CN107556517A - 一种基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，该方法包括：以丙烯酰胺为功能单体，N,N′‑亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，过硫酸铵与亚硫酸钠为引发体系，将环糊精分子组装体引入反应体系中，加入模板蛋白，反应5～12h，洗脱模板后得到蛋白质印迹凝胶。该方法的优点是环糊精分子组装体的引入增加了凝胶的非共价作用基团；在多重识别基团作用的同时，利用组装体特有的结构维持了印迹孔穴的空间结构，与蛋白质结构互补的孔穴结构提高了印迹凝胶对目标蛋白质的识别特异性。
Description
技术领域
本发明属于蛋白质分子印迹凝胶的合成技术领域，特别是一种基于环糊精分子组装体的蛋白质分子印迹凝胶的制备方法，引入环糊精分子组装体制备得到的蛋白质分子印迹凝胶，可以用于混合蛋白质的分离及提纯。
背景技术
分子印迹凝胶是一种可对模板分子进行特异性识别的新型聚合物，其印迹过程主要是将模板分子加入反应体系中，与功能单体预聚合，在交联剂作用下单体发生聚合反应，分子链包裹着模板分子。利用一定的溶剂将模板分子洗去后，留下与模板分子在形状、尺寸以及化学官能团互补的识别孔穴。这些孔穴可以从含有相似物的混合物中选择性吸附模板分子(Piyush Sindhu Sharma,Marcin Dabrowski,Francis D'Souza,et al.TrendsAnal.Chem.,2013,51:146-157.)。
目前在蛋白质分子印迹过程中，印迹凝胶与蛋白质的作用方法常用的有两种，一种是共价键：包括亚胺键、环氧配体、硼酸基团；另一种是非共价键：包括氢键、静电作用和疏水作用。早期的蛋白质印迹凝胶多依赖于单一作用力识别蛋白质，这种靠单一识别基团识别蛋白质的能力较弱，目前研究大多采用多重作用力与模板蛋白质分子作用，提高印迹凝胶的识别能力。此外，也有研究人员根据蛋白质的结构不同，利用与蛋白质空间互补的孔穴对蛋白质进行选择性识别；或是利用其它物质的空间特性提高印迹凝胶对蛋白质的选择性和吸附能力。
在制备蛋白质分子印迹凝胶时，利用共价键固定蛋白质，可以令识别位点的空间排列更为均匀，对蛋白质的亲和力和选择性要普遍高于非共价作用。周艳梅等(周艳梅,徐文国,童爱军.分析化学,2006,34(11):1551-1554.)以硅胶为载体，在载体表面通过亚胺键固定蛋白质，对蛋白质进行印迹。然而利用共价键固定模板，移除模板时会需要更严苛的实验条件，甚至可能会影响印迹的稳定性。与共价键相比，单体与蛋白质间的非共价键作用所需条件更加温和，在印迹技术应用上更具潜力。Luo等(Jing L,Jing H,WuY,etal.Biosens.Bioelectron.,2017,94:39-46.)以聚苯胺(PANI)与两亲性共聚物(P(AMPS-co-St))为单体，P(AMPS-co-St)与蛋白质间存有氢键和静电作用，加入P(AMPS-co-St)可提高凝胶对蛋白质的选择识别能力。
相比而言，蛋白质分子印迹凝胶中采用多重作用力，可使得印迹凝胶具有更高的识别能力。明胶中含有大量的活性基团(氨基、羧基、羟基等)和亲水、疏水片段，与蛋白质存在非共价作用，Hao等(Hao Y,Gao R,Liu D,et al.J.Colloid Interface Sci.,2016,470:100.)以共价键将模板固定在载体上，以明胶为功能单体，将共价键与非共价作用力相结合，制备了可识别牛血清白蛋白的分子印迹凝胶。
为了降低对非模板蛋白的吸附，研究人员在采用多重识别位点对蛋白质进行识别的基础上，制备了可识别蛋白质空间形状的印迹凝胶，凝胶上具有与蛋白质形状互补的识别孔穴，可明显提高印迹凝胶的选择性。Dabrowski等(Dabrowski M,CieplakM,SharmaP S,et al.Biosens.Bioelectron.,2017,94:155.)结合反蛋白石结构，将以功能单体二苯胺修饰的HSA固定到SiO2纳米颗粒表面，得到分级模板。经过电聚合，在分级模板上形成聚噻吩膜。聚噻吩膜填充SiO2纳米材料的间隙，移除分级模板后得到具有分级结构的分子印迹凝胶。聚噻吩膜包含识别位点的所有取向，这些取向与分析物上位点的取向互补。分子印迹凝胶的孔穴与HSA在空间上相互匹配，因此制备的凝胶具有高选择性及高灵敏度。
从当前情况看，蛋白质印迹凝胶具有优良的应用前景，已越来越多的被人们所认识。但是由于印迹蛋白质凝胶制备过程中存在模板蛋白质难去除、蛋白质构象不稳定、凝胶中识别位点不均匀等问题，在一定程度上阻碍了蛋白质印迹凝胶的发展。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提出一种基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法。
本发明利用环糊精与亲水性聚合物制备组装体，组装体中环糊精表面有大量的羟基，氢键的存在提高了凝胶对蛋白质的识别能力；同时环糊精的锥形圆筒结构维持了识别孔穴的空间结构，使得识别孔穴与蛋白质在空间结构上能够达到互补。该方法的优点一是在一定程度上可以减少模板蛋白质的包埋；二是组装体特有的结构维持了孔穴与蛋白质互补的空间结构，可以通过对蛋白质空间结构的识别提高了凝胶的特异性识别能力。该方法设备简单、成本低、易于操作，所制备的蛋白质分子印迹凝胶可以从蛋白质混合溶液中特异性地识别目标蛋白质。
本发明的技术方案：
一种基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，包括以下步骤：
1)环糊精分子组装体的制备；
将环糊精水溶液与聚乙烯醇水溶液置于三口烧瓶中，50℃～70℃下回流6～12h，20℃～40℃下搅拌6～12h，循环3～5次，蒸干溶液得到中间产物；在4～20℃下向中间产物的二甲基亚砜溶液中缓慢滴加丙烯酰氯1～5mL，反应3～6h；反应结束后，经沉淀剂沉淀、洗涤剂洗涤、干燥后得到环糊精分子的组装体。
所述环糊精可以是α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精。
所述环糊精水溶液质量浓度为12％～45％，聚乙烯醇水溶液质量浓度为2％～6％，环糊精与聚乙烯醇质量比为3～10:1。
所述中间产物溶液质量浓度为1％～15％，丙烯酰氯与中间产物质量比为0.5～1.5:1。
所述沉淀剂为乙醇、甲醇、丁醇、丙酮、或者乙醚等；洗涤剂为甲醇、乙醇、丙酮、或者乙醚等。
2)基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备；
将环糊精分子组装体水溶液与交联剂N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液加入到反应体系中，在不断搅拌下加入单体丙烯酰胺；4℃～10℃下，加入模板蛋白，搅拌15min～3h；以过硫酸铵和亚硫酸钠氧化还原体系为引发剂，在氮气保护下，引发温度4℃～10℃下，依次滴加过硫酸铵溶液和亚硫酸钠溶液，反应5～12h后取出产物，洗脱模板蛋白质，得到蛋白质印迹凝胶。
所述环糊精分子组装体水溶液质量浓度为2％～10％，N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液质量浓度为3％～9％。
所述环糊精分子组装体的质量为丙烯酰胺质量的20％～100％，N,N′-亚甲基双丙烯酰胺的质量为丙烯酰胺质量的30％～90％，模板蛋白的质量为丙烯酰胺质量的3％～20％。
所述过硫酸铵溶液质量浓度为0.7％～4％，亚硫酸钠溶液质量浓度为0.4％～2.2％；过硫酸铵与亚硫酸钠的摩尔比为1:1。
所述模板蛋白可以是牛血红蛋白、牛血清蛋白、卵清白蛋白、溶菌酶、肌红蛋白、胃蛋白酶、胰蛋白酶或细胞色素C等。
具体实施方式
实施例1：
γ-环糊精分子组装体的制备：将150g/L的γ-环糊精水溶液20mL与50g/L聚乙烯醇水溶液20mL置于三口烧瓶中；50℃下回流搅拌12h，25℃下搅拌12h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物1g于20mL二甲基亚砜中，4℃下，向溶液中缓慢滴加1mL丙烯酰氯，反应4h；将反应后的溶液滴加到100mL无水乙醇中析出沉淀，抽滤，用乙醇洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将70g/L的γ-环糊精分子组装体水溶液20mL、60g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；4℃下，加入牛血清白蛋白0.08g，搅拌0.5h；4℃下通氮气，滴加20g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加11g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应8h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例2：
β-环糊精分子组装体的制备：将150g/L的β-环糊精水溶液40mL与50g/L聚乙烯醇水溶液40mL于三口烧瓶中；60℃下回流搅拌6h，20℃下搅拌6h，循环3次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物2g于30mL二甲基亚砜中，10℃下，向溶液中缓慢滴加2mL丙烯酰氯，反应3h；将反应后的溶液滴加到200mL无水甲醇中析出沉淀，抽滤，用甲醇洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到β-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将40g/L的β-环糊精分子组装体水溶液40mL、30g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液40mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；10℃下，加入牛血清白蛋白0.06g，搅拌15min；10℃下通氮气，滴加40g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加22g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应6h后取出产物，将产物切小块，用2mol/LKCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例3：
β-环糊精分子组装体的制备：将200g/L的β-环糊精水溶液20mL与50g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；60℃下回流搅拌8h，20℃下搅拌8h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物2g于20mL二甲基亚砜中，16℃下，向溶液中缓慢滴加2mL丙烯酰氯，反应3h；将反应后的溶液滴加到200mL丁醇中析出沉淀，抽滤，用丁醇洗2次，用丙酮洗3次；40℃下干燥至恒重，得到β-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将35g/L的β-环糊精分子组装体水溶液40mL、50g/LN,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液40mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；4℃下，加入牛血清白蛋白0.06g，搅拌0.5h；4℃下通氮气，滴加7.88g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加4.35g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应5h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例4：
γ-环糊精分子组装体的制备：将300g/L的γ-环糊精水溶液20mL与50g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；50℃下回流搅拌12h，30℃下搅拌10h，循环4次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物4g于30mL二甲基亚砜中，20℃下，向溶液中缓慢滴加4mL丙烯酰氯，反应1h；将反应后的溶液滴加到200mL丙酮中析出沉淀，抽滤，用丙酮洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到γ-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将45g/L的γ-环糊精分子组装体水溶液20mL、55g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.2g丙烯酰胺；4℃下，加入牛血清白蛋白0.12g，搅拌3h；4℃下通氮气，滴加30g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加17.4g/L亚硫酸钠溶液5ml，反应6h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例5：
γ-环糊精分子组装体的制备：将350g/L的γ-环糊精水溶液20mL与50g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；70℃下回流搅拌12h，20℃下搅拌6h，循环3次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物1.5g于20mL二甲基亚砜中，18℃下向溶液中缓慢滴加1.5mL丙烯酰氯，反应2h；将反应后的溶液滴加到200mL乙醚中析出沉淀，抽滤，用乙醚洗4次；40℃下干燥至恒重，得到γ-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将40g/L的γ-环糊精分子组装体水溶液40mL、30g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；4℃下，加入牛血红蛋白0.06g，搅拌3h；4℃下通氮气，滴加40g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加22g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应12h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次得到蛋白质印迹凝胶。
实施例6：
γ-环糊精分子组装体的制备：将400g/L的γ-环糊精水溶液20mL与50g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；55℃下回流搅拌10h，25℃下搅拌12h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物3g于20mL二甲基亚砜中，4℃下向溶液中缓慢滴加3mL丙烯酰氯，反应6h；将反应后的溶液滴加到200mL无水乙醇中析出沉淀，抽滤，用乙醇洗2次，用丙酮洗3次；40℃下干燥至恒重，得到γ-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将55g/L的γ-环糊精分子组装体水溶液、70g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；5℃下加入溶菌酶0.16g，搅拌0.5h；4℃下通氮气，滴加30g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加17.4g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应8h后取出产物，将产物切小块，用2mol/LKCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例7：
γ-环糊精分子组装体的制备：将450g/L的γ-环糊精水溶液40mL与50g/L聚乙烯醇水溶液40mL于三口烧瓶中；70℃下回流搅拌6h，40℃下搅拌6h，循环3次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物6g于25mL二甲基亚砜中，12℃下向溶液中缓慢滴加4.4mL丙烯酰氯，反应6h；将反应后的溶液滴加到200mL无水甲醇中析出沉淀，抽滤，用甲醇洗2次，用丙酮洗3次；40℃下干燥至恒重，得到γ-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将60g/L的γ-环糊精分子组装体水溶液20mL、40g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液35mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；4℃下加入溶菌酶0.04g，搅拌0.5h；4℃下通氮气，滴加30g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加17.4g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应5h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例8：
γ-环糊精分子组装体的制备：将200g/L的γ-环糊精水溶液20mL与20g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；65℃下回流搅拌8h，20℃下搅拌8h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物1g于20mL二甲基亚砜中，8℃下向溶液中缓慢滴加5mL丙烯酰氯，反应6h；将反应后的溶液滴加到100mL无水乙醇中析出沉淀，抽滤，用乙醇洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到γ-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将40g/L环糊精分子组装体水溶液20mL、90g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；4℃下加入卵清白蛋白0.2g，搅拌0.5h；4℃下通氮气，滴加30g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加17.4g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应6h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例9：
β-环糊精分子组装体的制备：将330g/L的β-环糊精水溶液30mL与50g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；50℃下回流搅拌12h，24℃下搅拌12h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物2g于20mL二甲基亚砜中，10℃下向溶液中缓慢滴加2mL丙烯酰氯，反应6h；将反应后的溶液滴加到300mL无水乙醇中析出沉淀，抽滤，用乙醇洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到β-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将32g/L的β-环糊精分子组装体水溶液20mL、80g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；4℃下加入卵清白蛋白0.08g，搅拌1.0h；4℃下通氮气，滴加30g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加17.4g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应6h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例10：
β-环糊精分子组装体的制备：将240g/L的β-环糊精水溶液30mL与55g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；60℃下回流搅拌12h，20℃下搅拌12h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物1g于50mL二甲基亚砜中，10℃下向溶液中缓慢滴加1mL丙烯酰氯，反应6h；将反应后的溶液滴加到300mL无水乙醇中析出沉淀，抽滤，用乙醇洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到β-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将42g/L的β-环糊精分子组装体水溶液20mL、70g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2.0g丙烯酰胺；4℃下加入卵清白蛋白0.07g，搅拌0.5h；4℃下通氮气，滴加22g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加11g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应6h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例11：
α-环糊精分子组装体的制备：将310g/L的α-环糊精水溶液30mL与56g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；70℃下回流搅拌6h，40℃下搅拌6h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物1.7g于20mL二甲基亚砜中，20℃下向溶液中缓慢滴加1.7mL丙烯酰氯，反应4h；将反应后的溶液滴加到200mL无水乙醇中析出沉淀，抽滤，用乙醇洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到α-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将20g/L的α-环糊精分子组装体水溶液20mL、75g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入1.8g丙烯酰胺；4℃下加入牛血清白蛋白0.07g，搅拌3h；4℃下通氮气，滴加30g/L过硫酸铵溶液5mL，滴加17.4g/L亚硫酸钠溶液5mL，反应6h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
实施例12：
α-环糊精分子组装体的制备：将290g/L的α-环糊精水溶液30mL与50g/L聚乙烯醇水溶液20mL于三口烧瓶中；60℃下回流搅拌12h，25℃下搅拌12h，循环5次，蒸干溶液得到中间产物；取干燥后的中间产物2g于20mL二甲基亚砜中，10℃下向溶液中缓慢滴加2mL丙烯酰氯，反应6h；将反应后的溶液滴加到200mL无水乙醇中析出沉淀，抽滤，用乙醇洗2次，用乙醚洗3次；40℃下干燥至恒重，得到α-环糊精分子组装体。
蛋白质印迹凝胶的制备：将100g/L的α-环糊精分子组装体水溶液20mL、90g/L的N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液20mL加入到反应体系中，在不断搅拌下加入2g丙烯酰胺；4℃下，加入卵清蛋白0.4g，搅拌0.5h；4℃下通氮气，滴加30g/L过硫酸铵溶液3mL，滴加17.4g/L亚硫酸钠溶液3mL，反应8h后取出产物，将产物切小块，用2mol/L KCl溶液在4℃下振荡洗脱数次，得到蛋白质印迹凝胶。
Claims (9)
1.一种基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
将环糊精分子组装体水溶液与N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液加入到反应体系中，搅拌情况下加入功能单体丙烯酰胺；4℃～10℃下，加入模板蛋白质，搅拌15min～3h；4℃～10℃，在氮气保护下，依次滴加过硫酸铵溶液和亚硫酸钠溶液，反应5～12h后取出产物，洗脱模板蛋白质，得到蛋白质分子印迹凝胶；所述环糊精分子组装体的质量为丙烯酰胺质量的20％～100％，N,N′-亚甲基双丙烯酰胺的质量为丙烯酰胺质量的30％～90％，模板蛋白质的质量为丙烯酰胺质量的3％～20％。
2.根据权利要求1所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于：所述环糊精分子组装体水溶液质量浓度为2％～10％，N,N′-亚甲基双丙烯酰胺水溶液质量浓度为3％～9％。
3.根据权利要求1所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于：所述过硫酸铵溶液质量浓度为0.7％～4％，亚硫酸钠溶液质量浓度为0.4％～2.2％；过硫酸铵与亚硫酸钠的摩尔比为1:1。
4.根据权利要求1所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于：所述模板蛋白质为牛血红蛋白、牛血清蛋白、卵清白蛋白、溶菌酶、肌红蛋白、胃蛋白酶、胰蛋白酶或细胞色素C。
5.根据权利要求1所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于：所述的环糊精分子组装体的制备步骤如下：
将环糊精水溶液与聚乙烯醇水溶液置于三口烧瓶中，50℃～70℃下回流6～12h，20℃～40℃下搅拌6～12h，循环3～5次，蒸干溶液得到中间产物；在4～20℃下向中间产物的二甲基亚砜溶液中缓慢滴加丙烯酰氯1～5mL，反应3～6h；反应结束后，经沉淀剂沉淀、洗涤剂洗涤及干燥后，得到环糊精分子组装体。
6.根据权利要求5所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法环糊精分子组装体，其特征在于：所述环糊精分子是α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精。
7.根据权利要求5所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于：所述环糊精水溶液质量浓度为12％～45％，聚乙烯醇水溶液质量浓度为2％～6％，环糊精与聚乙烯醇质量比为3～10:1。
8.根据权利要求5所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于：所述中间产物溶液质量浓度为1％～15％，丙烯酰氯与中间产物质量比为0.5～1.5:1。
9.根据权利要求5所述的基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法，其特征在于：所述沉淀剂为乙醇、甲醇、丁醇、丙酮、或者乙醚；洗涤剂为甲醇、乙醇、丙酮、或者乙醚。
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| CN201710776824.1A CN107556517A (zh) | 2017-09-01 | 2017-09-01 | 一种基于环糊精分子组装体的蛋白质印迹凝胶的制备方法 |
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| CN110018142A (zh) * | 2019-03-20 | 2019-07-16 | 西南交通大学 | 复合荧光基底、复合荧光基底的制备方法以及应用 |
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2017
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