CN107541540A - 一种活性炭串联大孔树脂纯化菜籽肽的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种活性炭串联大孔树脂纯化菜籽肽的方法。该方法采用活性炭和DA201‑C大孔吸附树脂串联处理碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶分步酶解得到的酶解物，得到低盐、色浅、低抗营养因子、高产的小分子纯化菜籽肽。本方法在生产应用中具有极高的实用性；同时，将为其它蛋白水解物的串联精制研究提供一种思路。

Description

一种活性炭串联大孔树脂纯化菜籽肽的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及活性炭串联大孔树脂纯化菜籽肽的方法。

背景技术

菜籽肽是从菜籽饼粕中提取蛋白经水解后得到酶解物，相对于大分子的蛋白能更好被人体吸收，但菜籽饼粕在提取分离蛋白及酶解过程中不断地酸碱调节，使酶解液中带入了大量的盐分。不仅如此，酶解液最终色泽呈现黑褐色，干燥后的产品色泽较深。这些因素使其在食品、医药等领域中的应用得到限制。

发明内容

本发明的目的：提供了一种活性炭串联大孔树脂纯化菜籽肽的方法，获得低盐、色浅、低抗营养因子并且高产的小分子菜籽肽。

实现上述目的的技术方案是：

.一种菜籽肽的制备方法，包括以下步骤：

1)以菜籽分离蛋白粉末为原料，加水制成质量浓度为5％的溶液，调至pH＝9；

2)按照每克菜籽分离蛋白6000U的酶量添加碱性蛋白酶，保持体系pH不变，在55℃下水解3h，灭酶冷却后，调至pH＝7；

3)按照每克菜籽分离蛋白4000U的酶量添加复合风味蛋白酶，在50℃下水解2h，灭酶冷却后，调节pH＝4.5，沉淀未酶解蛋白，离心后收集上清液后冷冻干燥。

本发明还提供一种活性炭串联大孔树脂纯化上述菜籽肽的方法，包括以下步骤：

1)将菜籽肽溶于水，配置成30～90mg/mL的溶液，调节pH＝3.5～7.5,温度调节20～60℃，加入2％～5％添加量(w/v)的活性炭，吸附20～100min，过滤得到脱色菜籽肽溶液；

2)然后将脱色菜籽肽溶液以1～5BV/h流速流经大孔树脂层析柱，上样吸附结束后，用1～5BV蒸馏水洗脱，再用25％～100％乙醇解吸，流速与上样流速一致，洗脱1～5BV停止洗脱，真空浓缩后冷冻干燥得到纯化菜籽肽。

所述纯化菜籽肽的肽的含量且低于500分子量的肽进一步增加，单宁、植酸等抗营养因子有效降低，必须氨基酸和疏水性氨基酸含量得到有效富集。

本发明有益效果：

(1)主要改善了菜籽肽产品的色泽，降低了其盐分，活性炭和大孔树脂两种材料制造成本较低、重复利用性好，具有极高的实用性。

(2)提高了肽的含量且低于500分子量的肽进一步增加，单宁、植酸等抗营养因子有效降低，必须氨基酸和疏水性氨基酸含量得到有效富集。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明：

实施例1：

以菜籽分离蛋白粉末为原料，加水制成质量浓度为5％的溶液，调至pH＝9；按照每克菜籽分离蛋白6000U的酶量添加碱性蛋白酶，保持体系pH不变，在55℃下水解3h，灭酶冷却后，调至pH＝7；按照每克菜籽分离蛋白4000U的酶量添加复合风味蛋白酶，在50℃下水解2h，灭酶冷却后，调节pH＝4.5，沉淀未酶解蛋白，离心后收集上清液后冷冻干燥得菜籽肽。

将菜籽肽溶于水，配置成30mg/mL的溶液，调节pH＝3.5,温度调节60℃，加入2％添加量(w/v)的活性炭，吸附40min，过滤得到脱色菜籽肽溶液。然后将脱色菜籽肽溶液以5BV/h流速流经大孔树脂层析柱，上样吸附结束后，用5BV蒸馏水洗脱，再用75％乙醇解吸，流速与上样流速一致，洗脱5BV停止洗脱，旋转蒸发浓缩后冷冻干燥得到纯化菜籽肽。菜籽肽的脱色率达86.79％，多肽回收率35.54％，脱盐率为88.91％。

实施例2：

以菜籽分离蛋白粉末为原料，加水制成质量浓度为5％的溶液，调至pH＝9；按照每克菜籽分离蛋白6000U的酶量添加碱性蛋白酶，保持体系pH不变，在55℃下水解3h，灭酶冷却后，调至pH＝7；按照每克菜籽分离蛋白4000U的酶量添加复合风味蛋白酶，在50℃下水解2h，灭酶冷却后，调节pH＝4.5，沉淀未酶解蛋白，离心后收集上清液后冷冻干燥得菜籽肽。

将菜籽肽溶于水，配置成45mg/mL的溶液，调节pH＝4.5,温度调节50℃，加入2％添加量(w/v)的活性炭，吸附60min，过滤得到脱色菜籽肽溶液。然后将脱色菜籽肽溶液以3BV/h流速流经大孔树脂层析柱，上样吸附结束后，用3BV蒸馏水洗脱，再用75％乙醇解吸，流速与上样流速一致，洗脱3BV停止洗脱，旋转蒸发浓缩后冷冻干燥得到纯化菜籽肽。菜籽肽的脱色率达69.67％，多肽回收率40.05％,脱盐率为86.51％。

实例子3：

以菜籽分离蛋白粉末为原料，加水制成质量浓度为5％的溶液，调至pH＝9；按照每克菜籽分离蛋白6000U的酶量添加碱性蛋白酶，保持体系pH不变，在55℃下水解3h，灭酶冷却后，调至pH＝7；按照每克菜籽分离蛋白4000U的酶量添加复合风味蛋白酶，在50℃下水解2h，灭酶冷却后，调节pH＝4.5，沉淀未酶解蛋白，离心后收集上清液后冷冻干燥得菜籽肽。

将菜籽肽溶于水，配置成60mg/mL的溶液，调节pH＝4.5,温度调节40℃，加入4％添加量(w/v)的活性炭，吸附80min，过滤得到脱色菜籽肽溶液。然后将脱色菜籽肽溶液以4BV/h流速流经大孔树脂层析柱，上样吸附结束后，用4BV蒸馏水洗脱，再用60％乙醇解吸，流速与上样流速一致，洗脱4BV停止洗脱，旋转蒸发浓缩后冷冻干燥得到纯化菜籽肽。菜籽肽的脱色率达80.57％，多肽回收率34％,脱盐率为84.52％。

活性炭串联大孔树脂纯化前后的分子量分布如表1所示：

表1

经过活性炭串联大孔树脂处理，菜籽肽分子量分子低于500的肽进一步增加，纯化后的菜籽肽更有利于人体吸收。

活性炭串联大孔树脂纯化前后的基础组分如表2所示：

表2

经过活性炭串联大孔树脂处理，肽的含量得到有效的提高，单宁、植酸、硫苷等抗营养因子有效降低，纯化后的菜籽肽可食用性大大提高。

活性炭串联大孔树脂纯化前后的氨基酸组成如表3所示：

表3

经过活性炭串联大孔树脂处理，肽的必须氨基酸和疏水性氨基酸含量得到有效富集，纯化后菜籽肽的营养性和功能性得到强化。

Claims (5)

1.一种菜籽肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）以菜籽分离蛋白粉末为原料，加水制成质量浓度为5%的溶液，调至pH=9；

2）按照每克菜籽分离蛋白6000U的酶量添加碱性蛋白酶，保持体系pH不变，在55℃下水解3h，灭酶冷却后，调至pH=7；

3）按照每克菜籽分离蛋白4000U的酶量添加复合风味蛋白酶，在50℃下水解2h，灭酶冷却后，调节pH=4.5，沉淀未酶解蛋白，离心后收集上清液后冷冻干燥。

2.一种利用权利要求1所述方法制得的菜籽肽。

3.一种活性炭串联大孔树脂纯化权利要求2所述菜籽肽的方法。

4.根据权利要求3所述的活性炭串联大孔树脂纯化菜籽肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将菜籽肽溶于水，配置成30~90mg/mL的溶液，调节pH=3.5~7.5, 温度调节20~60℃，加入2%~5%添加量(w/v)的活性炭，吸附20~100min，过滤得到脱色菜籽肽溶液；

2）然后将脱色菜籽肽溶液以1~5BV/h流速流经大孔树脂层析柱，上样吸附结束后，用1~5BV蒸馏水洗脱，再用25%~100%乙醇解吸，流速与上样流速一致，洗脱1~5BV停止洗脱，真空浓缩后冷冻干燥得到纯化菜籽肽。

5.一种根据权利要求4所述方法制备得到的纯化菜籽肽。