CN104498407A

CN104498407A - 一株产耐高温角蛋白酶的地衣芽孢杆菌utm107 及其应用

Info

Publication number: CN104498407A
Application number: CN201410841868.4A
Authority: CN
Inventors: 刘永跃; 何璧梅; 许宜北; 汪涌
Original assignee: DADI LVYUAN ENVIRONMENTAL PROTECTION TECHNOLOGY (BEIJING) CO LTD
Current assignee: DADI LVYUAN ENVIRONMENTAL PROTECTION TECHNOLOGY (BEIJING) CO LTD
Priority date: 2014-12-24
Filing date: 2014-12-30
Publication date: 2015-04-08
Anticipated expiration: 2034-12-30
Also published as: CN104498407B

Abstract

本发明提供了一株产耐高温角蛋白酶的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)UTM107及其应用。该菌生物保藏编号为CGMCC No.9678。UTM107菌株可在下水污泥、生活垃圾、餐厨垃圾、动物尸体及畜禽粪便等废弃物中进行好氧堆肥发酵，在发酵过程中温度可达80～90℃，最高可达100℃以上，并长时间维持高温，能有效分解废弃物中的有机物。采用本发明的菌株制备的生物肥料绿色环保、性能优良，用其处理有机固体废弃物可做到无害化、减量化、资源化。应用本发明所制备的生物肥料绿色环保、性能优良。

Description

一株产耐高温角蛋白酶的地衣芽孢杆菌UTM107 及其应用

技术领域

本发明涉及城乡有机固体废弃物治理领域，涉及一种含角蛋白酶基因的地衣芽孢杆菌UTM107菌株及其在城乡有机固体废弃物处理中的应用。

背景技术

我国每年城镇产生的生活污泥约8000万吨，并以5％的速度增长。城镇生活废水经处理后产生大量的污泥，其处理方式目前以脱水后填埋为主。在大量耗能污染空气的同时，占用大量的土地，还可能造成周边环境与地下水资源的污染。另外目前我国畜禽养殖业生产能力已居世界第一，畜禽养殖和加工过程中所产生大量的有机废弃物，在某些地区已成为大于工业污染的污染源。因此，采用更有效的方法对城乡生活污泥、餐厨垃圾、畜禽养殖与加工产生的废弃物以及农业生产产生废弃物进行更合理的处理，真正做到无害化、减量化和资源化很有必要。

微生物发酵法是微生物利用有机废弃物中的营养物质，在适宜的温度水分等条件下利用有机物大量生长繁殖的同时产生的多种酶将有机大分子变成更小更简单分子，使各种复杂的有机态养分，转化为可溶性易吸收的养分和腐殖质。接种外源微生物能够在堆肥中形成优势菌群，有明显的促进堆肥腐熟的功能。堆肥好氧发酵技术是目前处理有机固体废弃物的有效方法，其占地少、技术简单、易操作、易推广、处理成本低。

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是一种常见的土壤微生物类群，能分泌多种酶，能快速分解和利用多种有机物。将地衣芽孢杆菌应用于有机固体废弃物的处理，具有良好的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种产耐高温角蛋白酶的地衣芽孢杆菌UTM107菌株及其应用。

本发明从采自云南腾冲温泉的底泥，利用驯化培养基(牛肉膏5g、酵母提取物5g、蛋白胨10g、氯化钠5g、可溶性淀粉15g、蒸馏水1000ml)在50℃经多代富集驯化，定向筛选出UTM107菌株。

本发明提供的UTM107菌株为G⁺、细胞0.8×(2.5～3.5)μm、直杆状、单生、产生近中生椭圆芽孢，孢囊稍膨大；在含葡萄糖蛋白胨琼脂的培养基(葡萄糖10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠5、琼脂15g，蒸馏水1000ml，pH7.0)上菌落光滑正园、微突、蛋壳黄色、生长迅速，30～50℃培养24小时后菌落直径约2～3mm，最适生长温度40～70℃。

利用引物为(27f)：5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3′和(1492r)：5′-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3′经PCR扩增该菌株的16S rRNA基因，测序后的基因序列见序列表SEQ ID No:1，将获得序列提交到EzTaxon数据库进行比对，结果显示UTM107菌株的该基因与Bacillus licheniformis的相似性最高，为99.7％，此序列是鉴定该菌株的主要特征依据。

利用通用引物UP-1S:5’-GAA GTC ATC ATG ACC GTT CTG CA-3’和UP-2Sr:5’-AGC AGG GTA CGG ATG TGC GAG CC-3’经PCR扩增该菌株的gyrB基因，测序后的基因序列见序列表SEQ ID No:2。获得的序列提交到NCBI GenBank数据库运用Blast程序进行序列比对，结果显示UTM107菌株的gyrB基因序列与Bacillus licheniformis相似性最高，结合所述菌株的生理生化特性为鉴别该菌株的次要特征。确定该菌株为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。

菌株UTM107已于2014年9月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，分类命名为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，保藏号为CGMCC No.9678。

本发明的地衣芽孢杆菌菌株UTM107，其能够产生耐高温角蛋白酶，尿囊素酶，纤维二糖酶和β-葡聚糖内切酶，因此具有耐高温角蛋白酶、尿囊素酶、纤维二糖酶、β-葡聚糖内切酶活性，其编码基因分别如序列表SEQ ID No:3～6所示。

本发明提供了含有地衣芽孢杆菌UTM107的菌剂。

本发明提供了地衣芽孢杆菌UTM107或其菌剂在有机固体废弃物的生物降解过程中的应用。

本发明还提供一种制备含地衣芽孢杆菌UTM107的堆肥接种剂的方法，包括以下步骤：

(1)制备发酵液：将地衣芽孢杆菌菌株UTM107接种于LB液体培养基中，进行发酵；

(2)发酵液经脱水干燥得到粉末状菌剂。

上述方法中，步骤(1)是将地衣芽孢杆菌UTM107接种于内装LB培养基的摇瓶中，培养温度35～50℃，摇床转速100～250转/分钟，培养时间24～48小时，得摇瓶种子液；

将摇瓶种子液接种于内装LB培养基的种子罐中，培养温度35～50℃、搅拌转速200转/分钟、通气量1:0.4(v/v)、培养时间30～40小时，得到种子罐种子液；

将种子罐种子液接种于内装LB培养基的发酵罐中，培养温度35～50℃、搅拌速度60～200转/分钟、通气量1:0.5(v/v)、接种量0.05％～5％、培养时间24～40小时，当OD₆₀₀≥1.8时停止培养，得到UTM107的发酵液。

优选地，制备摇瓶种子液的条件为：培养温度40℃，摇床转速150转/分钟，培养时间36小时。

制备种子罐种子液的条件为：培养温度35～50℃、搅拌转速100～400转/分钟、通气量1:0.4(v/v)、培养时间36小时。

优选地，将种子罐种子液接种于内装LB培养基的发酵罐中，培养温度40℃、搅拌速度100转/分钟、通气量1:0.5(v/v)、接种量2％、培养时间30小时。

本发明提供了地衣芽孢杆菌菌株UTM107或含有其的菌剂在有机固体废弃物堆肥发酵中的应用。

所述有机固体废弃物为下水污泥、生活垃圾、作物秸秆、动物尸体或畜禽粪便中的一种或多种。

用地衣芽孢杆菌菌株UTM107或含有其的菌剂对有机固体废弃物进行堆肥的方法，包括以下步骤：

(1)将相当于总物料湿重0.1％～1％的UTM107或其菌剂接种于有机固体废弃物中，混合拌匀，进行堆肥好氧发酵；所述有机固体废弃物物按碳氮比为10～50：1，含水率为45％～65％，保持氧气含量为8％～15％进行堆肥发酵，间隔3～5天翻抛1次；

(2)堆肥12-20天，待物料水分降至28～33％，发酵终止。

上述堆肥方法中，步骤(2)堆肥好氧发酵过程中，发酵3～4天时堆体温度达70～80℃，6～15天温度保持在80～90℃，最高温度可达105℃。约经12-20天的好氧发酵物料水分降至28～35％，废弃物中的大部分有机物被分解，终止发酵。剩余物或被填埋或被焚烧或过筛分装得生物肥料。

本发明是从温泉的底泥中分离到一株具有高温角蛋白酶、尿囊素酶、纤维二糖酶、β-葡聚糖内切酶等活性的菌株，为处理有机固体废弃物提供了一种高效降解的手段。本发明菌株UTM107可以用于城市生活污水厂的下水污泥、生活垃圾、餐厨垃圾、动物尸体及畜禽粪便等废弃物的堆肥好氧发酵中，以治理废弃物造成的污染，并可以制备生物肥料，具有较好的社会效益和经济效益。

附图说明

图1菌株UTM107系统进化树。

图2菌株UTM107的显微镜照片。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1地衣芽孢杆菌UTM107的分离与鉴定

取约1g云南腾冲温泉底泥样品置于装有多粒小玻璃珠的250ml三角瓶中，其内装100ml无菌水。50℃恒温摇床上震荡1小时后静置30分钟。在无菌条件下取上清液1ml，接至装有100ml已灭菌的富集培养基(蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酪素1.0％、NaCl 0.5％、K₂HPO₄0.07％)中，50℃振荡培养3天，转速160转/分钟。取培养3天后的菌悬液1ml，加入到装9ml无菌水的试管中，以梯度稀释法配制成10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5，10^-6，10^-7的稀释度。每个稀释度分别取0.1ml涂布在酪素选择培养基平板上(葡萄糖1.5％、天冬酰胺0.09％、牛肉膏0.07％、干酪素2.0％、K₂HPO₄0.07％、琼脂1.5％)，50℃培养3天。在菌落分散较好的平板上选择有水解圈的菌落，测量菌落直径及透明圈直径，计算透明圈与菌落直径比值作为初筛指标，挑取具有最大比值的的单菌落进行纯化。将纯化好菌落均匀点种在固体羊毛培养基(葡萄糖1.5％、牛肉膏0.1％、羊毛粉0.2％、天冬酰胺0.11％、K₂HPO₄0.12％、琼脂1.5％，pH 6.4)上。50℃恒温培养24h以上，观察菌落生长状况与酪素水解情况，然后挑取水解圈在1cm以上的单菌落。

以本发明分离的上述菌株DNA为模板，PCR扩增其16S rRNA基因序列，引物为(27f)：5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3′和(1492r)：5′-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3′。PCR反应程序为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，53℃退火45秒，72℃延伸90秒，30个循环，72℃延伸10分钟。扩增产物经电泳检测其纯度后测序，测序结果见序列表SEQID No:1所示。获得的16S rRNA基因序列通过EzTaxon数据库(http://www.ezbiocloud.net/)进行比对，与菌株Bacillus licheniformis的相似性最高，同源性为99.7％。图1为基于UTM107菌株16S rRNA基因序列，利用Mega5.0系统进化软件构建的系统进化树(最大似然法)，说明其系统进化关系与地衣芽孢杆菌最近。

利用通用引物UP-1S:5’-GAA GTC ATC ATG ACC GTT CTG CA-3’和UP-2Sr:5’-AGC AGG GTA CGG ATG TGC GAG CC-3’经PCR扩增该菌株的gyrB基因，测序结果见序列表SEQ ID No:2获得的序列提交到NCBI GenBank数据库运用Blast程序进行序列比对，结果显示UTM107菌株的gyrB基因序列与Bacillus licheniformis相似性最高，结合菌株的形态结构特征(图2)和生理生化特征，把该菌株鉴定为Bacilluslicheniformis，命名为UTM107。并于2014年9月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，分类命名为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，保藏号为CGMCC No.9678。

实施例2菌株UTM107耐高温角蛋白酶活性检测及其基因序列

将实施例1得到的UTM107菌株接种于含固体羊毛培养基(葡萄糖1.5％、牛肉膏0.1％、羊毛粉0.2％、天冬酰胺0.11％、K₂HPO₄0.12％、琼脂1.5％，pH 6.4)平板及酪蛋白培养基(葡萄糖1.5％、牛肉膏0.07％、干酪素2.0％、天冬酰胺0.09％、K₂HPO₄0.07％、琼脂1.5％)平板上，于50℃培养3天。观察到其在上述两种培养基上均具有透明的水解圈，证实UTM107菌株能分解角蛋白酶，其具有角蛋白酶活性将UTM107菌株接种至液体培养基(1％羽毛粉，0.1％磷酸氢二钾，0.01％MgCl₂；用自来水配制，并在配制好后将pH值调至7.0～8.0)中，50℃培养48小时后，5000转/分钟离心，取上清液取1.0ml上清液，在其中加入2.0ml 0.05mol/L Tris·HCl缓冲液(pH值7.5)，再加入10mg羽毛粉作为反应底物，于60℃恒温水浴锅中保温，定时取出并用力振荡。1小时后取出并加入2.0ml 10％TCA以终止反应。在10000转/分钟、4℃条件下过滤离心10分钟，取上清液于280nm处测定吸光度。以反应前添加TCA处理的反应管作对照。酶活性单位定义:在上述反应条件下，测得的OD280nm值每升高0.01所需要的酶量定义为1个酶活单位(U)。重复3次，取平均值。测得UTM107菌株的角蛋白酶在60℃酶活力为103个单位。

根据角蛋白酶基因设计的引物kera-f:5’-ATG ATG AGG AAA AAGAGT TTT TGG-3’和kera-r:5’-TTA TTG AGC GGC AGC TTC G-3’，并以本发明菌株UTM107DNA为模板，进行PCR扩增反应，PCR反应程序为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，55℃退火60秒，72℃延伸60秒，35个循环，72℃延伸10分钟，通过电泳检测得到约1.1kb大小的核苷酸片段，测序并将在NCBI GenBank数据库运用Blast程序进行序列比对，获得该序列片段编码角蛋白酶基因，其基因序列见序列表SEQID No:3。

实施例3菌株UTM107尿囊素酶活性检测及其相关基因序列

UTM107在发酵培养基(蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酪素1.0％、NaCl 0.5％、K₂HPO₄0.07％)中40℃发酵培养2天，4000转/分钟离心取上清液作为粗酶液，并迅速测定其酶活性。尿囊素酶活性测定方法为：加100μl UTM107粗酶液(发酵离心后的上清液)于2ml含15mmol/L尿囊素的50mmol/L的Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中，30℃下反应15分钟，然后加一滴浓盐酸终止反应。取0.5ml反应液测定酶反应产物尿囊酸的含量即可测得尿囊素酶活性大小。尿囊酸的测定采用高效液相色谱检测方法，采用C₁₈柱为固定相，以0.01mol/L的KH₂PO₄缓冲液为流动相，流速0.9ml/分钟，在210nm的检测波长下检测尿囊酸的含量，反应重复3次，取平均值。规定每分钟每毫克蛋白质水解1μmol/L尿囊素作为1个活力单位，测定结果：本发明UTM107菌株所产生的尿囊素酶活性约为23个活性单位。

根据芽孢杆菌尿囊素酶基因设计的简并引物niao-f:5’-AAT CGCAGC AAT CGG T-3’和niao-r:5’-TTG CGG CCA ATA TAC G-3’，并以本发明菌株UTM107DNA为模板，进行PCR扩增反应，PCR反应程序为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，55℃退火45秒，72℃延伸60秒，35个循环，72℃延伸10分钟，通过电泳检测得到1.1kb大小的核苷酸片段，测序并将在NCBI GenBank数据库运用Blast程序进行序列比对，获得该序列片段编码尿囊素酶基因，其基因序列见序列表SEQ ID No:4。

实施例4菌株UTM107纤维素酶活性检测及其相关基因序列

将芽胞杆菌UTM107菌株用点种法点种在羧甲基纤维素钠培养基(羧甲基纤维素钠5g、KH₂PO₄lg、NaNO₃3g、KCL 0.5g、MgSO₄0.5g、FeSO₄0.01g、琼脂17g，蒸馏水1000ml，pH 5.5～6.0)上，40℃培养48小时。采用0.2％刚果红染色30分钟，然后先用蒸馏水洗去染液，再用浓度为1mol/L的NaC1浸泡1小时，最后用5％的醋酸液固定颜色。在菌落周围形成无色透明圈证明此菌分泌纤维素酶，具有降解纤维素酶的活性。纤维素酶为多酶混合物，其由纤维二糖酶、β-葡聚糖内切酶等组成。根据纤维二糖酶基因设计的简并引物Cellobiase-f:5’-CGA CATCTG AAG CGT ACA GC-3’和Cellobiase-r:5’-CGG TCA TAC TCA GCATAA GC-3’，并以本发明菌株UTM107DNA为模板，进行PCR扩增反应，PCR反应程序为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，53℃退火45秒，72℃延伸90秒，35个循环，72℃延伸10分钟，通过电泳检测得到约2kb大小的核苷酸片段，测序并将在NCBI GenBank数据库运用Blast程序进行序列比对，该序列片段编码纤维二糖酶基因，其基因序列见序列表SEQ ID No.5。根据β-葡聚糖内切酶基因设计引物betaglu-f:5’-AAC GGT CCG CAT CAT C-3’与betaglu-r:5’-CGA GGA AGA TGCCGA T-3’,以本发明菌株UTM107DNA为模板进行PCR反应，PCR反应条件为95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，55℃退火45秒，72℃延伸120秒，30个循环，72℃延伸10分钟，获得约2.7kb的片段，测序并将在NCBI GenBank数据库运用Blast程序进行序列比对，该基因片段编码β-葡聚糖内切酶，其基因序列见序列表SEQ ID No.6。

实施例5菌株UTM107菌剂的制备(1)

将4℃保存的本发明实施例1获得的菌株UTM107斜面转接至LB培养基平板上，在35℃下培养至丰厚，然后刮菌苔接种于至装有50ml LB液体培养基的250ml摇瓶中，培养温度35℃，摇床转速250转/分钟，培养48小时。此为摇瓶种子液。

将上述种子液接种至含有LB液体培养基的种子罐中。培养温度35℃，通气量1：0.3(v/v)、搅拌转速400转/分钟，培养时间30小时。此为种子罐种子液。

将种子罐种子液接种至含有LB液体培养基的发酵罐中进行发酵培养。接种量约5％、培养温度35℃、通气量1：0.5(v/v)、搅拌转速200转/分钟，培养时间30小时。当OD₆₀₀≥1.8，停止培养，此为发酵菌液。

发酵液直接分装成为液体菌剂，发酵液经脱水干燥得到粉末状菌剂。

实施例6菌株UTM107菌剂的制备(2)

将4℃保存的本发明实施例1获得的菌株UTM107斜面转接至LB培养基平板上，在50℃下培养至丰厚，然后刮菌苔接种于至装有50ml LB液体培养基的250ml摇瓶中，培养温度50℃，摇床转速100转/分钟，培养24小时。此为摇瓶种子液。

将上述种子液接种至含有LB液体培养基的种子罐中。培养温度50℃，通气量1：0.6(v/v)、搅拌转速400转/分钟，培养时间40小时。此为种子罐种子液。

将种子罐种子液接种至含有LB液体培养基的发酵罐中进行发酵培养。接种量约0.1％、培养温度50℃、通气量1：0.6(v/v)、搅拌转速60转/分钟，培养时间24小时。当OD₆₀₀≥1.8，停止培养，此为发酵菌液。

实施例7菌株UTM107菌剂的制备(3)

将4℃保存的本发明实施例1获得的菌株UTM107斜面转接至LB培养基平板上，在40℃下培养至丰厚，然后刮菌苔接种于至装有50ml LB液体培养基的250ml摇瓶中，培养温度40℃，摇床转速150转/分钟，培养36小时。此为摇瓶种子液。

将上述种子液接种至含有LB液体培养基的种子罐中。培养温度40℃，通气量1：0.4(v/v)、搅拌转速200转/分钟，培养时间36小时。此为种子罐种子液。

将种子罐种子液接种至含有LB液体培养基的发酵罐中进行发酵培养。接种量约2％、培养温度38℃、通气量1：0.5(v/v)、搅拌转速100转/分钟，培养时间30小时。当OD₆₀₀≥1.8，停止培养，此为发酵菌液。

实施例8菌株UTM107的菌剂处理生活污泥

生活污泥约30吨，其含水量83.5％，加入水分调理剂20吨及50升实施例7制得的UTM107液体菌剂，拌合混匀。此时物料水分约60.3％。将物料移入发酵槽中进行堆肥好氧发酵。堆体高度不得低于2.3m，保持氧气含量为8％，约5天以倒槽的方式翻抛1次。发酵3天时堆体温度达70℃，6～16天温度达80～90℃，最高温度105℃。20天后，终止发酵。水分降至33.1％，有机物减重85％。容积减量60％，即可作为有机肥产品或进行深加工制备功能性有机肥料进行出售。

按照上述同样的方法，采用实施例5和6制备的菌剂处理生物污泥，也能取得上述类似的有益效果。

实施例9利用UTM107菌剂处理死淘鸡制备生物肥料

集约化的大型鸡养殖场的每个养殖周期都会有1～3％的死淘鸡。在养鸡场的垫料100m³中加入300L实施例7制得的UTM107液体菌剂，混合均匀，同时喷洒适量水分。然后用装载机将物料拌混均匀后送入一个发酵槽中，堆高2m以上，同时开启曝气机对堆体鼓风供气，保持氧气含量为15％，约2天。堆体温度上升至75℃～95℃后加入死淘鸡开始好氧堆肥发酵。

由于死淘鸡数量波动较大，每天有1～3000kg。根据死淘鸡数量，采用2种入槽方式：小量时采用直接坑埋，大量时用装载机拌混后填埋。并同时按1000：1比例加入UTM107液体菌剂。4～7天换槽一次，在发酵周期中补充水分以不出现渗滤现象为准。此好氧堆肥发酵温度可达90～100℃以上，并长时间维持高温，使死淘鸡的处理完全达到无害化。经一个养殖周期的好氧堆肥发酵死淘鸡和垫料变成高效的生物肥料。

将本发明实施例5、6制得的UTM107液体菌剂用于处理死淘鸡，也取得了相同的技术效果，可以将好氧堆肥发酵死淘鸡和垫料变成高效的生物肥料。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株UTM107，其保藏编号为CGMCC No.9678。

2.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌菌株UTM107，其特征在于，其能够产生耐高温角蛋白酶，尿囊素酶，纤维二糖酶和β-葡聚糖内切酶。

3.如权利要求2所述的地衣芽孢杆菌菌株UTM107，其特征在于，所述耐高温角蛋白酶编码核苷酸序列含有SEQ ID NO:3所述的核苷酸序列或其互补核苷酸序列；尿囊素酶编码核苷酸序列含有SEQ ID NO:4所述的核苷酸序列或其互补核苷酸序列；纤维二糖酶编码核苷酸序列含有SEQ ID NO:5所述的核苷酸序列或其互补核苷酸序列；β-葡聚糖内切酶编码核苷酸序列含有SEQ ID NO:6所述的核苷酸序列或其互补核苷酸序列。

4.含有权利要求1所述地衣芽孢杆菌菌株UTM107的菌剂。

5.一种制备含地衣芽孢杆菌UTM107的堆肥接种剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(2)发酵液经脱水干燥得到粉末状菌剂。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)是将地衣芽孢杆菌UTM107接种于内装LB培养基的摇瓶中，培养温度35～50℃，摇床转速100～250转/分钟，培养时间24～48小时，得摇瓶种子液；

将摇瓶种子液接种于内装LB培养基的种子罐中，培养温度35～50℃、搅拌转速100～400转/分钟、通气量1:0.3～0.6(v/v)、培养时间30～40小时，得到种子罐种子液；

将种子罐种子液接种于内装LB培养基的发酵罐中，培养温度35～50℃、搅拌速度60～200转/分钟、通气量1:0.5～0.6(v/v)、接种量0.05％～5％、培养时间24～40小时，当OD600≥1.8时停止培养，得到UTM107的发酵液。

7.权利要求1-3任一所述的地衣芽孢杆菌菌株UTM107或权利要求4所述的菌剂在有机固体废弃物堆肥发酵中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述有机固体废弃物为下水污泥、生活垃圾、作物秸秆、动物尸体或畜禽粪便中的一种或多种。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将相当于总物料湿重0.1％～1％的UTM107菌种或其菌剂接种于有机固体废弃物中，混合拌匀，进行堆肥好氧发酵；所述有机固体废弃物物按碳氮比为10～50：1，含水率为45％～65％，保持氧气含量为8％～15％进行堆肥发酵，间隔3～5天翻抛1次；

(2)堆肥12-20天，待物料水分降至28～33％，发酵终止。

10.权利要求1-3任一所述的地衣芽孢杆菌菌株UTM107或权利要求4所述的菌剂在制备有机肥料中的应用。