营养细胞的粉末（微生物细胞数：5×10¹¹/g）。

（2）试验步骤：饲养Arbor Acres种的小鸡，小鸡体重为约44g，每组的鸡数为20（即10只雄的和10只雌的），而且每种试验重复做三次。用小鸡饲料饲养小鸡增重，所述饲料不含任何抗菌素和抗菌物质，上述样品饲料每克含有（4.4至4.5）×10⁵的微生物细胞。生长试验进行4周。再者，在对比组中，用不含上述样品的饲料饲养小鸡。

（3）试验结果示于下面给出的表中。

表：小鸡生长试验

组体重增加饲料转化

对比 845g(100) 1.85(100)

使用参考样 864g(102) 1.85(100)

使用本发明 884g(105) 1.81(98)

的样品

如表1-1至1-4所示，酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞对家畜、家禽和人工养殖的水生动物有促进生长效果，因此可用于生产高度安全的食用肉类和人工养殖的水生动物。不象存活的微生物细胞，对于饲料的制备没有限制。特别是，应当指出，本发明相对于使用存活的微生物细胞的效果是显著的，因为杀死的微生物体加到人工养殖的水生动物的饲料中不会使饲料加快变质。

进一步而言，由试验2-1的结果，我们可以说，本发明的含有酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物营养细胞以及糖类和/或淀粉的粉末组合物，比只含有所述细菌的杀死的微生物细胞的相应的粉末组合物有高得多的生长促进效应。因此，本发明的组合物对于增加家畜、家禽和水生动物的生产率是有效的。

本发明将通过下面给出的实施例进一步详细地阐述。

实施例1-1

粉末组合物的配制

脱脂米糠 96g

大豆油 3g

含有酪酸梭状芽胞杆菌 1g

MIYAIRI的杀死的微生物细胞的粉末（每克含10¹⁰个杀死的微生物细胞）

上述组分相互混合以制备一种粉末组合物。

实施例1-2

丸剂的制备

脱脂米糠 70g

麦糊 28.9g

含有酪酸梭状芽胞杆菌 1g

MIYAIRI的杀死的微生物

细胞的粉末（每克含10¹⁰个杀死的微生物细胞）聚丙烯酸钠 1g

这些组分相互混合，用丸剂成形机将所得的混合物制成丸剂。

实施例1-3

片剂的制备

含有酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的微生物细胞（每克含10¹⁰个杀死的微生物细胞）的1份粉末与80份乳糖、20份谷物淀粉、20份取代度低的羟丙基纤维素，和2份聚乙烯吡咯烷酮均匀混合并形成颗粒，然后与0.5份硬脂酸镁混合。再进行片剂成形操作。

实施例1-4

细颗粒的制备

含有酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物细胞（每克含10¹⁰个杀死的微生物细胞）与85份甘露醇、15份羧基甲基纤维素和2.5份羟丙基纤维素均匀混合，然后制成细颗粒。

实施例2-1

将一种保藏的细菌，酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI株588（FERM BP-2789）在37℃下在下述的培养基中培养。16小时后，将液体培养物进行离心分离操作以得到微生物营养细胞。

胨 1%

酵母汁 1%

葡萄糖 1%

将如此得到的微生物细胞100g，谷物淀粉110g，乳糖50g，碳酸钙8g悬浮在1升水中。用喷雾干燥器将所得到的悬浮液立即进行喷雾干燥操作，其中热空气的入口温度在140和160℃之间，出口温度在70和95℃之间，从而得到含有杀死的微生物营养细胞的本发明的粉末组合物。

实施例2-2

将300g含有酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物营养细胞的粉末与100g乳糖和600g谷物淀粉在一个V型混合器中混合以得到本发明的粉末组合物。

实施例2-3

将含有用与下述参照实施例相似的方法得到的酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物营养细胞的粉末5.15kg与2kg乳糖、13kg谷物淀粉和1kg碳酸钙在适量的水中乳化。将所得到的乳状液与附加量的水混合，使乳状液的体积增加到100升。然后用喷雾干燥器进行喷雾干燥操作以得到本发明的粉末组合物。

实施例2-4

将含有酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物营养细胞的粉末2.5kg与0.5kg乳糖、7kg谷物淀粉和90kg啤酒酵母在一转鼓型混合器中混合以得到本发明的粉末组合物。

实施例2-5

将5克实施例2-1所示的喷雾干燥的产品与85克啤酒酵母和10克脱脂米糠均匀混合以得到本发明的组合物。

参照例

将一种保藏的细菌，即酪酸梭状芽胞杆菌MIRAIRI种588（FERMBP2789）在37℃在下述的培养基中培养。16小时后，将液体培养物进行离心分离操作以得到微生物营养细胞。

胨 1%

酵母汁 1%

葡萄糖 1%

将这样得到的微生物细胞100g悬浮在350ml的水中。在-30℃下，将该悬浮液进行初步冷冻操作，然后进行常规的冷冻干燥操作以得到含杀死的微生物营养细胞的干粉末。

Claims

1、一种用于促进动物生长的方法，该方法包括使动物食用梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物细胞。

2、按权利要求1的方法，其特征在于所述梭状芽胞杆菌属的细菌是酪酸梭状芽胞杆菌属的细菌。

3、按权利要求2的方法，其特征在于所述酪酸梭状芽胞杆菌属为酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI。

4、按权利要求1的方法，其特征在于杀死的微生物细胞为杀死的微生物营养细胞。

5、按权利要求1的方法，其特征在于通过将杀死的微生物细胞加到饲料中使动物食用杀死的微生物细胞。

6、按权利要求5的方法，其特征在于饲料中杀死的微生物细胞数为每克饲料至少10⁴个。

7、按权利要求1的方法，其特征在于所述动物是家畜、家禽或饲养的水生动物。

8、一种粉末组合物，含有作为基本成分的梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物营养细胞，以及糖类和/或淀粉。

9、按权利要求8的组合物，其特征在于梭状芽胞杆菌属的细菌是酪酸梭状芽胞杆菌属的细菌。

10、按权利要求9的组合物，其特征在于酪酸梭状芽胞杆菌属的细菌是酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI。

11、按权利要求8的组合物，其特征在于杀死的微生物营养细胞数为每克组合物至少10⁶个。

12、按权利要求8的组合物，其特征在于杀死的微生物营养细胞数为每克组合物10⁶和10¹¹个之间。

13、按权利要求8的组合物，其特征在于所述糖类为葡萄糖、果糖、蔗糖、低聚糖或乳糖，而所述淀粉为小麦淀粉、土豆淀粉或谷物淀粉。

14、按权利要求8的组合物，其特征在于所述组合物每份（重量）的梭状芽胞杆菌属的杀死的微生物营养细胞含有0.04-700份（重量）的糖类和/或0.2-700份（重量）的淀粉。

15、按权利要求8的组合物，其特征在于所述组合物含有0.00005-80W/W%的酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI的杀死的微生物营养细胞、0.001-50W/W%的糖类、0.015-90W/W%的淀粉、0.0005-33W/W%的难溶于水的无机物，和1-99.9W/W%的赋形剂，和其中杀死的微生物营养细胞数为每克组合物至少10⁶个。

16、按权利要求15的组合物，其特征在于所述糖类为乳糖，而难溶于水的无机物为碳酸钙。

17、一种用于制备含有梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物细胞的粉末组合物的制备方法，该方法包括下述步骤：

将梭状芽胞杆菌属的细菌的微生物营养细胞的粉末以及糖类和/或淀粉悬浮在水中;

将如此获得的悬浮液进行喷雾干燥操作。

18、一种促进动物生长的组合物，该组合物包括作为有效成分的梭状芽胞杆菌属细菌的杀死的微生物细胞。

19、按权利要求18的组合物，其特征在于所述杀死的微生物细胞为杀死的微生物营养细胞。

20、按权利要求18的组合物，其特征在于所述梭状芽胞杆菌属的细菌为酪酸梭状芽胞杆菌属的细菌。

21、按权利要求20的组合物，其特征在于酪酸梭状芽胞杆菌为酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI。

22、一种用于促进动物生长的组合物，该组合物包括0.00005-80%的含有梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物细胞的粉末，其余部分为载体。

23、按权利要求22的组合物，其特征在于杀死的微生物细胞为杀死的微生物营养细胞。

24、按权利要求21的组合物，其特征在于组合物含0.01-50%的梭状芽胞杆菌属的细菌的杀死的微生物细胞的粉末。

25、按权利要求22的组合物，其特征在于梭状芽胞杆菌属的细菌为酪酸梭状芽胞杆菌种的细菌。

26、按权利要求25的组合物，其特征在于酪酸梭状芽胞杆菌种的细菌为酪酸梭状芽胞杆菌MIYAIRI。