CN107543869B - 简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法 - Google Patents
简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107543869B CN107543869B CN201610475347.0A CN201610475347A CN107543869B CN 107543869 B CN107543869 B CN 107543869B CN 201610475347 A CN201610475347 A CN 201610475347A CN 107543869 B CN107543869 B CN 107543869B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethyl
- whole blood
- fatty acid
- human whole
- acid ethyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明属药物检测与司法鉴定技术领域，涉及一种用于快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯：十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯的方法，该方法样品用量少，检材少至仅200μL，前处理过程简便、快速，采用HP‑5MS毛细气相色谱柱以及质谱检测器，测定人全血中6种脂肪酸乙酯含量，该方法灵敏度高、专属性强、线性范围宽，并且操作简单、快速、提取溶剂用量少，能够满足司法鉴定任务紧迫、对检测时间要求高的需求，易于操作和推广。
Description
技术领域
本发明属药物检测与司法鉴定技术领域，涉及，具体涉及一种简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯(十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯)的方法。
背景技术
资料显示，乙醇滥用现象在当今社会已十分普遍，并对社会产生了诸多不良影响。在司法鉴定工作中，乙醇的检测对于交通事故等案件的原因调查和责任认定具有重要意义。但在实际案件中，由于乙醇代谢速度较快，且有时尸体腐败过程可能产生乙醇，使得检材中乙醇的检出情况不能真实反映饮酒情况。研究显示，脂肪酸乙酯，包括二十余种化合物，其中在人体内含量较高的有十四酸乙酯(ethyl myristate)、棕榈酸乙酯(ethylpalmitate)、硬脂酸乙酯(ethyl stearate)、油酸乙酯(ethyl oleate)、亚油酸乙酯(ethyllinoleate)、花生四烯酸乙酯(ethyl arachidonate)，是乙醇的非氧化代谢产物，其具有检测时限较长，不受腐败干扰的特点，业内认为其可作为乙醇的直接标志物。
目前公开的测定生物样品中脂肪酸乙酯的方法的检测对象仅为毛发、胎粪和血清，且存在样品前处理步骤繁琐、检材用量大等问题。全血是法医毒物鉴定中最为重要的一种生物检材，尤其对于涉及死亡的案例，由于死亡后溶血现象的发生，往往只能得到全血检材，而无法得到血浆或血清生物检材，迄今，尚未见有以全血为检测对象的分析方法的报道。
基于现有技术的现状，本申请的发明人拟建立一种简单、快速的全血中脂肪酸乙酯的测定方法，以满足司法鉴定的需要。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷，提供一种简便、快速而准确的能同时测定人全血中6种脂肪酸乙酯(十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯)的方法。
具体的，本发明提供了一种简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法，其包括步骤，
(1)血液样品预处理
取待检对象全血检材，加入内标十七烷酸乙酯溶液，加入乙醇及正己烷，涡旋混合，离心后，转移上层有机相，取进样；
(2)采用气相色谱－质谱联用法对待检对象全血中6种脂肪酸乙酯进行定性、定量分析。
本方法中，血液样品为人全血检材，本发明的实施例中，血液样品取样量为200μL；
本方法样品预处理中，取待检血液样品，加入内标十七烷酸乙酯液10μL，加入1mL乙醇及0.3mL正己烷，涡旋混合5min，12000rpm离心5min，转移上层有机相，取3μL进样；
本方法中，采用气相色谱－质谱联用法(GC-MS)对预处理的人全血中6种脂肪酸乙酯进行定性、定量分析。
本方法中，GC-MS操作条件为：
色谱柱：HP-5MS弹性石英毛细管气相色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm
柱温：起始100℃维持1.5min，然后25℃/min升至280℃并保持6min
溶剂延迟时间：5min
进样口/传输线温度：250℃/280℃
载气：高纯He，恒流1mL/min
分流比：2:1
EI源电子能量：70eV
扫描方式：全扫描
检测目标物的色谱保留时间和质谱特征离子如表1所示。
表1检测目标物的色谱保留时间和质谱参数
采用本发明方法对人全血中6种脂肪酸进行了定性和定量分析，结果显示结果准确、可靠，其中的十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯的检测限(S/N>3)与定量限(S/N>10)如表2所示，线性相关系数r2值均大于0.998；准确度在90.3-109.7％范围内，日内精密度的RSD值不超过9.3％，日间精密度的RSD值不超过12.5％。
表2各目标物的检测限与定量限
本发明提供了一种简便、快速而准确的能同时测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法，该方法样品用量少，检材少至仅200μL，前处理过程简便、快速，采用HP-5MS毛细气相色谱柱以及质谱检测器，测定人全血中6种脂肪酸乙酯含量，该方法灵敏度高、专属性强、线性范围宽，并且操作简单、快速、提取溶剂用量少，能够满足司法鉴定任务紧迫、对检测时间要求高的需求，易于操作和推广。
本发明方法与现有技术的方法相比，具有以下明显优势：
(1)本方法将全血作为检测脂肪酸乙酯的生物样品，现有技术方法仅针对毛发、胎粪、血清样品，不包含全血，而全血是法医毒物鉴定中最为重要的一种生物检材；本方法将全血作为检测脂肪酸乙酯的检材，具有显著改进；
(2)本方法使用的检材量少，现有技术的方法多采用1mL血清作为检材，所用提取溶剂量在5mL以上，有机溶剂的消耗量大，本发明方法使用仅200μL全血，样品用量少，能够应对在实际检案中常出现的检材量极其有限的情况，且提取溶剂低毒且用量少至1.3mL；
(3)本方法所采用的前处理步骤快速、简单，现有技术的样品前处理方法多采取液液萃取后再进行固相萃取或顶空固相微萃取，步骤繁琐，耗时长，本方法采用简单经济的液液萃取方法，采用的液液萃取溶剂乙醇-正己烷(10:3)毒性较低，对操作、分析人员的身体危害较小，对环境较友好；
(4)本方法提取后无需经过吹干、复溶步骤即可直接进样，显著地简化了提取步骤，缩短了样品前处理时间，同时减小了有机溶剂的使用量。
附图说明
图1是人全血中6种脂肪酸乙酯经提取后进样的离子色谱图，
其中m/z 88.00，十四酸乙酯(9.2min)，棕榈酸乙酯(11.5min)，十七烷酸乙酯(13.1min)，油酸乙酯(14.8min)，硬脂酸乙酯(15.4)；m/z 67.00，亚油酸乙酯(14.6min)；m/z 79.00，花生四烯酸乙酯(17.4min)。
具体实施方式
实施例1采用本方法测定人全血中6种脂肪酸乙酯含量
其中，设定色谱条件为：
色谱柱：HP-5MS弹性石英毛细管气相色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm
柱温：起始100℃维持1min，然后15℃/min升至210℃并保持7min，再20℃/min升至280℃并保持3min
溶剂延迟时间：5min
进样口/传输线温度：250℃/280℃
载气：高纯He，恒流1mL/min
分流比：2:1
EI源电子能量：70eV
扫描方式：全扫描
检测目标物的色谱保留时间和质谱特征峰：如表1所示；
表1
样品制备：
取全血检材200μL至2mL离心管中，加入内标(十七烷酸乙酯，30μg/mL)10μL，加入1mL乙醇及0.3mL正己烷，涡旋5min，12000rpm离心5min，转移上清至150μL玻璃内衬管中进行GC-MS分析，进样量3μL；
线性试验：
取混合标准系列工作溶液，加入空白全血，涡旋混匀，配制成含十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯0.015,0.025,0.1,0.3,1,3,10μg/mL，含油酸乙酯、亚油酸乙酯、花生四烯酸乙酯浓度为0.1,0.2,0.4,0.8,1.5,3,10μg/mL的标准含药血样，按“样品处理”项下操作，制备标准曲线，并同时制备空白样品，记录色谱图。以待测物浓度为横坐标，待测物与内标的峰面积比值为纵坐标，进行线性回归运算，绘制标准曲线；
精密度和准确度试验：
取混合标准低、中、高质控工作液，加入空白全血，涡旋混匀，每批每个浓度配制5份，共做3批，按“样品处理”项下操作；根据每批线性回归方程计算其实测浓度，计算每个浓度的准确度、日内和日间精密度，精密度以相对标准偏差(RSD)表示，质控工作液浓度及试验结果如表3所示。
表3人全血中待测物的日内和日间精密度、准确度数据
检测结果显示，本发明方法同时测定人全血中6种脂肪酸乙酯，样品用量少，前处理过程简便、快速，采用HP-5MS毛细气相色谱柱以及质谱检测器，测定人全血中6种脂肪酸乙酯含量，检测的灵敏度高、准确度好，易于操作和推广。
Claims (6)
1.一种简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法，其特征在于，所述方法其包括步骤，
(1)血液样品预处理
取全血检材200μL，加入30μg/mL的十七烷酸乙酯内标10μL，加入1mL乙醇及0.3mL正己烷，涡旋混合，离心后，转移上层有机相，取3μL进样；
(2)采用气相色谱－质谱联用法对待检对象全血中6种脂肪酸乙酯进行定性、定量分析；
所述6种脂肪酸乙酯为：十四酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯和花生四烯酸乙酯。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，血液样品为人全血检材。
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，血液样品取样量为200μL。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，取待检血液样品，加入内标十七烷酸乙酯液10μL，加入1mL乙醇及0.3mL正己烷，涡旋混合5min，12000rpm离心5min，转移上层有机相，取3μL进样。
5.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的气相色谱－质谱联用法中，GC-MS操作条件为：
色谱柱：HP-5MS弹性石英毛细管气相色谱柱，30m×0.25mm×0.25m
柱温：起始100℃维持1.5min，然后25℃/min升至280℃并保持6min
溶剂延迟时间：5min
进样口/传输线温度：250℃/280℃
载气：高纯He，恒流1mL/min
分流比：2:1
EI源电子能量：70eV
扫描方式：全扫描。
6.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用如表1所示的检测目标物的质谱特征离子，
表1 检测目标物的质谱特征离子
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610475347.0A CN107543869B (zh) | 2016-06-26 | 2016-06-26 | 简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610475347.0A CN107543869B (zh) | 2016-06-26 | 2016-06-26 | 简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107543869A CN107543869A (zh) | 2018-01-05 |
| CN107543869B true CN107543869B (zh) | 2020-06-09 |
Family
ID=60961235
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610475347.0A Active CN107543869B (zh) | 2016-06-26 | 2016-06-26 | 简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107543869B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5952235A (en) * | 1997-04-14 | 1999-09-14 | Case Western Reserve University | Detection of teratogen exposure |
| CN103645263A (zh) * | 2013-12-24 | 2014-03-19 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 人血清中三种极长链脂肪酸的气相色谱-质谱检测方法 |
-
2016
- 2016-06-26 CN CN201610475347.0A patent/CN107543869B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5952235A (en) * | 1997-04-14 | 1999-09-14 | Case Western Reserve University | Detection of teratogen exposure |
| CN103645263A (zh) * | 2013-12-24 | 2014-03-19 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 人血清中三种极长链脂肪酸的气相色谱-质谱检测方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Fatty acid methyl esters are detectable in the plasma and their presence correlates with liver dysfunction;Aleryani, SL; Cluette-Brown, JE; Khan, ZA;《CLINICA CHIMICA ACTA》;20050513;第359卷(第1期);141-149 * |
| In heavy drinkers fatty acid ethyl esters in the serum are increased for 44 hr after ethanol consumption;Borucki, K; Kunstmann, S; Dierkes, J;《ALCOHOLISM-CLINICAL AND EXPERIMENTAL RESEARCH》;20040731;第28卷(第1期);1102-1106 * |
| Rapid, accurate, and sensitive fatty acid ethyl ester determination by gas chromatography-mass spectrometry;Kulig, CC; Beresford, TP; Everson, GT;《JOURNAL OF LABORATORY AND CLINICAL MEDICINE》;20051102;第147卷(第3期);133-138 * |
| 乙醇非氧化代谢产物脂肪酸乙酯的研究进展;李江涛;《食品科学》;20130331;第34卷(第3期);290-293 * |
| 血液和尿液中Ets的高效液相串联质谱检测及其在法医学中的应用;任磊;《中国博士学位论文全文数据库》;20140315(第3期);第39-43页第2.4-2.6节 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107543869A (zh) | 2018-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107664664B (zh) | 一种同时检测人全血中4类乙醇非氧化代谢物的方法 | |
| CN105784894B (zh) | 一种用于中药的农药残留检测方法 | |
| CN111239267B (zh) | 一种基于gc-ms检测血清、淋巴组织中短链脂肪酸的方法 | |
| CN109387585A (zh) | 气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法 | |
| CN110658268A (zh) | 同时检测血斑中多种乙醇非氧化代谢物的方法 | |
| CN106153785A (zh) | 一种黄曲霉毒素在线进样分析方法 | |
| CN117907464A (zh) | 一种同时检测血液中13种维生素ae及其代谢产物的方法 | |
| CN107543869B (zh) | 简便快速测定人全血中6种脂肪酸乙酯的方法 | |
| CN102539592A (zh) | 检测体液中极长链脂肪酸含量的方法 | |
| CN111487329A (zh) | 一种同时测定血液和玻璃体液中乙醇非氧化代谢物的方法 | |
| CN111505179A (zh) | 海洋水体中生物蝶呤的检测方法 | |
| CN116893241A (zh) | 一种同时检测多种水溶性维生素的方法及方法的应用 | |
| CN115015461A (zh) | 一种肉类挥发性风味物质的鉴别方法及其应用 | |
| CN112051343B (zh) | 一种测定抗生素残留的方法 | |
| CN116124905A (zh) | 一种小鼠血浆、粪便或组织样本中短链脂肪酸的检测方法 | |
| CN112881548A (zh) | 一种高粱中氰化物的快速检测方法 | |
| CN111175426A (zh) | 短链脂肪酸的定量方法 | |
| CN112198235A (zh) | 人尿液中硫酸乙酯和葡萄糖醛酸乙酯的检测方法 | |
| CN111443143B (zh) | 一种快速测定乳粉中胆固醇含量的方法 | |
| CN113203805B (zh) | 同时测定血液中葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的液相色谱串联质谱方法 | |
| CN114236016A (zh) | 一种快速、准确测定生物样本中48种游离脂肪酸的方法 | |
| CN117783314A (zh) | 药用胶塞中硫及14种抗氧化剂类添加剂的测定方法 | |
| CN105158362A (zh) | 一种快速检测全血红细胞十八烷酸的方法 | |
| CN105158387A (zh) | 一种快速检测全血红细胞十四烷酸的方法 | |
| CN106404925A (zh) | 测定人全血中6种巴比妥类药物的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |