CN107541469B - 一种复合生物消解剂及其制备方法和其应用 - Google Patents
一种复合生物消解剂及其制备方法和其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种复合生物消解剂及其制备方法和其应用。本发明提供的生物消解剂将康宁木霉菌种提取液、地衣芽孢杆菌菌种提取液、热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液、黑曲霉菌种提取液、构巢曲霉菌种提取液混合均匀,得到混合提取液,再将沸石浸没于所述混合提取液中,浸泡后取出,干燥即得。2016年利用本发明提供的生物消解剂治理上海普陀区某黑臭河道,实验结果表明本发明提供的生物消解剂可显著降低黑臭河道中的CODcr、BOD5、NH3‑N和TP值。
Description
技术领域
本发明属于生物治理领域,具体涉及一种用于河道湖泊有机污染生物治理的复合生物消解剂及其制备方法。
背景技术
已知在污染河道湖泊中对于有机污染的生物治理方面,国际上兴起的投放微生物或者微生物产物工艺,其原理是利用生物培养或者提取的方法,制取单一的菌种或者生物提取液,在实际的使用中,单一、活体的菌种存在生物安全性问题、生物提取液效率低,且目前的工艺水平整体较低,制备的成本高,产量低,产品质量参差不齐,且缺乏有效的生产手段,实现生产的产业化困难,无法解决目前河道湖泊有机污染治理在生物类产品上的需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种生物消解剂,所述生物消解剂包括:康宁木霉、地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、黑曲霉、构巢曲霉;和/或其菌种提取液。
具体的,所述生物消解剂还包括沸石。
具体的,所述菌种提取液包括将所述菌种和/或所述菌种的发酵液进行破壁处理后再离心分离,取上清即得。具体的,所述破壁处理包括超声波破壁处理;再具体的,所述超声波破壁处理包括超声波破壁15-20min;具体的,所述离心分离包括离心分离8-10min。
具体的,所述菌种的发酵液包括:
将所述菌种的摇瓶菌液接种入装有所述菌种的培养基的菌种培养罐中培养一段时间后;加入聚乙烯醇水溶液后,再继续培养一段时间后,即得发酵液。
具体的,所述接种的接种量包括:按照2.0%-5.0%的重量百分含量接种;再具体的,按照2.0%、3.0%或5.0%的重量百分含量接种;
具体的,所述菌种的培养基的装量包括:按体积百分数计,为所述菌种培养罐最大装量的60-65%;再具体的,为所述菌种培养罐最大装量的60%、62%或65%;
具体的,所述培养包括:菌种培养罐的搅拌速度包括220-180r/min,供氧量包括0.08-0.1kg/h·L,温度包括37℃;再具体的,菌种培养罐的搅拌速度包括220r/min或180r/min,供氧量包括0.08kg/h·L或0.1kg/h·L;
具体的,所述培养一段时间包括连续培养24h;
具体的,所述再继续培养一段时间包括在同等条件下,连续培养24-30h;再具体的,连续培养24h或30h;
具体的,按照重量百分含量计,所述聚乙烯醇水溶液的加入量包括0.1%-0.2%;再具体的,按照重量百分含量计,所述聚乙烯醇水溶液的加入量包括0.1%、0.15%或0.2%;
具体的,所述聚乙烯醇水溶液的重量百分浓度包括20%;
再具体的,所述菌种的发酵液包括下述1)-3)中的至少一种:
1)按照2.0%的重量比例,将所述菌种的摇瓶菌液,接种入装有所述菌种培养基的菌种培养罐中,按体积百分数计,所述培养基装量为所述菌种培养罐最大装量的65%,菌种培养罐的搅拌速度控制在180r/min,供氧量为0.08kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.1%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到发酵液。
2)按照5.0%的重量比例,将所述菌种的摇瓶菌液,接种入装有所述菌种培养基的菌种培养罐中,按体积百分数计,所述培养基装量为所述菌种培养罐最大装量的62%,菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.15%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养24h,得到发酵液。
3)按照3.0%的重量比例,将所述菌种的摇瓶菌液,接种入装有所述菌种培养基的菌种培养罐中,按体积百分数计,所述培养基装量为所述菌种培养罐最大装量的60%,菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.2%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到发酵液。
具体的,所述菌种的摇瓶菌液包括:取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,37℃振荡培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
再具体的,所述菌种的摇瓶菌液包括:在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的12%-15%,置于振率为180-220r/min的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
再具体的,所述菌种的摇瓶菌液包括下述1)-3)中至少一种:
1)在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的12%,置于振率为180r/min 的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
2)在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的15%,置于振率为220r/min 的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
3)在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的12%,置于振率为220r/min 的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
具体的,所述菌种的培养基包括,
康宁木霉培养基包括:蛋白胨、磷酸氢二钾、酵母浸出粉、硫酸镁、葡萄糖、蒸馏水;
地衣芽孢杆菌培养基包括:牛肉膏、大豆蛋白胨、NaCl、蒸馏水;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基包括:蛋白胨、牛肉浸取物、NaCl、MnSO4·H2O、蒸馏水;
黑曲霉培养基包括:麦芽汁;
构巢曲霉培养基包括:蔗糖、NaNO3、MgSO4·7H2O、KCl、FeSO4·4H2O、K2HPO4、蒸馏水;
再具体的,按重量百分含量计,所述菌种的培养基包括,
康宁木霉培养基包括:蛋白胨0.4-0.55%、磷酸氢二钾0.08-0.11%、酵母浸出粉0.2-0.33%、硫酸镁0.05-0.06%、葡萄糖2.0-3.2%、余量为蒸馏水;
地衣芽孢杆菌培养基包括:牛肉膏0.5-1.0%、大豆蛋白胨1-1.2%、NaCl 0.5-0.6%、余量为蒸馏水;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基包括:蛋白胨0.5-1.0%、牛肉浸取物0.3-0.4%、NaCl0.5-0.6%、 MnSO4·H2O 0.0005-0.0006%、余量为蒸馏水;
黑曲霉培养基包括:3.5°Be~3.6°Be麦芽汁100%;
构巢曲霉培养基包括:蔗糖2.5-3.5%、NaNO3 0.25-0.35%、MgSO4·7H2O 0.05-0.06%、KCl 0.05-0.06%、FeSO4·4H2O 0.001-0.0012%、K2HPO4 0.08-0.12%、余量为蒸馏水;
还具体的,按重量百分含量计,所述菌种的培养基包括,
康宁木霉培养基包括下述1)-3)中至少一种:
1)蛋白胨0.4%,磷酸氢二钾0.08%,酵母浸出粉0.2%,硫酸镁0.05%,葡萄糖2.0%,余量为蒸馏水;
2)蛋白胨0.55%,磷酸氢二钾0.11%,酵母浸出粉0.33%,硫酸镁0.06%,葡萄糖3.2%,余量为蒸馏水;
3)蛋白胨0.45%,磷酸氢二钾0.1%,酵母浸出粉0.25%,硫酸镁0.05%,葡萄糖2.2%,余量为蒸馏水;
地衣芽孢杆菌培养基包括下述1)-3)中至少一种:
1)牛肉膏0.5%,大豆蛋白胨1%,NaCl 0.5%,余量为蒸馏水;
2)牛肉膏1.0%,大豆蛋白胨1.2%,NaCl 0.6%,余量为蒸馏水;
3)牛肉膏0.7%,大豆蛋白胨1.1%,NaCl 0.5%,余量为蒸馏水;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基包括下述1)-3)中至少一种:
1)蛋白胨0.5%,牛肉浸取物0.3%,NaCl 0.5%,MnSO4·H2O 0.0005%,余量为蒸馏水;
2)蛋白胨1.0%,牛肉浸取物0.4%,NaCl 0.6%,MnSO4·H2O 0.0006%,余量为蒸馏水;
3)蛋白胨0.8%,牛肉浸取物0.4%,NaCl 0.6%,MnSO4·H2O 0.0006%,余量为蒸馏水;
构巢曲霉培养基包括下述1)-3)中至少一种:
1)蔗糖2.5%,NaNO3 0.25%,MgSO4·7H2O 0.05%,KCl 0.05%,FeSO4·4H2O0.001%, K2HPO4 0.08%,余量为蒸馏水;
2)蔗糖3.5%,NaNO3 0.35%,MgSO4·7H2O 0.06%,KCl 0.06%,FeSO4·4H2O0.0012%, K2HPO4 0.12%,余量为蒸馏水;
3)蔗糖3.0%,NaNO3 0.3%,MgSO4·7H2O,KCl 0.06%,FeSO4·4H2O 0.0011%,K2HPO4 0.1%,余量为蒸馏水;)
具体的,所述菌种的培养基在配制好后,还包括灭菌,所述灭菌包括:
康宁木霉培养基:0.15mpa,121℃,灭菌15min;
地衣芽孢杆菌培养基:0.1mpa,121℃,灭菌15min;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基:0.1mpa,121℃,灭菌15min;
黑曲霉培养基:0.15mpa,121℃,灭菌15min;
构巢曲霉培养基:0.15mpa,121℃,灭菌15min。
具体的,按照质量百分含量计,所述生物消解剂包括:沸石65-75%、康宁木霉菌种提取液5-7%,地衣芽孢杆菌菌种提取液5-7%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液5-7%,黑曲霉菌种提取液5-7%,构巢曲霉菌种提取液5-7%。
具体的,所述生物消解剂包括下述1)-3)中的至少一种:
1)沸石75%、康宁木霉菌种提取液5%,地衣芽孢杆菌菌种提取液5%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液5%,黑曲霉菌种提取液5%,构巢曲霉菌种提取液5%;
2)沸石65%、康宁木霉菌种提取液7%,地衣芽孢杆菌菌种提取液7%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液7%,黑曲霉菌种提取液7%,构巢曲霉菌种提取液7%;
3)沸石70%、康宁木霉菌种提取液6%,地衣芽孢杆菌菌种提取液6%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液6%,黑曲霉菌种提取液6%,构巢曲霉菌种提取液6%。
具体的,按照质量百分含量计,所述生物消解剂包括:
将康宁木霉菌种提取液、地衣芽孢杆菌菌种提取液、热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液、黑曲霉菌种提取液、构巢曲霉菌种提取液混合均匀,得到混合提取液,再将沸石浸没于所述混合提取液中,浸泡后取出,干燥即得。
具体的,所述浸泡包括浸泡4h~6h;再具体的,浸泡5h~6h;
具体的,所述干燥包括45~50℃条件下,干燥至含水率12%~18%,所述12%~18%为质量百分数;再具体的,干燥至含水率15%~18%,所述15%~18%为质量百分数。
本发明的还一个目的是提供一种生物消解剂的制备方法,所述方法包括:将康宁木霉菌种提取液、地衣芽孢杆菌菌种提取液、热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液、黑曲霉菌种提取液、构巢曲霉菌种提取液混合均匀,得到混合提取液,再将沸石浸没于所述混合提取液中,浸泡后取出,干燥即得;
具体的,所述浸泡包括浸泡4h~6h;再具体的,浸泡5h~6h;
具体的,所述干燥包括45~50℃条件下,干燥至含水率12%~18%,所述12%~18%为质量百分数;再具体的,干燥至含水率15%~18%,所述15%~18%为质量百分数。
所述菌种提取液包括:
将所述菌种和/或所述菌种的发酵液进行破壁处理后再离心分离,取上清即得;
具体的,所述破壁处理包括超声波破壁处理;再具体的,所述超声波破壁处理包括超声波破壁15-20min;
具体的,所述离心分离包括离心分离8-10min;
所述菌种的发酵液包括:
将所述菌种的摇瓶菌液接种入装有所述菌种的培养基的菌种培养罐中培养一段时间后;加入聚乙烯醇水溶液后,再继续培养一段时间后,即得发酵液;
具体的,所述接种的接种量包括:按照2.0%-5.0%的重量百分含量接种;再具体的,按照2.0%、3.0%或5.0%的重量百分含量接种;
具体的,所述菌种的培养基的装量包括:按体积百分数计,为所述菌种培养罐最大装量的60-65%;再具体的,为所述菌种培养罐最大装量的60%、62%或65%;
具体的,所述培养包括:菌种培养罐的搅拌速度包括220-180r/min,供氧量包括0.08-0.1kg/h·L,温度包括37℃;再具体的,菌种培养罐的搅拌速度包括220r/min或180r/min,供氧量包括0.08kg/h·L或0.1kg/h·L;
具体的,所述培养一段时间包括连续培养24h;
具体的,所述再继续培养一段时间包括在同等条件下,连续培养24-30h;再具体的,连续培养24h或30h;
具体的,按照重量百分含量计,所述聚乙烯醇水溶液的加入量包括0.1%-0.2%;再具体的,按照重量百分含量计,所述聚乙烯醇水溶液的加入量包括0.1%、0.15%或0.2%;
具体的,所述聚乙烯醇水溶液的重量百分浓度包括20%;
再具体的,所述菌种的发酵液包括下述1)-3)中的至少一种:
1)按照2.0%的重量比例,将所述菌种的摇瓶菌液,接种入装有所述菌种培养基的菌种培养罐中,按体积百分数计,所述培养基装量为所述菌种培养罐最大装量的65%,菌种培养罐的搅拌速度控制在180r/min,供氧量为0.08kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.1%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到发酵液。
2)按照5.0%的重量比例,将所述菌种的摇瓶菌液,接种入装有所述菌种培养基的菌种培养罐中,按体积百分数计,所述培养基装量为所述菌种培养罐最大装量的62%,菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.15%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养24h,得到发酵液。
3)按照3.0%的重量比例,将所述菌种的摇瓶菌液,接种入装有所述菌种培养基的菌种培养罐中,按体积百分数计,所述培养基装量为所述菌种培养罐最大装量的60%,菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.2%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到发酵液。
具体的,所述菌种的摇瓶菌液包括:取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,37℃振荡培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
再具体的,所述菌种的摇瓶菌液包括:在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的12%-15%,置于振率为180-220r/min的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
再具体的,所述菌种的摇瓶菌液包括下述1)-3)中至少一种:
4)在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的12%,置于振率为180r/min 的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
5)在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的15%,置于振率为220r/min 的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
6)在万级无菌环境中,取所述菌种的斜面菌种,接入装有所述菌种的培养基的三角摇瓶中,按体积百分数计,所述培养基的装量为三角摇瓶最大装量的12%,置于振率为220r/min 的摇床中37℃培养18h,获得所述菌种的摇瓶菌液;
具体的,所述菌种的培养基包括,
康宁木霉培养基包括:蛋白胨、磷酸氢二钾、酵母浸出粉、硫酸镁、葡萄糖、蒸馏水;
地衣芽孢杆菌培养基包括:牛肉膏、大豆蛋白胨、NaCl、蒸馏水;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基包括:蛋白胨、牛肉浸取物、NaCl、MnSO4·H2O、蒸馏水;
黑曲霉培养基包括:麦芽汁;
构巢曲霉培养基包括:蔗糖、NaNO3、MgSO4·7H2O、KCl、FeSO4·4H2O、K2HPO4、蒸馏水;
再具体的,按重量百分含量计,所述菌种的培养基包括,
康宁木霉培养基包括:蛋白胨0.4-0.55%、磷酸氢二钾0.08-0.11%、酵母浸出粉0.2-0.33%、硫酸镁0.05-0.06%、葡萄糖2.0-3.2%、余量为蒸馏水;
地衣芽孢杆菌培养基包括:牛肉膏0.5-1.0%、大豆蛋白胨1-1.2%、NaCl 0.5-0.6%、余量为蒸馏水;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基包括:蛋白胨0.5-1.0%、牛肉浸取物0.3-0.4%、NaCl0.5-0.6%、 MnSO4·H2O 0.0005-0.0006%、余量为蒸馏水;
黑曲霉培养基包括:3.5°Be~3.6°Be麦芽汁100%;
构巢曲霉培养基包括:蔗糖2.5-3.5%、NaNO3 0.25-0.35%、MgSO4·7H2O 0.05-0.06%、KCl 0.05-0.06%、FeSO4·4H2O 0.001-0.0012%、K2HPO4 0.08-0.12%、余量为蒸馏水;
还具体的,按重量百分含量计,所述菌种的培养基包括,
康宁木霉培养基包括下述1)-3)中至少一种:
1)蛋白胨0.4%,磷酸氢二钾0.08%,酵母浸出粉0.2%,硫酸镁0.05%,葡萄糖2.0%,余量为蒸馏水;
2)蛋白胨0.55%,磷酸氢二钾0.11%,酵母浸出粉0.33%,硫酸镁0.06%,葡萄糖3.2%,余量为蒸馏水;
3)蛋白胨0.45%,磷酸氢二钾0.1%,酵母浸出粉0.25%,硫酸镁0.05%,葡萄糖2.2%,余量为蒸馏水;
地衣芽孢杆菌培养基包括下述1)-3)中至少一种:
1)牛肉膏0.5%,大豆蛋白胨1%,NaCl 0.5%,余量为蒸馏水;
2)牛肉膏1.0%,大豆蛋白胨1.2%,NaCl 0.6%,余量为蒸馏水;
3)牛肉膏0.7%,大豆蛋白胨1.1%,NaCl 0.5%,余量为蒸馏水;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基包括下述1)-3)中至少一种:
2)蛋白胨0.5%,牛肉浸取物0.3%,NaCl 0.5%,MnSO4·H2O 0.0005%,余量为蒸馏水;
2)蛋白胨1.0%,牛肉浸取物0.4%,NaCl 0.6%,MnSO4·H2O 0.0006%,余量为蒸馏水;
3)蛋白胨0.8%,牛肉浸取物0.4%,NaCl 0.6%,MnSO4·H2O 0.0006%,余量为蒸馏水;
构巢曲霉培养基包括下述1)-3)中至少一种:
1)蔗糖2.5%,NaNO3 0.25%,MgSO4·7H2O 0.05%,KCl 0.05%,FeSO4·4H2O0.001%, K2HPO4 0.08%,余量为蒸馏水;
2)蔗糖3.5%,NaNO3 0.35%,MgSO4·7H2O 0.06%,KCl 0.06%,FeSO4·4H2O0.0012%, K2HPO4 0.12%,余量为蒸馏水;
3)蔗糖3.0%,NaNO3 0.3%,MgSO4·7H2O,KCl 0.06%,FeSO4·4H2O 0.0011%,K2HPO4 0.1%,余量为蒸馏水;
具体的,所述菌种的培养基在配制好后,还包括灭菌,所述灭菌包括:
康宁木霉培养基:0.15mpa,121℃,灭菌15min;
地衣芽孢杆菌培养基:0.1mpa,121℃,灭菌15min;
嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基:0.1mpa,121℃,灭菌15min;
黑曲霉培养基:0.15mpa,121℃,灭菌15min;
构巢曲霉培养基:0.15mpa,121℃,灭菌15min。
具体的,所述的一种生物消解剂的制备方法中,按照质量百分含量计,所述生物消解剂包括:沸石65-75%、康宁木霉菌种提取液5-7%,地衣芽孢杆菌菌种提取液5-7%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液5-7%,黑曲霉菌种提取液5-7%,构巢曲霉菌种提取液5-7%。
具体的,所述生物消解剂包括下述1)-3)中的至少一种:
1)沸石75%、康宁木霉菌种提取液5%,地衣芽孢杆菌菌种提取液5%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液5%,黑曲霉菌种提取液5%,构巢曲霉菌种提取液5%;
2)沸石65%、康宁木霉菌种提取液7%,地衣芽孢杆菌菌种提取液7%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液7%,黑曲霉菌种提取液7%,构巢曲霉菌种提取液7%;
3)沸石70%、康宁木霉菌种提取液6%,地衣芽孢杆菌菌种提取液6%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液6%,黑曲霉菌种提取液6%,构巢曲霉菌种提取液6%。
本发明的还一个目的是提供本发明任一所述生物消解剂的制备方法。
本发明的还一个目的是提供本发明任一所述方法直接制备得到的生物消解剂。
本发明的再一个目的是提供本发明任一所述生物消解剂、本发明任一所述生物消解剂的制备方法、本发明任一所述方法、和/或本发明任一所述方法直接制备得到的生物消解剂的应用。
具体的,所述应用包括下述1)-4)中的至少一种:
1)在有机污染的治理、和/或制备具有机污染的治理功能相关产品中的应用;
2)在制备生物消解剂相关产品、和/或制备具有生物消解功能相关产品中的应用;
3)在水、河道、湖泊污染治理、和/或制备具水、河道、湖泊污染治理功能相关产品中的应用;
4)在水、河道、湖泊有机污染治理、和/或制备具水、河道、湖泊有机污染治理功能相关产品中的应用。
本发明的有益效果包括:
本发明提供的生物消解剂制备方法简单、成本低、易于工业化生产应用;
本发明提供的生物消解剂菌种多样,降低了实际使用过程中存在的生物安全性风险;
2016年利用本发明提供的生物消解剂治理上海普陀区某黑臭河道,实验结果表明本发明提供的生物消解剂可显著降低黑臭河道中的CODcr、BOD5、NH3-N和TP值。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法,或者按照产品说明书进行。
下述实施例中所用的原料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
下述实施例中所述的百分数,如无特别说明,均为质量或重量百分含量。
实施例1、一种用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂
一种用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂,原料包括以下组分及各组分的重量百分比含量包括:沸石75%、康宁木霉菌种提取液5%,地衣芽孢杆菌菌种提取液5%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液5%,黑曲霉菌种提取液5%,构巢曲霉菌种提取液5%。
复合生物消解剂的制备方法包括以下步骤:
康宁木霉菌种提取液的制备:
a、准备康宁木霉培养基原料,包括以下组分及重量百分含量:蛋白胨0.4%,磷酸氢二钾0.08%,酵母浸出粉0.2%,硫酸镁0.05%,葡萄糖2.0%,余量为蒸馏水。
b、康宁木霉液体培养基的制备:按照康宁木霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的康宁木霉培养基;
c、摇瓶康宁木霉菌液制备:在万级无菌环境中,取康宁木霉的斜面菌种,接入装有康宁木霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为 180r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得康宁木霉摇瓶菌液。
d、康宁木霉发酵液制备:按照2.0%的重量比例,将获得的康宁木霉摇瓶菌液,接种入装有康宁木霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐康宁木霉培养基装量为最大装量的65%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在180r/min,供氧量为0.08kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.1%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到康宁木霉发酵液。
e、康宁木霉菌种提取液制备:将获得的康宁木霉发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离10min,取上清液,获得康宁木霉菌种提取液制备。
地衣芽孢杆菌提取液的制备:
a、准备地衣芽孢杆菌培养基原料,包括以下组分及重量百分含量:牛肉膏0.5%,大豆蛋白胨1%,NaCl 0.5%,余量为蒸馏水。
b、地衣芽孢杆菌液体培养基的制备:按照地衣芽孢杆菌培养基的配方,在0.1mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的地衣芽孢杆菌培养基;
c、摇瓶地衣芽孢杆菌菌液制备:在万级无菌环境中,取地衣芽孢杆菌的斜面菌种,接入装有地衣芽孢杆菌培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为180r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得地衣芽孢杆菌摇瓶菌液。
d、地衣芽孢杆菌发酵液制备:按照2.0%的重量比例,将获得的地衣芽孢杆菌摇瓶菌液,接种入装有地衣芽孢杆菌培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐地衣芽孢杆菌培养基装量为最大装量的65%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在180r/min,供氧量为0.08kg/h·L, 37℃条件下,连续培养24h;按照0.1%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到地衣芽孢杆菌发酵液。
e、地衣芽孢杆菌菌种提取液制备:将获得的地衣芽孢杆菌发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离10min,取上清液,获得地衣芽孢杆菌菌种提取液制备。
嗜热脂肪地芽孢杆菌提取液的制备:
a、准备嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基原料,包括以下组分及重量份含量:蛋白胨0.5%,牛肉浸取物0.3%,NaCl 0.5%,MnSO4·H2O 0.0005%,余量为蒸馏水。
b、嗜热脂肪地芽孢杆菌液体培养基的制备:按照嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的配方,在 0.1mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基;
c、摇瓶嗜热脂肪地芽孢杆菌菌液制备:在万级无菌环境中,取嗜热脂肪地芽孢杆菌的斜面菌种,接入装有嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的 12%(体积百分数),置于振率为180r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得嗜热脂肪地芽孢杆菌摇瓶菌液。
d、嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液制备:按照2.0%的重量比例,将获得的嗜热脂肪地芽孢杆菌摇瓶菌液,接种入装有嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基装量为最大装量的65%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在 180r/min,供氧量为0.08kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.1%的重量比例,加入 20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液。
e、嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液制备:将获得的嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离10min,取上清液,获得嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液制备。
黑曲霉提取液的制备:
a、准备黑曲霉培养基原料,包括以下组分及重量份含量:3.5°Be~3.6°Be麦芽汁:100%。
b、黑曲霉液体培养基的制备:按照黑曲霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的黑曲霉培养基;
c、摇瓶黑曲霉菌液制备:在万级无菌环境中,取黑曲霉的斜面菌种,接入装有黑曲霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为180r/min 的摇床中培养(37℃,培养18h),获得黑曲霉摇瓶菌液。
d、黑曲霉发酵液制备:按照2.0%的重量比例,将获得的黑曲霉摇瓶菌液,接种入装有黑曲霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐黑曲霉培养基装量为最大装量的65%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在180r/min,供氧量为0.08kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.1%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到黑曲霉发酵液。
e、黑曲霉菌种提取液制备:将获得的黑曲霉发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离10min,取上清液,获得黑曲霉菌种提取液制备。
构巢曲霉提取液的制备:
a、准备构巢曲霉培养基原料,包括以下组分及重量份含量:蔗糖2.5%,NaNO30.25%, MgSO4·7H2O 0.05%,KCl 0.05%,FeSO4·4H2O 0.001%,K2HPO4 0.08%,余量为蒸馏水
b、构巢曲霉液体培养基的制备:按照构巢曲霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的构巢曲霉培养基;
c、摇瓶构巢曲霉菌液制备:在万级无菌环境中,取构巢曲霉的斜面菌种,接入装有构巢曲霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为 180r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得构巢曲霉摇瓶菌液。
d、构巢曲霉发酵液制备:按照2.0%的重量比例,将获得的构巢曲霉摇瓶菌液,接种入装有构巢曲霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐构巢曲霉培养基装量为最大装量的65%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在180r/min,供氧量为0.08kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.1%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到构巢曲霉发酵液。
e、构巢曲霉菌种提取液制备:将获得的构巢曲霉发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离10min,取上清液,获得构巢曲霉菌种提取液制备。
复合生物消解剂的制备:
将康宁木霉菌种提取液、地衣芽孢杆菌菌种提取液、热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液、黑曲霉菌种提取液、构巢曲霉菌种提取液按照配方,混合均匀,得到混合提取液,再将沸石按照配方浸没于混合提取液中,浸泡6h,沸石充分吸收混合提取液后,取出,45~50℃条件下,干燥至含水率12%~18%(质量百分数)。即获得用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂。
实施例2、一种用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂
一种用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂,原料包括以下组分及各组分的重量百分比含量包括:沸石65%、康宁木霉菌种提取液7%,地衣芽孢杆菌菌种提取液7%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液7%,黑曲霉菌种提取液7%,构巢曲霉菌种提取液7%。
用于河道湖泊有机污染生物治理的复合生物消解剂的制备方法包括以下步骤:
康宁木霉菌种提取液的制备:
a、准备康宁木霉培养基原料,包括以下组分及重量百分含量:蛋白胨0.55%,磷酸氢二钾0.11%,酵母浸出粉0.33%,硫酸镁0.06%,葡萄糖3.2%,余量为蒸馏水。
b、康宁木霉液体培养基的制备:按照康宁木霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的康宁木霉培养基;
c、摇瓶康宁木霉菌液制备:在万级无菌环境中,取康宁木霉的斜面菌种,接入装有康宁木霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的15%(体积百分数),置于振率为 220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得康宁木霉摇瓶菌液。
d、康宁木霉发酵液制备:按照5.0%的重量比例,将获得的康宁木霉摇瓶菌液,接种入装有康宁木霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐康宁木霉培养基装量为最大装量的62%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.15%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养24h,得到康宁木霉发酵液。
e、康宁木霉菌种提取液制备:将获得的康宁木霉发酵液,经超声波破壁20min,再经离心分离10min,取上清液,获得康宁木霉菌种提取液制备。
地衣芽孢杆菌提取液的制备:
a、准备地衣芽孢杆菌培养基原料,包括以下组分及重量百分含量:牛肉膏1.0%,大豆蛋白胨1.2%,NaCl 0.6%,余量为蒸馏水。
b、地衣芽孢杆菌液体培养基的制备:按照地衣芽孢杆菌培养基的配方,在0.1mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的地衣芽孢杆菌培养基;
c、摇瓶地衣芽孢杆菌菌液制备:在万级无菌环境中,取地衣芽孢杆菌的斜面菌种,接入装有地衣芽孢杆菌培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的15%(体积百分数),置于振率为220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得地衣芽孢杆菌摇瓶菌液。
d、地衣芽孢杆菌发酵液制备:按照5.0%的重量比例,将获得的地衣芽孢杆菌摇瓶菌液,接种入装有地衣芽孢杆菌培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐地衣芽孢杆菌培养基装量为最大装量的62%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L, 37℃条件下,连续培养24h;按照0.15%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养24h,得到地衣芽孢杆菌发酵液。
e、地衣芽孢杆菌菌种提取液制备:将获得的地衣芽孢杆菌发酵液,经超声波破壁20min,再经离心分离10min,取上清液,获得地衣芽孢杆菌菌种提取液制备。
嗜热脂肪地芽孢杆菌提取液的制备:
a、准备嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基原料,包括以下组分及重量份含量:蛋白胨1.0%,牛肉浸取物0.4%,NaCl 0.6%,MnSO4·H2O 0.0006%,余量为蒸馏水。
b、嗜热脂肪地芽孢杆菌液体培养基的制备:按照嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的配方,在 0.1mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基;
c、摇瓶嗜热脂肪地芽孢杆菌菌液制备:在万级无菌环境中,取嗜热脂肪地芽孢杆菌的斜面菌种,接入装有嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的 15%(体积百分数),置于振率为220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得嗜热脂肪地芽孢杆菌摇瓶菌液。
d、嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液制备:按照5.0%的重量比例,将获得的嗜热脂肪地芽孢杆菌摇瓶菌液,接种入装有嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基装量为最大装量的62%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在 220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.15%的重量比例,加入 20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养24h,得到嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液。
e、嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液制备:将获得的嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液,经超声波破壁20min,再经离心分离10min,取上清液,获得嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液制备。
黑曲霉提取液的制备:
a、准备黑曲霉培养基原料,包括以下组分及重量份含量:3.5°Be~3.6°Be麦芽汁100%。
b、黑曲霉液体培养基的制备:按照黑曲霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的黑曲霉培养基;
c、摇瓶黑曲霉菌液制备:在万级无菌环境中,取黑曲霉的斜面菌种,接入装有黑曲霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的15%(体积百分数),置于振率为220r/min 的摇床中培养(37℃,培养18h),获得黑曲霉摇瓶菌液。
d、黑曲霉发酵液制备:按照5.0%的重量比例,将获得的黑曲霉摇瓶菌液,接种入装有黑曲霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐黑曲霉培养基装量为最大装量的62%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养 24h;按照0.15%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养24h,得到黑曲霉发酵液。
e、黑曲霉菌种提取液制备:将获得的黑曲霉发酵液,经超声波破壁20min,再经离心分离10min,取上清液,获得黑曲霉菌种提取液制备。
构巢曲霉提取液的制备:
a、准备构巢曲霉培养基原料,包括以下组分及重量份含量:蔗糖3.5%,NaNO30.35%, MgSO4·7H2O 0.06%,KCl 0.06%,FeSO4·4H2O 0.0012%,K2HPO4 0.12%,余量为蒸馏水。
b、构巢曲霉液体培养基的制备:按照构巢曲霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的构巢曲霉培养基;
c、摇瓶构巢曲霉菌液制备:在万级无菌环境中,取构巢曲霉的斜面菌种,接入装有构巢曲霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的15%(体积百分数),置于振率为 220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得构巢曲霉摇瓶菌液。
d、构巢曲霉发酵液制备:按照5.0%的重量比例,将获得的构巢曲霉摇瓶菌液,接种入装有构巢曲霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐构巢曲霉培养基装量为最大装量的62%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.15%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养24h,得到构巢曲霉发酵液。
e、构巢曲霉菌种提取液制备:将获得的构巢曲霉发酵液,经超声波破壁20min,再经离心分离10min,取上清液,获得构巢曲霉菌种提取液制备。
复合生物消解剂的制备:将康宁木霉菌种提取液、地衣芽孢杆菌菌种提取液、热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液、黑曲霉菌种提取液、构巢曲霉菌种提取液按照配方,混合均匀,得到混合提取液,再将沸石按照配方浸没于混合提取液中,浸泡5h~6h,沸石充分吸收混合提取液后,取出,45~50℃条件下,干燥至含水率12%~18%(质量百分数)。即获得用于河道湖泊有机污染生物治理的复合生物消解剂。
实施例3、一种用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂
一种用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂,原料包括以下组分及重量百分比含量:沸石70%、康宁木霉菌种提取液6%,地衣芽孢杆菌菌种提取液6%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液6%,黑曲霉菌种提取液6%,构巢曲霉菌种提取液6%。
用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂的制备方法包括以下步骤:
康宁木霉菌种提取液的制备:
a、准备康宁木霉培养基原料,包括以下组分及重量份含量:蛋白胨0.45%,磷酸氢二钾 0.1%,酵母浸出粉0.25%,硫酸镁0.05%,葡萄糖2.2%,余量为蒸馏水。
b、康宁木霉液体培养基的制备:按照康宁木霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的康宁木霉培养基;
c、摇瓶康宁木霉菌液制备:在万级无菌环境中,取康宁木霉的斜面菌种,接入装有康宁木霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为 220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得康宁木霉摇瓶菌液。
d、康宁木霉发酵液制备:
按照3.0%的重量比例,将获得的康宁木霉摇瓶菌液,接种入装有康宁木霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐康宁木霉培养基装量为最大装量的60%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.2%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到康宁木霉发酵液。
e、康宁木霉菌种提取液制备:
将获得的康宁木霉发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离8min,取上清液,获得康宁木霉菌种提取液制备。
地衣芽孢杆菌提取液的制备:
a、准备地衣芽孢杆菌培养基原料,包括以下组分及重量份含量:牛肉膏0.7%,大豆蛋白胨1.1%,NaCl 0.5%,余量为蒸馏水。
b、地衣芽孢杆菌液体培养基的制备:按照地衣芽孢杆菌培养基的配方,在0.1mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的地衣芽孢杆菌培养基;
c、摇瓶地衣芽孢杆菌菌液制备:在万级无菌环境中,取地衣芽孢杆菌的斜面菌种,接入装有地衣芽孢杆菌培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得地衣芽孢杆菌摇瓶菌液。
d、地衣芽孢杆菌发酵液制备:按照3.0%的重量比例,将获得的地衣芽孢杆菌摇瓶菌液,接种入装有地衣芽孢杆菌培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐地衣芽孢杆菌培养基装量为最大装量的60%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L, 37℃条件下,连续培养24h;按照0.2%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到地衣芽孢杆菌发酵液。
e、地衣芽孢杆菌菌种提取液制备:将获得的地衣芽孢杆菌发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离8min,取上清液,获得地衣芽孢杆菌菌种提取液制备。
嗜热脂肪地芽孢杆菌提取液的制备:
a、准备嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基原料,包括以下组分及重量份含量:蛋白胨0.8%,牛肉浸取物0.4%,NaCl 0.6%,MnSO4·H2O 0.0006%,余量为蒸馏水。
b、嗜热脂肪地芽孢杆菌液体培养基的制备:按照嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的配方,在 0.1mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基;
c、摇瓶嗜热脂肪地芽孢杆菌菌液制备:在万级无菌环境中,取嗜热脂肪地芽孢杆菌的斜面菌种,接入装有嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的 12%(体积百分数),置于振率为220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得嗜热脂肪地芽孢杆菌摇瓶菌液。
d、嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液制备:
按照3.0%的重量比例,将获得的嗜热脂肪地芽孢杆菌摇瓶菌液,接种入装有嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐嗜热脂肪地芽孢杆菌培养基装量为最大装量的 60%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.2%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液。
e、嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液制备:将获得的嗜热脂肪地芽孢杆菌发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离8min,取上清液,获得嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液制备。
黑曲霉提取液的制备:
a、准备黑曲霉培养基原料,包括以下组分及重量份含量:3.5°Be~3.6°Be麦芽汁100%。
b、黑曲霉液体培养基的制备:按照黑曲霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的黑曲霉培养基;
c、摇瓶黑曲霉菌液制备:在万级无菌环境中,取黑曲霉的斜面菌种,接入装有黑曲霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为220r/min 的摇床中培养(37℃,培养18h),获得黑曲霉摇瓶菌液。
d、黑曲霉发酵液制备:
按照3.0%的重量比例,将获得的黑曲霉摇瓶菌液,接种入装有黑曲霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐黑曲霉培养基装量为最大装量的60%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.2%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到黑曲霉发酵液。
e、黑曲霉菌种提取液制备:
将获得的黑曲霉发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离8min,取上清液,获得黑曲霉菌种提取液制备。
构巢曲霉提取液的制备:
a、准备构巢曲霉培养基原料,包括以下组分及重量份含量:蔗糖3.0%,NaNO30.3%, MgSO4·7H2O 0.06%,KCl 0.06%,FeSO4·4H2O 0.0011%,K2HPO4 0.1%,余量为蒸馏水。
b、构巢曲霉液体培养基的制备:按照构巢曲霉培养基的配方,在0.15mpa,121℃,灭菌15min,得到已灭菌的构巢曲霉培养基;
c、摇瓶构巢曲霉菌液制备:在万级无菌环境中,取构巢曲霉的斜面菌种,接入装有构巢曲霉培养基的三角摇瓶中,三角摇瓶装量为最大装量的12%(体积百分数),置于振率为 220r/min的摇床中培养(37℃,培养18h),获得构巢曲霉摇瓶菌液。
d、构巢曲霉发酵液制备:
按照3.0%的重量比例,将获得的构巢曲霉摇瓶菌液,接种入装有构巢曲霉培养基的菌种培养罐中,菌种培养罐构巢曲霉培养基装量为最大装量的60%(体积百分数),菌种培养罐的搅拌速度控制在220r/min,供氧量为0.1kg/h·L,37℃条件下,连续培养24h;按照0.2%的重量比例,加入20%重量浓度的聚乙烯醇水溶液,再在同等条件下,连续培养30h,得到构巢曲霉发酵液。
e、构巢曲霉菌种提取液制备:将获得的构巢曲霉发酵液,经超声波破壁15min,再经离心分离8min,取上清液,获得构巢曲霉菌种提取液制备。
复合生物消解剂的制备:
将康宁木霉菌种提取液、地衣芽孢杆菌菌种提取液、热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液、黑曲霉菌种提取液、构巢曲霉菌种提取液按照配方,混合均匀,得到混合提取液,再将沸石按照配方浸没于混合提取液中,浸泡4h~6h,沸石充分吸收混合提取液后,取出,45~50℃条件下,干燥至含水率15%~18%(质量百分数)。即获得用于河道湖泊生物治理的复合生物消解剂。
实施例1-3所得生物消解剂的应用实例:
2016年于上海普陀区某黑臭河道应用效果:
Claims (2)
1.一种生物消解剂,其特征在于,按照质量百分含量计,所述生物消解剂为:沸石65-75%、康宁木霉菌种提取液5-7%,地衣芽孢杆菌菌种提取液5-7%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液5-7%,黑曲霉菌种提取液5-7%,构巢曲霉菌种提取液5-7%,
其中,所述菌种提取液为:将所述菌种和所述菌种的发酵液进行破壁处理后再离心分离,取上清所得;
其中,所述菌种的发酵液为:将所述菌种的摇瓶菌液接种入装有所述菌种的培养基的菌种培养罐中培养一段时间后;加入聚乙烯醇水溶液后,再继续培养一段时间后所得;
其中,所述生物消解剂通过以下方式制得:将康宁木霉菌种提取液、地衣芽孢杆菌菌种提取液、热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液、黑曲霉菌种提取液、构巢曲霉菌种提取液混合均匀,得到混合提取液,再将沸石浸没于所述混合提取液中,浸泡后取出,干燥即得。
2.权利要求1所述的一种生物消解剂的制备方法,其特征在于,所述方法为:将沸石65-75%、康宁木霉菌种提取液5-7%,地衣芽孢杆菌菌种提取液5-7%,嗜热脂肪地芽孢杆菌菌种提取液5-7%,黑曲霉菌种提取液5-7%,构巢曲霉菌种提取液5-7%混合均匀,得到混合提取液,再将沸石浸没于所述混合提取液中,浸泡后取出,干燥即得,
其中,所述菌种提取液为:将所述菌种和所述菌种的发酵液进行破壁处理后再离心分离,取上清所得;
其中,所述菌种的发酵液为:将所述菌种的摇瓶菌液接种入装有所述菌种的培养基的菌种培养罐中培养一段时间后;加入聚乙烯醇水溶液后,再继续培养一段时间后所得。
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